Influence of Place of Origin and Fertilizer on Fruit Quality of Citrus reticulata 'Chachiensis' in Xinhui District
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摘要: 探究产地及肥料对茶枝柑果实综合品质的影响，为新会茶枝柑果实的品质提升和综合开发利用提供科学参考依据。以梅江茶枝柑（核心产地，MJ）、南坦茶枝柑（非核心产地，NT）和南坦仙草柑（非核心产地施加中药肥料，XC）为研究对象，测定同一成熟度果实的理化性状、营养成分以及抗氧化特性，采用相关性分析、聚类分析的方法对三种茶枝柑果实不同部位的品质进行综合分析。结果表明：三种茶枝柑果实（包括果皮、渣、籽和汁）间存在显著性差异（P<0.05）。XC果实的平均单果重和横径指标最高，果形最大。三种茶枝柑果汁固酸比、主要有机酸和主要可溶性糖含量范围分别是15.83~17.41、25.82~29.35 mg/mL和122.28~133.63 mg/mL；与NT果汁相比，MJ和XC果汁中固酸比分别显著高出9.92%和9.98%（P<0.05）。三种茶枝柑果实鉴定出8种黄酮类化合物，其中橙皮苷含量最高。与NT果皮相比，MJ和XC果皮中总黄酮、总酚、ABTS值和FRAP值分别显著高出11.28%和5.38%、20.17%和8.94%、9.00%和7.92%、6.49%和5.60%（P<0.05）。茶枝柑果皮中橙皮苷、柚皮苷、甜橙黄酮、总黄酮、总酚和果汁中抗坏血酸、总酚、总黄酮分别与抗氧化活性呈显著正相关（P<0.05）。聚类分析表明MJ与NT果实之间的成分差异较大，与XC果实成分差异较小。综上，MJ果实的品质特性较为优异，可为核心产地广陈皮的高品质高价格提供科学依据，而施加中药肥料对非核心产地茶枝柑果实品质有一定的提升作用。Abstract: To explore the effects of origin and fertilizer on the comprehensive quality of Citrus reticulata 'Chachiensis' fruits, and provide scientific reference for the quality improvement and comprehensive development and utilization of Citrus reticulata 'Chachiensis' in Xinhui District. The fruits of Citrus reticulata 'Chachiensis' from Meijiang (core origin, MJ), Nantan (non-core origin, NT), and Nantan Xiancao (non-core origin with traditional Chinese medicine fertilizer, XC) were collected at the same period, and the physical and chemical traits, nutritional components, and antioxidant properties of the fruits were determined. The quality of different parts of the three kinds of Citrus reticulata 'Chachiensis' fruits was comprehensively analyzed by correlation analysis and cluster analysis. The findings indicated that there were significant differences among the three Citrus reticulata 'Chachiensis' fruits, including peel, pomace, seeds, and juice (P<0.05). XC fruits exhibited the highest average single fruit weight and transverse diameter, as well as the largest fruit shape. The solid-acid ratio ranges of the three Citrus reticulata 'Chachiensis' fruit juices were 15.83~17.41, while the major organic acids content ranged from 25.82~29.35 mg/mL and the major soluble sugars content ranged from 122.28~133.63 mg/mL, respectively. Compared to NT juice, the levels of solid-acid ratio in MJ and XC juice were significantly higher by 9.92% and 9.98%, respectively (P<0.05). Eight flavonoids were identified from the three Citrus reticulata 'Chachiensis' fruits, among which hesperidin content was the highest. Compared to NT peel, the levels of total flavonoids, total phenols, ABTS and FRAP values in MJ and XC peel were significantly higher by 11.28% and 5.38%, 20.17% and 8.94%, 9.00% and 7.92%, 6.49% and 5.60%, respectively (P<0.05). Hesperidin, naringin, sinensetin, total flavonoids, total phenols in peel and ascorbic acid, total phenols, total flavonoids in juice were significantly positively correlated with antioxidant activity, respectively (P<0.05). The cluster analysis revealed that the compositional difference between MJ and NT fruits was large, while the difference between MJ and XC fruits was small. In conclusion, the MJ fruits demonstrate superior quality characteristics, which can provide scientific basis for the high quality and premium price of Guang Chen Pi (the pericarp of Citrus reticulata Blanco's cultivars 'Chachi') in its core producing area. Additionally, the application of traditional Chinese medicine fertilizers can improve the fruit quality of Citrus reticulata 'Chachiensis' in non-core producing areas.
