Research Progress on Enzymatic Preparation and Functional Properties of Bioactive Peptides in Hairtail
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摘要: 带鱼是我国重要的经济鱼种，富含蛋白质等营养成分，是制备生物活性肽的优质来源。本文综述了带鱼活性肽的酶解法制备工艺及相关辅助方法，酶解液的抗氧化活性的研究较为广泛，碱性和木瓜蛋白酶是制备带鱼活性肽常用酶种，但对于酶解液中哪些肽序发挥作用及其作用机制的研究相对较少；本文阐述了带鱼活性肽抗氧化、降血压、抗菌、降血糖、抗疲劳、抗贫血、动物生长调节等活性的研究现状，总结了带鱼活性肽的活性评价方法、主要影响因素及其作用效果，但目前关于带鱼活性肽的研究多停留在体外活性层面，体内活性验证和分子层面的研究是未来的重要方向；本文还总结和展望了带鱼活性肽研究中的问题，以期为带鱼活性肽的开发和应用提供参考。带鱼源生物活性肽制备简便且活性丰富，在食品工业、保健品以及医药等领域具有广阔的应用前景。Abstract: Hairtail is a significant economic fish species in China, rich in protein and other nutrients, making it an excellent source of bioactive peptides. This review provides the enzymatic hydrolysis processes and auxiliary methods used for preparing hairtail bioactive peptides. The antioxidative activity of enzymatic hydrolysates is extensively studied, with alkaline protease and papain being the most commonly used enzymes. However, research on the specific peptide sequences responsible for bioactivity and their underlying mechanisms remains limited. This review discusses the current state of research on the bioactivities of hairtail peptides, including antioxidative, antihypertensive, antibacterial, antidiabetic, antifatigue, anti-anemia, and growth regulation activities. The evaluation methods, key influencing factors, and effectiveness of these bioactivities are summarized. Most existing studies on hairtail bioactive peptides focus on in vitro activities, highlighting the need for in vivo activity verification and molecular-level research as important future directions. This review also addresses current issues in hairtail bioactive peptide research, providing insights for their development and application. The simple preparation process and diverse bioactivity of hairtail-derived bioactive peptides present broad application prospects in the food industry, health products, and pharmaceuticals.
