Effects of Different Treatments on the Structure and in Vitro Hypolipidemic Function of Soluble Dietary Fiber from Rosa roxburghii Tratt Pomace
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摘要: 本文以刺梨果渣为原料，分别经普通粉碎（general grinding，GG）、超微粉碎（superfine grinding，SG）、高压均质（high-pressure homogenization，HPH）和超微粉碎协同高压均质（superfine grinding synergistic high-pressure homogenization，SG-HPH）处理后，采用酶法提取得到四种刺梨果渣可溶性膳食纤维（Rosa roxburghii Tratt pomace soluble dietary fiber，RRTSDF），分别命名为RRTSDF、S-RRTSDF、H-RRTSDF和SH-RRTSDF，比较不同处理方法得到的四种膳食纤维的得率以及结构和体外降血脂功能。结果表明，与普通粉碎处理对比，其他三种处理方法均能提高RRTSDF得率，其中超微粉碎协同高压均质处理的RRTSDF得率最高（20.48%±0.48%）。四种膳食纤维的平均粒径分别为36.71 μm（SH-RRTSDF）<112.46 μm（S-RRTSDF）<128.91 μm（H-RRTSDF）<153.32 μm（RRTSDF）。微观结构表明超微粉碎协同高压均质处理使RRTSDF表面形成多孔隙和皱褶结构。傅里叶变换红外光谱和X射线衍射图谱结果表明，四种处理方法均未改变RRTSDF的官能团和晶型，但是SG、HPH和SH处理均降低了RRTSDF热稳定性，其中SH-RRTSDF热稳定性最差。体外降脂实验结果表明，超微粉碎协同高压均质处理得到的SH-RRTSDF的持油力、模拟胃环境和肠环境的胆固醇吸附能力、牛磺和甘氨胆酸钠的吸附率分别为4.59 g/g、4.03±0.21 mg/g（pH2.0）、10.87±0.20 mg/g（pH7.0）和（23.69%±0.06）%（牛磺胆酸钠）和（33.37%±0.04）%（甘氨胆酸钠），显著高于其他三种膳食纤维。综上，超微粉碎协同高压均质处理能有效改善RRTSDF的结构和理化性质，不仅为刺梨果渣膳食纤维提供一种可靠的改性方法，还为刺梨深加工提供理论参考。Abstract: Rosa roxburghii (Rosa roxburghii Tratt) pomace was used as raw material after general grinding (GG), superfine grinding (SG), high-pressure homogenization (HPH), and superfine grinding synergistic high-pressure homogenization (SG-HPH) treatments. Four R. roxburghii pomace soluble dietary fibers (RRTSDFs) were then obtained by enzymatic extraction and named RRTSDF, S-RRTSDF, H-RRTSDF, and SH-RRTSDF. The yield, structure, and in vitro hypolipidemic function of the four dietary fibers were investigated. Compared with general grinding, the other three treatments increased the RRTSDF yield, with the highest yield at 20.48%±0.48% obtained using SG-HPH. The average particle sizes of the four dietary fibers were 36.71 μm, <112.46 μm, <128.91 μm, and <153.32 μm for SH-RRTSDF, S-RRTSDF, H-RRTSDF, and RRTSDF, respectively. The microstructural results revealed that SG combined with HPH treatment resulted in porous and wrinkled RRTSDF surfaces. Fourier transform infrared spectroscopy and X-ray diffraction analyses showed that none of the four treatments changed the functional groups and crystalline shape of the RRTSDF. However, the SG, HPH, and SH treatments reduced the thermal stability of the RRTSDF, with the SH-RRTSDF being the least thermally stable. The oil-holding capacity, cholesterol adsorption capacity in simulated gastric and intestinal environments, and adsorption rates of taurocholate and sodium glycylcholate of SH-RRTSDF obtained by ultra-micro-milling in combination with high-pressure homogenization were 4.59 g/g, 4.03±0.21 mg/g (pH2.0), 10.87±0.20 mg/g (pH7.0), and 23.69%±0.06% (sodium taurocholate) and 33.37%±0.04% (sodium glycylcholate), respectively. These values were significantly higher than those of the other three pulverization methods. In conclusion, SG-HPH effectively improved the structure and physicochemical properties of RRTSDF, which not only provides a reliable modification method for RRTSDF but also, a theoretical reference for the deep processing R. roxburghii.
