Deep Eutectic Solvents Extraction and Optimization of Amentoflavone from Selaginella moellendorffii
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摘要: 采用低共熔溶剂超声辅助技术提取江南卷柏中穗花杉双黄酮(AME），并优化其工艺参数。通过一步法制备3种低共熔溶剂，并筛选出提取江南卷柏AME效果最佳低共熔溶剂，通过核磁共振、傅里叶红外光谱和热重分析表明低共熔溶剂被成功制备，并采用单因素和响应面法优化江南卷柏中AME的提取工艺。结果表明，最佳低共熔溶剂为氯化胆碱:香叶醇，最佳提取工艺条件为：摩尔比1:2，含水量20%，液固比10 mL/g，超声时间31 min，超声功率为240 W。在此条件下，AME的提取得率为（2.75±0.12） mg/g。与热浸法、冷浸法、离子液体超声提取法、乙醇超声提取法进行对比表明，低共熔溶剂结合超声提取不仅能够节约提取时间，还能显著增加AME提取得率。Abstract: To extract the amentoflavone (AME) from Selaginella moellendorffii with deep eutectic solvent technology, three kinds of deep eutectic solvents were prepared by one-step method, and the best deep eutectic solvent for extracting AME of Selaginella moellendorffii was selected. The results of the clear magnetic resonance, fourier infrared spectroscopy and thermogravimetric analysis indicated that the deep eutectic solvent was successfully prepared. The extraction process of AME from Selaginella moellendorffii was optimized by single factors and response surface method. Results showed that, the best deep eutectic solvent was choline chloride:geraniol. The best extraction conditions were molar ratio 1:2, water content 20%, liquid-solid ratio 10 mL/g, ultrasound time 31 min, and the ultrasonic power was 240 W. Under this condition, the actual content of AME was (2.75±0.12) mg/g. The results of comparison with hot immersion method, cold immersion method, ionic liquid ultrasonic extraction method and ethanol ultrasonic extraction method showed that the deep eutectic solvent combined with ultrasonic extraction could not only save the extraction time, but also significantly increase the AME extraction rate.
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江南卷柏为卷柏科卷柏属江南卷柏植物（Selaginella moellendorffii Hieron.）的全草[1]，味辛、微甘，性平。别名为岩柏草、石柏，在我国资源丰富，长江以南贵州、重庆、云南和四川等地均有分布[2]。其具有利尿通淋、活血消肿、止痛退热、清热解毒等功效，可用于治疗多种急慢性炎症以及出血等病症[3]。据报道江南卷柏中含有双黄酮类、酚类、甾体皂苷、木质素类等成分[4]，该植物的主要有效成分是双黄酮，其中含量最高的穗花杉双黄酮（Amentoflavone，AME）具有较好的抗肿瘤、降血糖、抗炎、扩张血管和抗病毒等[5]作用。
