Comparison of Metabolite Characteristics of Blueberry Jiaosu and Sea-buckthorn Jiaosu Based on Non-targeted Metabolomics Approach
-
摘要: 为了探索不同酵素之间代谢产物的差异性，本研究以自然发酵的蓝莓酵素和沙棘酵素为样品，使用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱测定两种酵素样品中全部代谢物丰度，并对代谢物进行筛选和鉴定，利用代谢组学方法分析蓝莓酵素和沙棘酵素的代谢产物差异。结果表明，两种酵素样品中关键性代谢差异物为9种，通过KEGG数据库的比对分析可知富集代谢产物较多且显著性高的关键代谢通路有6条，主要体现在黄酮和黄酮醇的生物合成，泛酸和辅酶A的生物合成，酪氨酸代谢，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢，脯氨酸和精氨酸代谢，谷胱甘肽代谢。基于非靶向代谢组学分析，该文初步揭示了蓝莓和沙棘酵素代谢产物差异性，为水果酵素功能性的比较研究提供一定的理论基础和依据。Abstract: In order to explore the differences of metabolites between different Jiaosu samples, ultra-high performance liquid chromatography coupled to quadrupole time of flight mass spectrometry was used to identify and analyze the differential metabolites of blueberry jiaosu and sea-buckthorn jiaosu with metabolomics method. The results showed that 9 key metabolic differences in the two jiaosu samples. The comparative analysis based on the Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) database indicated that the high metabolites enrichment and high significance involved six metabolic pathways, which were flavonoid and flavonol biosynthesis, pantothenic acid and coenzyme A biosynthesis, tyrosine metabolism, alanine, aspartic acid and glutamate metabolism, proline and arginine metabolism, and glutathione metabolism. According to the non-targeted metabolome analysis, this research initially revealed the differences in the metabolites of blueberry jiaosu and sea-buckthorn jiaosu. Accordingly, a theoretical reference has been presented for the study of function of fruit jiaosu.
-
水果酵素是以新鲜水果为原料，加入糖类物质，在不控温的条件下，经多种有益微生物通过较长时间发酵而得到的功能性微生物产品[1]。水果酵素中含有多种有益营养物质，包括黄酮醇、类黄酮、花青素等多酚类物质，苹果酸、柠檬酸、乳酸等有机酸物质，多种活性酶类以及氨基酸等[2]。这些营养成分和生物活性成分的存在赋予了酵素多种生理功能，如抗氧化作用、抑菌作用、保护心血管作用、缓解肥胖等[3]。随着人们对功能性食品的需求与日俱增，酵素产品逐渐受到消费者和学者的广泛关注[1]。
代谢组学是指对一个生物体系在特定的时间和条件下所有小分子代谢物质的定性定量分析，从而描述生物内源性代谢物的整体及其对内、外因素变化应答规律[4]。非靶向代谢组学可以无偏向性地对所有小分子代谢物同时进行检测分析，筛选出靶标的代谢物[5-6]。目前代谢组学已被运用到食品研究中。胡明珍等[7]利用非靶向代谢组学分析了副干酪乳酸杆菌发酵枸杞汁各阶段的代谢差异，结果发现不同的发酵阶段对枸杞发酵液中氨基酸类物质的代谢影响最大。唐富豪等[8]利用非靶向代谢组学首次较系统评价了芥菜及其乳酸菌发酵芥菜的酚类物质组成和差异。
