Isolation and Purification of Polysaccharide and Anti-inflammatory Effect of Dendrobium officinale Neutral Polysaccharide
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摘要: 目的：从铁皮石斛中分离纯化得到铁皮石斛多糖，对其进行结构表征，并探究其抗炎作用。方法：以铁皮石斛为原料，通过水提醇沉法得到铁皮石斛粗多糖，再经过DEAE-52纤维素离子交换树脂和葡聚糖凝胶Sephadex G-100从粗多糖中分离纯化得到多糖组分DOP-1。利用紫外扫描法、气相色谱法、高效凝胶色谱、红外光谱和核磁共振扫描等技术对多糖DOP-1进行结构分析，并测定DOP-1对小鼠腹腔巨噬细胞RAW 264.7细胞增殖抑制效果，及其对LPS诱导的RAW264.7细胞NO、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）表达的影响。结果：分离纯化得到的多糖DOP-1为鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的均一性多糖，单糖摩尔比为0.6:9.0:2.7:2.9，分子量为59.2 kDa。DOP-1对RAW 264.7细胞增殖无显著性抑制，与模型组相比，DOP-1能显著抑制NO、TNF-α和IL-1β的表达量。结论：本实验得到的铁皮石斛多糖结构明确，且具有较好的抗炎活性，提取工艺条件具有可行性。本研究可为铁皮石斛多糖在抗炎功效产品的开发利用提供理论依据。Abstract: Objective: To isolate and purify polysaccharides from Dendrobium officinale, characterize their structure and explore their anti-inflammatory effects. Methods: Polysaccharides from Dendrobium officinale were obtained by water extraction and alcohol precipitation. DOP-1 was purified by DEAE-52 cellulose ion exchange resin and Sephadex G-100. Ultraviolet scanning, GC, high-performance gel chromatography, infrared spectroscopy and nuclear magnetic resonance scanning were used to analyze the structure of DOP-1 polysaccharide, and the inhibitory effect of DOP-1 on the proliferation of RAW 264.7 cells was determined. And its effect on the expression of NO, TNF-α and IL-1β in RAW264.7 cells induced by LPS. Results: DOP-1 was a homogeneous polysaccharide composed of rhamnose, mannose, glucose and galactose with a monosaccharide molar ratio of 0.6:9.0:2.7:2.9 and a molecular weight of 59.2 kDa. DOP-1 did not significantly inhibit the proliferation of RAW 264.7 cells. Compared with the model group, DOP-1 significantly inhibited the expression of NO, TNF-α and IL-1β. Conclusions: The polysaccharides of Dendrobium officinaleobtained in this study had clear structure and good anti-inflammatory activity, and the extraction conditions were feasible. This study would provide theoretical basis for the development and utilization of polysaccharides of Dendrobium officinale with anti-inflammatory effect.
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铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）是一种稀有的多年生草本植物，是兰科的第二大属[1]。它的地理分布广泛，包括印度、澳大利亚、美国和日本，在中国广泛分布，主要分布于安徽、浙江和福建等地[2−3]。其茎入药，味甘，性微寒，具有生津养胃，滋阴清热，润肺益肾等功效。现代医学研究表明铁皮石斛具有广泛的药理作用，包括抗癌，抗血管生成，抗炎，抗氧化，抗糖尿病，免疫增强，保肝，抗真菌，抗菌，抗病毒等[4−5]。研究表明，铁皮石斛的主要生物活性化合物是具有保湿、抗氧化、抗衰老和增强免疫作用的铁皮石斛多糖[6−8]。