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刺梨（Rosa roxburghii Tratt）是蔷薇科多年生落叶灌木缫丝花的果实，是我国西南和中南地区高山丘陵地带海拔1000~1600米的一种天然野果[1]，尤其以贵州的刺梨资源最为丰富。刺梨是一种可食用的野果，味道微酸涩，香气浓郁，口感脆[2]。尽管刺梨富含膳食纤维、维生素C、类黄酮、超氧化物歧化酶、有机酸、抗坏血酸和矿物质等功能性营养素，具有抗氧化、抗衰老、降血糖降血脂、抗动脉粥样硬化、促进肠胃消化和抗癌防癌等作用[3−5]，但是由于其酸涩的味道而未能得到大众的喜爱，因此刺梨果实主要被加工成果汁、果酒、酸奶和饮料[6]。加工后的副产物刺梨果渣占果实鲜重的50%左右[7]，刺梨果渣富含膳食纤维、维生素C、多酚、类黄酮、三萜类化合物等功能和营养成分，具有很大的开发为功能性食品的潜力[8]。周禹佳等[9]测定了刺梨果渣中的膳食纤维含量达到了60.40 g/100 g，但是90%以上都是不溶性膳食纤维，可溶性膳食纤维含量不到10%。而可溶性膳食纤维具有较高的水合能力和油脂吸附能力[10]，可以降低血胆固醇水平，降低葡萄糖吸收[11]。YANG等[12]研究表明可溶性膳食纤维与不可溶性膳食纤维的比例为1:3~1:2时，膳食纤维的质量最好。因此通过改性提高刺梨果渣可溶性膳食纤维的含量来改善其功能和品质成为研究热点。
高压均质和超微粉碎都是改性效果较好的物理方法，相对于化学改性方法，物理改性方法有改善食品的物理结构、化学性质和功能特性且保留营养成分的优点[13]。高压均质是通过高压剪切使物料的物理和结构特性发生改变，提高可溶性膳食纤维的含量和改善膳食纤维的理化性质[14−16]。通过机械或流体力学将物料颗粒粉碎至微米级的超微粉碎技术是一种制备具有优异性能粉体的食品加工技术[17]。李玥等[18]研究表明超微粉碎不仅能提升可溶性膳食纤维的含量，还能大大减小可溶性膳食纤维的粒径，同时还能改善其理化性质。两种改性方法均能一定程度改善膳食纤维的理化性质、结构和功能特性，但是鲜有超微粉碎和高压均质两种方法协同改性对膳食纤维结构和功能性质影响的报道，而且目前针对刺梨果渣膳食纤维的改性研究主要集中在单一的物理、化学或生物改性方法的研究。
本研究以去籽的刺梨果渣为原料，经气引式粉碎机粉碎，再分别进行超微粉碎、高压均质和超微粉碎协同高压均质三种改性处理，经酶法提取刺梨果渣可溶性膳食纤维。采用粒度分布、扫描电镜、红外光谱、X射线衍射和热重分析对四种刺梨果渣可溶性膳食纤维进行结构表征并进行对比；比较四种刺梨果渣可溶性膳食纤维的持油力、胆固醇吸附和胆酸钠盐结合能力，为刺梨资源高值化利用和刺梨果渣膳食纤维的开发利用提供参考依据。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
刺梨果渣（刺梨加工成刺梨果汁的副产物） 贵州宏财聚农实业有限责任公司；高温α-淀粉酶（40000 U/g）、碱性蛋白酶（200 U/mg）、糖化酶（100000 U/g） 上海源叶生物科技有限公司；氢氧化钠、盐酸、无水乙醇 分析纯，国药集团化学试剂有限公司；冰乙酸 分析纯，天津市化学试剂研究所有限公司；胆固醇（分析纯）、牛磺胆酸钠（分析纯）、甘氨胆酸钠（分析纯）、胃蛋白酶（3000 U/g）、胰蛋白酶（250 U/mg） 麦克林化学试剂有限公司。
D-6L高压均质机 美国PHD科技有限公司；CJM-SC-A高能纳米冲击磨 秦皇岛市太极环纳米制品有限公司；SHA-B恒温振荡水浴箱 常州智博瑞仪器制造有限公司；FDV气引式粉碎机 佑麒机械有限公司；5804R冷冻离心机 德国Eppendorf公司；FEG-250扫描电子显微镜 美国FEI公司；IRTracer-100傅里叶变换红外光谱仪 日本岛津仪器有限公司；D8 ADVANCE X射线衍射仪 德国布鲁克公司；TGA/DSC1/1100SF热重分析仪 瑞士梅特勒-托利多公司；Mastersizer 2000激光粒度仪 英国马尔文仪器有限公司；SpectraMax i3X酶标仪 美国Molecular Devices。
1.2 实验方法
1.2.1 原料预处理
刺梨果渣为刺梨榨汁后经60 ℃热风干燥至水分含量为8%的副产物。
1.2.1.1 普通粉碎（general grinding，GG）
刺梨果渣去籽后经气引式粉碎机连续粉碎3 min备用。
1.2.1.2 超微粉碎（superfine grinding，SG）