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Keywords:
- hairtail /
- bioactive peptides /
- functional properties
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带鱼（Trichiurus lepturu）又名刀鱼，牙带，鳞刀鱼等，是我国沿海水域中一种具有重要经济价值的鱼类[1]，2023年中国渔业统计年鉴数据显示，2022年我国带鱼捕捞产量达到90.3万吨[2]。带鱼富含丰富的多不饱和脂肪酸、多种维生素和矿物质，尤其富含高质量的蛋白质，涵盖了人体所需的各类必需氨基酸[3]。除了直接食用外，带鱼还被加工成如鱼糜、罐头、鱼油等产品，在加工过程中会产生占总带鱼重量约40%的内脏、鱼骨等副产物[4]。目前，带鱼及其副产物中的蛋白质资源尚未得到有效利用，因此以带鱼及其副产物为原料制备生物活性肽，将其转化为高附加值的产品，提高其生物利用率，是带鱼资源高值高质化利用的重要研究和产业应用方向。
近年来，在带鱼中发现了多种具有生物活性的物质，包括带鱼糖蛋白[5]和带鱼多肽等，具有抗疲劳、抗氧化[6]、降血糖[7]、降血压[8]、抗菌[9]等多种生理功能。其中带鱼生物活性肽研究最为广泛。生物活性肽（Bioactive Peptides）是由氨基酸组成的具有特定生理功能的短肽链，通常在2~20个氨基酸之间，其在生物体内发挥调节生理过程、参与细胞信号传导、调节免疫系统等多种功能[10]。生物活性肽易于消化吸收，能够直接参与人体蛋白质的合成[11]。同时，活性肽在体内还能与矿物质和金属离子形成螯合物，提高微量元素的吸收利用率[12]。截止2023年，“BIOPEP”数据库已收录4746种生物活性肽[13]，生物活性肽来源于天然产物，毒副作用较小，在生物学和医学等领域受到广泛关注，具有极大的应用潜力。
本文介绍了带鱼生物活性肽的制备和功能特性，总结了带鱼生物活性肽的研究现状，并展望了带鱼生物活性肽的发展方向，以期为带鱼中蛋白资源的开发利用提供重要参考。
1. 酶解法制备带鱼活性肽
生物活性肽的制备方法中，酶解法因其成本低、效率高、操作简单且具有较高的安全性等特点，成为制备带鱼生物活性肽最常用的方法[14]。酶解法是以带鱼及其副产物为原料制备抗氧化肽、抗菌肽和生长调节肽等活性肽的主要方法。而且原料的来源也比较丰富，如带鱼、带鱼肉、带鱼鱼糜、带鱼鱼糜洗涤水[15]、带鱼脊骨等。
蛋白酶是酶解法制备带鱼生物活性肽的主要工具，包括碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶等，不同蛋白酶的酶解位点不同，产生的多肽片段可能具有不同的功能活性[16]。以带鱼及其副产物为原料，利用酶解法制备生物活性肽的过程中，不同蛋白酶所得到的生物活性肽种类差异显著。许多抗氧化肽通常由碱性蛋白酶水解产生，如JIN等[17]以带鱼为原料，采用碱性蛋白酶水解得到了含有较高比例疏水性氨基酸的抗氧化肽，这可能是因为疏水性氨基酸在清除自由基方面发挥着重要作用[18]，而碱性蛋白酶的酶切位点主要为含有疏水性氨基酸的肽键，因此通常选择碱性蛋白酶进行抗氧化肽的制备。
采用单一酶水解法可能会造成水解程度不足，进而影响生物活性肽的产量、稳定性及活性。而复合酶解法能够实现更为深度的蛋白质水解，产生更多的肽段。目前，带鱼制备生物活性肽的研究中，有超过三分之一的活性肽是通过复合蛋白酶制备而得到的。例如，丁冬各[19]分别采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解带鱼鱼肉制备抗氧化肽，DPPH自由基清除率分别为53%和48%，采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶解制得产物的DPPH自由基清除率提高至61%。