目前对酵素的研究主要集中在抗氧化方面，如金哲宁等[9]对沙棘酵素功能成分及其体外抗氧化性能进行了研究，王高坚等[10]对蓝莓酵素发酵过程中的抗氧化活性进行了研究。姚笛等[11]对火龙果、蓝莓、桑葚三种酵素的抗氧化活性与微生物多样性的相关性进行了研究。酵素的功能成分复杂，影响抗氧化活性的因素众多，而且难以运用某一特定的方法把所有的功能物质全部检测出来，因此为酵素的功能性成分及其作用的研究造成了较大困难[12]。代谢组学可以宏观的检测出样品间的主要差异物质，运用代谢组学技术分析不同酵素产品间的差异代谢物的研究未见报道。
本研究以新鲜的蓝莓和沙棘为原料，采用自然发酵的方法制得蓝莓酵素和沙棘酵素，使用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱测定蓝莓和沙棘酵素中全部代谢物质的丰度，结合多元统计分析方法筛选差异代谢物，分析相关的代谢通路，找出蓝莓和沙棘酵素之间的主要代谢差异，为水果酵素中特征性功能性成分的研究提供有效地研究策略。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
新鲜蓝莓和新鲜沙棘 均购买于当地农贸市场；单晶冰糖 购买于安徽福香源生态农业科技有限公司；甲醇（色谱级）、乙腈（质谱级）、2-氯苯丙氨酸（纯度98.5%）、甲酸（质谱级）、甲酸铵（纯度99.9%） 国药集团；去离子水 通过Millipore系统制得。
H1850-R冷冻离心机 湖南湘仪公司；QL-866混匀仪 德国Vortex Mixer公司；5305真空浓缩仪 德国Eppendorf公司；UltiMate 3000液相色谱仪、Q Exactive质谱仪 美国赛默飞世尔科技公司。
1.2 实验方法
1.2.1 酵素的制备
用无菌水在无菌条件下分别轻轻冲洗蓝莓和沙棘，除去表面沙子和灰尘，在无菌操作台中自然晾干。冰糖用紫外杀菌，酵素罐（2 L）用高压蒸汽灭菌。将发酵水果原料与冰糖按质量比1:1，分别加入已灭菌的酵素罐中，一层原料一层冰糖，食材压实，排尽空气，装至酵素罐2/3处，封口，放置暗处发酵一年[13]。取每种水果发酵样品各6个平行，收集密封后于液氮中保存。
1.2.2 样品制备及处理
在4 ℃下将所有样本融化30 min，从每个样本中各取100 µL于2 mL离心管中，向每个离心管加入400 µL甲醇并振荡60 s，使其充分混匀；在12000 r/min 4 ℃下离心10 min，将全部上清液转移至新的2 mL离心管中，真空浓缩干燥；用150 µL 2-氯苯丙氨酸（4 mg/L）80%甲醇溶液复溶，使用0.22 µm 膜过滤上清液，得到待测样本，进行LC-MS检测[14-16]。每个样品均有6个生物学重复。
1.2.3 仪器检测条件
超高效液相色谱条件：采用Thermo Ultimate 3000仪器进行色谱分离，使用ACQUITY UPLC®HSS T3 1.8 µm（2.1 mm×150 mm）色谱柱，将自动进样器温度设为8 ℃，流速为0.25 mL/min，色谱柱温度维持在40 ℃，进样2 μL进行梯度洗脱，流动相为正离子0.1%甲酸水（C）-0.1%甲酸乙腈（D）；负离子5 mmol/L甲酸铵水（A）-乙腈（B）。梯度洗脱程序为0~1 min，2%流动相B/D；1~9 min，2%~50% 流动相B/D；9~12 min，50%~98%流动相B/D；12~13.5 min，98%流动相B/D；13.5~14 min，98%~2%B/D；14~20 min，2% D-正模式（14~17 min，2% B-负模式）[17]。
飞行时间质谱条件：电喷雾离子源（ESI），正离子喷雾电压为3.50 kV，负离子喷雾电压为2.50 kV，鞘气30 arb，辅助气10 arb。毛细管温度设置为325 ℃，以分辨率70000进行全扫描，扫描范围为81~1000 u，利用HCD对其进行二级裂解，碰撞电压为30 eV，同时利用动态排除除去没不必要的MS/MS信息[18]。
1.3 数据处理
利用Proteowizard软件（v3.0.8789）对数据进行峰识别、过滤、对齐，对数据的峰面积进行归一化。对于多元变量分析，采用主成分分析方法（principal components analysis，PCA），对数据进行质量控制（QC）与质量保证（QA）分析。使用R2和Q2进行主成分分析（PCA）和最小二乘法判别分析PLS-DA（Partial Least Squares Discriminant Analysis），根据学生式t检验的P值<0.05，同时PLS-DA模型主成分的VIP值>1，进行差异性代谢物的筛选。采用基于KEGG数据库中的MetPA数据库分析差异代谢物的相关代谢通路。对差异显著的代谢通路进行注释并分析各差异代谢路径之间的总关系图。
2. 结果与分析
2.1 两种酵素样品的代谢物主成分分析（PCA）
图1是蓝莓酵素和沙棘酵素这两种样品的主成分分析图。第一主成分（PC1）的贡献率是48.9%，第二主成分（PC2）的贡献率是8.4%，两者总贡献率是57.3%，从整体上能够反映出两种样品之间的代谢差异。从第一主成分方向看，蓝莓酵素在第一主成分负轴上，沙棘酵素在第一主成分正轴上，从第二主成分方向看，蓝莓酵素除了一个偏离较大的样本外，其他样本基本在中心线附近，沙棘酵素样本也分布在中心线附近，两种样品在PC1表现出组间差异，在PC2表现出组内聚集，说明两种酵素样品的代谢物差异主要体现在第一主成分上。
![]()
