呋喃唑酮代谢物间接竞争化学发光酶免疫法的建立

黄登宇; 高文静; 黄种乾; 高丽霞; 冯敏; 杨秀松

doi:10.13386/j.issn1002-0306.2017.09.048

呋喃唑酮代谢物间接竞争化学发光酶免疫法的建立

1. 山西大学生命科学学院
2. 山西大学食品药品快检技术中心
3. 国家食品药品监督管理总局高级研修学院

详细信息

作者简介:
黄登宇 (1968-) , 男, 博士, 副教授, 研究方向:食品安全检测, E-mail:Huangdy1110@126.com。;

杨秀松 (1975-) , 男, 硕士, 副教授, 研究方向:食品科学与食品安全, E-mail:yxs@cfdaied.org。;

中图分类号: O657.3;TS207.53
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出版历程
- 收稿日期: 2016-11-17

Synthesis of furazolidone metabolite artificial antigen and development of indirect competitive chemiluminescence enzyme immunoassay

School of Life Science, Shanxi University
Food and Drug Fast Inspection Center of Shanxi University
China Food and Drug Administration Institute of Executive Development

摘要

摘要: 建立快速检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的间接竞争化学发光酶免疫法。利用对醛基苯甲酸（4-CBA）将AOZ衍生化为CPAOZ,利用活化酯法将CPAOZ与卵清蛋白（OVA）偶联,生成完全抗原CPAOZ-OVA。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗稀释倍数进行优化,建立标准曲线,同时对方法的特异性进行评价。结果表明:包被抗原最佳稀释倍数为2000倍,抗体的最佳稀释倍数为20000倍、封闭液为2%脱脂乳粉、竞争时间为2 h、二抗最佳稀释倍数为4000倍;线性范围是0.075⁷.396 ng/m L,半抑制浓度IC₅₀为0.74 ng/m L,对呋喃唑酮原药的交叉反应率为23.4%,与其他结构类似物及衍生化试剂的交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏度高、特异性好,可为监管部门对于快速检测动物源性食品中AOZ提供依据。
- 呋喃唑酮 /
- 间接竞争化学发光酶免疫法 /
- 动物源性食品 /
- 快速检测
Abstract: An indirect competitive chemiluminescence enzyme immunoassay ( ic-CLEIA) was used for determination and identification of the furazolidone metabolite in animal-derived food. AOZ can be translated into hapten CPAOZ by derivative reaction.CPAOZ-OVA, as the coating antigen, was prepared by activated ester method.After optimizing the dilution multiple of coating antigen and anti-body, blocking buffer, competitive reaction time and the dilution multiple of second antibody, a standard curve was established, and finally the specificity of the method was evaluated.The results indicated that, the optimum dilution multiple of coating antigen was 2000-fold, the anti-body was 20000-fold.Blocking buffer was dried skim milk at the concentration of 2%.The competitive reaction time was 2 h, and the ideal dilution multiple of secondary antibody was 4000-fold.The linearity range was 0.075⁷.396 ng/m L, and half-inhibitory concentration ( IC₅₀) value was 0.74 ng/m L.The crossreactivity value between AOZ and furazolidone original drug was 23.4%, and cross reactivity value with other analogues and derivatives was < 0.1%. The method with demonstrated excellent sensitivity and specificity can provide the basis for rapid detection of AOZ content in animal-derived food for supervision department.
- furazolidone /
- indirect competitive chemiluminescence enzyme immunoassay /
- animal-derived food /
- rapid detection

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