炎症是一种由感染、组织压力、组织损害或者细胞应激引起的人体自动防御反应[9−10]。正常情况下炎症能消除有害刺激，启动愈合过程并恢复受伤组织的正常功能，对机体有益；但是过度炎症会破坏正常组织的稳态，例如过度炎症引起的炎症因子风暴会造成多器官衰竭，严重时甚至会造成死亡[11]。因此，抑制失调或者过度的炎症对人类的身体健康十分重要。巨噬细胞是先天性免疫和细胞免疫中的重要组成部分，具有吞噬、呈递抗原和分泌细胞因子等重要作用[12−13]。巨噬细胞能参与炎症过程中炎症反应的诱发、维持和消退[12]。脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS），又称内毒素（Endotoxin），由类脂A、核心多糖和0-抗原重复序列组成，能够诱导炎症[14]。LPS诱导巨噬细胞炎症是由细胞膜上的Toll样受体4（toll-like receptor 4，TLR4）介导的，细胞膜上的TLR4识别LPS后，巨噬细胞被激活,并导致一系列的细胞因子和其他炎症因子，如肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和IL-6等的过度表达[15]。据报道，75%醇沉的铁皮石斛多糖能促进RAW 264.7细胞的M2极化，显著降低TNF-α、IL-6和NO的释放水平，但蔡海兰等和黄杰等[16−17]的研究报道的铁皮石斛纯多糖对RAW 264.7细胞具有激活作用，能促进TNF-α的分泌，这可能与铁皮石斛原料的产地、多糖的分子量与结构相关。童微等[18]的研究发现，分子质量为960 kDa的铁皮石斛多糖能显著增强RAW 264.7细胞的免疫活性，不同化学修饰对其免疫活性的影响不同。但以上研究未对铁皮石斛多糖进行进一步的结构解析和构效关系研究。
因此，本文对分离得到的铁皮石斛多糖进行结构解析，以巨噬细胞RAW 264.7为研究对象，探究铁皮石斛分子量、结构与抗炎功效之间的关系，为开发铁皮石斛在抗炎功效上的应用提供依据。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
铁皮石斛原料（昆植1号） 产地为中国云南；小鼠腹腔巨噬细胞RAW 264.7 购于上海ATCC细胞库；DMEM（dulbecco's modified eagle medium）培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素双抗 美国Gibco公司；脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、果糖、甘露糖、肌醇标准品 美国Sigma公司；氯仿、正丁醇、氢氧化钠、浓硫酸、苯酚、吡啶 天津市大茂化学试剂厂；IL-4酶联免疫试剂盒（96T）、TNF-α酶联免疫试剂盒（96T） 江苏酶免实业有限公司。
RE-2000A旋转蒸发仪 上海亚索生化仪器厂；ML204T/02电子分析天平 梅特勒-托利多（中国）；H1650离心机 湖南湘仪离心机仪器有限公司；Sigma Alpha1-2LD真空冷冻干燥机 美国Sigma公司；ICS-5000型离子色谱分析系、Dionex CarboPacTM PA10 离子交换柱、Aglient 1200 型高效液相色谱仪、CO2培养箱 美国Thermo公司；UV-3200紫外-可见分光光度计 岛津企业管理（中国）有限公司；Sunrise型多功能酶标仪 奥地利Tecan公司。
1.2 实验方法
1.2.1 铁皮石斛多糖的提取与纯化
1.2.1.1 铁皮石斛粗多糖的制备
通过水提醇沉法提取铁皮石斛多糖，称取一定量的晒干铁皮石斛原料，使用加热水提法制备石斛粗多糖，实验条件为：提取料液比1:20、提取温度100 ℃、提取时间1 h、提取次数2次，最终得到提取液4 L。按照1:4（去离子水:95%乙醇）的比例加入乙醇溶液，醇沉过滤，40 ℃恒温干燥过夜，获得干燥的石斛粗多糖。
1.2.1.2 铁皮石斛纯化多糖的制备
称取铁皮石斛粗多糖1.0 g，溶于30 mL纯水中，使用DEAE-25纤维素交换层析柱进行分离。将石斛多糖溶液加入到层析柱中，用纯水洗脱层析柱，控制流速1 mL/min，每120 s收集1管洗脱液。在收集终点附近，取样少量的洗脱液，用苯酚硫酸法鉴定收集终点。对洗脱液进行选择性合并，获得不同的铁皮石斛多糖组分，收集获得的石斛多糖溶液浓缩后过Sephadex G-100葡萄糖凝胶柱，控制流速约0.1 mL/min，每管收集1 mL洗脱液，溶液内多糖含量为0时证明已到达收集终点。检测已收集的40管的洗脱液中的多糖含量，并使用酶标仪在波长为490 nm处检测吸光度，得到洗脱液中多糖的含量情况，并以此数据绘制多糖含量变化色谱图，根据色谱图中多糖物质的洗脱的先后顺序，判断多糖组分的分离效果。对主要出峰部分的洗脱液进行合并，冻干后获得了多糖组分DOP-1。
1.2.1.3 多糖的纯度鉴定
将多糖DOP-1溶于蒸馏水配制成浓度为1 mg/mL的溶液，用蒸馏水作参比，在波长范围为190~400 nm处对其进行紫外光谱扫描。
1.2.2 铁皮石斛多糖的结构鉴定
1.2.2.1 DOP-1的糖含量测定
利用苯酚硫酸法[19−20]测定样品中的总糖含量，将多糖DOP-1溶于蒸馏水配制成浓度为0.1 mg/mL的溶液，吸取1.0 mL，然后分别加入0.5 mL的6%的苯酚溶液和l mL的浓硫酸，涡旋充分混合，30 ℃水浴20 min，室温冷却，在490 nm下测定吸光度。