将去籽后的刺梨果渣于高能纳米冲击磨中连续粉碎10 h，刺梨果渣与氧化锆球质量比为1:6，粉碎后的粉末备用。
1.2.1.3 高压均质（high-pressure homogenization，HPH）
刺梨果渣去籽后经气引式粉碎机连续粉碎3 min，粉碎后的刺梨果渣粉按料液比1:20（g/mL）加入蒸馏水搅拌均匀，在均质压力90 MPa的条件下以100 mL/min的流量均质3次后备用。
1.2.1.4 超微粉碎协同高压均质处理（superfine grinding and high-pressure homogenization，SG-HPH）
将去籽后的刺梨果渣于高能纳米冲击磨中连续粉碎10 h，刺梨果渣与氧化锆球质量比为1:6，粉碎后的刺梨果渣粉按料液比1:20（g/mL）加入蒸馏水搅拌均匀，在均质压力90 MPa的条件下均质3次后备用。
1.2.2 刺梨果渣可溶性膳食纤维（Rosa roxburghii Tratt pomace soluble dietary fiber，RRTSDF）的提取
取1.2.1中的四种刺梨果渣粉，按照料液比1:20 g/mL加入蒸馏水搅拌均匀，用1 mol/L的HCl溶液调pH至6.0，加入2%的耐高温α淀粉酶（按刺梨果渣粉的质量计），于95 ℃热水中以100 r/min振荡60 min，然后于沸水浴中灭酶10 min；冷却至室温，用1 mol/L的NaOH溶液调pH至9.0，加入2%的碱性蛋白酶（按刺梨果渣粉的质量计），于60 ℃热水中以100 r/min振荡60 min，然后于沸水浴中灭酶10 min；冷却至室温，用1 mol/L的HCl溶液调pH至4.5，加入3%的糖化酶（按刺梨果渣粉的质量计），于60 ℃热水中以100 r/min振荡60 min，然后于沸水浴中灭酶10 min；冷却至室温，以4000 r/min离心5 min取上清液，加入上清液4倍体积的95%的乙醇溶液沉淀过夜，抽滤，滤渣于55 ℃烘箱烘干过夜，分别得到RRTSDF、S-RRTSDF、H-RRTSDF和SH-RRTSDF。刺梨果渣可溶性膳食纤维得率计算如公式（1）所示：
(1) 1.2.3 不同RRTSDF的测定
参考YAN等[19]方法，采用Mastersizer 2000激光粒度仪进行粒径测定，获得不同RRTSDF在0~1000 μm范围内不同子区间的体积百分比和D10、D50、D90粒径以及粒径分布累积曲线。
1.2.4 不同RRTSDF的扫描电子显微镜观察
参考XIE等[20]的方法，使用FEG-250扫描电子显微镜观察不同RRTSDF表面的微观形态特征。少量样品涂抹在载物台上，喷金2 min，工作电压为15 kV，距离10.8 mm，利用聚焦电子束对样品的表面进行逐点扫描。
1.2.5 不同RRTSDF的红外光谱分析
参考QIAO等[21]的方法，稍作修改。分别称取不同的RRTSDF样品2 mg与200 mg溴化钾（105 ℃干燥4 h）于研磨中充分研磨均匀，然后制成薄片，以不加样品的溴化钾薄片为背景对照，采用红外光谱仪在4000~400 cm−1频率区扫描。
1.2.6 不同RRTSDF的X射线衍射分析
参考YANG等[22]的方法，稍作修改。在铜靶上以2°/min的扫描速度从5°扫描到80°，用X射线衍射仪测定不同RRTSDF的结构。
1.2.7 不同RRTSDF的热重分析
参考DU等[23]的方法，稍作修改。通过热重分析仪分析不同RRTSDF的热稳定性，称取5~8 mg样品装入氧化铝坩埚，在N2的保护作用下，以10 ℃/min的加热速度从30 ℃加热到600 ℃。
1.2.8 不同RRTSDF的持油力（Oil holding capacity，OHC）测定
参考张馨月等[24]的方法，稍作修改。称取0.5 g样品于离心管中，加入10 mL菜籽油，在室温条件下150 r/min振荡7 h，4500 r/min离心10 min，去上层清液，称取并测定离心后样品的湿重，根据公式（2）计算持油力。
(2) 式中，m为样品吸附油脂后的重量。
1.2.9 不同RRTSDF的胆固醇（Cholesterol adsorption capacity，CAC）吸附能力测定
参考朱仁威[25]的方法，并稍作修改。取新鲜蛋黄按质量比1:9加入蒸馏水搅拌均匀得到蛋液，分别称取1 g不同RRTSDF样品于锥形瓶中，加入25 g蛋液，分别调pH至2.0（模拟胃环境）和7.0（模拟肠环境），在37 ℃的水浴锅中振荡2 h，然后在5000 r/min离心10 min，取上清液，用邻苯二甲醛法测定550 nm处的OD值，根据标准曲线y=20.207x−0.0065（R2=0.9908）计算胆固醇量，根据公式（3）计算不同RRTSDF的胆固醇吸附能力。