图 1 蓝莓酵素（A）和沙棘酵素（B）的PCA得分图注：A：蓝莓酵素，B：沙棘酵素，红色点代表蓝莓酵素的6个样品，绿色点代表沙棘酵素的6个样品。Figure 1. PCA score chart for blueberry jiaosu (A) and sea-buckthorn jiaosu (B)2.2 两种酵素样品的PLS-DA分析
PLS-DA是偏最小二乘法-判别分析，是一种监督模型。PLS-DA可以忽略组内误差，消除与研究目的无关的随机误差，因此本文进一步采用PLS-DA方法对构建的模型进行验证。两种酵素样品的PLS-DA得分图如图2（a）所示，蓝莓酵素样品主要分布在置信区间左侧，沙棘酵素样品主要分布在置信区间右侧，说明该模型能够对两种酵素样品进行有效区分。此外，模型的交叉验证参数R2X=0.555，R2Y=1，Q2=0.987，这三个模型参数均大于0.5，说明模型的可解释度和可预测性良好，因此本研究建立的PLS-DA模型能够有效解释两种酵素之间的代谢差异。
![]()
图 2 两种酵素样品的PLS-DA得分图（a）和置换检验图（b）注：A代表蓝莓酵素，B代表沙棘酵素。Figure 2. PLS-DA score chart (a) and replacement test chart (b) for two jiaosu samples因为PLS-DA在建模时对样品进行了指定和分组，所以能更大地区分组间差异，但这也导致数据的PLS-DA模型存在过拟合的问题，因此采用随机置换检验法对模型进行外部交叉验证，如图2（b）所示，回归线呈向上趋势，图中所有蓝色的Q2点从左到右均低于最右侧的原始的蓝色的Q2点，说明置换检验过关，模型不存在过度拟合的现象，可用于探索两种酵素样品的代谢物差异。
2.3 差异代谢物组学分析
根据PLS-DA模型分析结果，将t检验的P值小于0.05的代谢物和样本之间代谢物浓度的差异倍数FC值大于1.5或小于0.5的代谢物作为筛选标准，来筛选蓝莓和沙棘酵素之间差异显著的代谢物。两种酵素样品中共得到3728个差异代谢物，上调的差异代谢物有1151个，下调的差异代谢物的有2577个，由此可知，酵素中的代谢物组成非常丰富，用传统方法无法对酵素中的代谢物质进行全部研究而且无法对主要代谢物进行筛选和鉴定。经筛选处理后，共筛选出390种主要差异代谢物，主要体现在有机酸类、氨基酸类以及黄酮类。
2.4 差异代谢物富集通路分析
由蓝莓和沙棘两种酵素的差异代谢物数量可知，酵素的发酵是一个非常复杂的过程，因此需要进一步对其代谢通路进一步分析。通过KEGG数据库的比对，共检测出61条代谢通路，将其结果绘制成气泡图，如图3所示，图中每一个气泡表示一个KEGG Pathway通路。气泡的大小和横坐标数值表示影响值，气泡越大和横坐标数值越大表示此通路越重要。气泡颜色和纵坐标数值表示富集分析的P值（取负对数，即-lg），颜色越深P值越小，富集程度越显著。由图3可知，黄酮和黄酮醇的生物合成处的气泡最大，颜色最深，说明蓝莓酵素和沙棘酵素之间差异最显著的代谢物质是黄酮类化合物。
根据差异代谢物在不同条件下，表达出的代谢物质之间的变化，通过比较蓝莓和沙棘酵素之间的KEGG代谢途径，主要有13条代谢途径，由图4所示。其中差异较为显著的代谢路径是：黄酮和黄酮醇生物合成、β-丙氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、赖氨酸生物合成、泛酸和辅酶A生物合成、苯丙氨酸代谢、柠檬酸循环（TCA循环）、酪氨酸代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、谷胱甘肽代谢。但是结合差异代谢物数据分析发现，β-丙氨酸代谢、赖氨酸生物合成、苯丙氨酸代谢、柠檬酸循环（TCA循环）、乙醛酸和二羧酸代谢路径中并没有差异代谢物质的出现。因此对有差异代谢物出现的6条代谢路径进行具体分析，如图5所示。将蓝莓酵素和沙棘酵素进行比较，发现在两种酵素中某些物质的含量差异较为显著，把其数值的差异表示为差异倍数。
![]()
图 4 蓝莓和沙棘酵素主要KEGG代谢差异路径Figure 4. Main KEGG metabolic difference pathway of blueberry-jiaosu and sea-buckthorn jiaosu![]()
图 5 蓝莓和沙棘酵素的主要差异代谢物途径注：图中数字表示酶的编号。图中黑点表示上调，代表此成分在蓝莓中比较多；方形表示下调，代表此成分在沙棘中比较多。（A）黄酮和黄酮醇生物合成；（B）精氨酸和脯氨酸代谢；（C）丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢；（D）泛酸和辅酶A生物合成；（E）酪氨酸代谢；（F）谷胱甘肽代谢Figure 5. The main differences in metabolite pathways between blueberries and sea buckthorn enzymes图5A是黄酮和黄酮醇生物合成路径，在该途径中蓝莓酵素与沙棘酵素相比，蓝莓酵素中山奈素，山奈酚、木犀草素都表达为上调，差异倍数分别为2.2911、3.4576、4.974。沙棘酵素中3-O-甲基槲皮素表达为下调，差异倍数为0.04135。由此路径可知，蓝莓酵素中富含山奈素、山奈酚和木犀草素，三者都具有抗癌、抗菌、抗炎、免疫增强等作用[19-20]。沙棘酵素中富含3-O-甲基槲皮素，这种物质可抑制癌细胞增殖、转移和诱导凋亡[21]。山奈酚经酶的催化合成山奈素，在类黄酮3'-单加氧酶的作用下，山奈酚转化为槲皮素，通过黄酮醇3-O-葡萄糖乙酰转移酶，将槲皮素转移成异槲皮苷，槲皮素通过酶催化反应为3-O-甲基槲皮素，山奈酚在经过类莫酮生物合成反应生成芹菜素，由芹菜素通过黄酮类化合物3'-单氧酶合成为木犀草素。