采用DNS法[21]测定样品中的还原糖含量，将多糖DOP-1溶于蒸馏水配制成浓度为0.1 mg/mL的溶液，吸取1.0 mL，然后分别加入2 mL DNS溶液，加热15 min，室温冷却，在540 nm下测定吸光度。
1.2.2.2 铁皮石斛多糖的单糖组成分析
参考于小芳[22]的实验方法，配制浓度为10.0 μg/mL的各单糖（阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、果糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖）标准溶液，然后再配制成5.0 μg/mL的混合标准溶液。从混合标准溶液中分别取出5、1、0.5、0.1、0.05 mL溶液，并在每个样品中加入10 μg肌醇作为内标，然后用氮吹仪吹干。标准溶液及石斛多糖在100 ℃下用2 mol/L TFA被水解6 h。移除过量的TFA后，用0.3 mL TriSil试剂（吡啶:六甲基二硅胺烷:三甲基氯硅烷=10:2:1（V:V:V））对多糖水解产物进行硅醚化，反应条件是80 ℃水浴加热1 h，反应完成后用氮气吹干，1 mL正己烷定容，取0.5 μL进行气相色谱法分析。气相色谱条件为：色谱柱DB-17（30 m×0.32 mm×0.5 m）；检测器为氢火焰离子化检测器；检测器温度280 ℃；柱温190 ℃；进样口温度280 ℃；载气N2；流速1 mL/min。
1.2.2.3 铁皮石斛多糖的分子量测定
基于侯重文等[23]采用高效液相凝胶色谱仪分析多糖的均一性和平均分子量的实验方法，仪器配制了Ultrahydrogel 250柱子（7.8×300 mm），流动相为0.1 mol/L NaNO3，柱温为30 ℃，流速为0.6 mL/min，进样量为20 μL。将不同分子量的葡聚糖标准品（Mw=70、130、175、300、256和580 kDa）分别配制成5 mg/mL溶液，由小分子到大分子依次进样，记录各标准品相应的保留时间，以保留时间为横坐标，以分子量的对数为纵坐标绘制标准曲线，根据标准曲线计算分离获得的多糖的平均分子量。
1.2.2.4 铁皮石斛多糖的红外光谱分析
将KBr与干燥的多糖样品充分研磨混合后压制成薄片，然后于400~4000 cm−1波长范围进行红外扫描分析[24]。
1.2.2.5 铁皮石斛多糖的核磁分析
将样品溶解在0.55 mL的D2O中并用D2O交换两次。1H NMR，13C NMR光谱在Bruker光谱仪上以298 K的探针温度记录并在400 MHz下操作。
1.2.3 铁皮石斛多糖DOP-1的抗炎活性
1.2.3.1 细胞培养
小鼠腹腔巨噬细胞RAW 264.7细胞复苏，使用含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM培养基，在含有5%二氧化碳的37 ℃恒温培养箱中培养。
1.2.3.2 DOP-1对细胞增殖的影响
将RAW 264.7细胞以1×103个/mL的密度接种于96孔板中，在含有5%二氧化碳的37 ℃恒温培养箱中培养24 h后，弃去上清液，每孔加入含各浓度（1000、500、250、125、25、5 μg/mL）多糖的培养基，培养24 h。避光条件下向96孔板中每孔加入100 μL的0.5 mg/mL MTT溶液，培养箱中孵育4 h。4 h后吸除MTT溶液，每孔加入150 μL DMSO，震荡10 min，酶标仪中570 nm检测吸光值。统计分析，计算出多糖对RAW 264.7细胞存活率的影响。选取对细胞无增殖抑制作用浓度进行实验。
1.2.3.3 DOP-1对细胞炎症因子表达量的影响
将RAW 264.7细胞以5×104个/mL的密度接种于24孔板中，在含有5%二氧化碳的37 ℃恒温培养箱中培养24 h后，弃去上清液，分别设置为空白组、LPS组（5 μg/mL LPS）、DOP-1组（5 μg/mL LPS+（125~500） μg/mL DOP-1溶液），每组分别加入对应的供试液（或空白培养基）1 mL。培养24 h后，按照试剂盒说明书操作，测定样品中的NO、TNF-α和IL-1β的含量[25]。
1.3 数据处理
实验结果采用单因素方差分析，各组间差异比较用单因素方差分析（One-Way ANOVA），进行组间两两多重比较，P<0.05表示差异有统计学意义（*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001）。采用Graph Pad软件作图。使用Image J软件处理染色图片，所有数值均用“均数±标准误差”。
2. 结果与分析
2.1 铁皮石斛多糖的提取及纯化
铁皮石斛粗多糖的DEAE-25纤维素柱洗脱曲线见图1，收集主要洗脱组分，再经过Sephadex G-100葡萄糖凝胶柱洗脱，获得铁皮石斛中性多糖DOP-1。
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图 1 铁皮石斛多糖的DEAE-25洗脱曲线Figure 1. DEAE-25 elution curve of polysaccharides from Dendrobium officinale将铁皮石斛多糖DOP-1在波长范围为190~400 nm处进行紫外光谱扫描，UV光谱显示其在260和280 nm处没有吸收峰（图2），说明DOP-1中不存在核酸和蛋白质。
2.2 铁皮石斛多糖的结构分析
2.2.1 多糖含量测定
利用苯酚-硫酸法和DNS法测定DOP-1的总糖含量和还原糖含量，求得DOP-1的总糖含量为94%，纯度较高，且结果与之前的报道一致[26]。且DOP-1中不存在还原糖。
2.2.2 多糖分子量测定