(3) 式中：CAC为胆固醇吸附能力，mg/g；M为样品质量，g；m为未加样品上清液中胆固醇含量，mg；m0为样品吸附后上清液中胆固醇含量，mg。
1.2.10 不同RRTSDF的胆酸钠盐结合能力测定
参考祖齐欣等[26]的方法，稍作修改。
1.2.10.1 胆酸钠盐标准曲线制作
分别配制0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mmol/L的胆酸盐溶液2.5 mL加入10 mL具塞试管中，然后分别加入7.5 mL 60%的H2SO4后摇匀于70 ℃水浴20 min，取出冰浴5 min，于387 nm处测定吸光值，重复三次。得到胆酸盐标准曲线方程：牛磺胆酸钠标准曲线Y=6.1294X+0.024，R2=0.9909；甘氨胆酸钠标准曲线Y=7.1899X+0.0432，R2=0.9914。
1.2.10.2 样品测定
称取0.25 g样品于锥形瓶中，加入10 mg/mL胃蛋白酶溶液4 mL（0.01 mol/L的盐酸配制）于37 ℃水浴锅中振荡30 min，用1 mol/L氢氧化钠调pH为6.8，加入10 mg/mL胰蛋白酶溶液4 mL在37 ℃水浴锅中振荡30 min，加入4 mL胆酸钠盐溶液（0.5 mmol/L的甘氨胆酸钠溶液和0.5 mmol/L的牛磺胆酸钠溶液，均用pH为6.8的PBS缓冲溶液配制）于37 ℃恒温水浴振荡60 min，加入15 mL乙醇在4500 r/min离心10 min，取上清液根据1.2.10.1中方法测定胆酸盐浓度，以不加样品为空白对照，根据公式（4）计算胆酸钠盐结合率。
(4) 式中，C0为吸附前胆酸钠盐的浓度，mmol/L；C1为吸附后胆酸钠盐的浓度，mmol/L。
1.3 数据处理
所有试验均重复三次，结果采用平均值±标准差的形式表示，采用SPSS 17.0进行分析数据，平均数之间的差异通过单因素方差分析，P<0.05为显著性差异，采用Origin 2018作图。
2. 结果与分析
2.1 不同处理方法RRTSDF的得率
普通粉碎（GG）、超微粉碎（SG）、高压均质（HPH）和超微粉碎协同高压均质（SG-HPH）的4种方法处理后的RRTSDF的得率如图1所示。RRTSDF、S-RRTSDF、H-RRTSDF和SH-RRTSDF的得率分别为11.61%±0.42%、16.14%±0.61%、14.29%±0.36%、20.48%±0.48%，超微粉碎和高压均质单一处理的RRTSDF得率均能显著提升（P<0.05），这可能是SG的挤压冲击力作用和HPH的高速剪切作用将刺梨果渣不可溶性膳食纤维转化为RRTSDF[27]，尤其是超微粉碎协同高压均质处理刺梨果渣，RRTSDF的得率高达20.48%±0.48%，显著高于（P<0.05）普通粉碎、超微粉碎和高压均质，相比普通粉碎RRTSDF的得率提高了76.40%。结果表明超微粉碎协同高压均质是一种较好的改性方法。
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图 1 不同处理方法的RRTSDF的得率注：不同小写字母表示不同样品间差异显著（P<0.05）。Figure 1. Yield of RRTSDF with different treatments2.2 不同处理方法对RRTSDF粒径的影响
4种SDF的粒径分布如表1和图2所示。由表1和图2可知，与RRTSDF相比，H-RRTSDF、S-RRTSDF和SH-RRTSDF的中直径D50分别减小3.83%、17.01%和81.52%，表明SG和HPH两种改性方法均能使RRTSDF粒径减小，而SH-RRTSDF粒径又显著小于单一处理方法，说明两种改性方法具有协同效应，并且两种方法协同处理得到的SH-RRTSDF的D10、D50、D90均显著减小，比表面积也显著增大65.52%。这可能是由于SG和HPH的高速剪切力和冲击作用，降低了RRTSDF分子间的作用力从而破坏结构，减小RRTSDF的粒径，这与刘洋等[28]的研究结果一致，可以提升RRTSDF的应用前景。
表 1 不同处理方法的RRTSDF的粒径分布Table 1. Particle size distribution of RRTSDF with different treatments样品 比表面积