图5B是精氨酸和脯氨酸代谢路径，在该途径中，1-吡咯啉-5-碳酸钙通过吡咯啉-5-羧酸还原酶与脯氨酸相互转化，脯氨酸通过脯氨酰4-羟化酶转化为4-羟脯氨酸，再经过酶的催化生成1-吡咯啉-3-羟基-5-羧酸盐，4-羟基谷氨酸半醛和1-吡咯啉-3-羟基-5-羧酸盐相互转化，后者通过1-吡咯啉-5-羧酸脱氢酶生成L-赤型-4-羟基谷氨酸。N4-乙酰基-氨基丁醛通过乙醛脱氢酶（NAD+）转化为N4-乙酰氨基丁酸，在经酶的催化生成4-氨基丁酸，最后经酶多步催化生成精氨酸。
图5C是丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢路径，在该途径中蓝莓酵素与沙棘酵素相比，沙棘酵素中的L-天冬氨酸表达为下调，差异倍数为0.42899，结果说明，沙棘酵素中富含L-天冬氨酸，具有促进肝机能的作用[22]。这个途径是围绕柠檬酸循环进行的，分为两条路径，一条路径为L-天冬氨酸通过酶的催化氧化转化为延胡索酸盐和L-天冬酰胺；另一条为2-酮戊二酸经过谷氨酸合成酶（NADH）催化生成L-谷氨酸盐，然后通过谷氨酸脱羧酶转化为4-氨基丁酸脂（GABA），经4-氨基丁酸酯经γ－氨基丁酸转氨酶作用，生成琥珀酸半醛，利用琥珀酸半醛脱氢酶生成琥珀酸，最后L-谷氨酸盐通过1-苯丙胺-5-甲基苯丙胺脱氢酶转化为L-1-吡咯啉-5-羧酸盐。
图5D是泛酸和辅酶A生物合成，在该路径中蓝莓酵素与沙棘酵素相比，沙棘酵素中L-缬氨酸表达为下调，差异倍数为0.31624，表明沙棘酵素中富含L-缬氨酸，可作为营养增补剂[23]。L-缬氨酸经过酶的多步催化生成R-泛酸。然后，尿嘧啶通过二氢嘧啶脱氢酶（DADP+）与5,6-二氢尿嘧啶相互转化，5,6-二氢尿嘧啶通过二氢嘧啶酶转化为N-氨甲酰-β-丙氨酸，N-氨甲酰-β-丙氨酸通过β-脲基丙酸酶转化为β-丙氨酸。
图5E是酪氨酸代谢路径，在该路径中酪氨酸通过天冬氨酸转氨酶、酪氨酸转氨酶和组氨酸磷酸转氨酶联合作用，转化成4-羟基-苯丙酮酸，再通过4-羟基苯甲酸酯二氧酶生成尿黑酸，经多种酶催化生成延胡索酸盐，由琥珀酸和延胡索酸盐共同进入柠檬酸循环。
图5F是谷胱甘肽代谢路径，蓝莓酵素与沙棘酵素相比，蓝莓酵素中谷胱甘肽表达为上调，差异倍数为5.2098；沙棘酵素中抗坏血酸表达为下调，差异倍数为0.66454，表明蓝莓酵素中富含谷胱甘肽，沙棘酵素中富含抗坏血酸，二者都具有抗氧化作用[24-25]。谷胱甘肽在谷胱甘肽水解酶作用下，一条合成途径为催化合成L-半胱氨酰甘氨酸，再由丙氨酸氨基转移酶和氨肽酶的联合作用下合成L-半胱氨酸，然后，由L-γ-谷氨酰半胱氨酸通过γ-谷氨酰环素转移酶催化下生成L-半胱氨酸和通过谷胱甘肽合成酶生成谷胱甘肽，另一条合成途径为催化合成L-γ-谷氨酸-L-氨基酸，通过γ-谷氨酰环素转移酶作用生成5-羟脯氨酸，然后在5-氧丙烯酸酶（ATP-水解）催化下生成L-谷氨酸盐。谷胱甘肽在色氨酸和酶的作用下生成谷胱甘肽亚精胺，由谷胱甘肽亚精胺在酶的催化下生成色氨硫酮，在色氨硫酮生成二硫色胺途中，抗坏血酸在L-焦化过氧化酶催化下生成脱氢抗坏血酸。
2.5 差异代谢物的分析
根据蓝莓酵素和沙棘酵素的最为显著的关键代谢通路，共筛选并鉴定出9个关键代谢物，如表1所示。芹菜素、山奈素、木犀草素、山奈酚、3-O-甲基槲皮素属于黄酮类，山奈酚、山奈素、木犀草素这三种物质在蓝莓酵素中前三种物质平均相对丰度均呈上升趋势。沙棘酵素中3-O-甲基槲皮素平均相对丰度均呈上升趋势。黄酮类物质不仅具有抗氧化性，还具有抗菌抗病毒抗肿瘤等功效。L-天冬酰胺、谷胱甘肽、L-缬氨酸均属于氨基酸类，其中L-天冬酰胺和L-缬氨酸在沙棘酵素中平均相对丰度均呈上升趋势，二者对治疗肝脏疾病有重要意义。蓝莓酵素中富含谷胱甘肽，不仅可以作为体内的自由基清除剂，还可以起到预防癌症、动脉硬化和延缓衰老的作用。抗坏血酸属于有机酸类，在沙棘酵素中平均相对丰度呈上升趋势，可以起到增强免疫力、延长机体寿命等作用。
表 1 蓝莓酵素和沙棘酵素关键代谢差异物Table 1. Key metabolic differential substances between blueberries and sea buckthorn enzymes名称 质核比 相对分子质量 P值 倍数变化 A vs B A vs B L-天冬酰胺 131.0445496 132.1179 0.005074868 0.42899 芹菜素 271.0603732 270.2369 0.030638988 1.4622 山奈素 299.0557494 300.2629 0.008239019 2.2911 山柰酚 287.0536468 286.2363 0.005074868 3.4576 木犀草素 285.0395782 286.2363 0.045327562 4.974 3-O-甲基槲皮素 315.0503251 316.2623 0.005074868 0.04135 谷胱甘肽 308.0905336 307.3235 0.005074868 5.2098 抗坏血酸 175.0239321 176.1241 0.173485468 0.66454 L-缬氨酸 118.0867005 117.1463 0.005074868 0.31624 注：A为蓝莓酵素，B为沙棘酵素。 3. 结论