酶解法制备带鱼活性肽过程中，酶解条件也是重要的影响因素。一般采用正交试验或者响应面试验进行酶解条件的优化，而酶解时间（2~12.1 h）、温度（35~60 ℃）、pH（2~8.5）、加酶量以及料液比是常用到的优化因素（表1）。
表 1 带鱼活性肽的制备条件Table 1. Preparation conditions of active peptides from hairtail序号 活性 来源 蛋白酶种类 酶解条件 水解度 文献 时间（h） 温度（℃） pH 加酶量 料液比（g/mL） 1 抗氧化 带鱼 碱性蛋白酶 4 55 7.5 0.6% 1:2 / [17] 2 带鱼 碱性蛋白酶 2 50 9.0 4% 1:5 26.3% [19] 风味蛋白酶 3.5 45 7.0 4% 3 带鱼 碱性蛋白酶 3.8 48 / 1.65% 1:3 / [37] 4 5.5 50 / 1.6% 1:2 / 5 2 50 / 0.6% 1:20 / 6 3 50 / 3.2% 1:3 / 7 带鱼肉 木瓜蛋白酶 5 50 7.0 2% 1:5 / [38] 碱性蛋白酶 6 50 8.5 2% 8 带鱼鱼糜 中性蛋白酶 12.1 44.74 / 1858.85 U/g / / [40−41] 9 生长调节 带鱼鱼糜 木瓜蛋白酶 8 35~40 6.5 20000 U/g 1:10 / [30] 10 带鱼副产物 胃蛋白酶 12 60 6.5 25000 U/g 1:8 / [44] 11 带鱼鱼糜 木瓜蛋白酶 8 40 6.5 0.1% 1:3 / [45] 12 抗菌 带鱼副产物 风味蛋白酶+动物复合酶 / 40 7.0 6×103 IU/100 mL 41:1000 / [4] 13 带鱼 木瓜蛋白酶+胃蛋白酶 4.2 36.5 4.4 0.2% 1:10 32.64% [9] 14 带鱼 胃蛋白酶 / 35 3.5 0.2% 1:10 / [16] 木瓜蛋白酶 40 6.5 0.05% 15 带鱼 碱性蛋白酶 9 45 8.0 22000 U/g / 52.22% [32] 木瓜蛋白酶 8 45 6.0 22000 U/g / 16 抗疲劳 带鱼鱼糜 中性蛋白酶 / 44.7 6.5 / 1:4 / [29] 17 带鱼鱼糜 木瓜蛋白酶 8 45 6.5 / 1:10 / [59] 18 抗贫血 带鱼 碱性蛋白酶 8 40 7.0 0.1% 1:3 / [31] 19 带鱼鱼糜 木瓜蛋白酶 8 40 7.0 / 1:5 / [33] 20 降血糖 带鱼 风味蛋白酶 4.5 45 7.0 1.6% 1:3 / [7] 21 降血压 带鱼脊骨 酸性蛋白酶 3 40 3.0 1% 1:2 / [8] 22 降尿酸 带鱼肉 碱性蛋白酶 5 49 / 5000 U/g 1:3 21.9% [22] 23 降血脂 带鱼副产物 中性蛋白酶+风味蛋白酶 / 50 7.0 0.1% 1:1 / [65] 24 抗抑郁 冻干带鱼 胃蛋白酶 4 37 2.0 2400 U/g 1:20 / [66] 胰蛋白酶 4 37 7.5 300 U/g 此外，为了促进蛋白质酶解进程及提高酶解产物的活性，微波和超声波等辅助技术在酶解过程中得到了广泛的关注与应用。微波辅助酶解具有高效、反应时间短、产物得率高等优点[20]，HUANG等[21]发现与水浴酶解相比，微波辅助酶解显著缩短了蓝点马鲛蛋白酶解产物的制备时间，并显著提高了其总抗氧化能力。超声波是一种具有能量和波动的双重机械波，将超声波与酶解反应结合，可以提高酶解反应的速度从而缩短酶解时间，在带鱼活性肽制备中得到广泛应用。马洁等[22]的研究结果显示，带鱼经过20 min的超声辅助酶解后，酶解产物的水解度、黄嘌呤氧化酶抑制率以及肌肽和鹅肌肽的含量均显著升高，这可能归因于超声波的空化作用，其能够破坏细胞结构，促使胞内物质加速释放出来。
2. 带鱼金属螯合肽的制备
