人源弹性蛋白酶基因真核载体构建及表达

摘要: 从人体肾脏组织中提取的总RNA中通过反转录PCR（RT-PCR）扩增得到了ELA2B基因,并将其克隆到pGEM-Teasy载体中。然后用限制性内切酶EcoRⅠ和NotI对重组质粒pGEM-Teasy/ELA2B和毕赤酵母质粒pPIC9K进行双酶切,并且通过PCR技术去除ELA2B的信号肽,成功构建了真核表达载体pPIC9K/ELA2B,并将其转入毕赤酵母表达宿主GS115中。得到150株转化子,经含不同浓度G418的YPD平板筛选获得20株高拷贝转化子。甲醇诱导表达后,发酵液上清经SDS-PAGE检测,获得了大小约为28ku的目的条带。通过酪蛋白平板检测发酵液上清,出现透明圈,初步证明获得了有生物活性的弹性蛋白酶。