Analysis of Color Quality Difference of Liupao Tea Infusion
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摘要: 茶汤汤色是评价茶叶品质的重要因子。为探究广西六堡茶汤色品质与化学成分关系,本研究通过感官审评和色差分析区分六堡茶汤色,应用紫外分光光度比色法和超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱法(Ultra performance liquid chromatography-quadrupole-orbitrap-mass spectrometry,UPLC-Q-Orbitrap-MS)测定品质成分,并结合多元统计分析法研究茶汤内含物质与汤色间的变化关系。结果表明,六堡茶典型的茶汤汤色类型有橙红型、红色型、红浓型3种,且三种类型汤色间茶褐素含量差异显著;六堡茶样品中共鉴定出120种化合物,其中大部分氨基酸、儿茶素类、酚酸类、黄酮类化合物等在三种类型汤色间存在显著差异。根据VIP值筛选出N-乙酰-DL-谷氨酸、4-酮-L-脯氨酸、儿茶素、表儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、芦丁、槲皮苷、异槲皮苷、二氢杨梅素、杨梅素-3-O-半乳糖苷、奎宁酸、没食子酸、3-没食子酰基奎宁酸等28种影响六堡茶茶汤颜色的关键非挥发性成分,且随汤色加深而含量降低。本研究为六堡茶汤色物质基础的阐明和品质特征形成机理研究提供理论依据。Abstract: The color of the tea infusion is an important factor in evaluating the quality of tea. The objective of this research was to investigate the correlation between the color quality of the infusion and the chemical composition of Liupao tea. Sensory evaluation and color difference analysis were employed to differentiate the infusion color of Liupao tea. The components of Liupao tea were quantified using ultraviolet spectrophotometry and ultra-performance liquid chromatography coupled with quadrupole orbitrap mass spectrometry (UPLC-Q-Orbitrap-MS). Furthermore, multivariate statistical analysis was utilized to examine the relationship between these components and the infusion color. The infusion coloration of Liupao tea could be categorized into three distinct types: orange-red, red, and intense red. Notably, the concentration of theabrownin varies significantly among these three categories of tea infusion. A total of 120 compounds were identified in Liupao tea samples, and the concentrations of amino acids, catechins, phenolic acids, flavonoids, and glycosides exhibited significant variations among the three categories of infusion color. The 28 major nonvolatile components were identified based on the VIP values, which included N-acetyl-DL-glutamic acid, 4-keto-L-proline, catechin, epicatechin, catechin gallate, epigallocatechin gallate, rutin, quercetin, isoquercetin, dihydromyricetin, myricetin-3-O-galactopyranoside, quinic acid, gallic acid, and 3-galloyl quinic acid. It was observed that the content of these compounds diminished as the infusion color intensified. This research offers a theoretical framework for understanding the material foundations of infusion coloration and the mechanisms underlying the quality characteristics of Liupao tea.
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Keywords:
- Liupao tea /
- infusion color /
- chemical composition /
- difference analysis
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六堡茶属于黑茶,原产于广西梧州六堡镇,距今已有1500多年历史[1],六堡茶因“红、浓、陈、醇”的品质特征和降脂、减肥等保健功效[2−3],备受消费者青睐。加工技术是六堡茶品质形成的关键,加工过程分初制、精制两个阶段,初制加工中鲜叶经杀青、初揉、堆闷、复揉、干燥等环节加工成为毛茶,精制加工时将毛茶筛选、拼配、渥堆、汽蒸、压制成型,最后进行晾置陈化为具有独特风味的成品茶[4]。近年来,六堡茶的香气成分、滋味品质、微生物等[5]被不断研究,但关于六堡茶茶汤的研究还鲜有报道。
茶汤色泽是茶叶感官审评中评估茶叶质量最直观的表现之一,是衡量茶叶内物质转化程度、评判茶叶品质的重要指标[6−7]。茶汤色泽的深浅、明暗能侧面反映茶叶品质的优劣,如名优绿茶汤色黄绿明亮,在光照、氧气以及温度影响下会发生色泽的劣变,汤色逐渐变黄、变红、变褐,影响茶叶品质[8]。茶汤色泽不仅受原料影响,而且与加工过程中生成的色素物质有关,包括黄酮醇及其苷类、多酚氧化产物等[9−10],其中茶黄素、茶红素、茶褐素因其含量不同可能呈现出橙黄、橙红、红浓以及红褐色,是影响红茶、黑茶等发酵茶的主要呈色物质。在六堡茶加工过程中,茶汤颜色加深主要发生于渥堆陈化期,多酚、蛋白质等多种代谢产物会在湿热环境下通过微生物和酶的作用发生转化,形成茶褐素等深色贡献类物质。根据前人研究,Chen等[11]研究发现渥堆发酵过程中在微生物的作用下,酯型儿茶素和氨基酸含量下降,茶褐素含量增加,色泽逐渐加深;谌滢[12]也发现六堡茶在陈化过程中茶叶外形色泽变褐,汤色变红,这些研究为六堡茶茶汤品质形成机制的深入研究奠定了基础。但值得注意的是,受鲜叶质量、加工技术、陈化时间等多种因素的影响,六堡茶的茶汤色泽并不是完全一致的,而是在“红”的基础上呈现适度的差异。因此,明确六堡茶典型的茶汤汤色类型是进一步研究其汤色成因、茶汤品质、关键物质组成的基础。
