Studies on Isolation, Purification and Gastric Mucosal Protective Activity in Vitro of Laoxianghuang Polysaccharide
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摘要: 本文以老香黄多糖为研究对象，探究其胃黏膜保护活性。首先采用热水浸提法提取老香黄多糖，进而通过Sevag试剂脱蛋白、DEAE-52纤维柱和CL-6B琼脂糖凝胶柱进行多糖的分离纯化，最后采用乙醇损伤人胃黏膜上皮细胞（Human gastric mucosal epithelial cells, GES-1）细胞模型及GES-1细胞划痕损伤模型探究其体外胃黏膜保护活性。结果表明，老香黄多糖经纯化后共得到6个组分，分别为PFCP、PFCP-1、PFCP-2、PFCP-3、PFCP-2-1、PFCP-2-2。在乙醇损伤GES-1细胞实验中，老香黄多糖各分离纯化组分均能提高细胞活性，增强细胞超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）酶活，减少丙二醛（MDA）含量，从而增强细胞抗氧化能力，减轻黏膜损伤。其中PFCP-2-1（50 μg/mL）提高SOD酶活和降低MDA含量效果最佳，PFCP-2-1（5 μg/mL）提高CAT酶活效果最佳，与模型组相比均有显著性（P<0.05），且优于替普瑞酮阳性药物组。在GES-1细胞划痕损伤实验中，老香黄多糖各个组分均能加速损伤区域胃上皮细胞的生长, 促进细胞向损伤区域迁移，恢复胃黏膜上皮细胞的完整性，阳性药物的划痕修复率最佳，其次是PFCP-2-1（50 μg/mL）组分，两者无显著差异（P>0.05）。综上所述，老香黄多糖PFCP-2-1可能通过提高细胞抗氧化能力，以及促进GES-1细胞增殖、迁移发挥胃黏膜保护活性。Abstract: In this study, Laoxianghuang polysaccharide was used as the experimental material to examine the protective effects on stomach mucosa. The polysaccharide was first extracted by hot water and then purified by Sevag methods deproteinization, DEAE-52 cellulose anion-exchange chromatography column, and CL-6B agarose gel column. The ethanol-damaged human gastric mucosal epithelial cells (GES-1) model and the GES-1 scratch injury model were used to evaluate gastric mucosal protective activity of the polysaccharide in vitro. Results showed that six fractions of Laoxianghuang polysaccharide were obtained, including PFCP, PFCP-1, PFCP-2, PFCP-3, PFCP-2-1, and PFCP-2-2. After ethanol damaged to GES-1, each fraction of Laoxianghuang polysaccharide improved cellular activity, increased the activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and inhibited malondialdehyde (MDA) content, exhibiting good antioxidant capacity to reduce mucosal damage. Among them, PFCP-2-1 (50 μg/mL) had the best effect on improving SOD enzyme activity and reducing MDA content, and PFCP-2-1 (5 μg/mL) had the best effect on improving CAT enzyme activity, which was significant compared with the model group (P<0.05) and better than the teprenone-positive drug group. It was demonstrated that Laoxianghuang polysaccharide all fractions accelerated gastric epithelial cell growth, promoted cell migration to the damaged area, and restored gastric mucosal epithelial cell integrity in the GES-1 scratch injury assay. Positive drugs had the most effective scratch repair rate, followed by PFCP-2-1（50 μg/mL）, but there was no significant difference between them (P>0.05). In conclusion, Laoxianghuang polysaccharide PFCP-2-1 may exert gastric mucosal protective activity by enhancing cellular antioxidant capacity as well as promoting the proliferation and migration of GES-1.
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胃溃疡属于消化系统疾病中的一种，调查发现其发病率呈现逐年上升趋势，严重影响人们的生活质量。相关研究发现，胃黏膜损伤会导致溃疡发生，因此保护胃黏膜是预防胃溃疡的重要手段[1-2]。随着人们经济收入增加及生活水平的提高，对酒精（乙醇）的消费也日益增长，但是乙醇是胃黏膜损伤的攻击性因子。过量饮酒会导致体内自由基增多，造成机体氧化损伤，引起胃黏膜损伤，从而引发胃部溃疡[3-4]。目前临床上常用于治疗胃溃疡的药物大多会带来副作用，如胃肠道反应、肝肾毒性、高胃泌素血症以及对神经系统和视力的损害等[5]。为了减少药物治疗带来的不良反应，研究人员将目光放到了具有胃黏膜保护功效的天然活性物上。已有众多文献报道多糖在胃黏膜保护上可发挥良好的效果，如猴头菇多糖[6]、红芪多糖[7]、燕麦多糖[8]和枸杞多糖[9]等。
老香黄（又称佛手香黄、老香橼）是用新鲜佛手柑为原料，加配多种中药材，按照特定的工艺加工炮制，最后封坛发酵得到的，具有消积祛风、开胃理气、化痰生津等功效，而且久藏不坏[10-11]。目前对于老香黄的研究大多集中在发酵和加工炮制期间风味变化、质量安全以及相关加工工艺研究[10,12-15]，鲜有文献研究老香黄的活性物质与功能作用，且关于老香黄“养胃护胃”说法一直没有科学依据支撑。课题组前期初步研究发现，老香黄水提物对人胃黏膜上皮细胞（Human gastric mucosal epithelial cells，GES-1细胞）具有保护作用，其修复率达到85.03%。进一步研究发现，老香黄水提物在细胞受划痕和酒精刺激损伤后具有促进表皮生长因子、转化生长因子-β1和三叶因子2分泌、抑制肿瘤坏死因子分泌的作用，进而对GES-1细胞起到保护与修复的作用。实验进一步将老香黄水提物乙醇沉淀后发现，老香黄水提物中起作用的主要是多糖组分，经醇沉获得的老香黄粗多糖对划痕损伤的GES-1细胞修复效果比醇沉上清液更好，是它的2.16倍。