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茶枝柑（Citrus reticulata 'Chachiensis'），别名新会柑、大红柑，入选国家地理标志保护产品。《中国药典》（2020年版）明确指出茶枝柑的干燥成熟果皮为传统中药广陈皮，药食两用，具有理气健脾，燥湿化痰的功效，以广东新会出产为优[1]。药用植物生物活性代谢产物的合成与积累受植物品种、栽培区域、土壤养分等多种因素的影响[2−4]。相比化学肥料和农药种植，采用中草药生物肥料用于药用植物栽培能收获高质量药物成分[5]。茶枝柑广泛种植于广东省江门市新会区各个乡村和岛屿，核心产区包括天马、梅江等，非核心产区包括南坦、三江等[6]，且不同产区果实品质及价格差别较大。因此，研究核心产地、非核心产地以及同一产地施加不同肥料的茶枝柑果实营养成分是否存在差异，对促进新会茶枝柑综合产业高质量发展具有重要意义。
研究表明，不同产地以及施加不同肥料的柑橘成分各有差异；与温州蜜柑、脐橙、湖北柑果皮比较，茶枝柑果皮可溶性糖、总酚、总黄酮含量均有显著性差异（P<0.05）[7]；与福建芦柑陈皮和浙江蜜桔陈皮比较，广东茶枝柑陈皮单萜烯类化合物含量最高，种类最多[8]；与非核心产区比较，核心产区新会茶枝柑果皮精油成分存在明显差异，主要原因是土壤特性和土壤微生物组影响柑橘皮中单萜的产生[9]；与常规施肥比较，有机施肥显著提高茶枝柑单果质量，提高产量，主要是由于有机肥处理促进土壤微生物的活性，增加土壤养分的矿化，改善土壤物理特性，促进果实发育[10]。茶枝柑果实不同部位成分亦各有差异。果皮部位（广陈皮）含有丰富的黄酮类生物活性代谢物质，橙皮苷、橘皮素和川陈皮素为主要黄酮类化合物，具有调节脂质代谢和抗氧化的功效[6,11]。果汁部位富含柠檬酸、苹果酸、酒石酸、抗坏血酸、蔗糖、葡萄糖和果糖等主要营养物质，是影响果实品质的重要因素[12]。然而，产地及肥料对新会茶枝柑果实品质特性影响的研究鲜有报道，核心产地与非核心产地的茶枝柑果实品质差异的相关性尚不清楚，同一产地施加不同肥料的茶枝柑果实品质差异尚不明确。
本研究对梅江茶枝柑（核心产地）、南坦茶枝柑（非核心产地）和南坦仙草柑（同一产地施加不同肥料）果实的品质性状和营养成分进行了系统的研究分析和综合的比较评价，主要包括果汁的有机酸类化合物、可溶性糖和果实不同部位的活性物质（总酚、总黄酮和黄酮类化合物）以及抗氧化特性，为新会茶枝柑精深加工及品质调控提供科学参考依据。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
茶枝柑样品采集信息见表1；甲醇 色谱纯，天津市彪仕奇科技发展有限公司；偏磷酸、磷酸、硝酸铝 分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；磷酸氢二铵、葡萄糖、蔗糖、亚硝酸钠、氢氧化钠、三氯乙酸、过硫酸钾、碳酸钠、铁氰化钾、三氯化铁 分析纯，褔晨（天津）化学试剂有限公司；果糖 分析纯，合肥千盛生物科技有限公司；无水甲醇 分析纯，天津市富宇精细化工有限公司；抗坏血酸、葡萄糖醛酸、草酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、乳酸、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、香蜂草苷、橙皮素、甜橙黄酮、川陈皮素、桔红素、芦丁、6-羟基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸（Trolox）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、福林酚、没食子酸、2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS） 上海源叶生物科技公司。
表 1 茶枝柑样品信息Table 1. Sample information of Citrus reticulata 'Chachiensis'类型 不同产地 施加肥料 肥料使用情况 采摘时间 梅江茶枝柑（MJ） 新会梅江村 核心产区 普通叶面肥 5月份幼果发育期开始，喷施钙镁多、硼尔美、磷酸二氢钾、解易达、优尼可等柑橘常用叶面肥，每次间隔1~2周 2023年12月 南坦茶枝柑（NT） 新会南坦村 非核心产区 普通叶面肥 5月份幼果发育期开始，喷施钙镁多、硼尔美、磷酸二氢钾、解易达、优尼可等柑橘常用叶面肥，每次间隔1~2周 2023年12月 南坦仙草柑（XC） 新会南坦村 非核心产区 中药提取发酵液 5月份幼果发育期开始，喷施中药（甘草、牛大力、黄芪等）提取发酵液，每次间隔1周 2023年12月 ME204/02型电子天平、FE28 pH计 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；RFM340+全自动台式折光仪 桂宁（上海）实验器材有限公司；D3024R台式高速冷冻型微量离心机 美国赛洛捷克SCILOGEX公司；UV1800型紫外分光光度计、LC-20AT高效液相色谱仪 日本岛津公司；DL-800B 超声波清洗器 上海之信仪器有限公司；101-A 电热鼓风干燥箱 上海科恒实业发展有限公司；IP54 电子游标卡尺 上海美耐特实业有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 样品前处理
采样各选取12个果型均匀，表面色泽光亮无蛀虫、成熟度一致的新鲜果实。果实剥皮（果皮），果肉去籽（果籽），榨汁（果汁），过滤残渣（果渣）。果汁在−20 ℃冷冻备用，将果皮、果渣和果籽放入50 ℃烘箱中烘干至恒重，打粉，过80目筛网，备用。
1.2.2 果实理化性质比较分析
茶枝柑整果的横径和纵径、果皮厚度采用电子游标卡尺测量，纵径与横径的比值为果形指数；整果、果肉和果汁重量用电子天平进行测定，果肉与果实重量的比值为可食率，果汁与果实重量的比值为出汁率；可溶性固形物（TSS）含量采用折光仪（精度±0.01）测定；可滴定酸（TA）含量参照国标GB12456-2021《食品安全国家标准 食品中总酸的测定》中pH计电位滴定法进行测定；TSS与TA的比值为固酸比；pH采用pH计测定。