本研究聚焦于六堡茶汤色的差异分析,选用广西梧州六堡茶主要生产企业生产的六堡茶为材料,先通过感官评价和色度值测定明确呈现不同汤色的具有代表性的六堡茶样品,再检测样品茶色素和其他非挥发性成分,分析不同汤色六堡茶中主要非挥发性物质的差异,旨在探究影响汤色变化的相关成分,为进一步阐明六堡茶“红、浓、陈、醇”品质特征形成的物质基础提供理论参考。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
共收集90个六堡茶成品样 由广西梧州茶厂有限公司、广西梧州茂圣茶业有限公司、梧州中茶茶业有限公司提供,仓储年份均为5~7年,原料等级为特级至一级。茶样采用自封袋密闭,置于4 ℃冰箱保存备用;甲酸、乙腈、甲醇 色谱纯,美国Merck公司;乙酸乙酯、正丁醇、碳酸氢钠、草酸、乙醇 分析纯,上海国药集团化学试剂有限公司。
UPLC-Q-Orbitrap-MS联用仪 美国赛默飞世尔科技有限公司;MS204TS/00型电子分析天平 美国Metttler Toledo公司;DSY-2-8水浴锅 常州国华有限公司;UV-2250紫外分光光度计 日本岛津公司;YS6003 台式分光测色仪 深圳三恩时公司;5810R型高速冷冻离心机 德国Eppendorf公司。
1.2 实验方法
1.2.1 茶叶感官审评
参照国标《茶叶感官审评方法》(GB/T 23776-2018)进行茶叶感官审评,由高级评茶师和评茶员7人组成审评小组(男3人,女4人),对茶叶汤色进行特征描述。结合感官审评结果及国标《黑茶:六堡茶》(GBT32719.4-2016),对六堡茶汤色分组。
1.2.2 茶汤色度值测定
称取3 g茶样放入白色审评杯中,加入沸水150 mL冲泡5 min,沥出茶汤,即刻采用测色仪,以纯净水作为空白对照,测定汤色亮度L*、红绿度a*和黄蓝度b*[13−14]。
1.2.3 茶三素总含量测定
准确称取3.00 g茶样加入沸水125 mL浸提 10 min,趁热过滤于干燥的锥形瓶中,冷却至室温。采用萃取比色法对茶黄素、茶红素、茶褐素总含量进行测定[15]。
浸提:准确称取3.00 g茶样加入沸水125 mL浸提10 min,趁热过滤于干燥的锥形瓶中,冷却至室温。
萃取:a.吸取50 mL茶汤滤液,加入50 mL乙酸乙酯于分液漏斗振荡5 min分层后,保留乙酸乙酯萃取液(上层)和水层(下层)。吸取上层萃取液4 mL于25 mL的容量瓶中,95%乙醇定容(溶液A)。b.吸取乙酸乙酯萃取液25 mL,加入2.5% NaHCO3水溶液25 mL,迅速强烈振荡30 s分层后,弃去水层。吸取上层液4 mL于25 mL容量瓶中,95%乙醇定容(溶液C)。 c.吸取a.中水层待用液2 mL于25 mL容量瓶中,加入2 mL饱和草酸溶液和6 mL H2O,并用95%乙醇定容(溶液D)。d.吸取25 mL茶汤滤液和25 mL正丁醇于分液漏斗振荡3 min,分层后取下层液2 mL加饱和草酸溶液2 mL和6 mL蒸馏水,加95%乙醇定容至25 mL(溶液B)。
比色测定:用分光光度计在380 nm波长下,用1 cm厚比色皿,A、C空白为纯乙酸乙酯4 mL用95%乙醇定容至25 mL,B、D空白为水8 mL、饱和草酸2 mL用95%乙醇定容至25 mL,分别测定溶液A、B、C、D的吸光度。结果计算:
式中:EA—溶液A的吸光度值;EB—溶液B的吸光度;EC—溶液C的吸光度值;ED—溶液D的吸光度。
1.2.4 UPLC-Q-Orbitrap-MS化学成分检测
准确称量样品0.5 g样品于50 mL的锥形瓶中,添加70%甲醇溶液25 mL,封口摇匀,30 ℃水浴浸提30 min(每隔10 min摇匀利于充分浸提)。浸提结束后于0 ℃、12000×g条件离心10 min,取上清液经0.22 μm滤膜过滤,每个样本设置3个平行重复[16]。
UHPLC条件:色谱柱:Hypersil Gold C18柱(2.1 mm×100 mm×1.9 μm),柱温35 ℃,流速0.3 mL/min,进样量2 μL。流动相:A相为体积分数0.1%甲酸-水溶液,B相为体积分数0.1%甲酸-乙腈溶液。洗脱程序:0~1.6 min,100%A;1.6~18 min,95%A、5%B;18~34 min,72%A、18%B;34~38.5 min,5%A、95%B;38.5~42min,100%A。
MS条件:采用电喷雾电离(ESI)离子源,正离子模式,毛细管电压3.5 kV,离子转移管温度300 ℃,喷雾器温度300 ℃,辅助气温度350 ℃,辅助气流速10 Arb,吹扫气流速1 Arb,质量扫描范围m/z 100~1500。
定性定量分析:使用Compound Discoverer软件对原始数据进行分析。根据保留时间、质量电荷比、分子量和加合离子等信息来预测分子公式。然后将该预测公式与mz云数据库的信息进行比较,包括每个化合物的碎片离子和碰撞能量。选择样品中CV值低于30%的化合物作为最终定性结果。整合样品中检测到的色谱峰,每个特征峰的峰面积代表化合物的相对定量值[17]。
1.3 数据处理
正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)和HCA聚类分析使用Simca 14.1软件,单因素方差分析使用IBM SPSS Statistics software 26软件;柱形图制作采用柱形图制作采用Graphpad Prism 8软件完成;热图采用Sangerbox 3.0在线平台完成。
2. 结果与分析
2.1 感官审评
根据茶叶感官审评结果和90个六堡茶样品的汤色呈色规律,明确六堡茶汤色的呈色类型为:“橙红型”“红色型”和“红浓型”,并筛选出具有代表性的18个六堡茶样品。如图1及表1所示,C1~C6茶汤色泽总体可描述为橙红、亮,红色型H1~H6汤色总体可描述为红、较亮,而N1~N6汤色整体可描述为为红浓、稍暗。组间样品色泽差异显著,故将样品分为“橙红型C”“红色型H”“红浓型N”三组代表性六堡茶汤色样品。
表 1 六堡茶样品审评汤色评价结果Table 1. Results of group review of Liupao tea samples编号 1 2 3 4 5 6 橙红型C 橙,亮 橙红,亮 橙红,亮 橙红,亮 橙红,较亮 橙红,较亮 红色型H 红,较亮 红,亮 红,亮 红,较亮 红,尚亮 红,亮 红浓型N 红浓,稍暗 红浓,稍暗 红浓,稍暗 红浓,较暗 红浓,较暗 红浓,暗 2.2 茶汤色度值分析
在CIE L*a*b*体系中,可通过测定茶汤的色度值,实现色泽的量化。L*表示明暗度变化,L*值越大,茶汤的亮度越高。从图2A可以看出,橙红型六堡茶的L*值较高,且随茶汤颜色的加深L*值逐渐降低;a*值随着茶汤颜色的逐渐加深而增大,红浓型六堡茶汤色的a*值最大,橙红型的a*值最小;橙红型六堡茶汤色b*值最大,说明其黄度最高,红浓型的则最低。L*、a*、b*三者的变化趋势皆与茶汤实际色泽相符。
图 2 不同汤色六堡L*a*b*测定及HCA聚类分析结果注:不同小写字母表示差异显著(P<0.05);图3同。Figure 2. Results of L*a*b* measurement and hierarchical clustering analysis with different infusion colors如图2B所示,对 L*、a*、b*汤色表征值进行聚类分析(HCA)。结果表明C1~C6聚为一类,H1~H6聚为一类,N1~N6聚为一类,与感官审评结果一致,验证分组的可行性。
2.3 茶三素总含量测定
在三组六堡茶中,随色泽的加深,茶红素与茶黄素含量逐渐降低,茶褐素含量升高。三组间茶褐素含量差异显著(P<0.05),在红浓型六堡茶中占据了干物质含量10%左右,是影响茶汤色泽加深的主要色素物质。由于茶褐素为高聚物,根据三类色素间差异,推测茶汤颜色变化可能是由于茶黄素与茶红素进一步与其他非主要色泽构成物质发生反应,进一步生成茶褐素,导致其含量上升,茶汤颜色加深。
2.4 六堡茶非挥发性化学成分分析
采用UPLC-Q-Orbitrap-MS对三组汤色样品检测后进行峰匹配校准及质谱分析[16],共鉴定120种非挥发性成分,包括氨基酸类(10种)、儿茶素类(25种)、酚酸类(31种)、黄酮苷类(27种)、生物碱类(10种)、有机酸类(13种)、及其他类化合物(4种)(见表2)。