双黄酮类化合物传统提取通常采用碱提酸沉法[6]、加热回流提取法[7]、浸渍法[8]、渗漉法[9]，这些方法简单、易操作，但耗时长、提取得率低，且长时间热，对环境伤害极大，不利于环保。低共熔溶剂（Deep Eutectic Solvents, DESs），主要是由氢键受体氯化胆碱等与氢键供体有机酸和多元醇等组成的一种液体混合[10]。它可以作为一种对环境友好和可替代传统提取剂的溶剂，其原料便宜，制备简单，具有低蒸汽压、易生物降解等优点[11]。
DESs提取江南卷柏中穗花杉双黄酮的研究目前未见文献报道。故本实验采用一步合成法制备了3种低共熔溶剂，并结合超声辅助提取江南卷柏中穗花杉双黄酮，研究液固比、超声时间、超声功率等因素对AME提取得率的影响，再利用响应面优化法对提取工艺进行再优化，以期对江南卷柏的开发利用提供相关参考。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
江南卷柏干药材 采购自贵州（批号：20201016），并经遵义医科大学生药学教研室张玉金副教授鉴定为江南卷柏（Selaginella moellendorffii Hieron.）的全草；穗花杉双黄酮标准品（纯度≥98%） 瑞芬恩生物公司；氯化胆碱、香叶醇、芳樟醇、α-松油醇 均为分析纯，上海源叶生物科技有限公司；甲醇 分析纯，科龙化工试剂厂；对苯甲磺酸 分析纯，光复精细化工研究所；无水乙醇 分析纯，川东化工公司；乙腈 分析纯，上海试剂一厂；甲酸 分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。
1260型高效液相色谱仪、400MR DD2型核磁共振仪 美国安捷伦公司；FA1004N型电子天平 菁海仪器公司；KQ118型多频超声波清洗仪 昆山市超声仪器有限公司；N-1100型旋转蒸发仪、OSB-2100型水浴锅 上海爱朗仪器有限公司；DLSB-2L/-20型低温冷却液循环泵 上海豫康科教仪器设备有限公司；FW177型粉碎机 泰斯特仪器公司；Nicolet IS5型傅里叶红外光谱 美国赛默飞世尔科技；Labsys evo型热重分析仪 法国塞塔拉姆公司；TU-1901型紫外可见分光光度计 普析通用仪器公司；SHB-III型循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司；DF-101S型磁力搅拌器 郑州科华仪器设备有限公司；722型紫外可见分光光度计 上海菁华科技仪器有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 DES溶剂的制备
选择氯化胆碱（Choline chloride）[12]为氢键受体（hydrogen bond acceptor，HBA），芳樟醇（Linalool）、香叶醇（Geraniol）和α-松油醇（Alpha-Terpineol）为氢键供体（hydrogen bond donors， HBD）[13]，按照一定摩尔比混合，在氮气保护下60 ℃搅拌至均匀的无色液体，制得不同DES溶剂（表1）。
表 1 不同类型的DES溶剂Table 1. Different types of DES solventsDES溶剂 氢键受体（HBA） 氢键供体（HBD） 摩尔比 DES（Chcl-Lin） 氯化胆碱（Choline chloride） 芳樟醇（Linalool） 1:2 DES（Chcl-Ger） 氯化胆碱（Choline chloride） 香叶醇（Geraniol） 1:2 DES（Chcl-Alp） 氯化胆碱（Choline chloride） α-松油醇（Alpha-Terpineol） 1:2 1.2.2 DES溶剂的筛选
参考文献[14]中的提取方法，称取干燥粉碎的江南卷柏3 g，置于250 mL锥形瓶中，加入DES溶剂，液固比10 mL/g，提取时间30 min，超声功率240 W，以AME提取得率来考察不同的低共熔溶剂、摩尔比及含水量（见表2），筛选出最佳低共熔溶剂、摩尔比和含水量。
表 2 DES溶剂的筛选Table 2. Screening of DES solvents序号 DES溶剂 HBA:HBD摩尔比（mol） 含水量（%） 1 Chcl-Lin、Chcl-Ger、Chcl-Alp 1:2 20 2 Chcl-Ger 1:1、1:2、1:3、1:4、1:5 20 3 Chcl-Ger 1:2 10、20、30、40、50 1.2.3 DES溶剂的结构分析
核磁共振分析（NMR）：将30 mg DES加入核磁管中，然后加入500 μL氘代DMSO（C2D6SO）溶解，充分混匀后，用核磁共振仪进行1H-NMR和13C-NMR检测。
傅里叶红外光谱分析（FT-IR）[15]：DES及各组分的傅里叶红外光谱采用Shimadzu IR Affinity-1 进行检测。扫描范围为400~4000 cm−1，共扫描128次。