1.2.3 果汁中主要有机酸含量的测定
参照国标GB5009.157-2016《食品安全国家标准 食品中有机酸的测定》。
抗坏血酸的测定采用HPLC法，参照陈玉婷等[13]方法，略做修改。取果汁与0.3%偏磷酸溶液按比例为1:3混合，超声15 min，4 ℃，12000 r/min离心5 min，过0.22 μm的水相滤膜，色谱条件如下：二极管阵列检测器（PDA），C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱温为30 ℃，流速：1.0 mL/min，进样量：10 μL，检测波长254 nm。流动相：0.1%的（NH4）2HPO4溶液，磷酸调节pH2.7（A），洗脱程序00:01 min，A 100%；10:00 min，A 100%。有机酸类化合物的标准曲线见表2。
表 2 8种有机酸类化合物的标准曲线Table 2. Standard curves for eight organic acid compounds化合物 标准曲线 决定系数R2 葡萄糖醛酸 y=267440x+261.52 0.9999 草酸 y=5×106x+725.41 0.9999 酒石酸 y=1×106x−8425.7 0.9988 苹果酸 y=446902x+9536.6 0.9983 柠檬酸 y=556822x+3534.6 0.9999 琥珀酸 y=304926x+2891.9 0.9995 乳酸 y=312101x−2533.9 0.9998 抗坏血酸 y=3×107x−27247 0.9999 1.2.4 果汁中主要糖分含量的测定
HPLC法：参照钟思彦等[14]方法，略做修改。取果汁与蒸馏水按比例为1:4混合，超声30 min，12000 r/min离心10 min，过0.22 μm的水相滤膜，色谱条件如下：Shodex Asahipak NH2P-50 4E（4.6 mm×250 mm），检测器为蒸发光散射检测器（ELSD），柱温为40 ℃，漂移管温度为50 ℃，流速1 mL/min，进样量为10 μL。流动相：水（A），70%乙腈（B）；洗脱程序00:01 min，B 25%；20:00 min，B 25%。糖类化合物的标准曲线见表3。
表 3 3种糖类化合物的标准曲线Table 3. Standard curves for three carbohydrate compounds化合物 标准曲线 决定系数R2 果糖 y=358315x+4702.9 0.9992 葡萄糖 y=297538x−64488 0.9982 蔗糖 y=342030x+36365 0.9995 1.2.5 不同部位主要黄酮类化合物含量的测定
HPLC法：参照陈玉婷等[12]方法，略做修改。色谱条件如下：C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱温为35 ℃；二极管阵列检测器（PDA），流速：0.7 mL/min，进样量：10 μL，检测波长280 nm。流动相：0.1%甲酸（A），甲醇（B）；洗脱程序：00:01 min，B 5%；10:00 min，B 20%；15:00 min，B 30%；20:00 min，B 40%；35:00 min，B 50%；40:00 min，B 60%；55:00 min，B 70%；60:00 min，B 80%；65:00 min，B 5%；70:00 min，B 5%。黄酮类化合物的标准曲线见表4。
表 4 8种黄酮类化合物的标准曲线Table 4. Standard curves for eight flavonoids化合物 标准曲线 决定系数R2 芸香柚皮苷 y=3×107x−2709 0.9999 柚皮苷 y=2×107x−290.92 0.9999 橙皮苷 y=2×107x+146950 0.9999 香蜂草苷 y=2×107x+741.48 0.9999 橙皮素 y=4×107x+1286.2 0.9999 甜橙黄酮 y=2×107x−2258.7 0.9999 川陈皮素 y=3×107x−23116 0.9999 桔红素 y=4×107x−35537 0.9999 1.2.6 不同部位总黄酮含量的测定
黄酮物质的提取参照HE等[15]方法，称取0.2 g果皮（果渣、果籽和果汁）于5 mL离心管中。在试管中加入1.5 mL甲醇（0.1%甲酸），漩涡振荡30 s，混合液在25 ℃下超声提取15 min，再将提取液在−10 ℃下以12000 r/min离心5 min，将上清液转移到5 mL试管中，重复此步骤两次，合并上清液即为黄酮提取液。
参照DADWAL等[16]方法，略做修改。取6 mL适当稀释的黄酮提取液和1 mL 5% NaNO2溶液，振荡摇匀，静置5 min后，加入1 mL 10% Al（NO3）3溶液，振荡摇匀，静置6 min后，加入4 mL 1 mol/L NaOH溶液，振荡摇匀，置于45 ℃水浴10 min，取出冷却，6000 r/min离心5 min，取上清液测定510 nm处的吸光值，总黄酮含量以芦丁的当量表示（mg RE/g），标准曲线方程为：y=0.6634x−0.0012，R2=0.9999。
1.2.7 不同部位总酚含量的测定
Folin-Ciocalteu 法：参照IQBAL等[17]方法，略做修改。取1 mL适当稀释的黄酮提取液，加入2 mL Folin-Ciocalteu试剂，振荡混合，再加入2 mL 5%碳酸钠溶液，避光放置1 h，测定760 nm处的吸光值。标准曲线方程为：y=11.585x+0.005，R2=0.9992。结果以没食子酸当量表示（mg GAE/g）。
1.2.8 不同部位抗氧化能力的分析