本文在前期研究的基础上，对老香黄多糖进行分离纯化，并利用乙醇损伤GES-1细胞模型和划痕实验通过测定老香黄多糖各个分离纯化组分给药后的细胞存活率，检测细胞内超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、过氧化氢酶（Catalase，CAT）的含量以及测定各分离纯化组分对GES-1细胞划痕损伤的修复率，初步评价和筛选出胃黏膜保护活性较高的老香黄多糖组分，探明其对乙醇诱导的胃黏膜损伤的治疗效果，为后续老香黄多糖体内活性评价奠定基础，同时对老香黄产业精深加工及在功能、保健食品的开发提供科学参考。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
老香黄 由广州展翠食品股份有限公司提供；3500 MW透析袋 广州市齐云生物技术有限公司；GES-1人胃黏膜上皮细胞 中国科学院上海细胞库提供；杜氏细胞培养基（Dulbecco’s modified eagle medium，DMEM）、青-链霉素、0.25%胰蛋白酶、胎牛血清、二甲基亚砜（DMSO）、磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS） Gibco公司；替普瑞酮 Sigma公司；细胞裂解液（P0013J） 上海碧云天生物科技有限公司；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白质定量试剂盒（A045-4-2）、SOD试剂盒（A001-3-2）、MDA试剂盒（A003-2-2）、CAT试剂盒（A007-1-1） 南京建成生物有限公司。
AL104型万分之一电子天平 梅特勒-托利多仪器有限公司；R204B3型旋转蒸发仪 上海申生科技有限公司；JK-MSH-Pro-6B型磁力搅拌器 上海精学科学仪器有限公司；EnSpire2003多功能酶标仪 Perkin-Elmer；5417R型高速冷冻离心机 德国 Eppendorf 公司；CO2培养箱 新加坡艺思高科技有限公司（ESCO）；MH-2型微量振荡器 海门市其林贝尔仪器公司；BSD200型倒置生物显微镜 重庆奥特光学仪器有限责任公司。
1.2 实验方法
1.2.1 老香黄多糖提取
参考王淑慧等[16]的提取方法，并做一定修改。称取一定量粉碎后，过30目筛的干燥老香黄置于烧杯中，按照1:31 （g/mL）的料液比加入蒸馏水，设置提取温度为90 ℃，连续提取1.5 h，过滤收集上清液，向滤渣中加入相同比例的蒸馏水再次提取相同时间，过滤后合并两次滤液，再用旋转蒸发仪浓缩。将得到的浓缩液加入5倍体积的95%乙醇，于4 ℃冰箱中静置24 h，过滤后冷冻干燥得到老香黄粗多糖。采用Sevag法脱除多糖蛋白质。将老香黄粗多糖配制成浓度为10 mg/mL的样品溶液，加入样品溶液体积1/3的Sevag试剂（V氯仿:V正丁醇= 4:1），振荡30 min，5000 r/min离心10 min，取上清液再次加入Sevag试剂按上述方法重复操作2次[17]。将最后得到的上清液旋蒸除去残留有机试剂，然后透析，冻干得到老香黄粗多糖PFCP，并按照公式（1）计算PFCP得率。
(1) 1.2.2 老香黄多糖柱层析纯化
将PFCP配制成10 mg/mL的浓度，上样60 mL过DEAE-52柱（4.5 cm×50 cm），分别用去离子水、0.1、0.2和0.3 mol/L NaCl溶液以梯度方式分级洗脱，流速为1.5 mL/min，每6 min收集一管，每个浓度收集120管。采用苯酚-硫酸法逐管追踪多糖的流出，以管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制多糖分级流出的出峰图谱。根据洗脱曲线收集合并洗脱液，浓缩，一级水透析48 h（每隔6 h换一次水），冷冻干燥得到DEAE-52纯化多糖组分（PFCP-1、PFCP-2、PFCP-3）。
根据细胞实验结果收集PFCP-2，利用CL-6B琼脂糖凝胶柱再次纯化。PFCP-2配制成10 mg/mL的浓度，上样量为10 mL，过CL-6B琼脂糖凝胶柱（2.6 cm×60 cm），采用 0.1 mol/L NaCl 洗脱，流速为0.2 mL/min，每2 mL收集一管，收集150管。后续实验方法同前文所述，冷冻干燥得到CL-6B琼脂糖凝胶柱纯化多糖（PFCP-2-1、PFCP-2-2）。按照公式（2）计算各个纯化组分多糖得率。
(2) 1.2.3 多糖含量测定
采用苯酚-硫酸法测定中性糖含量[18]，以葡萄糖为标准品，葡糖糖浓度为横坐标，490 nm处吸光度为纵坐标，得标准曲线为y=4.9033x+0.0026，R2=0.9991，中性糖含量按照公式（3）计算；采用间羟基联苯法测定糖醛酸含量[19]，以半乳糖醛酸为标准品，半乳糖醛酸浓度为横坐标，525 nm处吸光度为纵坐标，得到标曲为y=0.0039x+0.0703，R2=0.9993，糖醛酸含量按照公式（4）计算。
(3) (4) 式中：N为老香黄多糖的中性糖含量；A1为样品反应后在490 nm处的吸光度；c为样品浓度，mg/mL；U为老香黄多糖糖醛酸的含量；A2为样品反应后在525 nm处的吸光度。
1.2.4 体外细胞实验
1.2.4.1 细胞培养
将GES-1细胞置于完全培养基（含89% DMEM培养液，10%胎牛血清，1%青链霉素）中，于细胞培养箱中培养，培养条件：37 ℃、5% CO2。当培养皿中细胞生长近90%细胞基本贴壁时，用0.25%胰酶1~2 mL在培养箱内消化1~2 min，在显微镜下观察到细胞变圆、散开时，加入3~4 mL DMEM培养液终止消化，1000 r/min离心4 min，弃上清，加入完全培养基重悬后在培养瓶中继续培养。
1.2.4.2 MTT细胞活力实验
取对数生长期GES-1细胞（1×105 个/mL）100 µL接种于96孔细胞培养板中，置于细胞培养箱中培养24 h，培养条件：37 ℃、5% CO2。用完全培养基配制0、5、25、50、100、200 μg/mL的PFCP、PFCP-1、PFCP-2、PFCP-3、PFCP-2-1、PFCP-2-2，在96孔板中分别加入不同样品，于细胞培养箱中培养。24 h后拿出细胞培养板，弃去孔内培养液，每孔加入100 µL MTT溶液（1 mg/mL），再次放入细胞培养箱中继续培养4 h，之后弃掉孔内液体，每孔加DMSO溶液150 µL，于微型振荡器上振荡15 min使其结晶物充分溶解，再用酶标仪在490 nm处测定吸光度。
1.2.4.3 GES-1细胞损伤模型的构建
对数生长期的GES-1细胞消化、计数后，取细胞培养液，用完全培养基稀释至细胞浓度为1×105个/mL，取100 μL接种于96孔细胞培养板中，置于细胞培养箱中培养24 h至细胞基本贴壁。将造模药物无水乙醇用完全培养基稀释成1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%，经0.22 μm滤膜过滤除菌后每孔加入100 μL[20]。每一稀释度设置5个复孔，同时设置空白对照组。细胞培养箱培养3 h后，参照1.2.4.2进行MTT试验。
1.2.4.4 老香黄多糖对酒精损伤GES-1细胞活力影响
将GES-1细胞（1×104个）接种于96孔板中，置于细胞培养箱中培养。24 h后将其分为空白组、模型组、阳性对照组（替普瑞酮80 μmol/L，用完全培养基配制）、老香黄多糖组（最终浓度为5、50和100 μg/mL的PFCP、PFCP-1、PFCP-2、PFCP-3、PFCP-2-1、PFCP-2-2，用完全培养基配制，下同），除去旧培养基，然后不同组别进行相应给药处理后（每孔加100 μL，空白组添加相同量的完全培养基），于细胞培养箱中培养24 h。除空白组外，其它组别根据1.2.4.3的实验结果选择6%乙醇浓度进行造模3 h，后续采用MTT法检测细胞活力。
1.2.4.5 酒精损伤GES-1细胞内SOD、MDA、CAT含量检测