本研究基于非靶向代谢组学技术，研究了蓝莓酵素和沙棘酵素的差异代谢物质，共鉴定分析出3728个差异代谢物，但是通过对差异代谢物通路分析，筛选出6条最为显著的关键通路，其中包含9个关键代谢物，即芹菜素、山奈素、山奈酚、木犀草素、3-O-甲基槲皮素、L-天冬酰胺、谷胱甘肽、L-缬氨酸、抗坏血酸，其中有5种参与黄酮和黄酮醇生物合成，1种参与丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢，2种参与谷胱甘肽代谢，1种参与泛酸和辅酶A生物合成。从中可以映射出在黄酮和黄酮醇生物合成中代谢差异物质最多，其中蓝莓酵素中富含山奈酚、山奈素和木犀草素、谷胱甘肽，沙棘酵素中富含3-O-甲基槲皮素、L-天冬酰胺、L-缬氨酸、抗坏血酸。从蓝莓和沙棘酵素的差异代谢物数量可知，水果酵素中的成分非常复杂，在评价酵素功能成分时，无法利用传统的分析方法对代谢物质进行鉴定，本研究首次利用非靶向代谢组学系统地分析了两种常见水果酵素的代谢差异，找出了最关键的代谢差异物，为后续更精准地评价酵素功能性提供了一定的理论参考。
-
![]()
图 1 蓝莓酵素（A）和沙棘酵素（B）的PCA得分图
注：A：蓝莓酵素，B：沙棘酵素，红色点代表蓝莓酵素的6个样品，绿色点代表沙棘酵素的6个样品。
Figure 1. PCA score chart for blueberry jiaosu (A) and sea-buckthorn jiaosu (B)
![]()
图 2 两种酵素样品的PLS-DA得分图（a）和置换检验图（b）
注：A代表蓝莓酵素，B代表沙棘酵素。
Figure 2. PLS-DA score chart (a) and replacement test chart (b) for two jiaosu samples
![]()
图 4 蓝莓和沙棘酵素主要KEGG代谢差异路径
Figure 4. Main KEGG metabolic difference pathway of blueberry-jiaosu and sea-buckthorn jiaosu
![]()
图 5 蓝莓和沙棘酵素的主要差异代谢物途径
注：图中数字表示酶的编号。图中黑点表示上调，代表此成分在蓝莓中比较多；方形表示下调，代表此成分在沙棘中比较多。（A）黄酮和黄酮醇生物合成；（B）精氨酸和脯氨酸代谢；（C）丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢；（D）泛酸和辅酶A生物合成；（E）酪氨酸代谢；（F）谷胱甘肽代谢
Figure 5. The main differences in metabolite pathways between blueberries and sea buckthorn enzymes
表 1 蓝莓酵素和沙棘酵素关键代谢差异物
Table 1 Key metabolic differential substances between blueberries and sea buckthorn enzymes
名称 质核比 相对分子质量 P值 倍数变化 A vs B A vs B L-天冬酰胺 131.0445496 132.1179 0.005074868 0.42899 芹菜素 271.0603732 270.2369 0.030638988 1.4622 山奈素 299.0557494 300.2629 0.008239019 2.2911 山柰酚 287.0536468 286.2363 0.005074868 3.4576 木犀草素 285.0395782 286.2363 0.045327562 4.974 3-O-甲基槲皮素 315.0503251 316.2623 0.005074868 0.04135 谷胱甘肽 308.0905336 307.3235 0.005074868 5.2098 抗坏血酸 175.0239321 176.1241 0.173485468 0.66454 L-缬氨酸 118.0867005 117.1463 0.005074868 0.31624 注：A为蓝莓酵素，B为沙棘酵素。 
下载: 导出CSV
-
[1] FENG Y, ZHANG M, MUJUMDAR A S, et al. Recent research process of fermented plant extract: A review[J]. Trends in Food Science & Technology,2017,65(5):40−48.