热重分析（TGA）：使用TA Q600热重分析仪，在氮气下进行，检测温度范围25~900 ℃，升温速率10 ℃/min[16]。
1.2.4 单因素实验
以最佳低共熔溶剂为提取剂，含水量20%，考察不同的提取条件（超声功率：160、200、240、280、320 W；液固比：5、10、15、20、25 mL/g；超声时间：10、30、50、70、90 min），HPLC测定穗花杉双黄酮的提取得率，考察不同条件对提取效果的影响。
1.2.5 响应面试验
根据单因素实验结果，选择对AME提取得率有显著影响的工艺参数：即液固比、提取时间和超声功率为单因素实验的最佳条件，根据响应面Box-Behnken设计出试验方案，用Design-Expert 11.0软件进行3因素3水平5个中心点，设计出17组随机的实验。使用二次多项式模型来评估响应值与三个变量即A、B、C之间的关系，如表3。
表 3 响应面试验因素水平设计Table 3. Response surface experimental factor level design水平 因素 A：超声功率（W） B：液固比（mL/g） C：超声时间（min） −1 200 5 10 0 240 10 30 1 280 15 50 1.2.6 HPLC色谱条件
色谱柱：Ascentis-C18 （250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：乙腈（A），0.1%甲酸水溶液（B）；检测波长：330 nm；柱温：25 ℃；流速：1 mL/min；供试品进样量：20 μL。
1.2.7 AME提取得率计算
式中：C为江南卷柏中AME的浓度，mg/mL；V为江南卷柏提取液体积，10 mL；m为江南卷柏药材总质量，g。
1.2.8 不同提取方法比较
冷浸法（Cold maceration extract, CME）：根据秦晶晶等[17]研究的方法，取3 g江南卷柏药材粉末，加入100 mL 95%乙醇，室温浸渍6 h，过滤，浓缩，甲醇稀释定容至10 mL，HPLC分析，计算AME得率。平行实验3次。
热浸法（Hot maceration extract, HME）：根据韩秋菊等[18]的研究方法，取3 g江南卷柏药材粉末，加入100 mL 95%乙醇，50 ℃下浸渍6 h，过滤，浓缩，甲醇稀释定容至10 mL，HPLC分析，计算AME得率。平行实验3次。
乙醇超声提取法（Ethanol-UAE）：根据李洪玉等[19]的研究方法，取江南卷柏药材3 g粉末，加入100 mL 95%乙醇，超声提取30 min，过滤，浓缩，甲醇稀释定容至10 mL，HPLC分析，计算AME提取得率。平行实验3次。
离子液体超声提取法（IL-UAE）：根据李国峰等[20]的研究方法，取江南卷柏药材3 g粉末，加入48 mL离子液体（[HMIM]·[PF6]）和12 mL水，超声提取30 min，过滤，浓缩，甲醇稀释定容至10 mL，HPLC分析，计算AME得率。平行实验3次。
1.3 数据处理
实验数据以
2. 结果与分析
2.1 DES溶剂的筛选
2.1.1 不同DES溶剂影响
本文考察了不同DES（Chcl-Lin、Chcl-Ger、Chcl-Alp）提取江南卷柏中AME的提取得率的差异。结果如图1所示，Chcl-Lin、Chcl-Ger、Chcl-Alp对AME的提取得率为Chcl-Ger>Chcl-Lin>Chcl-Alp，因此选择Chcl-Ger为最佳低共熔溶剂。
2.1.2 摩尔比的筛选
HBA和HBD的摩尔比是影响DES理化性质的重要因素[21]。摩尔比差异会导致DES粘度和表面张力差异[22]，进而影响目标分子的提取率。本文考察了Chcl-Ger不同摩尔比（HBA:HBD=1:1、1:2、1:3、1:4、1:5）对AME提取得率的影响。结果如图2所示，随着摩尔比从1:1增加到1:2，AME提取得率随之增大。这是由于HBD增加，使DES粘度和表面张力降低，有利于的AME的传质和溶出，导致AME提取率提高；当摩尔比从1:2进一步增加到1:5时，AME的提取得率反而降低，这可能是由于HBD过多导致DES与AME间的相互作用减弱。因此选择HBA:HBD=1:2位最佳摩尔比。
2.1.3 含水量的筛选
不同的含水量会导致DES的粘度差异，进而影响DES对目标物质的提取得率[23]。本实验考察了不同DES含水量（10%、20%、30%、40%、50%）对AME提取得率的影响。结果如图3所示，当含水量从10%增加至20%时，AME提取得率随之增加；当含水量达到20%时，AME提取得率最大；当含水量高于20%时，AME提取得率反而降低，这可能是因为过大的含水量会导致DES的粘度降低进而减弱DES与AME之间的相互作用。因此选择20%为最佳含水量。
