尼勒克县新疆黑蜂蜂蜜游离氨基酸的测定及分析

师丰丰; 尹欣; 张海峰; 张敏; 张致豪; 张金振; 周金慧; 孙丽萍

doi:10.13386/j.issn1002-0306.2021080274

尼勒克县新疆黑蜂蜂蜜游离氨基酸的测定及分析

师丰丰^1,,
尹欣^{1, 2,},
张海峰³,
张敏¹,
张致豪^{1, 4},
张金振¹,
周金慧^1, ,,
孙丽萍^1, ,

1.
中国农业科学院蜜蜂研究所，北京 100093
2.
福建农林大学食品科学学院，福建福州 350002
3.
尼勒克县种蜂场，新疆伊犁 835700
4.
福建农林大学动物科学学院（蜂学学院），福建福州 350002

基金项目: 中国农业科学院创新工程项目（CAAS-ASTIP-2020-IAR）。

详细信息

作者简介:
师丰丰（1995−），男，硕士研究生，研究方向：蜂产品品质与功效，E-mail：shi9914@126.com

尹欣（1994−），男，硕士研究生，研究方向：食品质量与安全，E-mail：609406836@qq.com

通讯作者:
周金慧（1977−），男，博士，研究员，研究方向：蜂产品质量安全研究，E-mail：zhoujinhui@caas.cn

孙丽萍（1963−），女，硕士，研究员，研究方向：蜂产品化学和功效，E-mail：caasun@126.com

中图分类号: S896.1
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出版历程
- 收稿日期: 2021-08-24
- 网络出版日期: 2022-03-29
- 刊出日期: 2022-05-31

Determination and Analysis of Free Amino Acid Composition of Xinjiang Black Bee Honey in Nilka

1.
Institute of Apicultural Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100093, China
2.
College of Food Science, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China
3.
Breeding Bee Farm of Nilka County, Yili 835700, China
4.
College of Animal Science (College of Bee Science), Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China

摘要

摘要: 为探究尼勒克县新疆黑蜂蜂蜜游离氨基酸含量组成特点，同时对蜂蜜产地进行区分分析。本研究采用行业标准方法测定尼勒克地区7个产区新疆黑蜂蜂蜜中游离氨基酸含量，对其必需氨基酸、药效氨基酸以及滋味氨基酸含量进行分析，并利用主成分分析和聚类分析探讨了尼勒克新疆黑蜂蜂蜜游离氨基酸特点。结果显示，7个产区新疆黑蜂蜂蜜总游离氨基酸含量在458.98~805.94 mg/kg之间，必需氨基酸占比为33.73%~51.84%，药效氨基酸占比为37.92%~57.94%，滋味氨基酸以芳香族氨基酸和甜味氨基酸为主。A3产区蜂蜜样品的游离氨基酸含量（805.94 mg/kg）远超其他6个产区（458.98~619.82 mg/kg），且其苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸和异亮氨酸均为7个产区最高，聚类分析显示A3产区蜂蜜可与其他产区蜂蜜较好分离。综上所述，尼勒克新疆黑蜂蜂蜜中游离氨基酸种类丰富，苯丙氨酸含量占比较高，药效氨基酸、滋味氨基酸含量高，且各产区蜂蜜可由游离氨基酸含量进行区分，具有开发成为口感独特的药用蜂蜜的潜力。
- 新疆黑蜂蜂蜜 /
- 游离氨基酸 /
- 呈味分析 /
- 主成分分析 /
- 聚类分析
Abstract: In order to explore the composition and content characteristics of free amino acids in Xinjiang black bee honey from Nilka County, and analyze the origin of honey. In this study, the content of free amino acids was determined by the industrial standard method in Xinjiang black bee honey from seven producing areas in Nilka. The essential amino acids, medicinal amino acids and taste amino acids were analyzed, and the characteristics of free amino acids in Xinjiang black bee honey from Nilka were discussed by principal component analysis and cluster analysis. The results showed that the total free amino acid content of Xinjiang black bee honey from seven producing areas in Nilka County was 458.98~805.94 mg/kg, the proportion of essential amino acids was 33.73%~51.84%, and the proportion of medicinal amino acids was 37.92%~57.94%. The taste amino acids were mainly aromatic amino acids and sweet amino acids. The total free amino acid content of honey from A3 producing area (805.94 mg/kg) was far higher than that from other six producing areas (458.98~619.82 mg/kg), and the phenylalanine, proline, serine, histidine, glycine, alanine, tyrosine, valine and isoleucine were the highest in seven producing areas. Cluster analysis showed that honey from A3 producing area could be well-separated from honey from other producing areas. In summary, Nilka Xinjiang black bee honey is rich in free amino acid species, phenylalanine content accounts for a relatively high amount of pharmacodynamic amino acids and taste amino acids, and honey from all production areas can be distinguished by free amino acid content, which has the potential to be developed into medicinal bee honey with unique taste.
- Xinjiang black bee honey /
- free amino acid /
- taste analysis /
- principal component analysis /
- cluster analysis

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蜂蜜主要成分为葡萄糖、果糖和水，此外还有蛋白质、氨基酸、多酚、有机酸和矿物质等^[1-3]。蜂蜜中氨基酸来源有花粉、花蜜和蜜蜂等，其约占蜂蜜的1%，通常脯氨酸可占总氨基酸50%以上^[4-5]。氨基酸是蛋白质的组成原料，是蜜源植物所必需的营养物质，影响蜜源植物生长发育，同时也是人体所需营养物质之一^[6-7]。氨基酸分为必需氨基酸和非必需氨基酸，必需氨基酸为机体所需，但人体无法自身合成，只能从自然界获取，成人所需必需氨基酸共有8种，分别为赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸，婴儿必需氨基酸除此之外还包括组氨酸^[8-10]，药效氨基酸是人体不能合成，但又可维持机体氮平衡的氨基酸^[11]。游离氨基酸是蜂蜜中的重要营养组成成分，为蜂蜜植物来源及其品质质量提供重要信息^[12-14]，也是一类重要的风味物质，对蜂蜜滋味口感具有一定的影响作用，是食品品质评价的重要指标^[15]。