金属元素在维持人体生命活动中扮演着至关重要的角色。金属螯合肽的初步制备主要是通过物理、化学等方法将蛋白分解成多肽，而酶解法因条件温和、安全性高、成本低等优点，成为金属螯合肽初期制备的主要方法[23]。肽的氨基酸残基提供了羧基、氨基和酮基等配体位点，使其能够与金属离子如钙[24]、铁[25]、锌[26]等形成金属离子螯合肽。金属离子螯合肽以其安全稳定、易吸收和高生物利用度等优势而备受关注[27]。目前，带鱼源的金属离子螯合肽主要以亚铁离子螯合肽为主，常采用单酶-螯合法的酶解方式，并通常以木瓜蛋白酶为主要水解酶，制备了具有抑菌[4]、抗贫血[28]、抗疲劳[29]和生长调节[30]等活性的金属螯合肽。斯兴开等[31]以带鱼为原料，FeCl2为金属离子来源，采用木瓜蛋白酶水解制备了带鱼多肽亚铁螯合物Fe-FPH，铁含量达60.18 g/kg，研究结果表明，该促铁吸收肽效果优于FeSO4。肽的结构特征对螯合肽的形成有重要影响，林慧敏[32]利用RP-HPLC分离得到了抑菌能力最强的肽段HYD，并利用红外光谱结合1H-NMR推导出小肽亚铁螯合物的结合机制为：三肽上的两个-NH-和一个-NH2与Fe2+发生配位，两个三肽末端-COOH上的-C=O及-OH与Fe2+发生配位，形成不稳定结构的螯合物。袁宁等[33]通过红外光谱发现Fe2+与带鱼蛋白肽的螯合主要位点是羧酸酯基团，该活性肽中如谷氨酸、甘氨酸和组氨酸含量高。可以得出，不同的带鱼活性肽中氨基酸组成和结构不同，导致亚铁离子的螯合位置不一。
3. 带鱼活性肽的功能特性
目前，已从带鱼及其副产物中提取并鉴定出多种生物活性肽，涵盖了抗氧化、生长调节、抗菌、降血糖、降血压等多种活性。带鱼生物活性肽的功能活性、肽序、分子量及活性评价见表2。
表 2 带鱼活性肽的活性、理化性质及活性评价Table 2. Activity, physicochemical properties and evaluation of the activity of active peptides from hairtail活性 来源 肽序或分子量 活性评价 文献 抗氧化 带鱼 337~6007 Da DPPH自由基清除率46.15%；
OH自由基清除率75.65%；
O2−自由基清除率82.5%[17] 带鱼 / DPPH自由基清除率60.72%±1.05%；
OH自由基清除率58.17%±1.53%[19] 带鱼 / DPPH自由基清除率60.13%；
OH自由基清除率58.73%；
ABTS+自由基清除率69.58%；
O2−自由基清除率47.31%[37] 带鱼肉 KA；217.1 Da DPPH自由基清除率53.45%±1.05%；
OH自由基清除率48.76%±1.64%[38] AKG；274.1 Da IYG；351.0 Da 带鱼鱼糜 DLYANTVLSGGTTMYPGIADR；
2214.0627 Da总抗氧化能力29.7085±0.9226 U/mL [40−41] 带鱼鱼糜清洗水 <4 kDa 抗氧化能力1.59 mmol/L FeSO4当量 [15] 动物生长调节 带鱼鱼糜 / 成活率、增重率、特定生长率提高；
肌肉组织弹性增强，硬度加大，品质增强[30] 带鱼副产物 / 成活率、增重率、特定生长率和肌肉指标值提高 [44] 带鱼鱼糜 / 脂肪酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶和丙二醛活性升高；
肠道菌群中乳酸杆菌和芽孢杆菌增加[45] 抑菌 带鱼副产物 <2 kDa 大肠杆菌的抑菌圈直径为14.1 mm；
金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为13.8 mm[4] 带鱼 / 对大肠杆菌抑菌率为78.56% [9] 带鱼 HYD；<3 kDa 对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为0.20 mg/mL；
最小杀菌浓度为0.26 mg/mL[32] 抗疲劳 带鱼鱼糜 / 小鼠力竭游泳时间延长 [29] 带鱼鱼糜 / 大鼠力竭游泳时间延长 [59] 抗贫血 带鱼 / 血红蛋白含量、平均红细胞体积、血红蛋白分布