ABTS法[18]：略作修改，将7 mmol/L的ABTS溶液（50 mL）和140 mmol/L的过硫酸钾溶液（0.88 mL）混合，在避光的条件下静置过夜，形成ABTS储备液。使用前用无水乙醇稀释至734 nm波长处吸光度为0.7±0.02。各取适当稀释后的黄酮提取液10 μL，加入200 μL ABTS溶液，旋涡振荡30 s，室温条件下避光反应6 min，用酶标仪测定波长734 nm处吸光度。以Trolox为标准品，通过其浓度与清除率值绘制标准曲线，标准曲线方程为：y=6.1638x+0.0155，R2=0.9991。结果用Trolox当量表示（mg TE/g）。
FRAP法[19]：取1 mL稀释后黄酮提取液，加入0.2 mL 0.2 mol/L PBS（pH6.6）溶液和1.5 mL 0.3%铁氰化钾溶液，混匀后在50 ℃孵化20 min，取出迅速冷却并加入1 mL 10%三氯乙酸，混匀后3000 r/min离心10 min，取上清液2 mL加入0.5 mL 0.3%三氯化铁溶液混匀，再加入3 mL纯水，摇匀后测定波长700 nm处吸光度。以Trolox为标准品，测定不同浓度下的Trolox对铁离子的还原力，绘制标准曲线。标准曲线方程为：y=3.4982x+0.1119，R2=0.9993。结果以Trolox当量表示（mg TE/g）。
1.3 数据处理
每个实验处理进行3次重复测定，结果以平均值±标准差表示；数据运用 Microsoft office Excel 2021软件汇总整理，Origin 2022软件绘图；统计差异比较采用SPSS 26.0软件，样品间的差异显著性（P<0.05）检验用 Waller-Duncan 法，用不同小写字母表示。
2. 结果与分析
2.1 异地种植及施肥对新会茶枝柑果实理化指标的影响
不同产地及施加不同肥料的新会茶枝柑果实外观和横切面见图1，茶枝柑果实的品质属性（单果重、横径、纵径、果形指数、鲜果皮厚度、果籽数量和可食率）见表5和果汁属性（出汁率、pH、TSS、TA 和固酸比）如图2所示。三种茶枝柑果实色泽基本一致，呈现黄绿相间。异地种植及施肥处理对茶枝柑果实平均单果重、横径、纵径表现出显著性差异（P<0.05），南坦茶枝柑果实的平均单果重、横径和纵径最低，较梅江茶枝柑果实和南坦仙草柑果实分别降低 12.87% 和 21.38%、3.17% 和 7.53%、8.38% 和 7.12%。梅江茶枝柑果实的果形指数最高为0.85±0.05，与其余两种果实差异显著（P<0.05），形状近似扁圆形。各样品间可食率（73.88%~74.76%）、鲜果皮厚度（2.19~2.36 mm）、果籽数量（17~25个）无显著性差异（P>0.05）。据报道，柑橘果实的可食率主要由种子数量和果皮厚度决定[20]。南坦仙草柑的出汁率显著低于南坦茶枝柑4.56%（P<0.05），而果汁的pH显著高于南坦茶枝柑2.72%（P<0.05）。TSS、TA和固酸比亦是与柑橘品质相关的重要参数，其中梅江茶枝柑果汁（17.40±0.28）和南坦仙草柑果汁（17.41±0.25）的固酸比显著高于南坦茶枝柑果汁（15.83±0.22）（P<0.05）。由此可知，与非核心产地相比，核心产地和非核心产地施加中药肥料更有利于茶枝柑果实生长，提升果汁品质。长期以来，新会茶枝柑只取果皮制作广陈皮，大部分果肉被丢弃，不仅污染环境而且造成资源浪费[11]。研究表明三种茶枝柑果汁的固酸比（15.83~17.41）远高于四川地区10种典型柑橘品种果汁（1.71~10.30）[20]，且柑橘果汁中固酸比在12~20之间的口感最为适宜[21]，说明新会茶枝柑果汁适合加工果汁以及复合果汁，亦可作为休闲食品基料原料，具有食品工业加工方面的潜力，有利于资源合理开发利用。
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图 1 异地种植及施肥对新会茶枝柑果实外观形态的影响Figure 1. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the appearance and morphology of Citrus reticulata 'Chachiensis' fruits in Xinhui district表 5 异地种植及施肥对新会茶枝柑果实理化性状的影响Table 5. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the physicochemical traits of Citrus reticulata 'Chachiensis' fruits in Xinhui district类型 单果重
（g）横径
（mm）纵径
（mm）果形指数 鲜果皮厚度
（mm）果籽数量
（个）可食率
（%）MJ 157.61±17.65a 70.88±3.34ab 59.91±2.92a 0.85±0.05a 2.19±0.17a 17±6a 74.55±1.89a NT 137.33±19.40b 68.63±4.87b 54.89±3.07b 0.80±0.05b 2.25±0.43a 25±10a 74.76±1.57a XC 174.68±14.60a 74.22±2.68a 59.10±2.53a 0.80±0.03b 2.36±0.20a 19±8a 73.88±1.11a 注：同一列不同小写字母表示组间存在显著性差异（P<0.05）。 ![]()
2.2 异地种植及施肥对新会茶枝柑果汁主要有机酸含量的影响