蜂蜜中游离氨基酸测定方法主要包括气相色谱技术（包括气相色谱技术^[16]（GC）和气相色谱-质谱^[5]（GC-MS）等）和液相色谱技术（包括液相色谱串联质谱^[17]（LC-MS/MS）、反向高效液相色谱^[4]（RP-HPLC）、高效液相色谱-荧光检测器^[18]（HPLC-FLD）和亲水相互作用色谱-液相色谱^[19]（HILIC-HPLC）等）。由于蜂蜜中游离氨基酸主要来源于植物花蜜和花粉，因此，可通过各游离氨基酸组分含量进行蜂蜜蜜种及地理源区分。GILBERT等^[16]对产自英国、澳大利亚、阿根廷和加拿大的45份蜂蜜样品中的游离氨基酸进行测定分析，发现其可根据游离氨基酸将不同地区蜂蜜区分开来。SUN等^[4]通过对中国的5种单花蜂蜜游离氨基酸测定发现，脯氨酸是大多数样品的主要氨基酸，荆条蜜中苯丙氨酸含量较高，且通过化学计量学分析可鉴定单花蜜。尼勒克新疆黑蜂蜂蜜是由新疆黑蜂工蜂采集尼勒克地区各类山花、药用植物等蜜源植物花蜜酿造而成^{[18, 20]}，其涵盖尼勒克县域内不同产区（不同沟系）生产蜂蜜。由于当地各沟系蜜源植物分布差异较大，以至于其所产蜂蜜口感、气味等各具特色，因此，有必要对其各项营养理化组成含量进行测定和分析。本实验室前期已对尼勒克新疆黑蜂蜂蜜中理化指标和维生素、矿物质等营养物质含量进行了分析探讨，表明尼勒克新疆黑蜂蜂蜜各项营养理化指标富有地方特色，且达到了国内多个富硒蜂蜜地方标准限量，是一种极具开发潜力的地方特色蜜种^[20]。

蜂蜜中游离氨基酸种类较多，逐一分析较为困难，积极利用相关统计方法，简单明了地显示数据特色与结果显得尤为重要。主成分分析（principal component analysis，PCA）是一种统计方法，通过正交变换将一组可能存在相关性的变量转换为一组线性不相关的变量，转换后的这组变量称为主成分，抽取出的主成分足以反映原始变量的大部分信息，且所含信息互不重复^[21]。聚类分析（cluster analysis）是一种无监督学习的统计方法，无需提前设定类或标记，由聚类学习算法自动对数据进行聚类的过程，能够衡量不同数据源之间的相似性^[22]。本研究测定了尼勒克7个产区新疆黑蜂蜂蜜中游离氨基酸含量，对其进行差异显著性分析，并利用主成分分析和聚类分析考察尼勒克新疆黑蜂蜂蜜的主要游离氨基酸和各产区蜂蜜间的差异情况。本研究探讨了尼勒克地区7个产区新疆黑蜂蜂蜜的游离氨基酸特色，以及其与当地蜜源植物多样性和蜂蜜品质多样性之间的可能关系，同时分析了利用游离氨基酸差异区分不同产区尼勒克新疆黑蜂蜂蜜的可行性。

1. 材料与方法

1.1 材料与仪器

尼勒克新疆黑蜂蜂蜜采集自尼勒克种蜂场7个不同产区（阿斯郎沟、寨布拉沟、小蜂场沟、狗熊沟、老布隆沟、塔灯沟、依森布谷沟），并依次记为A1、A2、A3、A4、A5、A7和A8，其中A6未获得样品，于2019年7~8月采集，置于−20 ℃保存至检测^[20]；磷酸二氢钠、氢氧化钠、硼酸　分析纯，上海麦克林生化科技有限公司；浓盐酸　分析纯，北京化学试剂研究所有限责任公司；甲醇、乙腈　色谱纯，赛默飞世尔科技（中国）有限公司；0.22 μm滤膜　天津市津腾实验设备有限公司。

LC-20AD高效液相色谱仪　日本岛津公司；PHS-3E pH计　上海仪电科学仪器股份有限公司；Milli-Q Advantage A10超纯水仪　法国默克公司。

1.2 游离氨基酸测定

依据SN/T 5223-2019 蜂蜜中18种游离氨基酸的测定—高效液相色谱-荧光检测法^[23]中相关方法进行测定。称取3.0 g蜂蜜，10 mL超纯水充分溶解，超纯水定容至25 mL，取1 mL溶液过0.22 μm滤膜，上机检测。以0.1 mol/L的盐酸溶液配制浓度为500 pmol/μL混标储备液，再以同样溶剂分别稀释至 0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0 pmol/μL的混合标准溶液。色谱柱为氨基酸分析柱，150 mm×4.6 mm （内径），3.5 μm；柱温：40 ℃；自动进样器：定量环规格为100 μL；流动相：A%（磷酸二氢钠缓冲溶液），B%（乙腈:甲醇:水=45:45:10（v/v/v））。

蜂蜜中游离氨基酸的含量按照以下公式计算：

$\rm X=\dfrac{\left(A-b\right)}{k}\times D\times \dfrac{V}{m}$

式中：X：试样中游离氨基酸的含量， mg/kg；A：被测样品中游离氨基酸的峰面积；b：标准曲线方程的截距；k：标准曲线方程的斜率；D：二次稀释倍数；V：样品的定容体积， mL；m：试样的质量， g。

1.3 数据处理

所有数据均进行三次平行测定，结果以平均值±标准差表示。方差显著性（P<0.05）通过SPSS 26.0分析，主成分和聚类分析通过SAS 9.4软件计算分析。采用Origin Pro 2021软件和Excel软件作图。

2. 结果与分析

2.1 新疆黑蜂蜂蜜游离氨基酸组分分析

游离氨基酸混合标准品色谱图和尼勒克新疆黑蜂蜂蜜中游离氨基酸色谱图如图1所示。尼勒克7产区新疆黑蜂蜂蜜游离氨基酸含量检测结果如表1所示，A3产区总游离氨基酸含量为805.94 mg/kg，显著（P<0.05）高于其他6个产区（458.98~619.82 mg/kg）；总游离氨基酸含量最低的产区为A1、A2和A7，含量不到500 mg/kg，显著低于其他各产地（P<0.05）。云南6种单花蜂蜜（桔花蜜、紫云英蜜、苦刺花蜜、槐花蜜、姚安硬蜜和桉树蜜）的总游离氨基酸含量为441.29~713.00 mg/kg^[24]，本研究中A2（459.98 mg/kg）和A7产区（458.98 mg/kg）游离氨基酸含量与姚安硬蜜（441.29 mg/kg）相当，A5产区（619.82 mg/kg）游离氨基酸含量与槐花蜜（615.86 mg/kg）相当，A3产区（805.94 mg/kg）游离氨基酸含量高于桉树蜜（713.00 mg/kg）。

图 1 游离氨基酸色谱图

注：a：混合游离氨基酸标准品；b：尼勒克新疆黑蜂蜂蜜中游离氨基酸；1：天冬氨酸；2：谷氨酸；3：丝氨酸；4：组氨酸；5：甘氨酸；6：苏氨酸；7：精氨酸；8：丙氨酸；9：酪氨酸；10：缬氨酸；11：蛋氨酸；12：苯丙氨酸；13：异亮氨酸；14：亮氨酸；15：赖氨酸；16：脯氨酸。