取处于对数生长期的细胞，接种于12孔培养板（4×105个/孔），分为空白组、模型组、阳性对照组、老香黄多糖组，每组设3个复孔；置于培养箱内培养24 h后，按照1.2.4.4的给药方法，不同组别进行相应给药处理后，细胞培养箱中再培养24 h。除空白组，其余各组每孔加入100 μL 6%的乙醇刺激3 h后，弃掉上清液，收集细胞并用PBS缓冲液洗涤2次，离心4 min （2000 r/min），弃去上层液体。加入100 μL细胞裂解液在冰上充分裂解细胞，收集裂解液，离心10 min （4 ℃，10000 r/min），收集上清液备用。采用生化试剂盒测定上清液中SOD、MDA、CAT的含量。
1.2.4.6 划痕损伤检测GES-1细胞迁移能力
取24孔板，用马克笔在背面画三条直线，将每个孔划分为4个视野，然后取对数生长期细胞，每孔2×105个细胞接种于24孔板，每孔1 mL细胞液，置于细胞培养箱中培养24 h。待细胞间较紧密地连接成单层后，用200 μL枪头垂直在24孔的中央划一道痕迹，吸出原培养液，在每孔加1 mL PBS洗涤两次以除净未贴壁细胞。根据1.2.4.2实验结果，加入5、50、100 μg/mL的各组老香黄多糖溶液1 mL，阳性对照组加入80 μmol/L替普瑞酮溶液1 mL，控制组仅加入DMEM培养液1 mL。每个浓度组设3平行复孔，分别测定0和24 h的划痕创面愈合情况，使用专业图像软件ImageJ，测量创面面积，按照公式（5）计算修复率。
(5) 1.3 数据处理
每组实验至少三次平行，数据结果用平均值±标准误差表示，采用IBM SPSS Statistics 26软件对实验数据进行显著性分析，采用Duncan法对各组进行多重比较分析。其中，P>0.05表示差异不显著，P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。使用Origin 2018软件绘图。
2. 结果与分析
2.1 老香黄多糖提取、分离纯化
目前植物多糖分离纯化方法多采用柱层析法，主要采用离子交换柱和凝胶色谱柱对粗多糖进行逐级分离纯化[21-22]。离子交换色谱柱的原理是通过多糖中不同组分与色谱柱中带电荷的交换基的作用力大小不同，在柱子中保留时间不同，从而导致不同极性多糖被相互分离；而凝胶色谱柱则起到分子筛的作用，根据多糖分子量大小进行分离[23]。本研究采用DEAE-52纤维柱和琼脂糖凝胶CL-6B柱分离纯化老香黄多糖。由表1可知，相对于PFCP-1、PFCP-3组，PFCP-2的得率明显较高，所以选取PFCP-2进一步利用琼脂糖凝胶柱纯化。
表 1 提取纯化样品糖含量和得率Table 1. Sugar content and yield of extraction and purification samples样品名称 中性糖含量（%） 糖醛酸含量（%） 多糖得率（%） PFCP 70.44±1.02a 22.66±0.32d 2.50±0.41 PFCP-1 60.86±1.22b − 9.11±0.27 PFCP-2 40.05±0.41d 48.98±0.44b 25.35±1.43 PFCP-3 31.79±1.94e 46.50±1.07c 3.4±0.41 PFCP-2-1 47.72±2.75c 52.74±0.55a 62.30±1.27 PFCP-2-2 36.79±0.41de 48.67±0.67b 29.36±0.71 注：表中PFCP得率计算以老香黄为基准；PFCP-1、PFCP-2、PFCP-3得率计算以PFCP为基准；PFCP-2-1、PFCP-2-2得率计算以PFCP-2为基准。−表示未检出，不同小写字母代表差异显著（P<0.05）。 经水提醇沉、Sevag试剂脱蛋白后得到老香黄多糖PFCP，其得率为2.5%。由图1可以看出，PFCP经DEAE-52纤维素柱层析纯化后得到三个组分。其中PFCP-1为水洗脱组分，得率为9.11%；PFCP-2为0.1 mol/L NaCl洗脱得到的组分，得率为25.35%；PFCP-3为0.2 mol/L NaCl洗脱得到的组分，得率为3.4%；经0.3 mol/L NaCl洗脱后，苯酚-硫酸法检测无多糖组分流出。第一个组分是由水洗脱，主要是中性糖，后面两个组分均由NaCl溶液洗脱，主要是酸性糖[24]，由表1也可看出，PFCP-1未检测到糖醛酸，而PFCP-2，PFCP-3糖醛酸含量较高。从图2可以看出，PFCP-2经CL-6B纯化后得到PFCP-2-1、PFCP-2-2两个组分，得率分别为62.30%，29.36%。从表1可以看出，经DEAE-52纤维柱和琼脂糖凝胶CL-6B柱纯化后，与PFCP-2相比，PFCP-2-1的中性糖含量和糖醛酸含量之和明显增加，达到了较好的纯化效果。
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图 1 PFCP的DEAE-52纤维素阴离子交换色谱柱洗脱曲线图Figure 1. Elution profiles of DEAE-52 cellulose anion-exchange chromatography column of PFCP![]()
图 2 PFCP-2的琼脂糖凝胶CL-6B凝胶色谱柱洗脱曲线图Figure 2. Elution profiles of Sepharose CL-6B gel column of PFCP-22.2 老香黄多糖组分对GES-1细胞增殖活力的影响
MTT比色法是检测细胞存活状态较为常见的方法，其原理是活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶能与MTT结合形成蓝紫色不溶于水的结晶，通过DMSO溶解之后使用酶标仪进行吸光度测定，而死细胞无法与MTT形成结晶，所以同步此方法可以检测细胞的存活状态[25]。本研究采用MTT法检测老香黄多糖各组分对GES-1细胞活力的影响，结果如图3所示。用不同组分老香黄多糖（0~200 μg/mL）干预正常GES-1细胞24 h后，细胞生长情况良好，说明0~200 μg/mL的老香黄多糖对GES-1细胞不仅无毒，而且还有一定的促进细胞生长作用，所以采用老香黄多糖干预损伤GES-1细胞可行。从图3中可以看出，除PFCP-2-1、PFCP-2-2外，多糖浓度达到100 μg/mL时，细胞存活率与正常组相比呈现显著上升趋势，因此选取5~100 μg/mL进行后续研究。此外，除5 μg/mL外，PFCP-2细胞存活率均高于其他组分。
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图 3 老香黄多糖对GES-1细胞增殖活力的影响注：不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。Figure 3. The effect of Laoxianghuang polysaccharides on the proliferative viability of GES-1 cells2.3 乙醇诱导GES-1细胞损伤模型建立
乙醇是一种致粘膜坏死物质，当它直接接触胃黏膜时，会破坏胃粘膜粘液屏障，使胃液分泌增加，加重胃粘膜损伤[26]。此外，高浓度的乙醇具有很强的脱水性，直接接触胃粘膜甚至会造成胃粘膜表层细胞变性坏死。有研究表明，使用乙醇诱导GES-1细胞模型，在一定反应时间内，细胞存活率与乙醇的浓度有一定相关性[27]。如图4所示，不同浓度的乙醇作用于GES-1细胞3 h后，细胞存活率均降低，且乙醇浓度越大，细胞损伤越严重，当乙醇浓度为6%时，细胞存活率为55.33%±3.08%，细胞状态较为稳定。当乙醇浓度较低时，对细胞活力的抑制作用不明显，导致后续实验结果不准确；而当乙醇浓度过高时，细胞存活率急速降低，可能造成不可逆转的损伤。考虑到细胞的可恢复性，细胞存活率一般控制在50%左右最佳[28]。因此，本研究选择建立模型的条件为6%乙醇作用3 h。
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图 4 不同乙醇浓度对GES-1细胞存活率的影响Figure 4. Effect of different ethanol concentrations on the survival rate of GES-1 cells2.4 老香黄多糖对乙醇损伤GES-1细胞活力影响