（m2/g）D[3,2]
（μm）D10
（μm）D50
（μm）D90
（μm）Span
（跨度）RRTSDF 0.29±
0.01b31.37±
0.25b9.75±
0.06c107.74±
0.25a367.91±
0.31a3.36±
0.17aH-RRTSDF 0.24±
0.02c25.73±
0.18c11.84±
0.06b103.69±
0.28a272.33±
0.25b2.51±
0.30bS-RRTSDF 0.15±
0.01d39.99±
0.16a23.47±
0.15a89.49±
0.38c283.50±
0.37c2.41±
0.40bSH-RRTSDF 0.48±
0.01a12.64±
0.14d6.32±
0.23d19.88±
0.16d70.18±
0.18d3.28±
0.21a注：D10、D50、D90和D[3,2]分别表示表示累积粒度分布为10%、50%、90%的样品对应的粒径和样品的表面积平均粒径，Span=（D90-D10）/D50。 ![]()
图 2 不同处理方法的RRTSDF粒径分布Figure 2. Particle size distribution of RRTSDF with different treatments2.3 不同处理方法对RRTSDF微观结构的影响
由图3可知，RRTSDF表面光滑，与RRTSDF（A1和A2）对比，经过SG处理后S-RRTSDF（C1和C2）和HPH处理的H-RRTSDF（B1和B2）的表面孔隙增多、颗粒细小，而SG协同HPH处理的SH-RRTSDF（D1和D2）的结构疏松、表面孔隙增多，并且从2.2的粒径结果已得知SH-RRTSDF的颗粒平均粒径更小且分布均匀。更小粒径、更大的表面和疏松多孔的表面结构可以使RRTSDF暴露更多的活性基团，从而改善RRTSDF的功能活性[29]。
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图 3 不同处理方法的RRTSDF的SEM图注：A、B、C、D分别为RRTSDF、H-RRTSDF、S-RRTSDF和SH-RRTSDF；1和2分别表示放大5000和20000倍。Figure 3. SEM images of RRTSDF with different treatments2.4 不同处理方法对RRTSDF红外光谱的影响
由图4可知，4种RRTSDF的红外光谱图均呈现典型的多糖吸收峰。3420 cm−1附近的吸收峰是RRTSDF中纤维素和半纤维素的-OH伸缩振动产生的[30]。2938 cm−1附近的吸收峰则是甲基或者亚甲基的C-H健伸缩振动产生的[31]。1742 cm−1和1618 cm−1附近的吸收峰则是典型的羰基伸缩振动产生的[32]。1049 cm−1附近的吸收峰是纤维素和半纤维素中的C-O伸缩振动产生的[33]。综上，四种RRTSDF的特征吸收峰相似，结果表明SG和HPH并未破坏RRTSDF的结构，也未产生新的基团。但是在峰的吸收强度上存在一定差异，这可能是改性方法影响RRTSDF的纯度。
2.5 不同处理方法对RRTSDF晶体结构的影响
通过XDR检测确定不同处理方法对RRTSDF晶体结构的影响如图5所示，4种RRTSDF具有相似的特征峰，并且均在2θ=31.9°附近有一个较强的衍射峰，表明4种RRTSDF的晶型没有发生改变且具有典型的纤维素Ⅰ型晶体结构[34]。RRTSDF、S-RRTSDF、H-RRTSDF和SHRRTSDF的相对结晶度分别为68.72%、53.56%、52.15%和32.43%，说明两种处理方法均能降低RRTSDF的结晶度，尤其SG和HPH协同处理使RRTSDF的结晶度降低了53.01%，可能是高速剪切和碰撞将有序的纤维转化为无序的纤维从而降低结晶度[35]。结果表明SG、HPH和SG协同HPH处理并未改变RRTSDF的结晶构型，但是SG、HPH和SG协同HPH处理破坏了RRTSDF部分结晶区和非结晶区结构，降低了RRTSDF的结晶度，周静等[36]研究物理改性方法对不同柑橘膳食纤维也得到相似的结果。
2.6 不同处理方法对RRTSDF热稳定的影响