Figure 1. Chromatogram of free amino acids

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表 1 新疆黑蜂蜂蜜游离氨基酸含量（mg/kg）

Table 1. The content of free amino acid of Xinjiang Black bee honey (mg/kg)

氨基酸	A1	A2	A3	A4	A5	A7	A8
^#※天冬氨酸Asp	12.53±0.16^c	10.09±0.00^e	11.36±0.88^d	11.92±0.08^cd	12.53±0.00^c	15.03±0.40^b	18.08±0.16^a
^#※谷氨酸Glu	18.08±0.09^c	17.84±0.08^c	27.59±2.08^a	19.13±0.69^bc	19.19±0.08^bc	29.43±0.52^a	20.23±0.17^b
^#丝氨酸Ger	12.26±0.13^bc	10.60±0.99^cd	15.54±0.69^a	11.74±0.74^c	13.53±0.06^b	11.03±0.12^c	9.59±0.06^d
^#组氨酸His	23.08±0.28^b	16.10±1.19^d	24.57±0.91^a	19.1±0.36^c	19.33±0.09^c	15.64±0.00^d	13.32±0.18^e
^#※甘氨酸Gly	6.69±0.09^b	5.46±0.11^d	8.20±0.26^a	6.13±0.18^c	5.59±0.06^d	4.47±0.04^e	4.22±0.04^e
*苏氨酸Thr	11.96±0.21^a	7.36±1.53^c	9.23±0.14^b	7.94±0.00^bc	10.82±0.00^a	6.80±0.07^c	8.14±0.00^bc
^#※精氨酸Arg	9.94±0.11^b	6.39±0.41^c	7.19±0.30^c	6.53±1.03^c	9.36±0.11^b	11.83±0.10^a	9.07±0.11^b
^#丙氨酸Ala	21.42±0.16^ab	16.11±2.52^c	24.20±1.26^a	18.86±1.47^bc	21.68±0.11^ab	20.16±0.26^b	15.07±0.11^c
^#酪氨酸Tyr	17.67±0.00^d	11.48±0.86^e	80.33±6.19^a	30.88±1.17^b	27.40±0.11^bc	16.91±0.00^de	24.31±0.21^c
*缬氨酸Val	15.47±0.07^b	12.35±0.34^d	18.65±1.38^a	13.96±0.41^c	15.38±0.06^b	14.99±0.21^bc	11.91±0.14^d
*^※蛋氨酸Met	12.31±0.00^c	13.68±0.18^ab	13.37±0.44^b	12.81±0.53^bc	13.18±0.17^b	14.30±0.35^a	13.86±0.09^ab
*^※苯丙氨酸Phe	83.28±0.39^e	103.86±6.91^d	321.43±18.50^a	136.01±4.28^c	215.44±0.97^b	97.88±0.00^de	198.23±0.00^b
*^※异亮氨酸Ile	7.65±0.00^bc	6.61±0.70^c	10.22±0.85^a	7.11±0.77^c	8.49±0.04^b	8.47±0.08^b	6.39±0.08^c
*^※亮氨酸Leu	7.82±0.08^e	7.43±0.62^ef	6.61±0.54^f	10.17±0.46^d	16.67±0.08^a	11.20±0.08^c	14.37±0.23^b
*^※赖氨酸Lys	21.08±0.18^a	19.37±0.86^a	20.71±6.89^a	19.49±3.44^a	17.91±0.17^ab	11.03±1.46^b	15.35±0.17^ab
^#脯氨酸Pro	191.88±0.00^b	195.24±3.39^b	206.75±2.03^a	185.65±2.04^c	193.32±2.04^b	169.82±2.72^d	135.28±2.72^e
总游离氨基酸TAA	473.13±1.56^d	459.98±11.62^d	805.94±42.74^a	517.44±9.71^c	619.82±0.96^b	458.98±2.81^d	517.43±1.15^c
*必需氨基酸EAA	159.57	170.67	400.22	207.48	297.88	164.66	268.26
^#非必需氨基酸NEAA	313.56	289.31	405.72	309.97	321.94	294.32	249.32
^※药效氨基酸MAA	179.39	190.74	426.67	229.29	318.36	203.63	299.82
EAA/TAA（%）	33.73	37.10	49.66	40.10	48.06	35.88	51.84
EAA/NEAA（%）	50.89	58.99	98.64	66.94	92.53	55.95	107.66
MAA/TAA（%）	37.92	41.47	52.94	44.31	51.36	44.37	57.94
注：同行不同字母表示差异显著（P<0.05）；*：表示必需氨基酸，^#：表示非必需氨基酸，^※：表示药效氨基酸。

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尼勒克7产区蜂蜜均以脯氨酸（135.28~206.75 mg/kg）和苯丙氨酸（83.28 ~321.43 mg/kg）为主要游离氨基酸，二者含量占总游离氨基酸的58.15%~65.95%，其中A1、A2、A4和A7产区脯氨酸含量高于苯丙氨酸，而A3、A5和A8产区二者正相反。A3产区苯丙氨酸含量为321.43 mg/kg，占A3产区总游离氨基酸的39.88%，为7个产区中最高，约为含量最少的A1产区（83.28 mg/kg）的4倍；同时，脯氨酸含量为206.75 mg/kg，酪氨酸含量为80.33 mg/kg，均显著高于其他6个产区（P<0.05）；其丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸和异亮氨酸亦为7个产区最高。文献显示蜂蜜中含量较多的游离氨基酸通常为脯氨酸，占总游离氨基酸的50%左右，其次为苯丙氨酸^[25]，有些蜂蜜由于蜜粉源植物等因素苯丙氨酸会高于脯氨酸^[18]，本研究中尼勒克县7产区新疆黑蜂蜂蜜苯丙氨酸含量也相对较高，A3、A5和A8产区含量超过脯氨酸，尤其在A3和A8产区脯氨酸含量仅占总游离氨基酸的25%左右，而苯丙氨酸含量则占到40%左右。蜂蜜中脯氨酸的来源之一为蜜蜂，而新疆黑蜂蜂蜜中脯氨酸含量占比较低的原因可能有新疆黑蜂蜂种本身的因素以及当地蜜粉源植物中苯丙氨酸等较高^[25]的因素，可待进一步研究解析。