2.2 Chcl-Ger的结构分析
2.2.1 核磁共振分析
通过核磁共振分析对最佳的DES进行了结构表征，Chcl-Ger的13C-NMR和1H-NMR如图4所示。从图4A可知，Chcl-Ger中氯化胆碱碳原子的特征峰为67.3和55.4 ppm，香叶醇碳原子的特征峰为17.97、57.91、124.42和135.67 ppm；从图4 B可知，Chcl-Ger共有4个特征峰，分别为归属于氯化胆碱氢原子的3.11 ppm和归属于香叶醇氢原子的1.75、4.38和5.40 ppm。通过与香叶醇和氯化胆碱的标准图谱对比可知Chcl-Ger中碳原子和氢原子化学位移值与香叶醇和氯化胆碱的一致，说明合成Chcl-Ger未发生化学反应，Chcl-Ger为混合物。
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图 4 氯化胆碱:香叶醇、香叶醇和氯化胆碱的核磁共振谱图注：A为Chcl-Ger的1H-NMR谱；B为Chcl-Ger的 13C-NMR谱；C为香叶醇的1H-NMR谱；D为香叶醇的13C-NMR谱；E为氯化胆碱的1H-NMR谱；F为氯化胆碱的13C-NMR谱。Figure 4. NMR spectra of choline chloride: geraniol, geraniol and choline chloride2.2.2 傅里叶红外光谱分析
Chcl-Ger、氯化胆碱和香叶醇的FT-IR光谱图如图5所示。由图5可知，香叶醇和氯化胆碱的νOH峰（伸缩振动峰）在低共熔溶剂图中发生微弱的变化，氯化胆碱的δC-H特征峰（弯曲振动峰）从1477 cm−1蓝移至低共熔溶剂1482 cm−1，香叶醇的δC-H特征峰（弯曲振动峰）从1377 cm−1红移至低共熔溶剂1373 cm−1，氯化胆碱的νC-N峰（伸缩振动峰）从1012 cm−1蓝移至低共熔溶剂1026 cm−1。以上结果表明，Chcl-Ger中具有强烈的氢键作用。
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图 5 氯化胆碱、香叶醇及氯化胆碱:香叶醇的红外光谱图Figure 5. Choline chloride, geraniol and choline chloride:geraniol spectra of geraniol2.2.3 热重分析
Chcl-Ger的热重分析结果如图6所示。由图6可知，Chcl-Ger存在三个失重阶段，第一阶段为室温到150 ℃，这部分的失重是由于DES中结晶水的释放所造成的，第二阶段为150到300 ℃，在这一阶段几乎没有重量损失，表明Chcl-Ger在这段温度范围有良好的热稳定性，温度高于300 ℃后，DES开始剧烈失重，这可能是由于各个有机基团分解造成的。
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图 6 氯化胆碱:香叶醇的热重分析图Figure 6. Thermogravimetric analysis diagram of choline chloride:geraniol2.3 单因素实验
2.3.1 超声功率的影响
由于超声波产生的空化作用和热效应会促使植物细胞的细胞细胞壁破裂，增加了目标物质的溶出。本文研究了不同功率（160、200、240、280、320 W）对AME提取得率的影响。如图7a所示，在160~240 W的超声功率范围内，随着超声功率的升高，AME提取得率显著增加，这可能是由于空化作用和热效应导致；当功率达到240 W时AME提取得率最大；当功率大于240 W时，AME提取得率随着功率的增加而减少，这可能是因为过大的功率产生了过多的杂质，而影响了AME的溶出，因此选择超声功率240 W用于之后研究。
2.3.2 液固比的影响
原料药材与溶剂的比率会影响AME的提取得率，适当的液固比会增加其接触面积进而使得提取得率增加[24]。本文考察了液固比在5~25 mL/g范围内AME的提取得率，结果见图7b。当液固比低于10 mL/g时，AME提取得率随着液固比的升高而增加；当液固比达到10 mL/g时，AME提取得率最大；但当液固比大于10 mL/g后，AME提取得率随着液固比的升高而降低。其原因可能为过低的液固比会导致江南卷柏粉末与低共熔溶剂接触不充分，使得AME的提取不完全，当液固比过高时，DES扩散到植物细胞内部的距离过长，溶解更多的杂质，导致AME提取得率降低。因此，本实验选择 10 mL/g液固比进行后续研究。
2.3.3 超声时间的影响