宽度和铁蛋白浓度增加[31] 带鱼鱼糜 / 贫血大鼠血红蛋白含量和红细胞数升高 [33] 降血糖 带鱼 / DPP-IV抑制率为96.97% [7] 降血压 带鱼脊骨 <3000 u ACE抑制率91.56% [8] 降尿酸 带鱼肉 <1 kDa 黄嘌呤氧化酶抑制率52.03% [22] 降血脂 带鱼副产物 / 抑制高血脂大鼠的TC、TG、HDL升高 [65] 抗抑郁 冻干带鱼 LPNSLYQQ、FEVFW、FADAME、LPNSLYQK MAO-A抑制活性为71.97%±0.86% [66] 3.1 抗氧化活性
氧化应激（OS）是指人体内氧化与抗氧化失衡的状态，通常是因为自身产生的抗氧化剂无法有效清除生成的活性自由基所致。这导致了ROS的积累，引发细胞代谢的氧化应激，破坏了人体的代谢平衡，进而加速了一些慢性疾病的发展，如心脏病、胃肠炎症、关节炎等[34]。带鱼抗氧化肽通过清除机体内的ROS和自由基，干扰氧化链式反应，发挥了抗氧化的作用[35]。带鱼抗氧化肽的活性与其分子量大小和序列中氨基酸组成存在一定的相关性[36]。
分子量较低的带鱼抗氧化肽更容易穿过肠道屏障，被人体吸收，因此更有效地发挥抗氧化作用。厉望[37]分析了制备的带鱼抗氧化酶解产物在不同抗氧化体系中的抗氧化能力，结果显示其对DPPH自由基、OH自由基、ABTS+自由基和O2−自由基均表现出清除效果，其中小于3 kDa的组分具有最强的抗氧化活性，进一步釆用凝胶层析Sephadex G-75分离该组分发现带鱼抗氧化多肽分子量大约为552 Da。丁东各[19]研究了带鱼酶解液中不同组分的抗氧化能力，发现分子量小于1 kDa的组分表现出最佳的抗氧化活性。
带鱼抗氧化肽的氨基酸组成对其活性有一定的影响。YANG等[38]从带鱼肌肉蛋白水解液中纯化得到的8条抗氧化肽，其中疏水性氨基酸含量高的肽段表现出较强的清除DPPH自由基、OH自由基和ABTS+自由基的能力。这可能是由于疏水性氨基酸有利于多肽与脂溶性ROS的结合，从而终止脂质过氧化作用，同时疏水性高的抗氧化肽可能更容易穿过细胞膜进入细胞内部发挥抗氧化作用[39]。WANG等[40−41]对带鱼鱼糜制备的抗氧化肽进行氨基酸组成分析后发现谷氨酸、天冬氨酸和精氨酸含量较高，带负电的氨基酸谷氨酸和天冬氨酸可能因其过剩的电子和作为氢供体的能力而具有抗氧化效应，精氨酸可能通过胍基基团向自由基提供电子并与自由基反应，从而终止自由基链反应而显示抗氧化能力。综上所述，带鱼抗氧化肽大多是小于1 kDa的小肽，且大多含有谷氨酸、天冬氨酸和精氨酸等极性氨基酸，极性带电氨基酸可以吸引带有异性电荷的自由基和金属离子，赋予带鱼活性肽抗氧化能力[42]。虽然有很多对于带鱼通过酶解制备抗氧化肽的研究，但大多数未进行多肽的组成、结构分析，对带鱼抗氧化肽的分离纯化、活性筛选及序列鉴定，是今后重点研究方向。
在实际生产中，投入更低的成本能够获得更高的产量，增加经济效益。在带鱼抗氧化肽的研究中，厉望[37]制备的抗氧化肽被证实对四种自由基均有较高的抑制作用，且制备条件简单、省时、快捷，未来在对多肽进行进一步的结构鉴定，探索氨基酸序列和空间结构对活性的影响后，具有开发制备抗氧化功能产品的潜力。
3.2 生长调节活性
带鱼活性肽能够与亚铁离子形成金属离子螯合肽，其在提高机体繁殖和生长能力、增强抗病免疫力，以及对生理代谢进行调节等方面发挥着重要作用[43]。ZHANG等[44]的研究表明，在饲料中添加适量的带鱼亚铁螯合肽能够提高克氏原螯虾的生长性能和其他非特异性免疫酶活性，并且增强了克氏原螯虾对病原体、重金属、氮化合物和农药等外部污染物的防御能力。梁营芳等[30]发现添加带鱼亚铁螯合肽的饲料显著提高了凡纳滨对虾的成活率、增重率和特定生长率，同时虾肌肉组织在弹性、硬度等品质方面得到提升，免疫相关指标也得到提高。LIN等[45]通过活体成像评估了异硫氰酸荧光素标记的带鱼亚铁螯合肽在泥鳅体内的分布，同时通过高通量测序检测了肠道微生物群落的变化，表明带鱼亚铁螯合肽提高了泥鳅的非特异性免疫水平，并改善其肠道健康。带鱼活性肽作为饲料添加剂改善动物的生理机能，这可能与活性肽在机体内的特殊转运和吸收的机制有关，酶解肽和金属螯合物一并吸收到特定的靶器官，增强机体的非特异性免疫能力，也提高了生物体对营养物质的利用效率，改善动物的生长性能。带鱼活性肽与亚铁离子的结合形成的金属离子螯合肽不仅为水产养殖和动物营养学领域提供了新的思路和方法，也为提升养殖业效率和动物整体健康水平提供了新的解决方案。