2.2 氨基酸评价

2.2.1 必需氨基酸（EAA）

根据FAO/WHO提出的理想蛋白质标准以人体必需氨基酸（EAA）含量占总氨基酸（TAA）含量的40%左右，必需氨基酸（EAA）与非必需氨基酸（NEAA）比例在60%以上为佳^[26]。由表1可知，尼勒克7个产区新疆黑蜂蜂蜜中EAA/TAA为33.73%~51.84%，其中，以A2、A4和A7产区新疆黑蜂蜂蜜EAA/TAA更加接近40%；EAA/NEAA在50.89%~107.66%之间，尤其A3、A5和A8占比高达90%以上，因此，尼勒克新疆黑蜂蜂蜜具有较好的营养补充潜力。

2.2.2 药效氨基酸（MAA）

由表1可知，7个产区新疆黑蜂蜂蜜中药效氨基酸含量在37.92%~57.94%之间，其中，A3、A5和A8产区药效氨基酸占比在51.36%~57.94%之间，与冬虫夏草^[27]药效氨基酸含量相似，高于红枣^[28]药效氨基酸含量，具有良好的药效活性。

图2为尼勒克7产区新疆黑蜂蜂蜜中各药效氨基酸占总药效氨基酸的比例。由图2可知，苯丙氨酸为主要的药效氨基酸，占总药效氨基酸的46.43%~75.34%，除A1产区（46.43%）和A7产区（48.06%）外，其他各产区药效氨基酸中苯丙氨酸占比均大于54%，其中，A3产区更是达到75.34%；除苯丙氨酸外，占总药效氨基酸含量较高的分别是谷氨酸（6.03%~14.45%）和赖氨酸（4.85%~11.75%），谷氨酸在A1和A7产区蜂蜜药效氨基酸中占比较高，分别为10.08%和14.45%；赖氨酸在A1和A2产区蜂蜜药效氨基酸中占比较高，分别为11.75%和10.16%；精氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸和甘氨酸在各产区蜂蜜药效氨基酸中占比均低于10%。

图 2 新疆黑蜂蜂蜜各药效氨基酸占比

Figure 2. The proportion of each pharmacodynamic amino acid of Xinjiang Black bee honey

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综上所述，可推测尼勒克新疆黑蜂蜂蜜中主要发挥药效作用的氨基酸为苯丙氨酸，在A1产区蜂蜜中谷氨酸和赖氨酸效用仅次于苯丙氨酸，A2产区黑蜂蜂蜜中为赖氨酸，A7产区黑蜂蜂蜜中为谷氨酸。研究表明苯丙氨酸能够提高人体血液中胆囊收缩素（cholecystokinin，CCK）浓度，从而降低十二指肠蠕动，影响机体食欲^[29-30]；谷氨酸能够增强学习和记忆能力、解毒保肝，还可以治疗神经损伤、癫痫等疾病^[31-32]；赖氨酸能够促进钙吸收、提升智力、促进生长发育^[11]；亮氨酸能够改善癌症等引起的恶病质，包括肌肉萎缩、营养不良、炎症等^[33-34]。

2.2.3 呈味氨基酸

2.2.3.1 呈味氨基酸含量

食品中游离氨基酸根据呈味特征可以分为四大类，分别是鲜味氨基酸（谷氨酸、天冬氨酸和赖氨酸）、甜味氨基酸（苏氨酸、甘氨酸、组氨酸、丙氨酸和脯氨酸）、苦味氨基酸（蛋氨酸、精氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸）和芳香氨基酸（苯丙氨酸和酪氨酸）^[11]。对尼勒克地区新疆黑蜂蜂蜜中呈味氨基酸含量进行统计分析，结果如图3所示。

图 3 新疆黑蜂蜂蜜各产区呈味氨基酸含量

Figure 3. Contents of taste-active amino acids in different production areas of Xinjiang Black bee honey

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由图3可知，A3（782.88 mg/kg）和A5产区（601.99 mg/kg）新疆黑蜂蜂蜜呈味氨基酸总含量较高；A3产区显著高于其他6个产区（P<0.05），或许可得出A3产区蜂蜜具有更加丰富的口味；A4（499.41 mg/kg）和A8产区（505.61 mg/kg）间呈味氨基酸含量无显著性差异（P<0.05）；A1（451.56 mg/kg）、A2（445.38 mg/kg）和A7产区（444.84 mg/kg）呈味氨基酸含量最低，且相互无显著性差异（P<0.05）。

2.2.3.2 呈味氨基酸含量滋味特征

根据鲜味氨基酸、甜味氨基酸、苦味氨基酸和芳香氨基酸分类，对7个产区蜂蜜中氨基酸含量进行计算，并通过雷达图直观显示不同产区蜂蜜中各类氨基酸含量差异，结果如图4所示。雷达图是一种可将多种维度数据在二维平面上直观显示的图示，便于人们观察总结各样本点之间的关系特点，从而做出归纳分类^[35]。

图 4 新疆黑蜂蜂蜜各产区不同滋味氨基酸分布

Figure 4. Distribution of amino acids with different flavors in different production areas of Xinjiang Black bee Honey

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由图4可知，尼勒克7个产区蜂蜜的呈味氨基酸主要以甜味氨基酸和芳香氨基酸为主，鲜味氨基酸和苦味氨基酸较少且各产区蜂蜜中都相对均衡。A1、A2和A7产区蜂蜜主要以甜味氨基酸为主，其中脯氨酸（169.82~195.24 mg/kg）含量贡献最大；A4产区蜂蜜甜味氨基酸（237.71 mg/kg）略高于芳香氨基酸（166.88 mg/kg）；而A3产区蜂蜜主要以芳香氨基酸苯丙氨酸（321.43 mg/kg）为主；A5产区蜂蜜甜味氨基酸（250.74 mg/kg）和芳香氨基酸（242.84 mg/kg）含量相对均衡；A8产区蜂蜜则芳香氨基酸（222.54 mg/kg）略高于甜味氨基酸（176.03 mg/kg）。二者含量的差异可能对尼勒克7个产区新疆黑蜂蜂蜜丰富的口感发挥一定的作用。

2.3 主成分分析

将尼勒克7个产区（A1~A5、A7、A8）的蜂蜜依次记为1~7，对检测到的16种氨基酸（天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸）依次编号为X1-X16，进行主成分分析，以探讨尼勒克地区新疆黑蜂蜂蜜中主要游离氨基酸组成成分。

主成分分析主要运用于对数据进行降维分析，用较少的变量解释全部数据变量，Z1、Z2……Z15、Z16依次代表对原始数据经运算后按方差贡献率排序的主成分值，结合表2方差累计贡献率高于86.08%和陡坡图（图5），选取前3个主成分用来解释全部数据变量。由表3可知，主成分Z1与丝氨酸、组氨酸和甘氨酸相关性较强，其方差贡献率为51.91%；主成分Z2与谷氨酸和蛋氨酸相关性较强，其方差贡献率为22.30%；主成分Z3与苏氨酸、精氨酸和亮氨酸相关性较强，其方差贡献率为11.86%。