提取时间会极大影响产物从植物中提取的效率，适当的提取时间才能尽可能使AME被充分提取。本文考察了不同提取时间（10、30、50、70、90 min）对AME提取得率的影响。由图7c可知，在30 min内AME提取得率随提取时间的增加而增大；在提取时间为30 min时，AME提取得率最大；当提取时间高于30 min后，AME提取得率逐渐减小。这是由于过长的提取时间产生的机械效应或温热效应，导致了部分AME的降解[25]，AME提取得率降低。因此，本实验选择30 min作为最佳提取时间。
2.4 响应面试验
2.4.1 响应面优化AME提取得率的结果
依据2.3项下的单因素实验结果和Box-Behnken，利用Design-Expert 11.0软件设计了3因素3水平5中心总共17组实验，三因素即超声功率（C）、液固比（A）、提取时间（B）。同时利用此软件分析实验结果，以AME（Y1）提取得率为响应值，Box-Behnken分析结果如表4。
表 4 Box-Behnken试验结果Table 4. Box-Behnken experimental results实验号 A液固比（mL/g） B超声时间（min） C超声功率（W） Y1黄酮提取得率（mg/g） 1 10 30 240 2.85 2 5 30 280 1.46 3 10 50 280 1.85 4 15 10 240 1.43 5 15 30 280 1.72 6 5 30 200 1.38 7 10 30 240 2.84 8 10 10 200 1.45 9 5 50 240 1.42 10 10 30 240 2.86 11 15 50 240 1.46 12 10 30 240 2.87 13 15 30 200 1.46 14 10 50 200 1.33 15 10 10 280 1.44 16 5 10 240 1.27 17 10 30 240 2.93 将此表中数据用Design-Expert 11.0软件进行二次多元线性回归方程拟合，分别得到江南卷柏提取物中AME提取得率响应面模型的二次多元线性回归方程分别为：Y1=2.8508+0.06525A+0.057625B+0.105625C−0.03125AB+0.04575AC+0.1345BC− 0.7344A2−0.72115B2−0.61315C2。
2.4.2 Y1响应值的二次回归模型的方差分析
为验证二次回归方程所构建的数学模型及模型中所有的参数是否具有统计学意义，对多元二次回归模型Y1进行方差分析，由表5可知，该二次回归模型F值为464.09（P<0.0001），说明该回归模型显著，方案具有可行性；决定系数R2=0.9983，校正决定系数R2Adj=0.9962，说明此模型方程能具有较好的反应响应值。失拟值P=0.2086，表明模型失拟值差异无统计学意义（P>0.05），从而反映该模型可对江南卷柏提取物中的AME（Y1）提取得率进行准确的分析及预测。由表5可知，模型的一次项A、B、C，交互项BC和二次项A2、B2、C2对江南卷柏中AME的提取得率影响显著，影响实验响应值综合评分的F值分别为F（A）=19.84、F（B）=15.47、F（C）=51.99，各单因素对AME得率得影响为：C>A>B，由此可知超声功率对江南卷柏提取物中AME的提取得率影响较大。
表 5 Y1方差分析Table 5. Y1 analysis of variance方法来源 平方和 自由度 F值 P值 显著性 模型 7.17 9 464.09 < 0.0001 *** A-液固比 0.0341 1 19.84 0.003 * B-超声时间 0.0266 1 15.47 0.0056 * C-超声功率 0.0893 1 51.99 0.0002 ** AB 0.0039 1 2.28 0.1752 AC 0.0084 1 4.88 0.063 BC 0.0724 1 42.15 0.0003 ** A2 2.33 1 1357.5 < 0.0001 *** B2 2.25 1 1309.58 < 0.0001 *** C2 1.63 1 951.09 < 0.0001 *** 残差 0.012 7 失拟值 0.0077 3 2.4 0.2086 纯误差 0.0043 4 总和 7.18 16 2.4.3 响应面分析优化
根据Design-Expert 11.0软件绘制的反映变量间交互关系的三维响应曲面（图8）。从AME的3D模型可以表示两个因变量如何影响测试结果，三维曲面图的横坐标表示任意两个变量，纵坐标表示AME的提取得率。图中所示当超声时间和液固比交互影响时，固定A或B的值，随着另一个值的增大都能得到AME得率呈现先上升后下降的趋势，虽然液固比和超声时间都能显著影响AME提取得率（P<0.05），但二者交互作用对响应值的影响并不显著（P>0.05）。当超声时间保持在零水平时，固定超声功率或液固比任一值， AME得率皆会随其中单个因素的升高而先升高后降低，超声功率和液固比都能对AME得率产生显著影响，但交互作用对响应值的影响无显著性（P>0.05）。当液固比为零水平时，超声时间和超声功率对AME得率具有交互作用，固定B或C任一值，AME得率随另一因素的升高而先升高，再趋于减少，交互作用显著（P<0.001）。交互项对AME得率的影响依次为：BC>AC>AB，且BC、AC、AB之间的三维响应曲面均存在着最高点，说明响应值（Y1）具有最大值。