使用标准右旋糖酐已知分子量的T系列标准，得到一个线性标准曲线方程：y=−0.3501x+9.3765，R2=0.9495，x代表Rt，y代表lg Mw。采用高效凝胶色谱法对DOP-1的平均分子量进行分析，结果如图3所示，根据分子量分布及保留时间（Rt）求铁皮石斛多糖组分的分子量，求得DOP-1的分子量为59.2 kDa，可能是均一性的多糖。之前的研究报道表明，不同的产地、提取方式、分离纯化方法对铁皮石斛多糖的分子量均有较大影响[27]。
2.2.3 多糖的单糖组成及含量测定
将铁皮石斛中性多糖DOP-1进行酸水解，硅醚化反应后，采用气相色谱法进行单糖组分分析，将DOP-1的气相色谱图与单糖混合标准品的气相色谱图进行比对，根据各单糖标品的出峰时间可以判断出各组分的单糖组成，在根据色谱图上的峰面积大小能够计算出各组分中的单糖构成和摩尔比。DOP-1单糖组成及摩尔比见表1，单糖组成为鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，单糖摩尔比为0.6:9.0:2.7:2.9。根据赵小丹等[28]的报道，铁皮石斛多糖的单糖组成主要为葡萄糖和甘露糖，李镜锐等[26]的报道表明铁皮石斛多糖主要由阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖和葡萄糖4种单糖组成，其中主要的单糖为甘露糖和葡萄糖。以上的研究报道与我们的实验结果较为接近，本实验中DOP-1的单糖组成为鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，其中鼠李糖含量较少，可忽略不计。
表 1 铁皮石斛多糖的单糖组成分析Table 1. Analysis of the monosaccharide composition of Dendrobium officinale polysaccharides样品 单糖组成（摩尔比） 鼠李糖 阿拉伯糖 木糖 甘露糖 葡萄糖 半乳糖 DOP-1 0.6 − − 9 2.7 2.9 2.2.4 铁皮石斛多糖的红外光谱分析
通过对铁皮石斛多糖DOP-1进行红外光谱分析，可得DOP-1的傅里叶红外光谱图如图4所示，根据文献[29]查询可得，多糖分子中羟基基团的O-H伸缩振动能够在3400 cm−1左右处出现较大的吸收峰，2900 cm−1附近较强的吸收峰来自于多糖分子-CH2-中的C-H伸缩振动，说明DOP-1有多糖的特征官能团；DOP-1在1732 cm−1处有吸收峰，说明含有-COOH基团；DOP-1在1641 cm−1处的吸收峰是由-COOR中的C=O振动引起的；硫酸基基团中的伸缩会在1250 cm−1处有吸收峰，DOP-1在1250 cm−1处有一定的吸收峰，表明含有硫酸基；DOP-1在810 cm−1处的吸收峰是D-Man的结果。
2.2.5 多糖的核磁共振分析
多糖的1H谱中质子信号大部分集中于δ 3.0~δ 4.0 ppm的区域，重叠现象严重，但是异头氢质子的信号在δ 4.3~δ 5.9 ppm处，因此谱图解析的关键是异头信号。α-糖苷键中C-1处质子的化学位移大于5.0 ppm，而β-糖苷键中C-1处的质子的化学位移小于5.0 ppm。在图5a中，在δ 4.2~δ 5.0 ppm和δ 5.0~δ 5.5 ppm处均存在信号，这表明DOP-1包含α-糖苷键和β-糖苷键。DOP-1的H-1质子在δ 4.2~δ 5.5 ppm内主要含有四种不同类型的异头氢，说明DNP4主要含有四种不同类型的单糖，这与单糖组成分析的结果接近，其中δ 5.32 ppm有主要位移，说明有α-葡萄糖存在，这与红外光谱的结果相符合。
13C NMR中化学位移在90~103 ppm的异头碳是α-型糖苷，化学位移在103~106 ppm之间的异头碳是β-型糖苷。在图5b中，在DOP-1的13CNMR谱中，在低场160~180 ppm处有微弱信号，说明多糖组分可能含有糖醛酸。根据DOP-1的13CNMR谱图，DOP-1中存在α-糖苷键和β-糖苷键，这与1HNMR分析一致。
DOP-1的HSQC谱如图6所示，H/C信号在5.34/99.59、4.45/102.51、4.70/100.08、4.91/98.52、91.83/5.17、4.58/95.71 ppm分别归属对应→4）-α-Glcp-（1→、β-GlcpA-（1→、→4）-β-D-Manp-（1→、→4,6）-α-D-Glcp-（1→、α-reducing-Manp、β-reducing-Manp糖残基，这与单糖组成结果一致。
2.3 铁皮石斛多糖DOP-1的抗炎活性
2.3.1 DOP-1对巨噬细胞存活率的影响
DOP-1对巨噬细胞RAW 264.7细胞存活率的影响如图7所示，在药物浓度小于500 μg/mL的条件小，DOP-1对RAW 264.7细胞没有细胞毒性。
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图 7 DOP-1对RAW 264.7细胞存活率的影响注：图中*表示与空白组差异显著（**P<0.01）。Figure 7. Effect of DOP-1 on the survival rate of RAW 264.7 cells2.3.2 DOP-1对RAW264.7细胞NO、TNF-α和IL-1β表达量的影响
LPS诱导巨噬细胞炎症模型中，NO和多种促炎细胞因子的分泌都会显著增加，NO释放量是衡量炎症反应程度的重要指标，IL-1β和TNF-α是关键的促炎细胞因子。如图8所示，与空白组相比，LPS组的NO相对含量显著升高（P<0.001），DOP-1处理后细胞NO的分泌显著减少了，并呈剂量依赖性。如图9所示，LPS刺激24 h显著促进了RAW 264.7细胞IL-1β的分泌，经125、250、500 μg/mL的DOP-1处理后，IL-1β的相对含量显著下降（P<0.01）。如图10所示，相比于空白组，LPS组的TNF-α表达量显著升高了（P<0.001），DOP-1处理显著降低了细胞TNF-α的表达水平（P<0.001）。