[2] 张梦梅, 刘芳, 胡凯弟, 等. 酵素食品微生物指标与主要功效酶及有机酸分析[J]. 食品与发酵工业,2017,43(9):195−200. [ZHANG M M, LIU F, HU K D, et al. Enzyme food microbial indicators and main efficacy enzymes and organic acid analysis[J]. Food and Fermentation Industry,2017,43(9):195−200. doi: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.014137 ZHANG M M, LIU F, HU K D, et al. Enzyme food microbial indicators and main efficacy enzymes and organic acid analysis[J]. Food and Fermentation Industry, 2017, 43(9): 195-200. doi: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.014137
[3] YANG J W, KIM K T, KIM S S. Fermentation characteristics and anti-Helicobacter pylori activity of aqueous broccoli fermented by Lactobacillus plantarum MG208[J]. Journal of Applied Biological Chemistry,2015,58(1):89−95. doi: 10.3839/jabc.2015.015
[4] WANG Q Z, WU C Y, CHEN T, et al. Integrating metabolomics into systems biology framework to exploit metabolic complexity: strategies and applications in microorganisms[J]. Applied Microbiology and Biotechnology,2006,70(2):151−161. doi: 10.1007/s00253-005-0277-2
[5] 尹晓月, 王维东, 钱朝菊, 等. 基于UPLC-MS的沙米代谢组学分析[J]. 中国实验方剂学杂志,2018,24(15):51−56. [YIN X Y, WANG W D, QIAN C J, et al. Shami metabolomic analysis based on UPLC-MS[J]. Journal of Experimental Pharmacology, China,2018,24(15):51−56. doi: 10.13422/j.cnki.syfjx.20181503 YIN X Y, WANG W D, QIAN C J, et al. Shami metabolomic analysis based on UPLC-MS[J]. Journal of Experimental Pharmacology, China, 2018, 24(15): 51-56. doi: 10.13422/j.cnki.syfjx.20181503
[6] XU Y J, WANG C S, EUGENE W X, et al. Recent developments and applications of metabolomics in microbiological investigations[J]. Trends in Analytical Chemistry,2014,56(5):37−48.
[7] 胡明珍, 刘慧燕, 潘琳, 等. 基于非靶向代谢组学分析副干酪乳酸杆菌发酵枸杞汁各阶段代谢差异[J]. 食品科学,2022,43(8):142−149. [HU M Z, LIU H Y, PAN L, et al. Analysis of metabolic differences of Goji juice fermented by Lactobacillus paracasei based on non-targeted metabonomics[J]. Food Science,2022,43(8):142−149. HU M Z, LIU H Y, PAN L, et al. Analysis of metabolic differences of Goji juice fermented by Lactobacillus paracasei based on non-targeted metabonomics[J]. Food Science, 2022, 43(8): 142-149.
[8] 唐富豪, 滕建文, 韦保耀, 等. 基于非靶向代谢组学评价传统发酵对客家酸芥菜酚类化合物组成的影响[J]. 食品与发酵工业,2021,47(8):128−133. [TANG F H, TENG J W, WEI B Y, et al. The effect of traditional fermentation on the composition of Hakka acid mustard phenolic compounds was evaluated based on non-target metabolomics[J]. Food and Fermentation Industry,2021,47(8):128−133. TANG F H, TENG J W, WEI B Y, et al. The effect of traditional fermentation on the composition of Hakka acid mustard phenolic compounds was evaluated based on non-target metabolomics[J]. Food and Fermentation Industry, 2021, 47(8): 128-133.