表 2 不同汤色六堡茶中的化合物信息Table 2. Compounds information in Liupao tea with different infusion colors编号 化合物名称 m/z 保留时间
(min)CAS号 MS峰面积(×107) C H N 氨基酸类物质 1 色氨酸 203.081 6.534 54-12-6 0.75±0.03a 0.69±0.03ab 0.63±0.05b 2 茶氨酸 173.092 1.088 3081-61-6 19.41±1.54a 5.75±0.66b 0.63±0.04c 3 天冬氨酸 132.030 0.859 56-84-8 2.96±0.19a 0.3±0.02b 0.09±0.01c 4 4-酮-L-脯氨酸 128.035 1.538 4347-18-6 67.72±0.88a 22.11±4.26b 5.95±0.15c 5 5-羟基色氨酸 219.077 7.067 56-69-9 0.08±0.01b 0.3±0.06a 0.36±0.01a 6 N-乙酰-L-酪氨酸 222.076 4.443 537-55-3 0.48±0.11c 1.16±0.19b 1.85±0.2a 7 N-甲基-D-天冬氨酸 146.045 0.906 6384-92-5 2.21±0.29a 1.81±0.17ab 1.42±0.07b 8 N-乙酰-DL-谷氨酸 188.056 1.668 5817-08-3 4.98±0.44b 9.99±0.5a 1.7±0.03c 9 N-乙酰基-DL-色氨酸 245.092 14.458 87-32-1 9.05±0.6a 8.48±0.76ab 7.46±0.16b 10 N-乙酰基-L-苯丙氨酸 206.081 11.626 2018-61-3 4.21±0.4a 3.67±0.09a 2.39±0.07b 儿茶素类物质 11 儿茶素 289.070 11.296 154-23-4 471.67±21.9a 393.38±18.93b 306.44±3.68c 12 表儿茶素 289.070 8.424 490-46-0 203.27±24.2a 134.32±6.3b 110.35±11.91b 13 阿夫儿茶精 273.076 13.827 2545-00-8 0.99±0.04c 2.3±0.08b 2.6±0.11a 14 儿茶素没食子酸酯 441.081 17.712 25615-05-8 268.23±21.7a 82.89±1.65b 36.27±0.88c 15 表没食子儿茶素没食子酸酯 457.075 12.036 989-51-5 683.78±14.3a 589.88±7.67b 285.25±20.37c 16 表儿茶素 3,5-双没食子酸酯 593.092 21.305 37484-74-5 11.28±1.34a 9.41±1.20a 2.37±0.06b 17 表儿茶素 3-O-对羟基苯甲酸酯 409.092 21.444 108907-45-5 1.89±0.20a 1.53±0.05b 0.83±0.04c 18 表没食子儿茶素 3-O-咖啡酸酯 467.096 20.511 122412-14-0 11.53±1.69a 7.61±0.54b 7.6±0.28b 19 表没食子儿茶素 3-O-肉桂酸酯 435.107 20.034 108907-46-6 8.66±0.06b 10.02±1.08b 15.41±0.44a 20 表没食子儿茶素-3-O-阿魏酸酯 481.112 21.756 1257872-16-4 0.77±0.09a 0.55±0.09a 0.63±0.1a 21 表没食子儿茶素 3-O-对-香豆酸酯 451.102 22.024 89013-65-0 15.14±0.94a 13.79±0.21b 14.43±0.32ab 22 表没食子儿茶素 3,3'-二-O-没食子酸酯 609.087 18.338 89013-66-1 20.99±1.62a 14.47±6.66a 2.74±0.16b 23 表儿茶素 3-O-(3-O-甲基没食子酸酯) 455.096 20.059 83104-86-3 20.24±1.97a 21.71±0.28a 5.68±0.41b 24 表没食子儿茶素 3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯 471.091 18.302 83104-87-4 9.3±1.44a 3.75±0.17b 0.68±0.11c 25 聚酯型儿茶素c 609.123 6.539 89013-69-4 12.91±1.04a 8.02±0.64b 3.14±0.17c 26 原花青素B1 577.133 9.787 20315-25-7 22.24±1.32a 12.82±1.71b 9.77±0.67c 27 原花青素B2-3"-O-没食子酸 729.143 13.987 73086-04-1 61.68±5.54a 23.86±0.9b 9.31±0.18c 28 原花青素B2-3,3'-二-O-没食子酸酯 881.153 17.226 79907-44-1 17.67±0.5a 8.61±0.4b 2.58±0.08c 29 原花青素B4-3-O-没食子酸酯 729.143 13.159 89064-33-5 62.7±5.64a 24.42±0.77b 9.54±0.24c 30 原花青素B5 577.133 9.802 12798-57-1 73.32±2.62a 49.8±2.69b 41.14±2.06c 31 原花青素C1 865.195 10.868 65085-09-8 4.47±0.16a 3.28±0.34b 1.77±0.06c 32 表儿茶素 3-O-没食子酸酯-(4β→6)-表没食子儿茶素
3-O-没食子酸酯897.148 14.440 126715-91-1 7.85±0.49a 6.61±0.47b 0.75±0.31c 33 表儿茶素-(4β→8)-表没食子儿茶素 3'-没食子酸酯 745.138 10.716 126715-89-7 63.5±4.73a 21.09±1.21b 5.45±0.18c 34 表没食子儿茶素-(4β→8)-表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯 761.132 14.407 86588-88-7 1.65±0.13a 0.38±0.03b 0.11±0.03c 35 没食子儿茶素-(4α→8)-表儿茶素 593.127 7.810 79199-56-7 24.51±3.05a 17.56±2.18b 12.51±1.38b 酚(酸)类 36 莽草酸 173.045 11.496 138-59-0 12.64±0.37a 9.09±0.14b 3.65±0.37c 37 咖啡酸 179.034 9.390 501-16-6 1.64±0.16a 1.16±0.08b 0.33±0.04c 38 龙胆酸 153.019 4.725 490-79-9 1.89±0.18b 3.12±0.17a 2.95±0.12a 39 绿原酸 353.086 6.369 327-97-9 13.32±1.86a 16.05±0.72a 6.31±0.79b 40 水杨酸 275.055 16.294 69-72-7 49.24±4.11a 45.59±2.56a 32.18±0.32b 41 奎宁酸 191.055 0.953 77-95-2 402.29±27.3a 162.97±7.89b 29.22±0.87c 42 对香豆酸 163.039 3.680 501-98-4 0.26±0.03c 0.57±0.06b 2.29±0.06a 43 没食子酸 169.013 3.066 149-91-7 453.44±9.07a 373.45±17.63b 134.15±3.13c 44 覆盆子酮 163.076 16.286 5471-51-2 1.46±0.15a 1.38±0.06a 0.99±0.04b 45 邻苯二酚 109.029 5.249 120-80-9 3.65±0.16a 2.77±0.09b 1.45±0.01c 46 邻苯三酚 125.024 3.068 87-66-1 