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图 9 DOP-1对RAW 264.7细胞IL-1β表达量的影响Figure 9. Effect of DOP-1 on IL-1β expression in RAW 264.7 cells![]()
图 10 DOP-1对RAW 264.7细胞TNF-α表达量的影响Figure 10. Effect of DOP-1 on the expression of TNF-α in RAW 264.7 cells由上述实验结果可知，DOP-1在没有细胞毒性的浓度下，能显著抑制LPS诱导的巨噬细胞NO、IL-1β和TNF-α的分泌，表明铁皮石斛多糖DOP-1可以通过下调炎症因子表达量来起到抗炎作用。Xiang等[30]的研究发现，从厚壳贻贝中提取分离得到的多糖能够通过改善LPS诱导的RAW 264.7细胞中TNF-α和IL-6的过度产生，抑制NF-κB信号通路的激活，改善DSS诱导的结肠炎等。因此，推测铁皮石斛多糖可能可以通过抑制炎症细胞因子的信号传导，抑制NF-κB通路的信号激活，从而抑制炎症反应，具有良好的抗炎功效。
3. 结论
本实验通过水提醇沉法从铁皮石斛中提取分离纯化得到组分DOP-1，其中DOP-1为均一性多糖，理化性质分析表明DOP-1的糖含量为94%，且不含有糖醛酸和蛋白质。DOP-1的分子量为59.2 kDa，单糖组成为鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，单糖摩尔比为0.6:12.0:6.4:0.4。DOP-1的红外光谱结果显示，DOP-1含有多糖的特征官能团，且含有硫酸基团和D-Man。DOP-1的核磁波谱分析表明DOP-1含有→4）-α-Glcp-（1→、β-GlcpA-（1→、→4）-β-D-Manp-（1→、 →4,6）-α-D-Glcp-（1→、α-reducing-Manp、 β-reducing-Manp糖残基，这与单糖组成和红外分析的结果一致。体外细胞实验表明，DOP-1能抑制LPS诱导的巨噬细胞NO、IL-1β和TNF-α的分泌，具有较好的抗炎功效。不同的产地来源、提取分离方法等因素都会可能对提取得到的铁皮石斛多糖的分子量、单糖组成和结构造成影响，而不同的分子量结构的铁皮石斛多糖，其生物活性往往也存在较大差异。先前对铁皮石斛多糖的研究中发现了铁皮石斛多糖的抗炎功效，但没有进行进一步的构效关系验证。本研究中对分离纯化得到的铁皮石斛多糖DOP-1进行了结构表征并验证了其对LPS诱导的炎症的抑制作用。本研究对铁皮石斛多糖的结构及其活性的探讨，可为铁皮石斛多糖在抗炎产品的开发利用提供理论依据。
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图 1 铁皮石斛多糖的DEAE-25洗脱曲线
Figure 1. DEAE-25 elution curve of polysaccharides from Dendrobium officinale
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图 7 DOP-1对RAW 264.7细胞存活率的影响
注：图中*表示与空白组差异显著（**P<0.01）。
Figure 7. Effect of DOP-1 on the survival rate of RAW 264.7 cells
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图 9 DOP-1对RAW 264.7细胞IL-1β表达量的影响
Figure 9. Effect of DOP-1 on IL-1β expression in RAW 264.7 cells
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图 10 DOP-1对RAW 264.7细胞TNF-α表达量的影响
Figure 10. Effect of DOP-1 on the expression of TNF-α in RAW 264.7 cells
表 1 铁皮石斛多糖的单糖组成分析
Table 1 Analysis of the monosaccharide composition of Dendrobium officinale polysaccharides
样品 单糖组成（摩尔比） 鼠李糖 阿拉伯糖 木糖 甘露糖 葡萄糖 半乳糖 DOP-1 0.6 − − 9 2.7 2.9 
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[1] TANG H X, ZHAO T W, SHENG Y J, et al. Dendrobium officinale Kimura et Migo:A review on its ethnopharmacology, phytochemistry, pharmacology, and industrialization[J]. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine:eCAM, 2017, 2017(3):7436259.