果汁主要有机酸的鉴定和定量分析对食品饮料技术和质量评价非常重要[22]。三种新会茶枝柑果汁的主要有机酸如图3所示。经标准品对照，共鉴定出8种有机酸类化合物分别为柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸、葡萄糖醛酸、酒石酸、抗坏血酸和草酸。三种茶枝柑果汁中柠檬酸（8.09~9.45 mg/mL）含量最高，其次是苹果酸（5.57~6.01 mg/mL），二者对果汁的风味和品质有重要贡献[23]。与南坦茶枝柑果汁相比，梅江茶枝柑果汁柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、葡萄糖醛酸、酒石酸、草酸含量显著高出9.38%、5.81%、15.91%、10.89%、6.56%、33.33%（P<0.05），而南坦仙草柑果汁柠檬酸含量显著降低6.37%（P<0.05）。抗坏血酸含量最高的是南坦仙草柑果汁（177.65±1.26 μg/mL），梅江茶枝柑果汁（169.98±1.16 μg/mL）次之，含量最低的为南坦茶枝柑果汁（164.23±0.81 μg/mL）。乳酸含量最高的是南坦茶枝柑果汁，较南坦仙草柑果汁显著高出15.93%（P<0.05）。酸组分在很大程度上取决于果实可食用部分液泡中的质子稳态，有机酸的积累和代谢对果汁的pH起着重要作用[23]。本研究结果发现三种茶枝柑果汁中8种有机酸化合物含量存在差异，可归因于异地种植及施加不同肥料后土壤酸碱度[24]的变化导致。
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图 3 异地种植及施肥对新会茶枝柑果汁主要有机酸含量的影响Figure 3. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the contents of major organic acids in Citrus reticulata 'Chachiensis' juice in Xinhui district2.3 异地种植及施肥对新会茶枝柑果汁主要可溶性糖含量的影响
采用HPLC法对不同产地及施加不同肥料的新会茶枝柑果汁糖组分进行比较分析，共检测出3种主要可溶性糖（果糖、葡萄糖和蔗糖），是赋予茶枝柑果实甜度的主要成分[25]。其中蔗糖（84.40~88.12 mg/mL）含量最高。蔗糖是维持细胞代谢和细胞壁生物合成所必需的，并且可转化为淀粉以供储存和后续使用[26]。由图4可知，与南坦茶枝柑果汁相比，梅江茶枝柑果汁蔗糖显著高出3.92%（P<0.05），而南坦仙草柑果汁的果糖和葡萄糖显著降低12.96%和14.77%（P<0.05）。三种可溶性糖是果实营养成分和风味品质的重要组成部分，亦是影响果实成熟后品质的重要因素[26]。综上，核心产地有利于茶枝柑果汁蔗糖含量的积累，而施加中药肥料后不利于茶枝柑果汁果糖和葡萄糖含量的积累。
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图 4 异地种植及施肥对新会茶枝柑果汁主要可溶性糖含量的影响Figure 4. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the contents of major soluble sugars in Citrus reticulata 'Chachiensis' juice in Xinhui district2.4 异地种植及施肥对新会茶枝柑果实主要黄酮类化合物含量的影响
不同产地及施加不同肥料的新会茶枝柑果实（包括果皮、渣、籽和汁）中黄酮类化合物的组成和含量如图5所示。采用HPLC法共检测出8种黄酮类化合物，经标准品对照，分别为橙皮苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、香蜂草苷、川陈皮素、桔红素、橙皮素和甜橙黄酮。经统计，三种茶枝柑果实不同部位黄酮类成分含量存在显著性差异（P<0.05）。果皮部位（图5A）橙皮苷、柚皮苷、芸香柚皮苷等8种主要黄酮类化合物含量最高的均是梅江茶枝柑果皮，范围为111.99~41027.83 μg/g，较南坦茶枝柑果皮高出0.70%~43.35%；三种茶枝柑果皮中橙皮苷（30806.14~41027.83 μg/g）含量最高，其次是川陈皮素（5303.99~6422.68 μg/g）和桔红素（2812.36~3082.07 μg/g），为广陈皮的主要黄酮类成分[6]。与南坦茶枝柑果皮相比，南坦仙草柑果皮的橙皮苷含量显著高出9.67%（P<0.05），而桔红素含量正好相反，显著降低8.12%（P<0.05），二者的川陈皮素含量无显著性差异（P>0.05）。果渣部位（图5B）检测到7种黄酮类化合物，橙皮苷（15977.02~17071.41 μg/g）含量最高，其次是香蜂草苷（1008.25~1213.41 μg/g）和芸香柚皮苷（1046.86~1457.78 μg/g），可应用于活性成分的提取；与南坦茶枝柑果渣相比，梅江茶枝柑果渣的橙皮苷显著高出2.41%（P<0.05），而芸香柚皮苷显著降低28.19%（P<0.05）；南坦仙草柑果渣的橙皮苷、香蜂草苷和芸香柚皮苷含量显著低于南坦茶枝柑果渣的4.16%、16.26%和21.03%（P<0.05）。果籽部位（图5C）检测到6种黄酮类化合物，橙皮苷（90.48~305.77 μg/g）含量最高，其次是柚皮苷（97.57~104.67 μg/g）；梅江茶枝柑果籽的橙皮苷（305.77±3.32 μg/g）含量最高，其次是南坦仙草柑果籽（101.14±0.64 μg/g），含量最低的为南坦茶枝柑果籽（90.48±0.57 μg/g）；南坦茶枝柑果籽的柚皮苷（104.67±1.60 μg/g）含量最高，较梅江茶枝柑果籽显著高出7.28%（P<0.05）。果汁部位（图5D）只检测到4种黄酮类化合物，橙皮苷（535.78~870.26 μg/g）亦是含量最高；梅江茶枝柑果汁的橙皮苷（870.26±20.33 μg/g）含量最高，其次是南坦茶枝柑果汁（659.13±30.67 μg/g），含量最低的为南坦仙草柑果汁（535.78±16.83 μg/g）。
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图 5 异地种植及施肥对新会茶枝柑果皮（A）、渣（B）、籽（C）和汁（D）主要黄酮类化合物含量的影响Figure 5. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the contents of major flavonoids in the peel (A), pomace (B), seeds (C) and juice (D) of Citrus reticulata 'Chachiensis' in Xinhui district2.5 异地种植及施肥对新会茶枝柑果实总酚和总黄酮含量的影响