[9] 金哲宁, 方晟, 沙如意, 等. 沙棘酵素功能成分及其体外抗氧化性能研究[J]. 食品研究与开发,2020,41(17):20−28. [JIN Z N, FANG C, SHA R Y, et al. Study on the functional composition of sea buckthorn enzymes and their in vitro antioxidant properties[J]. Food Research and Development,2020,41(17):20−28. JIN Z N, FANG C, SHA R Y, et al. Study on the functional composition of sea buckthorn enzymes and their in vitro antioxidant properties[J]. Food Research and Development, 2020, 41(17): 20-28.
[10] 王高坚, 王珍珍, 李嘉嘉, 等. 蓝莓酵素的体外抗氧化及对秀丽隐杆线虫的氧化应激保护作用[J]. 食品工业科技,2021,42(15):343−350. [WANG G Z, WANG Z Z, LI J J, et al. Antioxidant effect of blueberry enzyme in vitro and oxidative stress protection against Caenorhabditis elegans[J]. Food and Fermentation Industry,2021,42(15):343−350. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2020110157 WANG G Z, WANG Z Z, LI J J, et al. Antioxidant effect of blueberry enzyme in vitro and oxidative stress protection against Caenorhabditis elegans[J]. Food and Fermentation Industry, 2021, 42(15): 343-350. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2020110157
[11] 姚笛, 徐磊, 李佳慧. 三种酵素的抗氧化活性与微生物多样性的相关性研究[J]. 天然产物研究与开发,2020,32(6):928−936. [YAO D, XU L, LI J H. The correlation between antioxidant activity of the three enzymes and micro-biodiversity[J]. Natural Pro-ducts Research and Development,2020,32(6):928−936. doi: 10.16333/j.1001-6880.2020.6.004 YAO D, XU L, LI J H. The correlation between antioxidant activity of the three enzymes and micro-biodiversity[J]. Natural Products Research and Development, 2020, 32(6): 928-936. doi: 10.16333/j.1001-6880.2020.6.004
[12] 杨青青, 王智荣, 彭林, 等. 基于代谢组学分析两种产地青花椒中非挥发性成分的差异[J]. 食品与发酵工业,2021,47(12):216−223. [YANG Q Q, WANG Z R, PENG L, et al. Based on metabolomic analysis of the differences between non-volatile components of green peppers in two origins[J]. Food and Fermentation Industry,2021,47(12):216−223. doi: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.026480 YANG Q Q, WANG Z R, PENG L, et al. Based on metabolomic analysis of the differences between non-volatile components of green peppers in two origins[J]. Food and Fermentation Industry, 2021, 47(12): 216-223. doi: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.026480
[13] 蒋增良, 刘晓庆, 王珍珍, 等. 葡萄酵素有机酸分析及其体外抗氧化性能[J]. 中国食品学报,2017,17(5):255−262. [JIANG Z L, LIU X Q, WANG Z Z, et al. Analysis of grape enzyme organic acids and their in vitro antioxidant properties[J]. China Food Journal,2017,17(5):255−262. doi: 10.16429/j.1009-7848.2017.05.033 JIANG Z L, LIU X Q, WANG Z Z, et al. Analysis of grape enzyme organic acids and their in vitro antioxidant properties[J]. China Food Journal, 2017, 17(5): 255-262. doi: 10.16429/j.1009-7848.2017.05.033
[14] DUNN W B, BROADHURST D, BEGLEY P, et al. Procedures for large-scale metabolic profiling of serum and plasma using gas chromatography and liquid chromatography coupled to mass spectrometry[J]. Nature Protocols,2011,6(7):1060−1083. doi: 10.1038/nprot.2011.335
[15] WANG Q Y, YE T T, ZHENG S J, et al. A stable isotope labelling assisted LC-MS method for the determination of polyamines in micro-tissues of rice[J]. Analytical Methods,2017,9(23):3541−3548. doi: 10.1039/C7AY00805H
[16] VANKOVA D V, TODOROVA M N, KISSELOVA-KANEVA Y D, et al. Development of new and robust LC-MS method for simultaneous quantification of polyphenols from Sambucus ebulus fruits[J]. Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies,2019,42(13−14):408−416.
[17] LI J, MENG Z Y, GAN H, et al. Simultaneous quantitation of E0703, a novel radioprotective agent and its oxidative metabolite M1 in human plasma by UPLC-MS/MS, and application to clinical pharmacokinetics[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2019,174(5):63−69.
[18] TANG CHUANHUI, TAO GUANJUN, WANG YUE, et al. Identification of α-tocopherol and its oxidation products by ultra-performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2020,68(2):669−677. doi: 10.1021/acs.jafc.9b06544
[19] 马斐斐. 刺榆刺中黄酮类化合物的分离与抗氧化及抑菌活性的研究[D]. 长春: 吉林农业大学, 2013. MA F F. Research on the separation of flavonoids in hedgehogs and the activity of antioxidants and antibacterials[D]. Changchun: Jilin Agricultural University, 2013.