60.78±1.49a 50.79±2.35b 19.34±0.35c 47 异丁香酚 163.076 16.293 97-54-1 1.42±0.15a 1.34±0.05a 0.94±0.04b 48 秦皮甲素 279.050 7.373 531-75-9 0.59±0.08a 0.59±0.06a 0.24±0.02b 49 木麻黄素 633.070 9.699 517-46-4 76.7±6.86a 34.65±3.4b 9.95±1.22c 50 绿原酸甲酯 367.102 22.550 29708-87-0 0.58±0.05c 2.23±0.07a 0.81±0.13b 51 没食子酸甲酯 183.029 7.372 99-24-1 9.05±0.56a 3.57±0.35b 0.73±0.07c 52 没食子酸吡喃葡萄糖 331.066 2.719 58511-73-2 33.59±4.05a 13.35±0.56b 5.78±0.02c 53 6-O-没食子酰葡萄糖 331.066 2.722 13186-19-1 33.98±3.21a 13.76±0.38b 5.86±0.22c 54 5-O-咖啡酰莽草酸 335.078 0.924 73263-62-4 0.45±0.12a 0.17±0.05b 0.03±0.01b 55 4-对香豆酰奎宁酸 337.091 11.501 1108200-72-1 67.91±2.45a 48.4±0.98b 18.42±0.95c z56 3-没食子酰基奎宁酸 343.065 4.624 17365-11-6 413.67±9.56a 254.3±11.03b 86.35±2.31c 57 3,4-二-O-没食子酰奎宁酸 495.076 8.311 86687-37-8 1.78±0.39a 1.7±0.05a 0.52±0.03b 58 4-羟基苯乙烯 119.050 12.704 2628-17-3 1.14±0.02a 0.87±0.04b 0.3±0.01c 59 3-羟基肉桂酸 163.039 7.798 588-30-7 0.95±0.12a 0.66±0.06b 0.16±0.01c 60 4-羟基苯甲酸 275.055 16.284 99-96-7 50.57±4.13a 46.99±2.71a 34.14±2.27b 61 5,7-二羟基香豆素 177.019 11.549 2732-18-5 1.7±0.21b 1.99±0.23b 4.1±0.22a 62 2,3-二羟基苯甲酸 13.019 5.249 303-38-8 11.22±0.53a 8.04±0.13b 4.58±0.58c 63 3-羟基邻氨基苯甲酸 52.05 7.101 548-93-6 0.22±0.03c 0.59±0.1a 0.34±0b 64 5,7-二羟基-4-甲基香豆素 191.034 5.494 2107-76-8 5.52±0.09b 6.65±0.21a 3.67±0.28c 65 3-(4-羟基苯基)-2-羟基丙酸 181.050 6.201 6482-98-0 0.54±0.01a 0.47±0.03b 0.27±0.02c 66 1,2,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖 635.086 14.818 79886-49-0 54.81±2.88a 25±0.56b 11.82±0.56c 黄酮苷类 67 芦丁 609.143 18.034 153-18-4 173.19±5.68a 134.97±3.02b 94.4±0.82c 68 牡荆素 577.154 17.942 3681-93-4 13.2±1.65a 4.45±0.25b 1.81±0.18c 69 香橙素 347.076 13.764 480-20-6 2.25±0.03b 8.58±0.88a 8.06±0.61a 70 槲皮苷 447.091 20.709 522-12-3 82.23±3.82a 72.6±1.92b 46.99±1.21c 71 槲皮素 301.034 33.314 117-39-5 3.39±0.32a 2.8±0.08b 1.25±0.21c 72 山奈苷 577.154 17.920 482-38-2 12.86±2.06a 4.46±0.23b 1.9±0.1c 73 杨梅苷 463.087 17.462 17912-87-7 1.59±0.14b 2.21±0.08a 0.8±0.07c 74 山茶苷 741.186 18.757 926664-29-1 2.63±0.29a 1.57±0.03b 1.49±0.07b 75 柚皮素 271.060 23.734 67604-48-2 2.02±0.13a 1.6±0.08b 1.27±0.13c 76 山茶苷A 755.201 19.415 55696-58-7 53.08±4.68a 22.07±0.72b 8.1±0.11c 77 山茶苷B 725.190 20.710 131573-90-5 2.23±0.08a 0.97±0.08b 1.04±0.05b 78 异槲皮苷 463.086 18.441 482-35-9 128.96±7.86a 114.87±1.55b 80.17±1.74c 79 新西兰牡荆素 593.148 20.392 23666-13-9 3.57±0.3a 2.4±0.02b 1.62±0.04c 80 二氢槲皮素 303.050 8.006 111003-33-9 13.71±0.73a 13.13±0.49a 9.03±0.26b 81 二氢杨梅素 319.045 8.267 27200-12-0 126.39±1.93a 94.15±3.67b 57.17±2.33c 82 异牡荆黄素 431.097 17.915 38953-85-4 29.5±2.6a 17.51±1.13b 17.54±1.48b 83 异金丝桃苷 463.086 13.045 35589-21-0 1.89±0.43a 0.8±0.03b 0.71±0b 84 异夏佛塔苷 563.138 14.995 52012-29-0 28.35±0.62a 25.35±1.21b 23.37±2.24b 85 槲皮素 3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷 477.066 17.386 22688-79-5 1.03±0.1a 0.56±0.04b 0.61±0.08b 86 山奈酚-3-O-芸香糖苷 593.149 16.745 17650-84-9 28.61±5.04a 14.9±0.34b 8.51±0.9c 87 山奈酚-3-葡萄糖苷-2''-对香豆酰 593.128 23.259 137018-32-7 9.89±0.55a 7.21±0.91b 5.57±0.18c 88 山奈酚 7-O-(6'''-没食子酰)葡萄糖苷 599.101 20.403 85933-23-9 8.06±0.45a 6.34±0.4b 2.77±0.15c 89 山奈酚 3-葡萄糖基(1-3)鼠李糖基(1-6)半乳糖苷 755.200 19.393 134953-94-9 53.06±4.77a 22.69±0.79b 8.46±0.73c 90 杨梅素-3-O-半乳糖苷 479.081 15.571 15648-86-9 68.63±0.56a 60.71±3.03b 25.45±0.59c 91 柚皮素-7-O-芸香糖苷 579.170 20.240 14259-46-2 0.75±0.01a 0.5±0.03b 0.26±0.02c 92 杨梅素 3-(6-鼠李糖基半乳糖苷) 625.139 15.411 145544-43-0 13.53±0.69a 8.95±0.33b 3.47±0.42c 93 6,8-二-C-β-D-阿拉伯吡喃芹菜素 533.128 17.847 107911-03-5 11.05±0.71b 14.5±1.32a 13.55±1.61ab 生物碱 94 茶碱 179.057 6.657 58-55-9 56.39±6.32c 151.51±3.09b 