表 2 相关矩阵特征值

Table 2. Correlation matrix eigenvalues

编号	特征值	方差贡献率（%）	方差累积贡献率（%）
Z1	8.30635	51.91	51.91
Z2	3.568	22.30	74.21
Z3	1.89808	11.86	86.08
Z4	1.40691	8.79	94.87
Z5	0.66022	4.13	99.00
Z6	0.16044	1.00	100
Z7	0	0	100
…	…	…	…
Z16	0	0	100

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图 5 主成分分析scree plot图

Figure 5. Scree plot of principal component analysis

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表 3 主成分分析特征向量

Table 3. Principal component analysis eigenvectors

变量	特征向量
变量	Z1	Z2	Z3	Z4	Z5	Z6	Z7	Z8	Z9	Z10	Z11	Z12	Z13	Z14	Z15	Z16
X1	−0.22	0.26	0.23	0.27	−0.46	−0.05	0.00	0.01	−0.12	0.01	−0.10	0.07	−0.12	0.59	−0.18	0.34
X2	0.07	0.48	−0.17	−0.23	−0.16	−0.13	0.16	−0.05	0.05	−0.08	0.24	0.25	−0.25	0.01	0.65	0.00
X3	0.33	0.12	0.05	0.08	0.21	−0.02	0.13	−0.08	−0.90	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00
X4	0.33	−0.06	0.13	−0.07	−0.18	−0.10	0.14	−0.17	0.11	0.87	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00
X5	0.34	−0.08	−0.08	0.03	−0.21	−0.02	0.10	0.91	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00
X6	0.18	−0.16	0.55	0.12	−0.06	0.49	0.03	−0.04	0.07	−0.13	0.09	−0.28	0.04	−0.10	0.42	0.28
X7	−0.10	0.30	0.48	−0.32	−0.10	0.25	0.10	0.09	−0.03	−0.03	0.14	0.20	0.25	0.02	−0.22	−0.55
X8	0.30	0.18	0.21	−0.15	0.09	−0.21	0.20	−0.08	0.19	−0.22	0.30	0.08	−0.22	−0.27	−0.49	0.41
X9	0.27	0.21	−0.21	0.33	−0.20	−0.13	0.10	−0.17	0.13	−0.15	0.17	−0.11	0.75	0.00	0.00	0.00
X10	0.31	0.22	0.09	−0.10	−0.04	−0.08	−0.91	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00
X11	−0.18	0.35	−0.32	−0.04	0.21	0.59	−0.06	0.14	−0.03	0.29	0.08	0.16	0.17	−0.10	−0.12	0.39
X12	0.19	0.23	−0.13	0.58	0.08	0.27	0.02	−0.06	0.17	0.02	0.17	−0.14	−0.45	0.02	−0.14	−0.42
X13	0.27	0.32	0.03	−0.08	0.13	0.08	0.17	−0.06	0.19	−0.12	−0.84	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00
X14	−0.17	0.14	0.37	0.39	0.57	−0.34	−0.02	0.22	0.13	0.16	0.02	0.27	0.14	0.01	0.19	0.05
X15	0.23	−0.36	−0.04	0.19	−0.12	0.20	−0.04	−0.15	0.03	−0.12	−0.06	0.82	0.00	0.00	0.00	0.00
X16	0.29	−0.14	−0.10	−0.27	0.42	0.11	0.06	−0.03	0.16	−0.06	0.20	−0.05	0.05	0.74	0.00	0.00

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2.4 聚类分析

以测得的尼勒克7个产区新疆黑蜂蜂蜜中16种游离氨基酸为变量，采用SAS 9.4 聚类分析对七个产区新疆黑蜂蜂蜜进行聚类，各产区之间聚类距离越远，其各类间区分越好，结果见图6。16种游离氨基酸聚类分析结果显示，当聚类距离在0.9~1.5之间时，七个产区被分为两类，A3产区（图中OB3）为一类，其他产区为一类；当聚类距离在0.5~0.8之间时，七个产区被分为三类，A3产区为一类，结合检测数据可知该类蜂蜜游离氨基酸总量远高于其他产区蜂蜜，芳香氨基酸含量高于其他产区，A5（图中OB5）和A8（图中OB7）产区为一类，该类蜂蜜氨基酸总量及呈味氨基酸总量均仅次于A3产区蜂蜜，亮氨酸含量明显高于其他产区，其他产区为一类，该类蜂蜜氨基酸总量最低，但其药效氨基酸中甘氨酸和蛋氨酸含量较高。

图 6 聚类分析树状图

注：OB1、OB2、OB3、OB4、OB5、OB6、OB7依次代表尼勒克县A1、A2、A3、A4、A5、A7、A8产区蜂蜜。

Figure 6. Dendrogram of cluster analysis

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3. 结论

本研究采用行业标准方法对尼勒克7个产区的新疆黑蜂蜂蜜中18种游离氨基酸进行测定分析，结果表明：所有产区均检测到16种游离氨基酸，其总含量为458.98~805.94 mg/kg，A3产区蜂蜜中游离氨基酸含量（805.94 mg/kg）远超其他6个产区（≤619.82 mg/kg），聚类分析显示，A3产区独立成类，与其他产区能够完美分离。尼勒克新疆黑蜂蜂蜜游离氨基酸具有较高的药效氨基酸占比（37.92%~57.94%），其主要药效氨基酸为苯丙氨酸；呈味氨基酸以芳香族氨基酸和甜味氨基酸为主，但各产区间二者含量差异较大，A3产区呈味氨基酸总量也是远高于其他6个产区，各产区间游离氨基酸种类及含量的变化体现出当地蜜源植物的多样性，本研究将为解析尼勒克地区新疆黑蜂的蜂蜜特色提供科学数据，为地方蜂蜜产业宣传及发展提供理论依据。

图 1 游离氨基酸色谱图

Figure 1. Chromatogram of free amino acids

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图 2 新疆黑蜂蜂蜜各药效氨基酸占比

Figure 2. The proportion of each pharmacodynamic amino acid of Xinjiang Black bee honey

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图 3 新疆黑蜂蜂蜜各产区呈味氨基酸含量

Figure 3. Contents of taste-active amino acids in different production areas of Xinjiang Black bee honey

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图 4 新疆黑蜂蜂蜜各产区不同滋味氨基酸分布

Figure 4. Distribution of amino acids with different flavors in different production areas of Xinjiang Black bee Honey