[20] 莫景颖, 罗笑珊, 张海怡, 等. 木犀草素抗肿瘤作用研究概况[J]. 亚太传统医药,2021,17(2):177−181. [MO J Y, LUO X S, ZHANG H Y, et al. Wood rhinoceros anti-tumor effect research overview[J]. Asia Pacific Traditional Medicine,2021,17(2):177−181. MO J Y, LUO X S, ZHANG H Y, et al. wood rhinoceros anti-tumor effect research overview[J]. Asia Pacific Traditional Medicine, 2021, 17(2): 177-181.
[21] 蔚帅帅. 3-甲氧基槲皮素抑制鼻咽癌细胞增殖、转移和诱导凋亡的机制研究[D]. 广州: 广东医学院, 2015. WEI S S. 3-Methoxy quercetin inhibits the mechanism of proliferation, metastasis and apoptosis of nasopharyngeal cancer cells[D]. Guangzhou: Guangdong Medical College, 2015.
[22] 张有明, 曹成, 林奇, 等. L-天冬氨酸中的氢键作用研究[J]. 化学研究与应用,2006,4(8):952−954. [ZHANG Y M, CAO C, LIN Q, et al. Study on the action of hydrogen bonds in L-tiandonine[J]. Chemical Research and Application,2006,4(8):952−954. doi: 10.3969/j.issn.1004-1656.2006.08.014 ZHANG Y M, CAO C, LIN Q, et al. Study on the action of hydrogen bonds in L-tiandonine[J]. Chemical Research and Application, 2006, 4(8): 952-954. doi: 10.3969/j.issn.1004-1656.2006.08.014
[23] 王均成, 王可, 张春宇. L-缬氨酸的应用和育种研究进展[J]. 发酵科技通讯,2012,41(1):30−34. [WANG J C, WANG K, ZHANG C Y. Advances in the application and breeding of L-proline[J]. Fermentation Technology Newsletter,2012,41(1):30−34. doi: 10.3969/j.issn.1674-2214.2012.01.011 WANG J C, WANG K, ZHANG C Y. Advances in the application and breeding of L-proline[J]. Fermentation Technology Newsletter, 2012, 41(1): 30-34. doi: 10.3969/j.issn.1674-2214.2012.01.011
[24] 冉玲, 黄琰, 曾红棱, 等. 酚酸与谷胱甘肽的抗氧化活性及联合抗氧化作用[J]. 现代食品科技,2020,36(3):48−55. [RAN L, HUANG W, ZENG H L, et al. Antioxidant activity and combined antioxidant effects of phenolic acid and glutathione[J]. Modern Food Technology,2020,36(3):48−55. doi: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2020.3.007 RAN L, HUANG W, ZENG H L, et al. Antioxidant activity and combined antioxidant effects of phenolic acid and glutathione[J]. Modern Food Technology, 2020, 36(3): 48-55. doi: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2020.3.007
[25] 米书梅, 阮征, 温艳梅, 等. 几种常见果蔬抗氧化活性与多酚和维生素C的关系[J]. 食品工业科技,2013,1(34):133−136. [MIS M, RUAN Z, WEN Y M, et al. Several common antioxidant activities of fruits and vegetables are related to polyphenols and vitamin C[J]. Food Industry Technology,2013,1(34):133−136. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2013.01.008 MIS M, RUAN Z, WEN Y M, et al. Several common antioxidant activities of fruits and vegetables are related to polyphenols and vitamin C[J]. Food Industry Technology, 2013, 1(34): 133-136. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2013.01.008
-
期刊类型引用(5)
1. 袁辛锐，杨其长，王芳，林致通. 紫胡萝卜复合发酵饮料的研制及其挥发性风味物质分析. 食品工业科技. 2024(02): 201-209 . 
本站查看
2. 林彦，段涵怡，叶敬榕，杨雪，张凤英. 微波辅助热水浸提黄芩茎叶多糖的工艺优化. 饲料工业. 2024(10): 106-112 . 百度学术
3. 黄越，黄传书，杨碧文，赵珮，刘艳，王梅，吴均，戴宏杰. 桑椹酒发酵工艺优化及其挥发性成分分析. 食品研究与开发. 2024(12): 111-119 . 百度学术
4. 赵港国，李晓晓，张婧靖，王军燕，麻静静，甄攀，贾丽艳. 基于响应面法优化库德毕赤酵母强化发酵工艺生产清香型白酒. 中国酿造. 2024(08): 224-229 . 百度学术
5. 崔粲，梁雨璐，黄建梅. 党参酒发酵工艺优化及成分表征. 中国现代中药. 2024(10): 1754-1764 . 百度学术
其他类型引用(4)
下载:
计量
- 文章访问数: 291
- HTML全文浏览量: 57
- PDF下载量: 23
- 被引次数: 9