热重分析（thermogravimetric analysis，TGA）可用于表征物质的热稳定性和组分的热分解[37]。如图6所示，4种RRTSDF的热重曲线（a）和微商热重曲线（b）均表现出相同的热分解趋势，分为三个阶段，这和FAN等[38]的研究结果相一致。曲线b可以看出4种RRTSDF的第一个热解峰出现在100 ℃左右，这是RRTSDF中的水分蒸发[39]。第二个热解峰出现在250 ℃左右，也是质量损失最多的一个阶段，主要是果胶、半纤维素和多糖等多种大分子物质的热解。与RRTSDF相比，改性后的RRTSDF在这个阶段的热解峰均有所增强，尤其是SH-RRTSDF的热解峰最强，可能是SG和HPH联合处理破坏了RRTSDF的部分碳链和氢键，加之粒径减小，受热更容易分解[40]。第三个热解峰出现在350 ℃左右，主要是热解残留物碳化形成的。曲线a中RRTSDF、S-RRTSDF、H-RRTSDF和SH-RRTSDF的残留质量分别为59.71%、56.32%、59.11%和51.86%，说明SG和HPH处理均会导致RRTSDF的热稳定性降低，并且两者有协同作用。这与吴鸿亿等[41]的研究结果相似，这可能是SG和HPH处理破坏了RRTSDF分子的部分碳链和氢键，并且粒径更小和组织疏松更有利于热分解，从而降低了RRTSDF的热稳定性。
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图 6 不同处理方法的RRTSDF的热重分析图注：曲线a表示热重曲线，曲线b表示微商热重曲线。Figure 6. Thermogravimetric analysis of RRTSDF with different treatments2.7 不同处理方法对RRTSDF持油力、胆固醇吸附能力和胆酸钠盐结合率的影响
膳食纤维持油力、胆固醇和胆酸钠盐吸附能力是评价膳食纤维体外降血脂功能的重要指标[42−43]。如图7A所示，与普通粉碎对比，经过SG、HPH、SG协同HPH处理后的RRTSDF的持油力显著提升（P<0.05），分别提升了41.78%、23.47%和115.49%。这可能与SG、HPH和SG协同HPH处理使RRTSDF的粒径减小、比表面积增大以及表面形成疏松多孔的结构密切相关，不仅增加了RRTSDF与油脂的接触面积，同时疏松多孔的结构更利于其对油脂的吸附。由图7B可知，RRTSDF、S-RRTSDF、H-RRTSDF和SH-RRTSDF在模拟肠环境（pH7.0）的胆固醇吸附能力分别是在模拟胃环境（pH2.0）的3.04、2.09、3.59和2.69倍，表明RRTSDF吸附胆固醇主要在肠道中进行；并且经过SG协同HPH处理的SH-RRTSDF的胆固醇吸附能力最强，在模拟肠环境、模拟胃环境分别是10.87±0.2 mg/g、4.03±0.21 mg/g。RRTSDF吸附胆固醇有物理吸附和螯合作用两种方式，由于SG协同HPH处理使得SH-RRTSDF的比表面积增大且结构疏松，SH-RRTSDF的物理吸附胆固醇能力得到显著提升（P<0.05）。如图7C所示，与普通粉碎对比，SG、HPH和SG协同HPH处理均能提升RRTSDF的牛磺胆酸钠和甘氨胆酸钠结合率，尤其SH-RRTSDF的牛磺胆酸钠和甘氨胆酸钠结合率最高分别达到了23.69%±0.06%和33.37%±0.04%。以上结果均表明SG、HPH、SG协同HPH处理后的RRTSDF的体外降血脂功能均得到显著提升，其中SH-RRTSDF的体外降血脂效果最佳，这可能归因于SH-RRTSDF具有更小的粒径、更大的比表面积和皱褶多孔的表面结构，同时SG协同HPH处理使SH-RRTSDF的表面暴露更多极性基团[44]。研究表明RRTSDF具有良好的体外降脂效果，与尚学钰等[45]研究的黑木耳可溶性膳食纤维的降血脂活性相比，RRTSDF的持油力4.59 g/g和胆固醇吸附能力10.87 mg/g均显著高于黑木耳可溶性膳食纤维的持油力2.95 g/g和胆固醇吸附能力6.63 mg/g。
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图 7 不同处理方法的RRTSDF的持油力（A）、胆固醇吸附能力（B）和胆酸钠盐结合率（C）注：不同大小写字母表示不同样品间的差异显著（P<0.05）。Figure 7. Oil holding capacity (A), cholesterol adsorption capacity (B) and bile acid sodium salt binding rate (C) of RRTSDF with different treatments3. 结论