不同产地及施加不同肥料的新会茶枝柑果实（包括果皮、渣、籽和汁）总黄酮含量分析结果显示（图6A），三者的不同部位总黄酮含量趋势依次为果皮>果渣>果籽>果汁。与南坦茶枝柑果实不同部位相比，梅江茶枝柑果皮、渣、籽和汁总黄酮含量分别显著高出11.28%、11.91%、6.59%和9.11%（P<0.05），南坦仙草柑果皮和籽总黄酮含量分别显著高出5.38%和18.86%（P<0.05），而南坦仙草柑果渣总黄酮含量显著降低8.08%（P<0.05）。三种茶枝柑各个部位的总酚含量趋势与总黄酮一致（图6B），但含量各不同。与南坦茶枝柑果实不同部位相比，梅江茶枝柑果皮、渣和汁总酚含量分别显著高出20.17%、7.21%和28.82%（P<0.05），南坦仙草柑果皮、籽和汁总酚含量分别显著高出8.94%、3.52%和7.85%（P<0.05）。造成不同产地及施加不同肥料茶枝柑各部位总黄酮和总酚含量存在差异的原因可能是次生代谢物的合成和适当累积受到时间和空间的严格控制，并受到不断变化的自然环境影响，如：水、光、温度、土壤、化学物质等周围环境因素[3]，以及外界干扰（施肥等）。
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图 6 异地种植及施肥对新会茶枝柑果皮、渣、籽和汁中总黄酮（A）和总酚（B）含量的影响Figure 6. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the contents of the total flavonoids (A) and total phenols (B) in the peel, pomace, seeds and juice of Citrus reticulata 'Chachiensis' in Xinhui district2.6 异地种植及施肥对新会茶枝柑果实体外抗氧化能力的影响
采用ABTS和FRAP两种方法评估三种新会茶枝柑果皮、渣、籽和汁的抗氧化能力（图7）。结果发现三种茶枝柑果实不同部位的ABTS+自由基清除能力存在显著性差异（P<0.05）（图7A）。与南坦茶枝柑果实不同部位相比，梅江茶枝柑果皮、渣、籽和汁的ABTS+自由基清除能力显著高出9.00%、1.09%、10.37%和54.62%（P<0.05），南坦仙草柑果皮、籽和汁的ABTS+自由基清除能力显著高出7.92%、14.83%和43.42%（P<0.05），而南坦仙草柑果渣的ABTS+自由基清除能力显著降低1.27%（P<0.05）。此外，三者的FRAP铁离子还原能力亦存在显著性差异（P<0.05）（图7B）。与南坦茶枝柑果实不同部位相比，梅江茶枝柑果皮、渣、籽和汁的FRAP铁离子还原能力显著高出6.49%、9.88%、39.57%和37.68%（P<0.05），南坦仙草柑果皮、籽和汁的FRAP铁离子还原能力显著高出5.60%、53.08%和31.45%（P<0.05）。ABTS和FRAP实验表明不同产地及施加不同肥料茶枝柑抗氧化能力表现为果皮>果渣>果籽>果汁。陈玉婷等[12−13]研究发现茶枝柑ABTS阳离子自由基清除能力和玫瑰柑FRAP铁离子还原能力趋势均呈现果皮>果渣>果汁，说明柑橘果皮的抗氧化能力最强，与本研究结果一致。
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图 7 异地种植及施肥对新会茶枝柑果皮、渣、籽和汁抗氧化能力的影响Figure 7. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the antioxidant capacity in the peel, pomace, seed, and juice of Citrus reticulata 'Chachiensis' in Xinhui district2.7 茶枝柑果实抗氧化能力与活性物质相关性分析
柑橘类黄酮在调节氧化应激方面发挥着必不可少的作用，是日常摄入抗氧化补充剂的重要来源[27]。相关性分析揭示了抗坏血酸和黄酮类化合物的重要作用。抗氧化能力之间相关性的热图分析如图8所示。果皮、渣、籽和汁部位抗氧化活性（ABTS和FRAP）、总酚、总黄酮含量之间存在很强的正相关性（r>0.72，P<0.05）。果皮部位柚皮苷、橙皮苷、甜橙黄酮和果渣部位橙皮苷均与抗氧化活性（ABTS和FRAP）呈显著正相关（r>0.74，P<0.05）。据报道，橙皮苷、柚皮苷等黄酮类化合物能表现出细胞抗氧化能力，包括增强细胞活力，抑制脂质过氧化，促进细胞抗氧化酶的表达[27]。而抗坏血酸（r=0.69和r=0.71）与果汁部位抗氧化活性（ABTS和FRAP）呈显著正相关（P<0.05），表明抗坏血酸在果汁抗氧化活性中起着重要作用。然而，果汁部位主要黄酮类化合物与抗氧化能力之间没有检测到显著的相关性，与GUO等[20]研究结果一致。此外，抗氧化评价方法（ABTS和FRAP）两两之间均呈显著正相关（P<0.05），说明不同产地及施加不同肥料的茶枝柑果皮、渣、籽和汁提取物铁离子还原能力和自由基清除能力的效果基本一致。
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图 8 新会茶枝柑果皮、渣、籽和汁抗氧化能力与活性物质相关性分析注：*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。Figure 8. Correlation analysis of the antioxidant capacity and active substances in the peel, pomace, seed, and juice of Citrus reticulata 'Chachiensis' in Xinhui district2.8 异地种植及施肥对茶枝柑果实聚类分析的影响