281.11±4.23a 95 咖啡碱 194.190 1.537 58-08-2 5753.43±93.7ab 5931.6±98.2a 5282.75±26.7c 96 黄嘌呤 151.026 1.871 69-89-6 12.11±1.63c 21.65±1.9b 28.85±1.52a 97 鸟嘌呤 150.042 1.408 73-40-5 1.47±0.34b 2.65±0.36a 3.17±0.17a 98 尿嘧啶 111.020 1.361 66-22-8 0.55±0.21b 0.74±0.07b 2.01±0.25a 99 腺嘌呤 134.047 1.440 73-24-5 2.28±0.14b 2.88±0.25a 1.96±0.08b 100 次黄嘌呤 135.031 1.620 68-94-0 1.69±0.26b 3.48±0.14a 3.89±0.13a 101 1-甲基黄嘌呤 165.041 4.827 6136-37-4 0.21±0.02c 0.72±0.08b 1.35±0.12a 102 3-甲基黄嘌呤 15.041 4.675 1076-22-8 2.85±0.42c 24.7±0.87b 58.36±2.5a 103 1,3,7-三甲基尿酸 209.067 7.280 5415-44-1 4.91±0.24a 4.53±0.14a 3.37±0.43b 有机酸类 104 糠酸 111.008 1.488 88-14-2 15.57±1.95a 7.54±0.41b 2.67±0.11c 105 泛酸 218.102 5.036 79-83-4 1.11±0.2a 0.76±0.02b 0.66±0.02b 106 甘油酸 105.082 0.967 473-81-4 1.27±0.05c 1.97±0.28b 3.00±0.04a 107 核糖酸 165.040 0.888 642-98-8 18.96±2.32a 11.03±0.29b 2.72±0.11c 108 苏糖酸 135.029 0.910 7306-96-9 19.77±1.39a 7.27±0.15b 2.73±0.15c 109 富马酸 115.003 1.129 110-17-8 2.77±0.3a 1.03±0.11b 0.2±0.06c 110 琥珀酸 117.019 1.718 110-15-6 2.6±0.29a 1.28±0.02b 0.62±0.01c 111 柠檬酸 191.019 1.487 77-92-9 2.99±0.4a 2.33±0.25b 1.61±0.05c 112 柠康酸 129.019 1.541 498-23-7 42.65±5.21a 17.9±1.32b 4.44±0.18c 113 苹果酸 133.014 0.974 6915-15-7 29.28±1.51a 13.07±1.72b 3.12±0.14c 114 脱落酸 263.128 22.018 14398-53-9 0.67±0.08a 0.5±0.08b 0.26±0.03c 115 葡萄糖酸 195.050 0.872 526-95-4 8.14±0.99a 4.14±0.22b 1.34±0.03c 116 顺乌头酸 173.008 1.511 585-84-2 3.51±0.35a 2.07±0.08b 1.05±0.04c 其他 117 苯乙酮 119.050 12.693 98-86-2 1.15±0.02a 0.89±0.03b 0.29±0.02c 118 甘露醇 181.071 0.873 69-65-8 2.97±0.36a 3.02±0.39a 1.98±0.08b 119 甲乙双酮 156.066 4.760 115-67-3 0.5±0.01a 0.42±0.03b 0.25±0.04c 120 金鸡纳素Ia 451.102 19.723 85081-24-9 10.01±0.87a 4.3±0.27b 4.36±0.05b 注:同一行不同小写字母表示差异显著(P<0.05) 咖啡碱、表没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素、没食子酸、3-没食子酰基奎宁酸、芦丁、表儿茶素、儿茶素没食子酸酯等非挥发性成分的峰面积在六堡茶茶汤中均较高,但在橙红型(C)、红色型(H)、红浓型(N)六堡茶茶汤样品中存在差异(表2)。这说明,除物质种类外,各非挥发性成分的含量差异也有可能造成六堡茶茶汤呈色类型差异。
2.5 不同呈色类型六堡茶茶汤的关键非挥发性成分
为进一步探究橙红型(C)、红色型(H)、红浓型(N)六堡茶茶汤的差异非挥发性成分,本研究采用正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)的方法进行统计分析,得分图(图4A)显示,3组样品的R2X=0.981,R2Y=0.986,Q2为0.98。其中R2Y=0.986表明该模型能反映98.6%的数据变化,Q2与R2Y均接近1,表明本模型符合样品数据的预测,各汤色类型六堡茶间有明显的分离趋势,成分存在差异。OPLS-DA置换验证模型(图4B)中经200次交叉验证后,R2和Q2的截距分别为0.237和-0.786,模型Q2回归线与横坐标交叉,且与纵坐标交叉截距小于0,表明模型没有过拟合,所建立的OPLS-DA模型较稳定可靠,能较好地反映样品间物质的差异。
变量投影重要性(variable importance of projection,VIP)表示OPLS-DA模型中每个化合物对差异的贡献程度,可以衡量各组分积累差异对各组样本分类判别的影响强度和解释能力。VIP值越大,表示变量在不同样本之间差异越显著。以VIP值>1为重要变量作为筛选条件,如图4C所示,模型中VIP 值大于1的化合物共有28种,主要为儿茶素类(儿茶素、表儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯等)、黄酮类(芦丁、槲皮苷、异槲皮苷、二氢杨梅素、杨梅素-3-O-半乳糖苷等)、氨基酸类(N-乙酰-DL-谷氨酸、4-酮-L-脯氨酸)以及酚酸类(奎宁酸、没食子酸、3-没食子酰基奎宁酸等)4类化合物。其中儿茶素类物质多为白色或非显色类物质,黄酮类为浅黄至亮黄色类物质[10]。
2.6 六堡茶茶汤关键非挥发性成分对茶汤品质的影响
为阐释儿茶素类、黄酮类、氨基酸类以及酚酸类等主要差异化合物对六堡茶汤色的影响,根据VIP值>1且存在组间差异(P<0.05)化合物的含量与汤色类型进行分析。
儿茶素类化合物:儿茶素约占所有茶多酚含量的60%~80%,是茶叶中最主要的多酚化合物。儿茶素类化合物在一定的条件下会发生氧化、聚合、缩合等反应,逐步形成原花青素和聚酯型儿茶素等多种二聚儿茶素类产物[18−20]。六堡茶属发酵类茶,其色泽主要呈色物质为茶红素、茶褐素等儿茶素类氧化产物。随着发酵进行,大量低聚合和非显色类儿茶素类氧化产物会继续氧化聚合形成茶红素和茶褐素,使茶汤颜色逐渐加深[21−22]。结果显示,随着茶汤色泽加深,儿茶素、表儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、原花青素B5、原花青素B4-3-O-没食子酸酯、原花青素B2-3"-O-没食子酸、表儿茶素-(4β→8)-表没食子儿茶素3'-没食子酸酯等非显色类物质含量均呈现不同程度的降低。其中红浓型六堡茶中的儿茶素、表儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯含量分别是红色型六堡茶的77.9%、43.8%、82.2%、48.4%,是橙红型六堡茶的65%、13.5%、54.3%、41.7%。作者认为在加工过程中,简单儿茶素类逐步氧化聚合形成原花青素、聚酯型儿茶素等高聚类物质,并进一步形成了茶红素和茶褐素,使六堡茶汤色逐渐呈现红浓的品质特征。