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图 5 主成分分析scree plot图

Figure 5. Scree plot of principal component analysis

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图 6 聚类分析树状图

注：OB1、OB2、OB3、OB4、OB5、OB6、OB7依次代表尼勒克县A1、A2、A3、A4、A5、A7、A8产区蜂蜜。

Figure 6. Dendrogram of cluster analysis

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表 1 新疆黑蜂蜂蜜游离氨基酸含量（mg/kg）

Table 1 The content of free amino acid of Xinjiang Black bee honey (mg/kg)

氨基酸	A1	A2	A3	A4	A5	A7	A8
^#※天冬氨酸Asp	12.53±0.16^c	10.09±0.00^e	11.36±0.88^d	11.92±0.08^cd	12.53±0.00^c	15.03±0.40^b	18.08±0.16^a
^#※谷氨酸Glu	18.08±0.09^c	17.84±0.08^c	27.59±2.08^a	19.13±0.69^bc	19.19±0.08^bc	29.43±0.52^a	20.23±0.17^b
^#丝氨酸Ger	12.26±0.13^bc	10.60±0.99^cd	15.54±0.69^a	11.74±0.74^c	13.53±0.06^b	11.03±0.12^c	9.59±0.06^d
^#组氨酸His	23.08±0.28^b	16.10±1.19^d	24.57±0.91^a	19.1±0.36^c	19.33±0.09^c	15.64±0.00^d	13.32±0.18^e
^#※甘氨酸Gly	6.69±0.09^b	5.46±0.11^d	8.20±0.26^a	6.13±0.18^c	5.59±0.06^d	4.47±0.04^e	4.22±0.04^e
*苏氨酸Thr	11.96±0.21^a	7.36±1.53^c	9.23±0.14^b	7.94±0.00^bc	10.82±0.00^a	6.80±0.07^c	8.14±0.00^bc
^#※精氨酸Arg	9.94±0.11^b	6.39±0.41^c	7.19±0.30^c	6.53±1.03^c	9.36±0.11^b	11.83±0.10^a	9.07±0.11^b
^#丙氨酸Ala	21.42±0.16^ab	16.11±2.52^c	24.20±1.26^a	18.86±1.47^bc	21.68±0.11^ab	20.16±0.26^b	15.07±0.11^c
^#酪氨酸Tyr	17.67±0.00^d	11.48±0.86^e	80.33±6.19^a	30.88±1.17^b	27.40±0.11^bc	16.91±0.00^de	24.31±0.21^c
*缬氨酸Val	15.47±0.07^b	12.35±0.34^d	18.65±1.38^a	13.96±0.41^c	15.38±0.06^b	14.99±0.21^bc	11.91±0.14^d
*^※蛋氨酸Met	12.31±0.00^c	13.68±0.18^ab	13.37±0.44^b	12.81±0.53^bc	13.18±0.17^b	14.30±0.35^a	13.86±0.09^ab
*^※苯丙氨酸Phe	83.28±0.39^e	103.86±6.91^d	321.43±18.50^a	136.01±4.28^c	215.44±0.97^b	97.88±0.00^de	198.23±0.00^b
*^※异亮氨酸Ile	7.65±0.00^bc	6.61±0.70^c	10.22±0.85^a	7.11±0.77^c	8.49±0.04^b	8.47±0.08^b	6.39±0.08^c
*^※亮氨酸Leu	7.82±0.08^e	7.43±0.62^ef	6.61±0.54^f	10.17±0.46^d	16.67±0.08^a	11.20±0.08^c	14.37±0.23^b
*^※赖氨酸Lys	21.08±0.18^a	19.37±0.86^a	20.71±6.89^a	19.49±3.44^a	17.91±0.17^ab	11.03±1.46^b	15.35±0.17^ab
^#脯氨酸Pro	191.88±0.00^b	195.24±3.39^b	206.75±2.03^a	185.65±2.04^c	193.32±2.04^b	169.82±2.72^d	135.28±2.72^e
总游离氨基酸TAA	473.13±1.56^d	459.98±11.62^d	805.94±42.74^a	517.44±9.71^c	619.82±0.96^b	458.98±2.81^d	517.43±1.15^c
*必需氨基酸EAA	159.57	170.67	400.22	207.48	297.88	164.66	268.26
^#非必需氨基酸NEAA	313.56	289.31	405.72	309.97	321.94	294.32	249.32
^※药效氨基酸MAA	179.39	190.74	426.67	229.29	318.36	203.63	299.82
EAA/TAA（%）	33.73	37.10	49.66	40.10	48.06	35.88	51.84
EAA/NEAA（%）	50.89	58.99	98.64	66.94	92.53	55.95	107.66
MAA/TAA（%）	37.92	41.47	52.94	44.31	51.36	44.37	57.94
注：同行不同字母表示差异显著（P<0.05）；*：表示必需氨基酸，^#：表示非必需氨基酸，^※：表示药效氨基酸。

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表 2 相关矩阵特征值

Table 2 Correlation matrix eigenvalues

编号	特征值	方差贡献率（%）	方差累积贡献率（%）
Z1	8.30635	51.91	51.91
Z2	3.568	22.30	74.21
Z3	1.89808	11.86	86.08
Z4	1.40691	8.79	94.87
Z5	0.66022	4.13	99.00
Z6	0.16044	1.00	100
Z7	0	0	100
…	…	…	…
Z16	0	0	100