根据2.2和2.3的结果，添加不同浓度的老香黄多糖（5、50、100 μg/mL）和80 μmol/L的阳性对照物替普瑞酮干预正常的GES-1细胞24 h后，使用6%的乙醇损伤3 h进行造模。结果如图5所示，模型组细胞存活率仅为55.23%，与正常组相比差异极显著（P<0.01），说明造模成功。与模型组相比，除PFCP-1（5 μg/mL）和PFCP（50 μg/mL）剂量组外，其它各个剂量老香黄多糖组的细胞存活率均有显著提高（P<0.01）。其中PFCP-2-1效果最好，具有浓度依赖性，且细胞存活率高于阳性药物对照组，当PFCP-2-1浓度为100 μg/mL时，与模型组相比存活率提高了64.75%，且与正常组无显著差异（P>0.05）。Liu等[29]研究发现，砂仁酸性多糖预处理能提高乙醇诱导的GES-1细胞的活力，对细胞损伤具有保护作用。以上结果说明，老香黄多糖对乙醇诱导的GES-1细胞损伤具有一定的保护作用，且PFCP-2-1保护效果最佳。
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2.5 老香黄多糖对GES-1细胞损伤模型SOD、MDA、CAT水平的影响
乙醇的摄入会促进组织中的氧化应激，导致脂质过氧化反应增加，抗氧化酶活性降低，从而导致胃损伤[30]。已有研究表明，自由基与胃黏膜损伤有关，氧自由基发生脂质过氧化，产生过量脂质过氧化物会也对胃黏膜造成损伤，而自由基清除剂可使乙醇性胃黏膜损伤程度减轻[31-33]，因此，检测细胞内自由基清除剂SOD、CAT酶活力和脂类代谢产生的MDA含量可作为评价机体和胃组织对胃黏膜损伤修复能力的指标。
2.5.1 细胞内SOD酶活力
SOD是机体内分泌的一种氧自由基清除剂，它可以将活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）转化为过氧化氢，然后被身体利用和代谢[34-35]。如图6所示，正常组SOD酶活为（90.30±2.26） U/mg prot，模型组SOD酶活为（55.17±6.08） U/mg prot，与正常组相比差异极显著（P<0.01）。与模型组相比，除作用浓度为5 μg/mL的PFCP-2-2以外，多糖处理后，细胞内SOD酶活力均有显著提升（P<0.01），其中，PFCP-2-1作用浓度为50 μg/mL时，SOD酶活力达最高值，为（98.78±0.71） U/mg prot，与阳性对照组相比增加了16.66%，两者差异显著（P<0.05）。Xu等[4]研究发现，芦荟多糖能提高GES-1细胞氧化损伤后SOD活力，从而改善胃黏膜损伤，与本文研究结果相似。因此，老香黄多糖PFCP-2-1提高细胞内SOD酶活力，增强细胞抗氧化活性，有助于缓解乙醇所致胃黏膜氧化损伤。
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图 6 老香黄多糖对乙醇损伤GES-1细胞内SOD分泌量的影响注：ns表示无显著差异。Figure 6. Effect of Laoxianghuang polysaccharide on the secretion of SOD in ethanol damaged GES-1 cells2.5.2 细胞内MDA含量
MDA是机体脂质过氧化反应产生的一类代谢酶，具有细胞毒性，MDA含量与机体产生的氧化应激强度和细胞损伤有密切联系[34]。已有研究表明，经乙醇诱导损伤后，GES-1细胞内MDA含量增加，脂质过氧化反应增加[36]。如图7所示，正常组细胞中MDA含量仅为（1.23±0.09） nmol/mg prot，而模型组细胞中MDA的含量为（3.57±0.15） nmol/mg prot，高于正常组（P<0.01）。乙醇诱导后，细胞内MDA含量显著增加，说明细胞产生氧化应激损伤。经不同组分老香黄多糖干预后，细胞内MDA含量显著下降，说明老香黄多糖能明显抑制细胞内MDA分泌，减轻细胞损伤。与模型组相比，经老香黄多糖干预后，细胞内MDA含量均显著下降（P<0.01）。其中PFCP-2-1（50 μg/mL）的MDA抑制效果最优，与模型组相比降低了68.34%，其次是PFCP-2（50 μg/mL），与模型组相比降低了64.70%，且两组与空白组相比，均无显著差异（P>0.05）。以上结果说明，老香黄多糖PFCP-1-2能较好地调节细胞内MDA含量。
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图 7 老香黄多糖对乙醇损伤GES-1细胞内MDA分泌量的影响Figure 7. Effect of Laoxianghuang polysaccharide on the secretion of MDA in ethanol damaged GES-1 cells2.5.3 细胞内CAT酶活力
CAT是人体必需的酶，它可以分解SOD对ROS的代谢物过氧化氢，进一步发挥机体对外界刺激的抗氧化作用，以保护机体健康[37]。研究结果如图8所示，正常组细胞中CAT酶活为（40.32±1.68） U/mg prot，模型组细胞中CAT酶活显著降低（P<0.01），仅为（6.66±3.02） U/mg prot，而经不同纯化组分老香黄多糖干预后，细胞内CAT酶活均有所增加，细胞抗氧化能力增强。与模型组相比，用老香黄多糖干预后，细胞内CAT酶活力显著提高（100 μg/mL PFCP，P<0.05；其他多糖组分，P<0.01），其中PFCP-2-1（5 μg/mL）提高CAT酶活效果最优，其次是PFCP-2（100 μg/mL）。PFCP-2-1组分浓度为5 μg/mL时CAT酶活为（33.74±1.00） U/mg prot，PFCP-2组分浓度为100 μg/mL时CAT酶活为（31.12±3.08） U/mg prot，两组效果均优于替普瑞酮组（P<0.05）。因此老香黄多糖能提高细胞内CAT酶活力，从而发挥胃粘膜保护活性，这与Hou等[36]研究结果相似，多糖干预可以增强GES-1细胞内CAT酶活，改善细胞内氧化应激状态，最终使细胞发挥正常功能。
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图 8 老香黄多糖对乙醇损伤GES-1细胞内CAT酶活的影响Figure 8. Effect of Laoxianghuang polysaccharide on the secretion of CAT in ethanol damaged GES-1 cells2.6 老香黄多糖对GES-1细胞划痕修复的影响
GES-1细胞能促进胃上皮细胞分泌粘液与HCO−3形成黏膜防御屏障，保护胃黏膜[38]。因此，GES-1细胞增殖、迁移能力是影响黏膜损伤愈合的重要因素，促进细胞增殖、迁移聚集到黏膜损伤部位是提高黏膜保护质量的关键[39]。研究结果如图9、10所示，老香黄多糖能够促进GES-1细胞向损伤区域迁移、生长。在GES-1细胞受损24 h后，PFCP-2-1在50 μg/mL浓度时损伤区域修复率高达64.01%±6.85%，显著高于控制组（26.89%±3.05%）（P<0.01），而和替普瑞酮阳性对照组（73.19%±8.14%）无显著性差异（P>0.05）。该结果表明老香黄多糖PFCP-2-1对GES-1细胞损伤后具有良好的迁移和修复效果。林娇芬等[40]研究发现，杏鲍菇β葡聚糖能加速GES-1细胞损伤区域上皮细胞的生长，与本研究结果相似。老香黄多糖PFCP-2-1可能通过促进划痕受损的GES-1细胞生长、迁移，从而加速胃黏膜损伤的修复，达到保护胃黏膜的作用。
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图 9 老香黄多糖对GES-1损伤后的修复效果对比注：不同小写字母代表有显著差异（P<0.05），*表示与控制组相比差异显著（P<0.05）；**表示与控制组相比差异极显著（P<0.01）。Figure 9. Comparison of the repair effect of Laoxianghuang polysaccharide on GES-1 after damage![]()