3.3 抗菌活性
抗菌肽有抗细菌[46]、抗真菌[47]和抗病毒[48]等多种类型，一般具有两亲性和富含半胱氨酸的特点，主要通过膜渗透、非膜靶向和免疫调节等机制来发挥作用[49]。目前，抗细菌肽研究较为深入，包括其制备工艺、活性影响因素以及对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等的抑制机理。何定芬等[9]以大肠杆菌为指示菌优化了舟山小带鱼抗菌肽的制备工艺，对大肠杆菌的抑菌率达到44.48%，经进一步分离纯化后抑菌率上升至78.56%。李远慧等[16]探究了温度、pH、胰蛋白酶、β-内酰胺酶、反复冻融和金属离子对带鱼蛋白抗菌肽抑菌效果的影响，结果显示带鱼蛋白抗菌肽在热稳定方面表现出较强的抗性，在pH为4.8时抑菌活性最高，抗菌肽的抗菌效力随着冻融次数的增多而下降，对Zn2+、Fe2+和Fe3+表现出较低的耐受性。
带鱼抗细菌肽的抑制机制有多种假设。霍健聪[4]研究了带鱼活性肽亚铁螯合物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的影响，并分析了潜在的抑菌机理，其中一种假设是通过作用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌外膜表面形成内外连通的孔道，导致菌体细胞壁破裂，内容物外泄，最终导致细胞死亡；另一种机制是多肽亚铁螯合物与微生物竞争性结合铁元素，进而影响了微生物的正常生长繁殖。林慧敏[32]分析了带鱼抗菌肽亚铁螯合物的抑菌活性，发现分子量小于3 kDa的组分表现出最强的抑菌活性，对金黄色葡萄球菌的抑制率为91.3%，主要作用于金黄色葡萄球菌在对数生长期的菌体分裂。综上所述，带鱼来源的抗菌肽大多为分子量小于3 kDa的小肽，且大多含有非极性、疏水性氨基酸，李海蓝等[50]提出鱼源抗菌肽的抗菌机制大多是对细胞膜的作用，具有疏水氨基酸的肽段能通过典型的环孔模型与细胞膜作用而发挥抑菌作用。目前，对于带鱼抗菌肽研究仅停留在抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌方面，而对于真菌，病毒的研究较少，这就需要进一步研究带鱼活性肽的其他抗菌活性，并研究其结构与活性的关系和作用机制，为抗菌肽分子的改造和设计提供足够的理论依据。
3.4 抗疲劳活性
疲劳是一种常见的身体状况，包括身体疲劳和精神疲劳。疲劳可由剧烈的体育锻炼或脑力劳动引起，并与贫血、甲状腺功能障碍、早衰和抑郁等疾病有关[51]。目前关于机体疲劳的假说有自由基理论[52]、代谢物质堆积理论[53]和能源耗尽理论[54]等。抗疲劳肽被认为是延缓或消除疲劳的有效途径，其主要机制包括消除疲劳物质的积累，提高运动耐力，并促进机体迅速恢复体力[55]。此外，抗疲劳肽还能通过调节人体炎症反应，参与并调节能量代谢，调节神经递质等途径来缓解疲劳[56]。目前，对带鱼抗疲劳肽的主要评价方式为实验鼠运动实验结合抗氧化指标。WANG等[29]通过力竭游泳实验来评估带鱼水解液的抗疲劳性能，结果显示带鱼抗疲劳肽的补充延长了小鼠的力竭负重游泳时间，提高了肝糖原和肌糖原水平，降低了乳酸、尿素氮和肌酸激酶水平，也降低了丙二醛的含量。同时对小鼠粪便短链脂肪酸分析表明，肠道短链脂肪酸的增加可能有助于小鼠的抗疲劳作用，这可能与短链脂肪酸修复肠道损伤[57]、参与器官能量代谢[58]有关。HUANG等[59]利用带鱼鱼糜酶解液螯合亚铁离子制备了带鱼抗疲劳肽，通过大鼠强制游泳实验后发现饲喂带鱼抗疲劳肽的大鼠有更高的血红蛋白再生效率，更长的力竭游泳时间和更高的超氧化物歧化酶活性，血乳酸和丙二醛含量也更低。以上研究说明带鱼抗疲劳肽的作用机制是多方面的，可能涉及到能量代谢、肌肉疲劳、抗氧化和调节肠道环境等多个方面的调节作用。
3.5 抗贫血活性