[2] 张霞, 白月明, 谢雪勤, 等. 铁皮石斛多糖分离纯化及其药理活性研究进展[J]. 食品工业科技,2022,43(24):412−422. [ZHANG X, BAI Y M, XIE X Q, et al. Advances in the isolation and purification of polysaccharides from Dendrobium officinale and their pharmacological activities[J]. Science and Technology of Food Industry,2022,43(24):412−422.] ZHANG X, BAI Y M, XIE X Q, et al . Advances in the isolation and purification of polysaccharides from Dendrobium officinale and their pharmacological activities[J]. Science and Technology of Food Industry,2022 ,43 （24 ）:412 −422 .[3] CHEN W H, LU J M, ZHANG J H, et al. Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and quality control of Dendrobium officinale Kimura et. Migo[J]. Frontiers in Pharmacology,2021,12:726528. doi: 10.3389/fphar.2021.726528
[4] GUO L H, QI J X, DU D, et al. Current advances of Dendrobium officinale polysaccharides in dermatology:A literature review[J]. Pharmaceutical Biology,2020,58(1):664−673. doi: 10.1080/13880209.2020.1787470
[5] LIN Y Y, YANG T, SHEN L Y, et al. Study on the properties of Dendrobium officinale fermentation broth as functional raw material of cosmetics[J]. Journal of Cosmetic Dermatology,2021,21(3):1216−1223.
[6] CHU W H, WANG P, MA Z, et al. Ultrasonic treatment of Dendrobium officinale polysaccharide enhances antioxidant and anti-inflammatory activity in a mouse D-galactose-induced aging model[J]. Food Science & Nutrition,2022,10(8):2620−2630.
[7] LIANG Y H, LIU G R, XIE L N, et al. Dendrobium candidum polysaccharide reduce atopic dermatitis symptoms and modulate gut microbiota in DNFB-induced AD-like mice[J]. Frontiers in Physiology, 2022:13976421.
[8] CHA S Y, PARK S Y, LEE J S, et al. Efficacy of Dendrobium candidum polysaccharide extract as a moisturizer[J]. Journal of Cosmetic Dermatology,2022,21(7):3117−3126. doi: 10.1111/jocd.14586
[9] MEDZHITOV R. Review article origin and physiological roles of inflammation[J]. Nature,2008(7203):428−435.
[10] MEDZHITOV R. Origin and physiological roles of inflammation[J]. Nature,2008,454(7203):428−435. doi: 10.1038/nature07201
[11] COUSSENS L M, WERB Z. Inflammation and cancer[J]. Nature,2002,420(6917):860−867. doi: 10.1038/nature01322
[12] HAMIDZADEH K, CHRISTENSEN S M, DALBY E, et al. Macrophages and the recovery from acute and chronic inflammation[J]. Annual Review of Physiology,2017,7:567−592.