对茶枝柑果实的36项品质指标参数进行标准化处理，用于构建三种新会茶枝柑果实之间的层次聚类热图，如图9所示。可以看出，层次聚类热图将三种新会茶枝柑果实分为两个类群，梅江茶枝柑果实和南坦仙草柑果实为第一类，南坦茶枝柑果实为第二类，由此可见南坦茶枝柑果实与其他两种茶枝柑果实差异较为明显。热图红色代表含量高，绿色代表含量低。相比之下，梅江茶枝柑果实测试指标整体呈橙红色，说明整体含量偏高，特别是果汁部位柠檬酸、琥珀酸、草酸、TSS、果糖、葡萄糖、蔗糖以及果皮、渣和汁部位总酚、总黄酮、ABTS值和FRAP值等指标最高，抗氧化能力最强；南坦茶枝柑果实测试指标大部分呈浅绿色，说明整体含量偏低，而南坦茶枝柑果汁中乳酸、TA、出汁率指标颜色最红，说明含量最高；南坦仙草柑果实单果重和横径指标颜色最红，果形最大，果汁部位抗坏血酸和固酸比以及果籽部位总酚和总黄酮指标颜色最红，含量最高。综上，新会核心产地栽培的茶枝柑果实品质较为优异，而在非核心产地施加中药肥料对茶枝柑果实有积极的促进作用。
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图 9 三种新会茶枝柑果实聚类分析热图Figure 9. Heat map for cluster analysis of three types of Citrus reticulata 'Chachiensis' fruits in Xinhui district3. 结论
本研究比较了产地及肥料对新会茶枝柑果实的感官指标、果汁特性、营养成分、活性物质以及抗氧化特性等品质指标的影响。结果表明，与南坦茶枝柑果汁相比，梅江茶枝柑果汁的固酸比、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸和蔗糖含量显著高出9.92%、9.38%、5.81%、3.50%和3.92%（P<0.05），南坦仙草柑果汁的固酸比、抗坏血酸含量显著高出9.98%、8.17%（P<0.05）；果汁中抗坏血酸、总酚、总黄酮对抗氧化能力有显著贡献。梅江茶枝柑果皮的橙皮苷、柚皮苷、甜橙黄酮、总黄酮和总酚含量最高，抗氧化能力最强，南坦仙草柑果皮含量次之，南坦茶枝柑果皮含量最低；果皮中橙皮苷、柚皮苷、甜橙黄酮、总黄酮、总酚对抗氧化能力有显著贡献。聚类分析将三种新会茶枝柑果实划分为两大类，梅江茶枝柑果实与南坦仙草柑果实归为一类。综上，位于核心产地的梅江茶枝柑果实综合品质最优，非核心产地施加中药肥料的南坦仙草柑果皮活性物质含量高于南坦茶枝柑果皮，说明施加中药肥料对茶枝柑果皮品质有积极促进作用，但是该中药肥料对于果实品质提升的机制有待进一步研究。本研究结果明确了异地种植及施肥对新会茶枝柑果实品质特性的差异，可为新会茶枝柑果汁加工利用以及果渣活性物质的提取提供参考依据，对于新会茶枝柑果实品质调控及综合开发利用具有重要意义。
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图 1 异地种植及施肥对新会茶枝柑果实外观形态的影响
Figure 1. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the appearance and morphology of Citrus reticulata 'Chachiensis' fruits in Xinhui district
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图 3 异地种植及施肥对新会茶枝柑果汁主要有机酸含量的影响
Figure 3. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the contents of major organic acids in Citrus reticulata 'Chachiensis' juice in Xinhui district
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图 4 异地种植及施肥对新会茶枝柑果汁主要可溶性糖含量的影响
Figure 4. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the contents of major soluble sugars in Citrus reticulata 'Chachiensis' juice in Xinhui district
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图 5 异地种植及施肥对新会茶枝柑果皮（A）、渣（B）、籽（C）和汁（D）主要黄酮类化合物含量的影响
Figure 5. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the contents of major flavonoids in the peel (A), pomace (B), seeds (C) and juice (D) of Citrus reticulata 'Chachiensis' in Xinhui district
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图 6 异地种植及施肥对新会茶枝柑果皮、渣、籽和汁中总黄酮（A）和总酚（B）含量的影响
Figure 6. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the contents of the total flavonoids (A) and total phenols (B) in the peel, pomace, seeds and juice of Citrus reticulata 'Chachiensis' in Xinhui district
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图 7 异地种植及施肥对新会茶枝柑果皮、渣、籽和汁抗氧化能力的影响