图 10 划痕修复效果对比图注：蓝色条带内为划痕损伤区域；控制组用培养基处理，阳性对照组用80 μmol/L的替普瑞酮处理；划痕损伤修复面积使用imageJ软件计算。Figure 10. Scratch repair effect comparison graph3. 结论
老香黄多糖通过脱蛋白、DEAE-52阴离子纤维柱和CL-6B琼脂糖凝胶柱层析，分离纯化得到PFCP、PFCP-1、PFCP-2、PFCP-3、PFCP-2-1和PFCP-2-2这6组不同纯化程度的多糖。
通过建立体外酒精损伤GES-1细胞模型，结果发现PFCP-2-1胃黏膜保护活性最强，其次是PFCP-2，两者均能提高GES-1细胞经酒精损伤的细胞活力，促进细胞增殖。通过检测细胞内MDA含量以及SOD和CAT酶活发现，模型组细胞的MDA含量明显高于正常组，SOD和CAT的酶活明显低于正常组，而PFCP-2-1多糖组MDA含量显著低于模型组（P<0.01），SOD和CAT酶活显著高于模型组（P<0.01）。其中，在PFCP-2-1作用浓度为50 μg/mL时，细胞SOD酶活最高，MDA含量最小；在PFCP-2-1作用浓度5 μg/mL时，细胞内CAT酶活最高。PFCP-2-1能有效提高细胞SOD和CAT酶活，降低MDA的水平，由此可知，老香黄多糖PFCP-2-1可能通过缓解酒精引起的MDA水平升高，减轻GES-1细胞的氧化应激反应，达到保护胃黏膜的效果，且效果基本优于阳性对照组。细胞划痕损伤实验说明，在50 μg/mL浓度条件下，PFCP-2-1能提高GES-1细胞划痕损伤修复率，促进细胞向损伤区域迁移，从而保护胃黏膜。
综上所述，老香黄多糖经纯化后获得了6个组分的多糖，其中PFCP-2-1组分体外胃黏膜保护活性最强，其可通过提高细胞抗氧化能力，改善乙醇所导致的GES-1细胞损伤，并且能通过促进GES-1细胞增殖、迁移发挥胃黏膜保护活性。
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图 1 PFCP的DEAE-52纤维素阴离子交换色谱柱洗脱曲线图
Figure 1. Elution profiles of DEAE-52 cellulose anion-exchange chromatography column of PFCP
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图 2 PFCP-2的琼脂糖凝胶CL-6B凝胶色谱柱洗脱曲线图
Figure 2. Elution profiles of Sepharose CL-6B gel column of PFCP-2
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图 3 老香黄多糖对GES-1细胞增殖活力的影响
注：不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。
Figure 3. The effect of Laoxianghuang polysaccharides on the proliferative viability of GES-1 cells
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图 4 不同乙醇浓度对GES-1细胞存活率的影响
Figure 4. Effect of different ethanol concentrations on the survival rate of GES-1 cells
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图 6 老香黄多糖对乙醇损伤GES-1细胞内SOD分泌量的影响
注：ns表示无显著差异。
Figure 6. Effect of Laoxianghuang polysaccharide on the secretion of SOD in ethanol damaged GES-1 cells
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图 7 老香黄多糖对乙醇损伤GES-1细胞内MDA分泌量的影响
Figure 7. Effect of Laoxianghuang polysaccharide on the secretion of MDA in ethanol damaged GES-1 cells
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图 8 老香黄多糖对乙醇损伤GES-1细胞内CAT酶活的影响
Figure 8. Effect of Laoxianghuang polysaccharide on the secretion of CAT in ethanol damaged GES-1 cells
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图 9 老香黄多糖对GES-1损伤后的修复效果对比
注：不同小写字母代表有显著差异（P<0.05），*表示与控制组相比差异显著（P<0.05）；**表示与控制组相比差异极显著（P<0.01）。
Figure 9. Comparison of the repair effect of Laoxianghuang polysaccharide on GES-1 after damage
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图 10 划痕修复效果对比图
注：蓝色条带内为划痕损伤区域；控制组用培养基处理，阳性对照组用80 μmol/L的替普瑞酮处理；划痕损伤修复面积使用imageJ软件计算。
Figure 10. Scratch repair effect comparison graph
表 1 提取纯化样品糖含量和得率
Table 1 Sugar content and yield of extraction and purification samples
样品名称 中性糖含量（%） 糖醛酸含量（%） 多糖得率（%） PFCP 70.44±1.02a 22.66±0.32d 2.50±0.41 PFCP-1 60.86±1.22b − 9.11±0.27 PFCP-2 40.05±0.41d 48.98±0.44b 25.35±1.43 PFCP-3 31.79±1.94e 46.50±1.07c 3.4±0.41 PFCP-2-1 47.72±2.75c 52.74±0.55a 62.30±1.27 PFCP-2-2 36.79±0.41de 48.67±0.67b 29.36±0.71 注：表中PFCP得率计算以老香黄为基准；PFCP-1、PFCP-2、PFCP-3得率计算以PFCP为基准；PFCP-2-1、PFCP-2-2得率计算以PFCP-2为基准。−表示未检出，不同小写字母代表差异显著（P<0.05）。 
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[1] 刘亚文, 刘红, 吴静. 胃黏膜保护机制与药物研究进展[J]. 临床药物治疗杂志,2018,16(10):8−12. [LIU Yawen, LIU Hong, WU Jing. Progress in gastric mucosa protectant[J]. Clinic Medication Journal,2018,16(10):8−12. LIU Yawen, LIU Hong, WU Jing. Progress in gastric mucosa protectant[J]. Clinic Medication Journal, 2018, 16(10): 8-12.