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图 8 响应面分析因素间相互作用对AME提取得率的影响的3D曲线图Figure 8. 3D graph of response surface analysis factor inter-action interaction on AME extraction rate2.4.4 验证结果
对Y1的二次回归方程求极值可以得到使得江南卷柏提取物中AME提取得率可以达到最大值的提取条件：液固比10.23 mL/g，超声时间为30.94 min，超声功率为243.66 W，在此提取条件下AME的提取得率可以达到理论最大值2.88 mg/g。提取条件实际调整为：液固比10 mL/g，超声时间为31 min，超声功率为240 W，在此条件下，AME实际提取得率为（2.75±0.12） mg/g。
2.5 HPLC色谱条件
在色谱条件下分别对江南卷柏提取物、AME标准品、Chcl-Ger低共熔溶剂进行检测，结果如图9所示。
2.6 不同提取方法比较
本文使用了4种方法包括热浸法（Hot maceration extract, HME）、冷浸法（Cold maceration extract, CME）、离子液体超声提取法（IL-UAE）、乙醇超声提取法 （Ethanol-UAE），与低共熔溶剂超声提取法（DES-UAE）比较其AME提取得率的大小。如图10所示，DES-UAE与传统的HME和CME相比，不仅能够节约近11倍（229 min）的时间，其提取得率也分别增加了近10和5倍；与IL-UAE和Ethanol-UAE相比，虽然提取时间相同，但是DES-UAE法AME的提取得率分别增加了近2和4倍。因此，低共熔溶剂法能快速、高效、环保地提取江南卷柏中的穗花杉双黄酮，极大的拓宽了天然活性成分提取的途径。
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图 10 不同方法对江南卷柏中AME提取得率的影响Figure 10. Influence of different methods on the content of AME in Selaginella moellendorffii3. 结论
本文依据DES作为一种操作简便、简单易得、具有可设计性的特点，设计并合成了三种DES （Chcl-Lin，Chcl-Ger和Chcl-Alp）用于提取江南卷柏中AME。筛选出摩尔比为1:2和含水量为20%的Chcl-Ger为最佳的DES。通过单因素实验得出，最好的提取条件为液固比10 mL/g，超声时间为31 min，超声功率为240 W，在此条件下，AME实际提取得率为（2.75±0.12） mg/g。与乙醇超声提取法、冷浸法、热浸法和离子液体超声提取法这四种方法相比较，DES法从江南卷柏中提取AME的效果最好。以上结果表明DES是一种快速高效、绿色环保的溶剂，极大拓宽江南卷柏的应用价值。本研究中筛选3种二元DESs考察AME提取得率，今后可制备多种二元或者三元、多元的DESs将其用于江南卷柏中更多活性成分的分离提取。
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图 4 氯化胆碱:香叶醇、香叶醇和氯化胆碱的核磁共振谱图
注：A为Chcl-Ger的1H-NMR谱；B为Chcl-Ger的 13C-NMR谱；C为香叶醇的1H-NMR谱；D为香叶醇的13C-NMR谱；E为氯化胆碱的1H-NMR谱；F为氯化胆碱的13C-NMR谱。
Figure 4. NMR spectra of choline chloride: geraniol, geraniol and choline chloride
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图 5 氯化胆碱、香叶醇及氯化胆碱:香叶醇的红外光谱图
Figure 5. Choline chloride, geraniol and choline chloride:geraniol spectra of geraniol
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图 6 氯化胆碱:香叶醇的热重分析图
Figure 6. Thermogravimetric analysis diagram of choline chloride:geraniol