[13] MURRAY P J, WYNN T A. Obstacles and opportunities for understanding macrophage polarization[J]. Journal of Leukocyte Biology,2011,89(4):557−563. doi: 10.1189/jlb.0710409
[14] TAKATANI N, BEPPU F, YAMANO Y, et al. Preparation of apoastaxanthinals and evaluation of their anti-inflammatory action against lipopolysaccharide-stimulated macrophages and adipocytes[J]. ACS omega,2022,7(26):22341−22350. doi: 10.1021/acsomega.2c01164
[15] ABDOLLAHI E, KEYHANFAR F, DELBANDI A A, et al. Dapagliflozin exerts anti-inflammatory effects via inhibition of LPS-induced TLR-4 overexpression and NF- κB activation in human endothelial cells and differentiated macrophages[J]. European Journal of Pharmacology,2022,918:174715. doi: 10.1016/j.ejphar.2021.174715
[16] 蔡海兰, 黄晓君, 聂少平, 等. 铁皮石斛多糖对RAW2647细胞分泌TNF- α的影响[J]. 中国药理学通报,2012,28(11):1553−1556. [CAI H L, HUANG X J, NIE S P, et al. Effects of polysaccharides from Dendrobium officinale on the secretion of TNF- α by RAW2647 cells[J]. Chinese Pharmacological Bulletin,2012,28(11):1553−1556.] CAI H L, HUANG X J, NIE S P, et al . Effects of polysaccharides from Dendrobium officinale on the secretion of TNF-α by RAW2647 cells[J]. Chinese Pharmacological Bulletin,2012 ,28 （11 ）:1553 −1556 .[17] 黄杰, 章莹, 严婧, 等. 铁皮石斛多糖对脂多糖诱导的巨噬细胞免疫调节作用[J]. 中国药学杂志,2017,52(7):548−552. [HUANG J, ZHANG Y, YAN J, et al. Effects of polysaccharides from Dendrobium officinale on lipopolysaccharide induced macrophage immune regulation[J]. Chin J Pharmacy,2017,52(7):548−552.] HUANG J, ZHANG Y, YAN J, et al . Effects of polysaccharides from Dendrobium officinale on lipopolysaccharide induced macrophage immune regulation[J]. Chin J Pharmacy,2017 ,52 （7 ）:548 −552 .[18] 童微, 余强, 李虎, 等. 铁皮石斛多糖化学修饰及其对免疫活性的影响[J]. 食品科学,2017,38(7):155−160. [TONG W, YU Q, LI H, et al. Chemical modification of polysaccharides from Dendrobium officinale and its effects on immune activity[J]. Food Science,2017,38(7):155−160.] TONG W, YU Q, LI H, et al . Chemical modification of polysaccharides from Dendrobium officinale and its effects on immune activity[J]. Food Science,2017 ,38 （7 ）:155 −160 .[19] 万晓莹, 刘振丽, 宋志前, 等. 中药多糖含量测定方法研究[J]. 中国中医基础医学杂志,2021,27(7):1175−1178. [WAN X Y, LIU Z L, SONG Z Q, et al. Study on determination of polysaccharide content in traditional Chinese medicine[J]. Chin J Basic Medicine of Traditional Chinese Medicine,2021,27(7):1175−1178.] WAN X Y, LIU Z L, SONG Z Q, et al . Study on determination of polysaccharide content in traditional Chinese medicine[J]. Chin J Basic Medicine of Traditional Chinese Medicine,2021 ,27 （7 ）:1175 −1178 .[20] 范传颍, 陶正明, 吴志刚. 苯酚硫酸法与蒽酮硫酸法测定铁皮石斛中多糖含量的比较[C]//中国植物学会. 生态文明建设中的植物学:现在与未来—中国植物学会第十五届会员代表大会暨八十周年学术年会论文集—第4分会场:资源植物学. 温州:浙江省亚热带作物研究所;温州医学院, 2013:1. [FAN C Y, TAO Z M, WU Z G. Comparison of phenol sulfuric acid method and anthrone sulfuric acid method for determination of polysaccharides in Dendrobium officinale[C]//Proceedings of the Botany in the Construction of Ecological Civilization:Present and Future-Proceedings of the 15th Congress and the 80th Annual Academic Conference of the Botanical Society of China-Session 4:Resource Botany, F. Wenzhou:Zhejiang Subtropical Crop Research Institute; Wenzhou Medical College, 2013:1.] FAN C Y, TAO Z M, WU Z G. Comparison of phenol sulfuric acid method and anthrone sulfuric acid method for determination of polysaccharides in Dendrobium officinale[C]//Proceedings of the Botany in the Construction of Ecological Civilization: Present and Future-Proceedings of the 15th Congress and the 80th Annual Academic Conference of the Botanical Society of China-Session 4: Resource Botany, F. Wenzhou: Zhejiang Subtropical Crop Research Institute; Wenzhou Medical College, 2013: 1.