[2] YANG Y, YIN B, LV L, et al. Gastroprotective effect of aucubin against ethanol-induced gastric mucosal injury in mice[J]. Life Sciences,2017,189:44−51. doi: 10.1016/j.lfs.2017.09.016
[3] WU T, LIANG J, AI J, et al. Mulberry ethanol extract and rutin protect alcohol-damaged GES-1 cells by inhibiting the MAPK pathway[J]. Molecules,2022,27(13):4266. doi: 10.3390/molecules27134266
[4] XU C, DING C, ZHOU N, et al. A polysaccharide from Aloe vera L. var. chinensis (Haw.) Berger prevents damage to human gastric epithelial cells in vitro and to rat gastric mucosa in vivo[J]. Journal of Functional Foods,2016,24:501−512. doi: 10.1016/j.jff.2016.04.035
[5] WANG R, WU Y, ZHU Y, et al. ANKRD22 is a novel therapeutic target for gastric mucosal injury[J]. Biomedicine & Pharmacotherapy,2022,147:112649.
[6] WANG X, YIN J, ZHAO M, et al. Gastroprotective activity of polysaccharide from Hericium erinaceus against ethanol-induced gastric mucosal lesion and pylorus ligation-induced gastric ulcer, and its antioxidant activities[J]. Carbohydrate Polymers,2018,186:100−109. doi: 10.1016/j.carbpol.2018.01.004
[7] 薛志远. 红芪多糖的结构表征及抗胃溃疡活性研究[D]. 兰州: 兰州大学, 2022 XUE Zhiyuan. Structural characterization of polysaccharides from radix hedysari andits anti-gastric ulcer activity[D]. Lanzhou: Lanzhou University, 2022.
[8] 丁丽婷, 潘世杰, 胡婕伦, 等. 燕麦多糖对小鼠急性胃黏膜损伤的保护作用[J]. 食品科学,2022,43(9):150−157. [DING Liting, PAN Shijie, HU Jielun, et al. Protective effect of oat polysaccharides against acute gastric mucosal injury in mice[J]. Food Science,2022,43(9):150−157. DING Liting, PAN Shijie, HU Jielun, et al. Protective effect of oat polysaccharides against acute gastric mucosal injury in mice[J]. Food Science, 2022, 43(9): 150-157.
[9] LIAN Y Z, LIN I, YANG Y, et al. Gastroprotective effect of Lycium barbarum polysaccharides and C-phycocyanin in rats with ethanol-induced gastric ulcer[J]. International Journal of Biological Macromolecules,2020,165:1519−1528. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2020.10.037
[10] 阳丹, 陈小爱, 杨玉洁, 等. 基于电子鼻、HS-GC-IMS、HS-SPME-GC-MS技术联用分析不同发酵年份老香黄挥发性成分差异[J]. 现代食品科技,2022,38(11):313−323. [YANG Dan, CHEN Xiaoai, YANG Yujie, et al. The Application of E-nose, HS-GC-IMS, and HS-SPME-GC-MS to differentiate the volatile composition of Lao Xianghuang fermented for different years[J]. Modern Food Science and Technology,2022,38(11):313−323. doi: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2022.11.1406 YANG Dan, CHEN Xiaoai, YANG Yujie, et al. The Application of E-nose, HS-GC-IMS, and HS-SPME-GC-MS to differentiate the volatile composition of Lao Xianghuang fermented for different years[J]. Modern Food Science and Technology,2022,38(11):313-323. doi: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2022.11.1406
[11] 郭舒臣, 郑玉忠, 郭瑞, 等. 不同年份老香黄定量分析及其化学模式识别研究[J]. 分析测试学报,2021,40(1):10−18. [GUO Shuchen, ZHENG Yuzhong, GUO Rui, et al. Quantitative analysis and chemical pattern recognition of Lao-Xiang-Huang preserved in different years[J]. Journal of Instrumental Analysis,2021,40(1):10−18. GUO Shuchen, ZHENG Yuzhong, GUO Rui, et al. Quantitative analysis and chemical pattern recognition of Lao-Xiang-Huang preserved in different years[J]. Journal of Instrumental Analysis, 2021, 40(1): 10-18.
[12] 林婉玲, 刘亚群, 刘谋泉, 等. 不同陈化年份老香黄品质的综合评价[J]. 食品工业科技,2023,44(2):358−368. [LIN Wanling, LIU Yaqun, LIU Mouquan, et al. Comprehensive evaluation of Laoxinghuang quality in different aging years[J]. Science and Technology of Food Industry,2023,44(2):358−368. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022040129 LIN Wanling, LIU Yaqun, LIU Mouquan, et al. Comprehensive evaluation of Laoxinghuang quality in different aging years[J]. Science and Technology of Food Industry,2023,44(2):358-368. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022040129
[13] 陈小爱, 蔡惠钿, 刘静宜, 等. 基于电子鼻、GC-MS和GC-IMS技术分析老香黄发酵期间的挥发性成分变化[J]. 食品工业科技,2021,42(12):70−80. [CHEN Xiaoai, CAI Huitian, LIU Jingyi, et al. Analysis of volatile components in Laoxianghuang during fermentation by electronic nose, GC-MS and GC-IMS[J]. Science and Technology of Food Industry,2021,42(12):70−80. CHEN Xiaoai, CAI Huitian, LIU Jingyi, et al. Analysis of Volatile Components in Laoxianghuang During Fermentation by Electronic Nose, GC-MS and GC-IMS[J]. Science and Technology of Food Industry, 2021, 42 (12): 70-80.