黄酮苷类化合物:黄酮、黄酮醇作为一类天然色素,通常以糖苷形式存在。茶叶中含有的黄酮苷,主要为槲皮素苷、杨梅素苷及山奈酚苷,水溶液为绿黄色,被认为是绿茶汤色的重要组分[23]。黑茶中的总黄酮含量范围为0.4%~0.98%[24]。研究结果显示,芦丁、二氢杨梅素、槲皮苷、异槲皮苷、杨梅素-3-O-半乳糖苷等,随着茶汤颜色加深含量都有不同程度的减少,在红浓型中含量显著低于橙红型。槲皮苷、异槲皮苷、二氢杨梅素等黄酮苷类物质在色泽上多为黄绿色,与红浓色泽无直接联系,但可参与儿茶素类物质向深色物质的转变,使其含量低降,使茶汤黄度减弱红色加深。在六堡茶渥堆过程中,大多数黄酮醇苷含量不断下降,黄色减弱而红色加深[25];黄酮醇类与花青素类化合物发生聚合反应形成辅色素[26];Dai等[27]研究也发现在热处理作用下,山奈酚、槲皮素和杨梅素加速了EGCG的氧化使溶液褐变。使茶汤色泽逐渐转变为红浓。
氨基酸类化合物:在茶叶加工过程中,氨基酸在热作用下与糖类经过复杂反应生成棕褐色物质,对茶汤颜色产生影响[28]。结果显示,4-酮-L-脯氨酸在橙红型汤色茶样中含量最高,随着茶汤颜色加深逐渐降低,而N-乙酰基-DL-谷氨酸在红色型中含量最高,为橙红型的2倍,红浓型的却仅为橙红型的34.2%。
酚酸类化合物:根据表2结果,没食子酸、奎宁酸、邻苯三酚、3-没食子酰基奎宁酸、4-对香豆酰奎宁酸等酚酸类化合物的含量随着汤色加深呈不同程度减少。根据前人研究,酚酸类物质可以与儿茶素发生酶促氧化反应,生成有色的儿茶素-绿原酸加合物。Zhang等[29]从红茶中鉴定出表没食子儿茶素没食子酸酯绿原酸加合物(EGCG-CGA)和表没食子儿茶素-绿原酸加合物(EGC-CGA),前者分离鉴定为红色色素,对六堡茶汤色可能存在一定贡献。此外,外源添加没食子酸、焦性没食子酸、邻苯二酚等,也可促进茶褐素的形成[30]。
3. 结论
本研究聚焦于六堡茶汤色,将六堡茶汤色划分为橙红型、红色型、红浓型三类,检测分析表明影响三类汤色的主要色素物质为茶褐素,且三种汤色间氨基酸类、儿茶素类、酚酸类、黄酮苷类化合物含量存在显著差异,随汤色加深含量降低,与茶汤颜色的加深有直接或间接的联系。根据UPLC-Q-Orbitrap-MS检测分析,三种不同汤色类型六堡茶中共鉴定出120种非挥发性代谢物水平。经测定,儿茶素水平在颜色加深过程中随着茶褐素的明显增加而显著降低,而其他大多数非挥发性代谢物也表现出一定程度的降低。表明这些物质主要在色泽加深过程中存在一定的转变,对茶褐素以及色泽物质的形成有贡献作用。根据VIP值筛选的28种贡献物质,主要为氨基酸类(N-乙酰-DL-谷氨酸、4-酮-L-脯氨酸)、儿茶素类(儿茶素、表儿茶素、儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯等)、黄酮类(芦丁、槲皮苷、异槲皮苷、二氢杨梅素、杨梅素-3-O-半乳糖苷等)以及酚酸类(奎宁酸、没食子酸、3-没食子酰基奎宁酸等)4类化合物,这些物质在加工过程中对茶汤颜色形成贡献最大。在六堡茶渥堆陈化过程中,在湿热及微生物氧化作用下,以上多种物质发生氧化聚合,含量降低,使茶红素以及茶褐素的大量形成。但这些化合物对颜色形成的实际影响仍然需要通过模型反应来验证。茶叶内化学成分的差异造成了茶汤颜色不同,其呈色途径、综合呈色效果、互作机理等尚不明确,待进一步研究探讨。
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图 2 不同汤色六堡L*a*b*测定及HCA聚类分析结果
注:不同小写字母表示差异显著(P<0.05);图3同。
Figure 2. Results of L*a*b* measurement and hierarchical clustering analysis with different infusion colors
表 1 六堡茶样品审评汤色评价结果
Table 1 Results of group review of Liupao tea samples
编号 1 2 3 4 5 6 橙红型C 橙,亮 橙红,亮 橙红,亮 橙红,亮 橙红,较亮 橙红,较亮 红色型H 红,较亮 红,亮 红,亮 红,较亮 红,尚亮 红,亮 红浓型N 红浓,稍暗 红浓,稍暗 红浓,稍暗 红浓,较暗 红浓,较暗 红浓,暗 表 2 不同汤色六堡茶中的化合物信息
Table 2 Compounds information in Liupao tea with different infusion colors
编号 化合物名称 m/z 保留时间
(min)CAS号 MS峰面积(×107) C H N 氨基酸类物质 1 色氨酸 203.081 6.534 54-12-6 0.75±0.03a 0.69±0.03ab 0.63±0.05b 2 茶氨酸 173.092 1.088 3081-61-6 19.41±1.54a 5.75±0.66b 0.63±0.04c 3 天冬氨酸 132.030 0.859 56-84-8 2.96±0.19a 0.3±0.02b 0.09±0.01c 4 4-酮-L-脯氨酸 128.035 1.538 4347-18-6 67.72±0.88a 22.11±4.26b 5.95±0.15c 5 5-羟基色氨酸 219.077 7.067 56-69-9 0.08±0.01b 0.3±0.06a 0.36±0.01a 6 N-乙酰-L-酪氨酸 222.076 4.443 537-55-3 0.48±0.11c 1.16±0.19b 1.85±0.2a 7 N-甲基-D-天冬氨酸 146.045 0.906 6384-92-5 2.21±0.29a 1.81±0.17ab 1.42±0.07b 8 N-乙酰-DL-谷氨酸 188.056 1.668 5817-08-3 4.98±0.44b 9.99±0.5a 1.7±0.03c 9 N-乙酰基-DL-色氨酸 245.092 14.458 87-32-1 9.05±0.6a 8.48±0.76ab 7.46±0.16b 10 N-乙酰基-L-苯丙氨酸 206.081 11.626 2018-61-3 4.21±0.4a 3.67±0.09a 2.39±0.07b 儿茶素类物质 11 儿茶素 289.070 11.296 154-23-4 471.67±21.9a 393.38±18.93b 306.44±3.68c 12 表儿茶素 289.070 8.424 490-46-0 203.27±24.2a 134.32±6.3b 110.35±11.91b 13 阿夫儿茶精 273.076 13.827 2545-00-8 0.99±0.04c 2.3±0.08b 2.6±0.11a 14 儿茶素没食子酸酯 441.081 17.712 25615-05-8 268.23±21.7a 82.89±1.65b 36.27±0.88c 15 表没食子儿茶素没食子酸酯 457.075 12.036 989-51-5 683.78±14.3a 589.88±7.67b 285.25±20.37c 16 表儿茶素 3,5-双没食子酸酯 593.092 21.305 37484-74-5 11.28±1.34a 9.41±1.20a 2.37±0.06b 17 表儿茶素 3-O-对羟基苯甲酸酯 409.092 21.444 108907-45-5 1.89±0.20a 1.53±0.05b 0.83±0.04c 18 表没食子儿茶素 3-O-咖啡酸酯 467.096 20.511 122412-14-0 11.53±1.69a 7.61±0.54b 7.6±0.28b 19 表没食子儿茶素 3-O-肉桂酸酯 435.107 20.034 108907-46-6 8.66±0.06b 10.02±1.08b 15.41±0.44a 20 表没食子儿茶素-3-O-阿魏酸酯 481.112 21.756 1257872-16-4 0.77±0.09a 0.55±0.09a 0.63±0.1a 21 表没食子儿茶素 3-O-对-香豆酸酯 451.102 22.024 89013-65-0 15.14±0.94a 13.79±0.21b 14.43±0.32ab 22 表没食子儿茶素 3,3'-二-O-没食子酸酯 609.087 18.338 89013-66-1 20.99±1.62a 14.47±6.66a 2.74±0.16b 23 表儿茶素 3-O-(3-O-甲基没食子酸酯) 455.096 20.059 83104-86-3 20.24±1.97a 21.71±0.28a 5.68±0.41b 24 表没食子儿茶素 