[21] 余丽梅, 向平, 叶丽娟, 等. 四种水果中还原糖含量的测定与分析[J]. 广东化工,2021,48(16):243−244,248. [YU L M, XIANG P, YE L J, et al. Determination and analysis of reducing sugar content in four kinds of fruits[J]. Guangdong Chemical Industry,2021,48(16):243−244,248.] YU L M, XIANG P, YE L J, et al . Determination and analysis of reducing sugar content in four kinds of fruits[J]. Guangdong Chemical Industry,2021 ,48 （16 ）:243 −244,248 .[22] 于小芳. 不同产地, 不同年限铁皮石斛多糖中单糖组成的HPLC分析[J]. 医药与保健,2022,30(5):36−39. [YU X F. HPLC analysis of monosaccharide composition in polysaccharides of Dendrobium officinale from different Habitats and different ages[J]. Medicine & Health Care,2022,30(5):36−39.] YU X F . HPLC analysis of monosaccharide composition in polysaccharides of Dendrobium officinale from different Habitats and different ages[J]. Medicine & Health Care,2022 ,30 （5 ）:36 −39 .[23] 侯重文, 朱梓昂, 张金华, 等. 高效凝胶色谱法测定贻贝多糖含量及分子量[J]. 中国生化药物杂志,2016,36(11):9−12. [HOU C W, ZHU Z A, ZHANG J H, et al. Determination of mussel polysaccharide content and molecular weight by high-performance gel chromatography[J]. Chinese Journal of Biochemical Drugs,2016,36(11):9−12.] HOU C W, ZHU Z A, ZHANG J H, et al . Determination of mussel polysaccharide content and molecular weight by high-performance gel chromatography[J]. Chinese Journal of Biochemical Drugs,2016 ,36 （11 ）:9 −12 .[24] PRZYBYŁ K, KOSZELA K, ADAMSKI F, et al. Deep and machine learning using SEM, FTIR, and texture analysis to detect polysaccharide in raspberry powders[J]. Sensors,2021,21(17):5823−5823. doi: 10.3390/s21175823
[25] LI L, XU W J, LUO Y Z, et al. Aloe polymeric acemannan inhibits the cytokine storm in mouse pneumonia models by modulating macrophage metabolism[J]. Carbohydrate Polymers,2022,297:120032. doi: 10.1016/j.carbpol.2022.120032
[26] 李镜锐, 陶文扬, 杨颖, 等. 三种浙产铁皮石斛多糖的结构及免疫功效探究[J]. 浙江农业学报,2023,35(8):1888−1895. [LI J R, TAO W Y, YANG Y, et al. Study on the structure and immune effect of polysaccharides from three kinds of Dendrobium officinale produced in Zhejiang Province[J]. Journal of Agricultural Sciences,2023,35(8):1888−1895.] LI J R, TAO W Y, YANG Y, et al . Study on the structure and immune effect of polysaccharides from three kinds of Dendrobium officinale produced in Zhejiang Province[J]. Journal of Agricultural Sciences,2023 ,35 （8 ）:1888 −1895 .[27] 谭青云, 袁永俊, 王丹, 等. 不同提取方式对铁皮石斛多糖及体外降血糖的影响[J]. 食品科技,2019,44(6):202−206. [TAN Q Y, YUAN Y J, WANG D, et al. Effects of different extraction methods on polysaccharides of Dendrobium officinale and its hypoglycemic effect in vitro[J]. Food Science and Technology,2019,44(6):202−206.] TAN Q Y, YUAN Y J, WANG D, et al . Effects of different extraction methods on polysaccharides of Dendrobium officinale and its hypoglycemic effect in vitro[J]. Food Science and Technology,2019 ,44 （6 ）:202 −206 .[28] 赵小丹, 刘玉, 陶新玉, 等. 不同相对分子质量的铁皮石斛多糖对细胞免疫活性的影响[J]. 中国药学杂志,2023,58(11):997−1004. [ZHAO X D, LIU Y, TAO X Y, et al. Effects of polysaccharides of Dendrobium officinale with different molecular weights on cellular immune activity[J]. Chin J Pharmacy,2023,58(11):997−1004.] ZHAO X D, LIU Y, TAO X Y, et al . Effects of polysaccharides of Dendrobium officinale with different molecular weights on cellular immune activity[J]. Chin J Pharmacy,2023 ,58 （11 ）:997 −1004 .[29] YUAN S, DONG P Y, MA H H, et al. Antioxidant and biological activities of the lotus root polysaccharide-iron (III) complex[J]. Molecules,2022,27(20):7106. doi: 10.3390/molecules27207106
[30] XIANG X W, WANG R, YAO L W, et al. Anti-inflammatory effects of mytilus coruscus polysaccharide on RAW264.7 cells and DSS-induced colitis in mice[J]. Marine Drugs,2021,19(8):468−468. doi: 10.3390/md19080468
-
期刊类型引用(3)
1. 孙健，张民达，张文霞，熊晖，李振皓，徐靖，康传志，王志安. 不同生态种植模式的铁皮石斛品质特征分析. 中国现代中药. 2025(01): 20-28 . 
百度学术
2. 高斌，罗家兴，孙晓慧，任凌洁，唐泽宇，张芮娇，田洋. 核桃分心木提取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞的抗炎作用. 食品科技. 2024(09): 210-217+226 . 百度学术
3. 王超，刘青飞，黄红艳. 乳酸菌发酵香蕉、石斛复合汁的工艺条件优化及挥发性风味物质分析. 饮料工业. 2024(06): 5-10 . 百度学术
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