[14] 赖宣, 杨启财, 张振霞. 潮汕老香黄亚硝酸盐含量的调查分析[J]. 轻工科技,2016,32(5):4−5. [LAI Xuan, YANG Shoucai, ZHANG Zhengxia. Investigation and analysis of nitrite content of Lao Xianghuang in Chaoshan[J]. Light Industry Science and Technology,2016,32(5):4−5. LAI Xuan, YANG Shoucai, ZHANG Zhengxia. Investigation and analysis of nitrite content of Lao Xianghuang in Chaoshan[J]. Light Industry Science and Technology, 2016, 32(5): 4-5.
[15] 戈子龙, 张泽金, 周爱梅, 等. 基于高通量测序与培养方法分析新鲜佛手与老香黄中的细菌多样性[J]. 食品与发酵工业,2020,46(3):250−256. [GE Zilong, ZHANG Zejin, ZHOU Aimei, et al. Analysis of bacteria diversity in fresh fingered citron and Laoxianghuang based on high throughput sequencing and culture methodology[J]. Food and Fermentation Industries,2020,46(3):250−256. GE Zilong, ZHANG Zejin, ZHOU Aimei, et al. Analysis of bacteria diversity in fresh fingered citron and Laoxianghuang based on high throughput sequencing and culture methodology[J]. Food and Fermentation Industries, 2020, 46(3): 250-256.
[16] 王淑惠, 杨玉洁, 周爱梅, 等. 两种方法提取佛手渣多糖及其对巨噬细胞RAW264.7免疫调节活性的研究[J]. 食品工业科技,2020,41(15):179−187. [WANG Shuhui, YANG Yujie, ZHOU Aimei, et al. Study on the polysaccharide extracted from Bergamot (Citrus medica L. var. sarcodactylis) residue by two methods and its immunomodulatory function in RAW264.7 cells[J]. Science and Technology of Food Industry,2020,41(15):179−187. WANG Shuhui, YANG Yujie, ZHOU Aimei, et al. Study on the polysaccharide extracted from Bergamot ( Citrus medica L. var. sarcodactylis) residue by two methods and its immunomodulatory function in RAW264.7 cells[J]. Science and Technology of Food Industry, 2020, 41(15): 179-187.
[17] YUAN L, QIU Z, YANG Y, et al. Preparation, structural characterization and antioxidant activity of water-soluble polysaccharides and purified fractions from blackened jujube by an activity-oriented approach[J]. Food Chemistry,2022,385:132637. doi: 10.1016/j.foodchem.2022.132637
[18] 袁心田, 陈华国, 赵超, 等. 基于膜技术的桑葚多糖分级分离及生物活性组分筛选[J]. 食品工业科技,2022,43(24):672−80. [YUAN Xintian, CHEN Huaguo, ZHAO Chao, et al. Separation of Mori fructus polysaccharides and screening of bioactive fractions based on membrane technology[J]. Science and Technology of Food Industry,2022,43(24):672−80. YUAN Xintian, CHEN Huaguo, ZHAO Chao, et al. Separation of Mori fructus polysaccharides and screening of bioactive fractions based on membrane technology[J]. Science and Technology of Food Industry, 2022, 43(24): 672-80.
[19] 方青青. 油茶桑寄生多糖的提取纯化、结构分析及其生物活性研究[D]. 湘潭: 湘潭大学, 2019 FANG Qingqing. The extraction, purification, structural analysis and bioactivity research of polysaccharide from Mistletoe of Camellia Oleifera[D]. Xiangtan: Xiangtan University, 2019.
[20] XIE M, CHEN H, NIE S, et al. Gastroprotective effect of gamma-aminobutyric acid against ethanol-induced gastric mucosal injury[J]. Chemico-Biological Interactions,2017,272:125−134. doi: 10.1016/j.cbi.2017.04.022
[21] LIU D, WANG S, BAO Y, et al. Extraction, purification and structural characterization of polysaccharides from Apocynum venetum L. roots with anti-inflammatory activity[J]. Process Biochemistry,2022,121:100−112. doi: 10.1016/j.procbio.2022.06.035
[22] ZHANG R, ZHANG X, TANG Y, et al. Composition, isolation, purification and biological activities of Sargassum fusiforme polysaccharides: A review[J]. Carbohydrate Polymers,2020,228:115381. doi: 10.1016/j.carbpol.2019.115381
[23] LIN B, HUANG G. Extraction, isolation, purification, derivatization, bioactivity, structure-activity relationship, and application of polysaccharides from White jellyfungus[J]. Biotechnology and Bioengineering,2022,119(6):1359−1379. doi: 10.1002/bit.28064
[24] 张如佳. 锦灯笼果实多糖的分离纯化及结构分析[D]. 长春: 东北师范大学, 2020 ZHANG Rujia. Isolation, purification and structural analysis of polysaccharides from the fruits of Physalis alkekengi L. [D]. Changchun: Northeast Normal University, 2020.
[25] ZHANG C, GAO F, GAN S, et al. Chemical characterization and gastroprotective effect of an isolated polysaccharide fraction from Bletilla striata against ethanol-induced acute gastric ulcer[J]. Food and Chemical Toxicology,2019,131:110539. doi: 10.1016/j.fct.2019.05.047
[26] CHARI S, TEYSSEN S, SINGER M V. Alcohol and gastric acid secretion in humans[J]. Gut,1993,34(6):843−847. doi: 10.1136/gut.34.6.843
[27] 何瑞坤, 黄焕迪, 戴庆玲, 等. 高良姜、红豆蔻及大高良姜的挥发油对乙醇致GES-1细胞损伤的保护作用及机制研究[J]. 中华中医药学刊,2022,40(6):81−85. [HE Ruikun, HUANG Huandi, DAI Qingling, et al. The protective effect and mechanism of volatile oil from Alpinia officinarum Hance, seeds of Alpinia galanga Willd and Alpinia galanga Willd on GES-1 cell damage induced by ethanol[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine,2022,40(6):81−85. HE Ruikun, HUANG Huandi, DAI Qingling, et al. The protective effect and mechanism of volatile oil from Alpinia officinarum Hance, seeds of Alpinia galanga Willd and Alpinia galanga Willd on GES-1 cell damage induced by ethanol[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2022, 40(6): 81-85.
[28] 廖兵武. 猴头菇多糖及其磷酸化衍生物对GES-1细胞损伤的保护作用研究[D]. 广州: 华南理工大学, 2021 LIAO Binwu. A study on protective effects of polysaccharide from Hericium erinaceus and its phosphorylated derivatives against injured GES-1 cells[D]. Guangzhou: South China University of Technology, 2021.