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表 3 主成分分析特征向量

Table 3 Principal component analysis eigenvectors

变量	特征向量
变量	Z1	Z2	Z3	Z4	Z5	Z6	Z7	Z8	Z9	Z10	Z11	Z12	Z13	Z14	Z15	Z16
X1	−0.22	0.26	0.23	0.27	−0.46	−0.05	0.00	0.01	−0.12	0.01	−0.10	0.07	−0.12	0.59	−0.18	0.34
X2	0.07	0.48	−0.17	−0.23	−0.16	−0.13	0.16	−0.05	0.05	−0.08	0.24	0.25	−0.25	0.01	0.65	0.00
X3	0.33	0.12	0.05	0.08	0.21	−0.02	0.13	−0.08	−0.90	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00
X4	0.33	−0.06	0.13	−0.07	−0.18	−0.10	0.14	−0.17	0.11	0.87	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00
X5	0.34	−0.08	−0.08	0.03	−0.21	−0.02	0.10	0.91	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00
X6	0.18	−0.16	0.55	0.12	−0.06	0.49	0.03	−0.04	0.07	−0.13	0.09	−0.28	0.04	−0.10	0.42	0.28
X7	−0.10	0.30	0.48	−0.32	−0.10	0.25	0.10	0.09	−0.03	−0.03	0.14	0.20	0.25	0.02	−0.22	−0.55
X8	0.30	0.18	0.21	−0.15	0.09	−0.21	0.20	−0.08	0.19	−0.22	0.30	0.08	−0.22	−0.27	−0.49	0.41
X9	0.27	0.21	−0.21	0.33	−0.20	−0.13	0.10	−0.17	0.13	−0.15	0.17	−0.11	0.75	0.00	0.00	0.00
X10	0.31	0.22	0.09	−0.10	−0.04	−0.08	−0.91	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00
X11	−0.18	0.35	−0.32	−0.04	0.21	0.59	−0.06	0.14	−0.03	0.29	0.08	0.16	0.17	−0.10	−0.12	0.39
X12	0.19	0.23	−0.13	0.58	0.08	0.27	0.02	−0.06	0.17	0.02	0.17	−0.14	−0.45	0.02	−0.14	−0.42
X13	0.27	0.32	0.03	−0.08	0.13	0.08	0.17	−0.06	0.19	−0.12	−0.84	0.00	0.00	0.00	0.00	0.00
X14	−0.17	0.14	0.37	0.39	0.57	−0.34	−0.02	0.22	0.13	0.16	0.02	0.27	0.14	0.01	0.19	0.05
X15	0.23	−0.36	−0.04	0.19	−0.12	0.20	−0.04	−0.15	0.03	−0.12	−0.06	0.82	0.00	0.00	0.00	0.00
X16	0.29	−0.14	−0.10	−0.27	0.42	0.11	0.06	−0.03	0.16	−0.06	0.20	−0.05	0.05	0.74	0.00	0.00

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参考文献(35)