3-O-(3-O-甲基)没食子酸酯 471.091 18.302 83104-87-4 9.3±1.44a 3.75±0.17b 0.68±0.11c 25 聚酯型儿茶素c 609.123 6.539 89013-69-4 12.91±1.04a 8.02±0.64b 3.14±0.17c 26 原花青素B1 577.133 9.787 20315-25-7 22.24±1.32a 12.82±1.71b 9.77±0.67c 27 原花青素B2-3"-O-没食子酸 729.143 13.987 73086-04-1 61.68±5.54a 23.86±0.9b 9.31±0.18c 28 原花青素B2-3,3'-二-O-没食子酸酯 881.153 17.226 79907-44-1 17.67±0.5a 8.61±0.4b 2.58±0.08c 29 原花青素B4-3-O-没食子酸酯 729.143 13.159 89064-33-5 62.7±5.64a 24.42±0.77b 9.54±0.24c 30 原花青素B5 577.133 9.802 12798-57-1 73.32±2.62a 49.8±2.69b 41.14±2.06c 31 原花青素C1 865.195 10.868 65085-09-8 4.47±0.16a 3.28±0.34b 1.77±0.06c 32 表儿茶素 3-O-没食子酸酯-(4β→6)-表没食子儿茶素
3-O-没食子酸酯897.148 14.440 126715-91-1 7.85±0.49a 6.61±0.47b 0.75±0.31c 33 表儿茶素-(4β→8)-表没食子儿茶素 3'-没食子酸酯 745.138 10.716 126715-89-7 63.5±4.73a 21.09±1.21b 5.45±0.18c 34 表没食子儿茶素-(4β→8)-表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯 761.132 14.407 86588-88-7 1.65±0.13a 0.38±0.03b 0.11±0.03c 35 没食子儿茶素-(4α→8)-表儿茶素 593.127 7.810 79199-56-7 24.51±3.05a 17.56±2.18b 12.51±1.38b 酚(酸)类 36 莽草酸 173.045 11.496 138-59-0 12.64±0.37a 9.09±0.14b 3.65±0.37c 37 咖啡酸 179.034 9.390 501-16-6 1.64±0.16a 1.16±0.08b 0.33±0.04c 38 龙胆酸 153.019 4.725 490-79-9 1.89±0.18b 3.12±0.17a 2.95±0.12a 39 绿原酸 353.086 6.369 327-97-9 13.32±1.86a 16.05±0.72a 6.31±0.79b 40 水杨酸 275.055 16.294 69-72-7 49.24±4.11a 45.59±2.56a 32.18±0.32b 41 奎宁酸 191.055 0.953 77-95-2 402.29±27.3a 162.97±7.89b 29.22±0.87c 42 对香豆酸 163.039 3.680 501-98-4 0.26±0.03c 0.57±0.06b 2.29±0.06a 43 没食子酸 169.013 3.066 149-91-7 453.44±9.07a 373.45±17.63b 134.15±3.13c 44 覆盆子酮 163.076 16.286 5471-51-2 1.46±0.15a 1.38±0.06a 0.99±0.04b 45 邻苯二酚 109.029 5.249 120-80-9 3.65±0.16a 2.77±0.09b 1.45±0.01c 46 邻苯三酚 125.024 3.068 87-66-1 60.78±1.49a 50.79±2.35b 19.34±0.35c 47 异丁香酚 163.076 16.293 97-54-1 1.42±0.15a 1.34±0.05a 0.94±0.04b 48 秦皮甲素 279.050 7.373 531-75-9 0.59±0.08a 0.59±0.06a 0.24±0.02b 49 木麻黄素 633.070 9.699 517-46-4 76.7±6.86a 34.65±3.4b 9.95±1.22c 50 绿原酸甲酯 367.102 22.550 29708-87-0 0.58±0.05c 2.23±0.07a 0.81±0.13b 51 没食子酸甲酯 183.029 7.372 99-24-1 9.05±0.56a 3.57±0.35b 0.73±0.07c 52 没食子酸吡喃葡萄糖 331.066 2.719 58511-73-2 33.59±4.05a 13.35±0.56b 5.78±0.02c 53 6-O-没食子酰葡萄糖 331.066 2.722 13186-19-1 33.98±3.21a 13.76±0.38b 5.86±0.22c 54 5-O-咖啡酰莽草酸 335.078 0.924 73263-62-4 0.45±0.12a 0.17±0.05b 0.03±0.01b 55 4-对香豆酰奎宁酸 337.091 11.501 1108200-72-1 67.91±2.45a 48.4±0.98b 18.42±0.95c z56 3-没食子酰基奎宁酸 343.065 4.624 17365-11-6 413.67±9.56a 254.3±11.03b 86.35±2.31c 57 3,4-二-O-没食子酰奎宁酸 495.076 8.311 86687-37-8 1.78±0.39a 1.7±0.05a 0.52±0.03b 58 4-羟基苯乙烯 119.050 12.704 2628-17-3 1.14±0.02a 0.87±0.04b 0.3±0.01c 59 3-羟基肉桂酸 163.039 7.798 588-30-7 0.95±0.12a 0.66±0.06b 0.16±0.01c 60 4-羟基苯甲酸 275.055 16.284 99-96-7 50.57±4.13a 46.99±2.71a 34.14±2.27b 61 5,7-二羟基香豆素 177.019 11.549 2732-18-5 1.7±0.21b 1.99±0.23b 4.1±0.22a 62 2,3-二羟基苯甲酸 13.019 5.249 303-38-8 11.22±0.53a 8.04±0.13b 4.58±0.58c 63 3-羟基邻氨基苯甲酸 52.05 7.101 548-93-6 0.22±0.03c 0.59±0.1a 0.34±0b 64 5,7-二羟基-4-甲基香豆素 191.034 5.494 2107-76-8 5.52±0.09b 6.65±0.21a 3.67±0.28c 65 3-(4-羟基苯基)-2-羟基丙酸 181.050 6.201 6482-98-0 0.54±0.01a 0.47±0.03b 0.27±0.02c 66 1,2,6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖 635.086 14.818 79886-49-0 54.81±2.88a 25±0.56b 11.82±0.56c 黄酮苷类 67 芦丁 609.143 18.034 153-18-4 173.19±5.68a 134.97±3.02b 94.4±0.82c 68 牡荆素 577.154 17.942 3681-93-4 13.2±1.65a 4.45±0.25b 1.81±0.18c 69 香橙素 347.076 13.764 480-20-6 2.25±0.03b 8.58±0.88a 8.06±0.61a 70 槲皮苷 447.091 20.709 522-12-3 82.23±3.82a 72.6±1.92b 46.99±1.21c 71 槲皮素 301.034 33.314 117-39-5 3.39±0.32a 2.8±0.08b 1.25±0.21c 72 山奈苷 577.154 17.920 