[29] LIU H, ZHUANG S, LIANG C, et al. Effects of a polysaccharide extract from Amomum villosum Lour. on gastric mucosal injury and its potential underlying mechanism[J]. Carbohydrate Polymers,2022,294:119822. doi: 10.1016/j.carbpol.2022.119822
[30] KE Y, ZHAN L, LU T, et al. Polysaccharides of Dendrobium officinale Kimura & Migo leaves protect against ethanol-induced gastric mucosal injury via the AMPK/mTOR signaling pathway in vitro and vivo[J]. Frontiers in Pharmacology,2020,11:526349.
[31] WANG X Y, YIN J Y, HU J L, et al. Gastroprotective polysaccharide from natural sources: Review on structure, mechanism, and structure-activity relationship[J]. Food Frontiers,2022,3(4):560−591. doi: 10.1002/fft2.172
[32] WANG B, ZHANG H, CHEN L, et al. Extraction, purification, and determination of the gastroprotective activity of glucomannan from Bletilla striata[J]. Carbohydrate Polymers,2020,246:116620. doi: 10.1016/j.carbpol.2020.116620
[33] 剌晓琴, 刘一志, 张立超, 等. 谷糠多酚对酒精性胃黏膜损伤的保护作用[J]. 食品科学,2022,43(13):64−71. [LA Xiaoqin, LIU Yizhi, ZHANG Lichao, et al. Protective effect of Foxtail Millet bran-derived polyphenols on Alcohol-Induced Gastric Mucosal Injury[J]. Food Science,2022,43(13):64−71. LA Xiaoqin, LIU Yizhi, ZHANG Lichao, et al. Protective effect of Foxtail Millet bran-derived polyphenols on Alcohol-Induced Gastric Mucosal Injury[J]. Food Science, 2022, 43 (13): 64-71.
[34] 张慧. 白及多糖对乙醇型胃黏膜损伤保护作用的研究[D]. 西安: 陕西师范大学, 2018 ZHANG Hui. Study on the protective effect of Bletilla striata polysaccharide on ethanol-based gastric mucosal damage[D]. Xi'an: Shaanxi Normal University, 2018.
[35] DAS K, ROYCHOUDHURY A. Reactive oxygen species (ROS) and response of antioxidants as ROS-scavengers during environmental stress in plants[J]. Frontiers in Environmental Science, 2014, 2.
[36] HOU C, LIU L, REN J, et al. Structural characterization of two Hericium erinaceus polysaccharides and their protective effects on the alcohol-induced gastric mucosal injury[J]. Food Chemistry,2022,375:131896. doi: 10.1016/j.foodchem.2021.131896
[37] PAN J S, HE S Z, XU H Z, et al. Oxidative stress disturbs energy metabolism of mitochondria in ethanol-induced gastric mucosa injury[J]. World Journal of Gastroenterology,2008(38):5857−5867.
[38] LAINE L, TAKEUCHI K, TARNAWSKI A. Gastric mucosal defense and cytoprotection: Bench to bedside[J]. Gastroenterology,2008,135(1):41−60. doi: 10.1053/j.gastro.2008.05.030
[39] 陈敏敏. 胃黏膜防御—修复机制老化的初步研究[D]. 上海: 复旦大学, 2013 CHEN Mingming. Gastric mucosal defense-repair mechanisms with aging: A preliminary study[D].Shanghai: Fudan University, 2013.
[40] 林娇芬, 黄家福, 林志超, 等. 杏鲍菇β-葡聚糖促人胃粘膜上皮细胞增殖和迁移效果研究[J]. 热带作物学报,2013,34(11):2301−2306. [LIN Jiaofen, HUANG Jiafu, LIN Zhichao, et al. The Effect of β-glucan from Pleurotus Eryngii on promoting the proliteration and migration of gastric mucosa epithelial cell[J]. Chinese Journal of Tropical Crops,2013,34(11):2301−2306. doi: 10.3969/j.issn.1000-2561.2013.11.039 LIN Jiaofen, HUANG Jiafu, LIN Zhichao, et al. The Effect of β-glucan from Pleurotus Eryngii on promoting the proliteration and migration of gastric mucosa epithelial cell[J]. Chinese Journal of Tropical Crops, 2013, 34(11): 2301-2306. doi: 10.3969/j.issn.1000-2561.2013.11.039
-
期刊类型引用(12)
1. 徐源，杨立军，李冰洁，郭磊磊，王琳，李尽哲. 超声辅助双水相提取紫苏叶总黄酮工艺优化及其抗氧化活性分析. 粮食与油脂. 2025(02): 158-162 . 
百度学术
2. 郝熙，李伟，张海鹏，李昕彤，张铭，吴松遥，陈林林. 酶辅助超声优化提取紫苏籽多酚及其抗氧化和酶抑制活性. 中国调味品. 2025(02): 112-120 . 百度学术
3. 闫小杰，白乌日力嘎，张园园，刘秀丽，史培，其力格尔其其格，乌云达来，王莉梅. 紫苏叶醇提物提取工艺及其抗氧化、抗菌活性研究. 中国食品添加剂. 2025(03): 9-18 . 百度学术
4. 陈春明，詹锐旭，郑莉雯，温梁健，谢书垚，刘华. 山竹皮氧杂蒽酮超声辅助植物油提取工艺优化及其抗氧化和抑菌能力研究. 中国食品添加剂. 2024(02): 104-111 . 百度学术
5. 赵元寿，胡慧敏，赵振羽，赵卫东，尚艳. 食品中多酚类化合物提取方法的研究进展. 中国食品工业. 2024(04): 141-143 . 百度学术
6. 孟庆霖，褚齐，宋健，董红畅，李贺，林珈羽，赵南晰. 紫苏叶总黄酮对APAP诱导的急性肝损伤的保护作用. 食品工业科技. 2024(14): 344-351 . 本站查看
7. 邱卫华，于晓慧. 响应面法优化紫苏叶中花色苷与多酚的同步高效提取工艺. 现代食品. 2024(21): 155-162 . 百度学术
8. 郭誉嵘，王丹，李河，武瑞杰，崔小芳，许瑞清，李会珍，张志军. 紫苏叶提取物对美拉德体系晚期糖基化终末产物生成的抑制作用研究. 食品安全质量检测学报. 2023(16): 143-151 . 百度学术
9. 王贝，葛娅娅. 响应面法优化紫苏叶总黄酮提取工艺. 中国饲料. 2023(18): 28-32 . 百度学术
10. 吴颖，王双旦，唐文，刘晴，王佳其，张蓓婷. 金盏菊乙酸乙酯萃取相的酚酮类物质含量及其抗氧化、抑菌和酪氨酸酶抑制活性. 食品工业科技. 2023(19): 347-355 . 本站查看
11. 王哲，赵彩博，肖娟. 超声波辅助盐酸水解提取琼枝麒麟菜卡拉胶工艺优化. 海南大学学报(自然科学版). 2023(04): 376-386 . 百度学术
12. 张良琦，李文姣，肖美凤. 紫苏不同部位活性成分比较及其药理作用研究进展. 中国中药杂志. 2023(24): 6551-6571 . 百度学术
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