[1]	KOWALSKI S, KOPUNCOVÁ M, CIESAROVÁ Z, et al. Free amino acids profile of Polish and Slovak honeys based on LC–MS/MS method without the prior derivatisation[J]. Journal of Food Science and Technology,2017,54(11):3716−3723. doi: 10.1007/s13197-017-2838-7
[2]	KUŚ P M. Honey as source of nitrogen compounds: Aromatic amino acids, free nucleosides and their derivatives[J]. Molecules,2020,25(4):847. doi: 10.3390/molecules25040847
[3]	SUN L P, SHI F F, ZHANG W W, et al. Antioxidant and anti-inflammatory activities of safflower (Carthamus tinctorius L.) honey extract[J]. Foods,2020,9(8):1039. doi: 10.3390/foods9081039
[4]	SUN Z, ZHAO L, CHENG N, et al. Identification of botanical origin of Chinese unifloral honeys by free amino acid profiles and chemometric methods[J]. Journal of Pharmaceutical Analysis,2017,7(5):317−323. doi: 10.1016/j.jpha.2017.06.009
[5]	AZEVEDO M S, SERAGLIO S K T, ROCHA G, et al. Free amino acid determination by GC-MS combined with a chemometric approach for geographical classification of bracatinga honeydew honey (Mimosa scabrella Bentham)[J]. Food Control,2017,78:383−392. doi: 10.1016/j.foodcont.2017.03.008
[6]	张伟, 马培芳, 李延龙, 等. 韭菜两新优品种叶片游离氨基酸总量测定与比较[J]. 陕西农业科学,2020,66(12):53−54. [ZHANG W, MA P F, LI Y L, et al. Measure and comparison of total free amino acid in leaves of two different Chinese chives varieties[J]. Shaanxi Journal of Agricultural Sciences,2020,66(12):53−54.
[7]	彭振兴, 郭东锋, 姚忠达, 等. 典型烤烟区域氨基酸含量差异分析[J]. 安徽农业科学,2021,49(1):176−180,185. [PENG Z X, GUO D F, YAO Z D. Analysis of amino acid content difference in typical flue-cured tobacco regions[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences,2021,49(1):176−180,185. doi: 10.3969/j.issn.0517-6611.2021.01.048
[8]	宫春颖, 王青云, 粘靖祺, 等. 婴幼儿配方食品中氨基酸模式的研究进展[J]. 中国乳业,2020(7):59−63. [GONG C Y, WANG Q Y, NIAN J Q, et al. Research progress of amino acid composition in infant formula[J]. China Dairy,2020(7):59−63.
[9]	李曼曼, 王耘. 系统生物学视野下的功能氨基酸组学[J]. 氨基酸和生物资源,2016,38(1):1−5. [LI M M, WANG Y. Functional amino acid omics in sight of systems biology[J]. Biotic Resources,2016,38(1):1−5.
[10]	王琪, 齐仁立, 王敬, 等. 氨基酸缺乏诱导细胞自噬及miRNA调控机制[J]. 生物技术通报,2016,32(9):38−43. [WANG Q, QI R L, WANG J, et al. Investigation of autophagy induced by amino acid deprivation and the regulatory mechanisms of miRNA in autophagy[J]. Biotechnology Bulletin,2016,32(9):38−43.
[11]	王馨雨, 王蓉蓉, 王婷, 等. 不同品种百合内外鳞片游离氨基酸组成的主成分分析及聚类分析[J]. 食品科学,2020,41(12):211−220. [WANG X Y, WANG R R, WANG T, et al. Principal component analysis and cluster analysis for evaluating the free amino acid composition of inner and outer lily bulb scales from different cultivars[J]. Food Science,2020,41(12):211−220. doi: 10.7506/spkx1002-6630-20190709-117
[12]	RALITSA B, KATERINA S, RADOSTINA S G. Main honey botanical components and techniques for identification: A review[J]. Journal of Apicultural Research,2020,59(5):852−861. doi: 10.1080/00218839.2020.1765481
[13]	BILUCA F C, BERNAL J, VALVERDE S, et al. Determination of free amino acids in stingless bee (Meliponinae) honey[J]. Food Analytical Methods,2019,12(4):902−907. doi: 10.1007/s12161-018-01427-x
[14]	SANTOS-BUELGA C, GONZÁLEZ-PARAMÁS A M. Chemical composition of honey[M] // Alvarez-Suarez J M. Bee Products-Chemical and Biological Properties. Cham; Springer International Publishing, 2017: 43−82.
[15]	唐史杰, 尹明雨, 松冈亮辅, 等. 市售沙拉酱游离氨基酸组成的主成分分析与层次聚类分析[J]. 食品与发酵工业,2021,47(10):1−11. [TANG S J, YIN M Y, MATSUOKA R, et al. The composition analysis of free amino acids in market salad dressings using principal component analysis and cluster analysis[J]. Food and Fermentation Industries,2021,47(10):1−11.
[16]	GILBERT J, SHEPHERD M J, WALLWORK M A, et al. Determination of the geographical origin of honeys by multivariate analysis of gas chromatographic data on their free amino acid content[J]. Journal of Apicultural Research,1981,20(2):125−135. doi: 10.1080/00218839.1981.11100485
[17]	ŁOZOWICKA B, KACZYŃSKI P, IWANIUK P. Analysis of 22 free amino acids in honey from eastern europe and central asia using LC-MS/MS technique without derivatization step[J]. Journal of Food Composition and Analysis,2021,98:103837. doi: 10.1016/j.jfca.2021.103837
[18]	CHEN H, JIN L, CHANG Q, et al. Discrimination of botanical origins for Chinese honey according to free amino acids content by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection with chemometric approaches[J]. Journal of the Science of Food and Agriculture,2017,97(7):2042−2049. doi: 10.1002/jsfa.8008
[19]	KıRKAN E, AYDOĞAN C. Free amino acid analysis in honey samples by hydrophilic interaction liquid chromatography with UV detection using precolumn derivatization with dansyl chloride[J]. Chromatographia,2021,84(2):127−133. doi: 10.1007/s10337-020-03991-z
[20]	师丰丰, 周金慧, 孙丽萍, 等. 尼勒克县不同产区的新疆黑蜂蜂蜜理化性质与营养成分分析[J]. 食品工业科技,2021,42(13):66−73. [SHI F F, ZHOU J H, SUN L P, et al. Physicochemical properties and nutritional components of Xinjiang black bee honey in Nilka County[J]. Science and Technology of Food Industry,2021,42(13):66−73.
[21]	刘伟, 张群, 李志坚, 等. 不同品种黄花菜游离氨基酸组成的主成分分析及聚类分析[J]. 食品科学,2019,40(10):243−250. [LIU W, ZHANG Q, LI Z J, et al. Principal component analysis and cluster analysis for evaluating free amino acids of different cultivars of daylily buds[J]. Food Science,2019,40(10):243−250. doi: 10.7506/spkx1002-6630-20180523-336
[22]	付小梅, 孙菡, 刘婧, 等. 基于聚类分析和主成分分析的栀子指纹图谱研究[J]. 中草药,2018,49(19):4653−4661. [FU X M, SUN H, LIU J, et al. HPLC fingerprint of fruits ofGardenia Fructus based on cluster analysis and principal component analysis[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs,2018,49(19):4653−4661. doi: 10.7501/j.issn.0253-2670.2018.19.028
[23]	中华人民共和国海关总署. SN/T 5223-2019 蜂蜜中 18 种游离氨基酸的测定高效液相色谱——荧光检测法[S]. 北京: 中国标准出版社, 2019. General Administration of Customs of the People's Republic of China. SN/T 5223-2019 Determination of 18 free amino acids in honey by high performance liquid chromatography with fluorescence detection[S]. Beijing: Standards Press of China, 2019.
[24]	牛之瑞, 冯雷, 谭建林, 等. 云南产6种蜂蜜中35种游离氨基酸的测定[J]. 食品安全质量检测学报,2016,7(10):4027−4032. [NIU Z R, FENG L, TAN J L, et al. Determination of 35 kinds of free amino acids in 6 kinds of honeys produced in Yunnan[J]. Journal of Food Safety & Quality,2016,7(10):4027−4032.
[25]	HERMOSÍN I, CHICÓN R M, DOLORES CABEZUDO M. Free amino acid composition and botanical origin of honey[J]. Food Chemistry,2003,83(2):263−268. doi: 10.1016/S0308-8146(03)00089-X
[26]	FAO/WHO. Energy and protein requirements[R]. Geneva: World Health Organization, 1973.
[27]	严冬, 杨鑫嵎. 西藏不同产地冬虫夏草中氨基酸成分分析及其营养价值评价[J]. 中国农学通报,2014,30(3):281−284. [YAN D, YANG X Y. Analysis of amino acid composition and evaluation of nutritional quality in cordyceps sinensis from different regions of tibet[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin,2014,30(3):281−284. doi: 10.11924/j.issn.1000-6850.2013-0580
[28]	田艳花, 张立伟, 田叶, 等. 11种红枣氨基酸组成及主成分分析[J]. 分子植物育种,2018,16(4):1300−1306. [TIAN Y H, ZHANG L W, TIAN Y, et al. Amino acid composition and principal component analysis of 11 kinds of jujube[J]. Molecular Plant Breeding,2018,16(4):1300−1306.
[29]	FITZGERALD P, MANOLIU B, HERBILLON B, et al. Effects of L-phenylalanine on energy intake and glycaemia-impacts on appetite perceptions, gastrointestinal hormones and gastric emptying in healthy males[J]. Nutrients,2020,12:1788. doi: 10.3390/nu12061788
[30]	STEINERT R, LANDROCK M, HOROWITZ M, et al. Effects of intraduodenal infusions of L-phenylalanine and L-glutamine on antropyloroduodenal motility and plasma cholecystokinin in healthy men[J]. Journal of neurogastroenterology and motility,2015,21:404−413. doi: 10.5056/jnm14143
[31]	黄小兰, 何旭峰, 杨勤, 等. 不同产地地参中17种氨基酸的测定与分析[J]. 食品科学,2021,42(2):255−261. [HUANG X L, HE X F, YANG Q, et al. Determination of 17 amino acids in the dried rhizome of Lycopus lucidus turcz. var. hirtus regel from different habitats[J]. Food Science,2021,42(2):255−261. doi: 10.7506/spkx1002-6630-20200108-090
[32]	侯娜, 赵莉莉, 魏安智, 等. 不同种质花椒氨基酸组成及营养价值评价[J]. 食品科学,2017,38(18):113−118. [HOU N, ZHAO L L, WEI A Z, et al. Amino acid composition and nutritional quality evaluation of different germplasms of Chinese prickly ash (Zanthoxylum bungeanum Maxim)[J]. Food Science,2017,38(18):113−118. doi: 10.7506/spkx1002-6630-201718018
[33]	THEIS N, BROWN M A, WOOD P, et al. Leucine supplementation increases muscle strength and volume, reduces inflammation, and affects wellbeing in adults and adolescents with cerebral palsy[J]. The Journal of Nutrition,2021,151(1):59−64. doi: 10.1093/jn/nxaa006
[34]	REN J Y. The role of leucine in cancer cachexia treatment[J]. International Core Journal of Engineering,2021,7(2):415−418.
[35]	周晟, 胡佳卉, 孟庆刚. 雷达图在中医药领域的应用探索[J]. 北京中医药大学学报,2018,41(1):9−13. [ZHOU S, HU J H, MENG Q G. Application of radar map in field of Chinese medicine[J]. Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine,2018,41(1):9−13. doi: 10.3969/j.issn.1006-2157.2018.01.002