Figure 7. Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the antioxidant capacity in the peel, pomace, seed, and juice of Citrus reticulata 'Chachiensis' in Xinhui district
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图 8 新会茶枝柑果皮、渣、籽和汁抗氧化能力与活性物质相关性分析
注：*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。
Figure 8. Correlation analysis of the antioxidant capacity and active substances in the peel, pomace, seed, and juice of Citrus reticulata 'Chachiensis' in Xinhui district
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图 9 三种新会茶枝柑果实聚类分析热图
Figure 9. Heat map for cluster analysis of three types of Citrus reticulata 'Chachiensis' fruits in Xinhui district
表 1 茶枝柑样品信息
Table 1 Sample information of Citrus reticulata 'Chachiensis'
类型 不同产地 施加肥料 肥料使用情况 采摘时间 梅江茶枝柑（MJ） 新会梅江村 核心产区 普通叶面肥 5月份幼果发育期开始，喷施钙镁多、硼尔美、磷酸二氢钾、解易达、优尼可等柑橘常用叶面肥，每次间隔1~2周 2023年12月 南坦茶枝柑（NT） 新会南坦村 非核心产区 普通叶面肥 5月份幼果发育期开始，喷施钙镁多、硼尔美、磷酸二氢钾、解易达、优尼可等柑橘常用叶面肥，每次间隔1~2周 2023年12月 南坦仙草柑（XC） 新会南坦村 非核心产区 中药提取发酵液 5月份幼果发育期开始，喷施中药（甘草、牛大力、黄芪等）提取发酵液，每次间隔1周 2023年12月 
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表 2 8种有机酸类化合物的标准曲线
Table 2 Standard curves for eight organic acid compounds
化合物 标准曲线 决定系数R2 葡萄糖醛酸 y=267440x+261.52 0.9999 草酸 y=5×106x+725.41 0.9999 酒石酸 y=1×106x−8425.7 0.9988 苹果酸 y=446902x+9536.6 0.9983 柠檬酸 y=556822x+3534.6 0.9999 琥珀酸 y=304926x+2891.9 0.9995 乳酸 y=312101x−2533.9 0.9998 抗坏血酸 y=3×107x−27247 0.9999
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表 3 3种糖类化合物的标准曲线
Table 3 Standard curves for three carbohydrate compounds
化合物 标准曲线 决定系数R2 果糖 y=358315x+4702.9 0.9992 葡萄糖 y=297538x−64488 0.9982 蔗糖 y=342030x+36365 0.9995
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表 4 8种黄酮类化合物的标准曲线
Table 4 Standard curves for eight flavonoids
化合物 标准曲线 决定系数R2 芸香柚皮苷 y=3×107x−2709 0.9999 柚皮苷 y=2×107x−290.92 0.9999 橙皮苷 y=2×107x+146950 0.9999 香蜂草苷 y=2×107x+741.48 0.9999 橙皮素 y=4×107x+1286.2 0.9999 甜橙黄酮 y=2×107x−2258.7 0.9999 川陈皮素 y=3×107x−23116 0.9999 桔红素 y=4×107x−35537 0.9999
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表 5 异地种植及施肥对新会茶枝柑果实理化性状的影响
Table 5 Effects of ex-situ cultivation and fertilization on the physicochemical traits of Citrus reticulata 'Chachiensis' fruits in Xinhui district
类型 单果重
（g）横径
（mm）纵径
（mm）果形指数 鲜果皮厚度
（mm）果籽数量
（个）可食率
（%）MJ 157.61±17.65a 70.88±3.34ab 59.91±2.92a 0.85±0.05a 2.19±0.17a 17±6a 74.55±1.89a NT 137.33±19.40b 68.63±4.87b 54.89±3.07b 0.80±0.05b 2.25±0.43a 25±10a 74.76±1.57a XC 174.68±14.60a 74.22±2.68a 59.10±2.53a 0.80±0.03b 2.36±0.20a 19±8a 73.88±1.11a 注：同一列不同小写字母表示组间存在显著性差异（P<0.05）。
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