482-38-2 12.86±2.06a 4.46±0.23b 1.9±0.1c 73 杨梅苷 463.087 17.462 17912-87-7 1.59±0.14b 2.21±0.08a 0.8±0.07c 74 山茶苷 741.186 18.757 926664-29-1 2.63±0.29a 1.57±0.03b 1.49±0.07b 75 柚皮素 271.060 23.734 67604-48-2 2.02±0.13a 1.6±0.08b 1.27±0.13c 76 山茶苷A 755.201 19.415 55696-58-7 53.08±4.68a 22.07±0.72b 8.1±0.11c 77 山茶苷B 725.190 20.710 131573-90-5 2.23±0.08a 0.97±0.08b 1.04±0.05b 78 异槲皮苷 463.086 18.441 482-35-9 128.96±7.86a 114.87±1.55b 80.17±1.74c 79 新西兰牡荆素 593.148 20.392 23666-13-9 3.57±0.3a 2.4±0.02b 1.62±0.04c 80 二氢槲皮素 303.050 8.006 111003-33-9 13.71±0.73a 13.13±0.49a 9.03±0.26b 81 二氢杨梅素 319.045 8.267 27200-12-0 126.39±1.93a 94.15±3.67b 57.17±2.33c 82 异牡荆黄素 431.097 17.915 38953-85-4 29.5±2.6a 17.51±1.13b 17.54±1.48b 83 异金丝桃苷 463.086 13.045 35589-21-0 1.89±0.43a 0.8±0.03b 0.71±0b 84 异夏佛塔苷 563.138 14.995 52012-29-0 28.35±0.62a 25.35±1.21b 23.37±2.24b 85 槲皮素 3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷 477.066 17.386 22688-79-5 1.03±0.1a 0.56±0.04b 0.61±0.08b 86 山奈酚-3-O-芸香糖苷 593.149 16.745 17650-84-9 28.61±5.04a 14.9±0.34b 8.51±0.9c 87 山奈酚-3-葡萄糖苷-2''-对香豆酰 593.128 23.259 137018-32-7 9.89±0.55a 7.21±0.91b 5.57±0.18c 88 山奈酚 7-O-(6'''-没食子酰)葡萄糖苷 599.101 20.403 85933-23-9 8.06±0.45a 6.34±0.4b 2.77±0.15c 89 山奈酚 3-葡萄糖基(1-3)鼠李糖基(1-6)半乳糖苷 755.200 19.393 134953-94-9 53.06±4.77a 22.69±0.79b 8.46±0.73c 90 杨梅素-3-O-半乳糖苷 479.081 15.571 15648-86-9 68.63±0.56a 60.71±3.03b 25.45±0.59c 91 柚皮素-7-O-芸香糖苷 579.170 20.240 14259-46-2 0.75±0.01a 0.5±0.03b 0.26±0.02c 92 杨梅素 3-(6-鼠李糖基半乳糖苷) 625.139 15.411 145544-43-0 13.53±0.69a 8.95±0.33b 3.47±0.42c 93 6,8-二-C-β-D-阿拉伯吡喃芹菜素 533.128 17.847 107911-03-5 11.05±0.71b 14.5±1.32a 13.55±1.61ab 生物碱 94 茶碱 179.057 6.657 58-55-9 56.39±6.32c 151.51±3.09b 281.11±4.23a 95 咖啡碱 194.190 1.537 58-08-2 5753.43±93.7ab 5931.6±98.2a 5282.75±26.7c 96 黄嘌呤 151.026 1.871 69-89-6 12.11±1.63c 21.65±1.9b 28.85±1.52a 97 鸟嘌呤 150.042 1.408 73-40-5 1.47±0.34b 2.65±0.36a 3.17±0.17a 98 尿嘧啶 111.020 1.361 66-22-8 0.55±0.21b 0.74±0.07b 2.01±0.25a 99 腺嘌呤 134.047 1.440 73-24-5 2.28±0.14b 2.88±0.25a 1.96±0.08b 100 次黄嘌呤 135.031 1.620 68-94-0 1.69±0.26b 3.48±0.14a 3.89±0.13a 101 1-甲基黄嘌呤 165.041 4.827 6136-37-4 0.21±0.02c 0.72±0.08b 1.35±0.12a 102 3-甲基黄嘌呤 15.041 4.675 1076-22-8 2.85±0.42c 24.7±0.87b 58.36±2.5a 103 1,3,7-三甲基尿酸 209.067 7.280 5415-44-1 4.91±0.24a 4.53±0.14a 3.37±0.43b 有机酸类 104 糠酸 111.008 1.488 88-14-2 15.57±1.95a 7.54±0.41b 2.67±0.11c 105 泛酸 218.102 5.036 79-83-4 1.11±0.2a 0.76±0.02b 0.66±0.02b 106 甘油酸 105.082 0.967 473-81-4 1.27±0.05c 1.97±0.28b 3.00±0.04a 107 核糖酸 165.040 0.888 642-98-8 18.96±2.32a 11.03±0.29b 2.72±0.11c 108 苏糖酸 135.029 0.910 7306-96-9 19.77±1.39a 7.27±0.15b 2.73±0.15c 109 富马酸 115.003 1.129 110-17-8 2.77±0.3a 1.03±0.11b 0.2±0.06c 110 琥珀酸 117.019 1.718 110-15-6 2.6±0.29a 1.28±0.02b 0.62±0.01c 111 柠檬酸 191.019 1.487 77-92-9 2.99±0.4a 2.33±0.25b 1.61±0.05c 112 柠康酸 129.019 1.541 498-23-7 42.65±5.21a 17.9±1.32b 4.44±0.18c 113 苹果酸 133.014 0.974 6915-15-7 29.28±1.51a 13.07±1.72b 3.12±0.14c 114 脱落酸 263.128 22.018 14398-53-9 0.67±0.08a 0.5±0.08b 0.26±0.03c 115 葡萄糖酸 195.050 0.872 526-95-4 8.14±0.99a 4.14±0.22b 1.34±0.03c 116 顺乌头酸 173.008 1.511 585-84-2 3.51±0.35a 2.07±0.08b 1.05±0.04c 其他 117 苯乙酮 119.050 12.693 98-86-2 1.15±0.02a 0.89±0.03b 0.29±0.02c 118 甘露醇 181.071 0.873 69-65-8 2.97±0.36a 3.02±0.39a 1.98±0.08b 119 甲乙双酮 156.066 4.760 115-67-3 0.5±0.01a 0.42±0.03b 0.25±0.04c 120 金鸡纳素Ia 451.102 19.723 85081-24-9 10.01±0.87a 4.3±0.27b 4.36±0.05b 注:同一行不同小写字母表示差异显著(P<0.05) -
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期刊类型引用(5)
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