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图 8 响应面分析因素间相互作用对AME提取得率的影响的3D曲线图
Figure 8. 3D graph of response surface analysis factor inter-action interaction on AME extraction rate
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图 10 不同方法对江南卷柏中AME提取得率的影响
Figure 10. Influence of different methods on the content of AME in Selaginella moellendorffii
表 1 不同类型的DES溶剂
Table 1 Different types of DES solvents
DES溶剂 氢键受体（HBA） 氢键供体（HBD） 摩尔比 DES（Chcl-Lin） 氯化胆碱（Choline chloride） 芳樟醇（Linalool） 1:2 DES（Chcl-Ger） 氯化胆碱（Choline chloride） 香叶醇（Geraniol） 1:2 DES（Chcl-Alp） 氯化胆碱（Choline chloride） α-松油醇（Alpha-Terpineol） 1:2 
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表 2 DES溶剂的筛选
Table 2 Screening of DES solvents
序号 DES溶剂 HBA:HBD摩尔比（mol） 含水量（%） 1 Chcl-Lin、Chcl-Ger、Chcl-Alp 1:2 20 2 Chcl-Ger 1:1、1:2、1:3、1:4、1:5 20 3 Chcl-Ger 1:2 10、20、30、40、50
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表 3 响应面试验因素水平设计
Table 3 Response surface experimental factor level design
水平 因素 A：超声功率（W） B：液固比（mL/g） C：超声时间（min） −1 200 5 10 0 240 10 30 1 280 15 50
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表 4 Box-Behnken试验结果
Table 4 Box-Behnken experimental results
实验号 A液固比（mL/g） B超声时间（min） C超声功率（W） Y1黄酮提取得率（mg/g） 1 10 30 240 2.85 2 5 30 280 1.46 3 10 50 280 1.85 4 15 10 240 1.43 5 15 30 280 1.72 6 5 30 200 1.38 7 10 30 240 2.84 8 10 10 200 1.45 9 5 50 240 1.42 10 10 30 240 2.86 11 15 50 240 1.46 12 10 30 240 2.87 13 15 30 200 1.46 14 10 50 200 1.33 15 10 10 280 1.44 16 5 10 240 1.27 17 10 30 240 2.93
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表 5 Y1方差分析
Table 5 Y1 analysis of variance
方法来源 平方和 自由度 F值 P值 显著性 模型 7.17 9 464.09 < 0.0001 *** A-液固比 0.0341 1 19.84 0.003 * B-超声时间 0.0266 1 15.47 0.0056 * C-超声功率 0.0893 1 51.99 0.0002 ** AB 0.0039 1 2.28 0.1752 AC 0.0084 1 4.88 0.063 BC 0.0724 1 42.15 0.0003 ** A2 2.33 1 1357.5 < 0.0001 *** B2 2.25 1 1309.58 < 0.0001 *** C2 1.63 1 951.09 < 0.0001 *** 残差 0.012 7 失拟值 0.0077 3 2.4 0.2086 纯误差 0.0043 4 总和 7.18 16
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