本研究采用超微粉碎协同高压均质处理刺梨果渣提取RRTSDF，与普通粉碎、超微粉碎以及高压均质三种处理方法提取的RRTSDF进行比较，对四种RRTSDF的结构进行表征，同时对比了四种RRTSDF的体外降血脂活性。结果表明，与普通粉碎相比，超微粉碎协同高压均质处理不仅将RRTSDF的得率提升76.40%，中直径D50也减小了81.52%的同时比表面积增大了65.52%，且粒径分布更均匀，RRTSDF表面更加疏松多孔，从而有效得提升了RRTSDF的持油力、胆固醇吸附能力和胆酸钠盐结合率，增强了RRTSDF的体外降血脂活性。通过对比分析不同处理方式对RRTSDF结构和体外降血脂功能的影响，为刺梨果渣高值化利用提供了理论基础，后续研究将进一步通过体内降血脂实验来验证不同处理方法对RRTSDF的降血脂功能及其作用机理的影响。
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图 1 不同处理方法的RRTSDF的得率
注：不同小写字母表示不同样品间差异显著（P<0.05）。
Figure 1. Yield of RRTSDF with different treatments
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图 2 不同处理方法的RRTSDF粒径分布
Figure 2. Particle size distribution of RRTSDF with different treatments
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图 3 不同处理方法的RRTSDF的SEM图
注：A、B、C、D分别为RRTSDF、H-RRTSDF、S-RRTSDF和SH-RRTSDF；1和2分别表示放大5000和20000倍。
Figure 3. SEM images of RRTSDF with different treatments
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图 6 不同处理方法的RRTSDF的热重分析图
注：曲线a表示热重曲线，曲线b表示微商热重曲线。
Figure 6. Thermogravimetric analysis of RRTSDF with different treatments
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图 7 不同处理方法的RRTSDF的持油力（A）、胆固醇吸附能力（B）和胆酸钠盐结合率（C）
注：不同大小写字母表示不同样品间的差异显著（P<0.05）。
Figure 7. Oil holding capacity (A), cholesterol adsorption capacity (B) and bile acid sodium salt binding rate (C) of RRTSDF with different treatments
表 1 不同处理方法的RRTSDF的粒径分布
Table 1 Particle size distribution of RRTSDF with different treatments
样品 比表面积
（m2/g）D[3,2]
（μm）D10
（μm）D50
（μm）D90
（μm）Span
（跨度）RRTSDF 0.29±
0.01b31.37±
0.25b9.75±
0.06c107.74±
0.25a367.91±
0.31a3.36±
0.17aH-RRTSDF 0.24±
0.02c25.73±
0.18c11.84±
0.06b103.69±
0.28a272.33±
0.25b2.51±
0.30bS-RRTSDF 0.15±
0.01d39.99±
0.16a23.47±
0.15a89.49±
0.38c283.50±
0.37c2.41±
0.40bSH-RRTSDF 0.48±
0.01a12.64±
0.14d6.32±
0.23d19.88±
0.16d70.18±
0.18d3.28±
0.21a注：D10、D50、D90和D[3,2]分别表示表示累积粒度分布为10%、50%、90%的样品对应的粒径和样品的表面积平均粒径，Span=（D90-D10）/D50。 
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