缺铁性贫血（iron deficiency anemia）是指由于体内合成血红蛋白所需的贮存铁不足或利用障碍，导致血红蛋白合成减少，进而形成的一种小细胞低色素性贫血。该疾病遍及全球，是发达国家中唯一常见的营养缺乏症，也是发展中国家中最为普遍的贫血类型。患病率在发展中国家、经济不发达地区、以及婴幼儿和育龄妇女中尤为显著[60]。目前的研究表明利用带鱼生物活性肽作为铁螯合剂制备螯合物的方法，可以提高铁的生物利用度[61−62]。袁宁等[33]以带鱼蛋白酶解肽作为铁螯合剂，以FeCl2为铁源制备出带鱼蛋白亚铁螯合肽Fe（II）-FPH，以缺铁性贫血大鼠为对象来研究Fe（II）-FPH的抗贫血功效，并对Fe（II）-FPH进行了急性毒性实验、小鼠骨髓微核实验、小鼠精子畸形试验和体外哺乳动物细胞染色体畸变试验，证实带鱼蛋白亚铁螯合肽具有抗贫血的功能，且食品安全性良好。LIN等[28]进一步研究了Fe（II）-FPH其在贫血模型大鼠中的抗贫血机制，发现该产物对大鼠的血红蛋白、平均红细胞体积、血红蛋白分布宽度和铁蛋白浓度有积极影响，并能改善大鼠肠道菌群和炎症反应，促进肠道内铁的溶解和释放并增加肠道上皮细胞对铁的吸收。活性肽的氨基酸组成是其能否与金属螯合的重要因素之一，据报道某些氨基酸如谷氨酸、甘氨酸和组氨酸与Fe2+的亲和力明显高于其他氨基酸[63]，在带鱼活性肽亚铁螯合物中，谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸和组氨酸这四种氨基酸的含量居多，这可能是带鱼活性肽与Fe2+的螯合能力较高，具有较好的抗贫血功能的原因之一。
3.6 其他活性
除上述提到的活性外，带鱼降血压肽、降血糖肽、降尿酸肽、降血脂肽和抗抑郁肽等也得到了一定的研究。王金玲等[8,64]以酸性蛋白酶水解带鱼脊骨获得了具有降血压活性的酶解液，其中分子量小于3 kDa的组分表现出最强的降血压活性，其IC50为0.727 mg/mL，该带鱼脊骨ACE抑制肽降低了原发性高血压大鼠的血压，展现出了体内降血压效果。靳挺等[7]利用风味蛋白酶水解带鱼蛋白制备了具有降血糖活性的带鱼二肽基肽酶IV（DPP-IV）抑制肽。马洁等[22]采用超声辅助酶法制备具有降尿酸活性的带鱼活性肽，黄嘌呤氧化酶抑制率为52.03%、鹅肌肽和肌肽含量为0.66%和0.15%。谢超等[65]利用中性蛋白酶和风味蛋白酶混合水解带鱼副产物得到氨基态氮含量为1.5 g/L的水解物，该水解物具有降低大鼠总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇的作用。杨小雪[66]通过体外模拟胃肠道消化得到带鱼单胺氧化酶A（MAO-A）抑制肽，利用分子对接技术筛选得到VFEVFW、LPNSLYQQ、LPNSLYQK和FADAME四条多肽，通过构建SH-SY5Y细胞应激模型，发现这四条多肽可以缓解地塞米松诱导引起的细胞损伤，同时上调了与神经可塑性相关以及抑郁相关的蛋白BDNF/CREB/Bcl-2 mRNA的表达水平，表现出潜在的抗抑郁作用。
4. 结语和展望
本文综述了带鱼活性肽的制备和功能活性研究的最新进展，着重介绍了其酶解制备工艺及其生物活性（抗氧化活性、生长调节活性、抗菌活性和抗疲劳活性等），为后续带鱼活性肽研究开发提供参考。我国丰富的带鱼资源为带鱼活性肽的开发和研究提供了广阔的空间。对带鱼活性肽功能活性的深入研究，不仅可以提高带鱼资源的综合利用率，同时也为预防和治疗某些疾病提供了科学依据，具有开发为功能性食品的潜力。通过不断拓展研究领域和采用创新技术手段，可以更全面、深入地认识带鱼活性肽的潜在价值，为其在医药和保健品领域的应用打下坚实基础。
但目前对于带鱼活性肽的研究还有一定的不足和局限性，例如，目前关于带鱼活性肽的研究主要集中在制备、纯化及活性评价上，而未在分子层面阐明构效关系。此外，活性肽的食品安全性未得到充分的验证，要在市场上生产及应用还需要评价其毒性和致敏性等指标。未来的研究方向可以侧重于以下几个方面：首先，结合现代科技手段，如基因编辑和分子模拟，可以更精准地设计和优化活性肽的结构，提高其生物利用度和稳定性；其次，继续探索优化带鱼活性肽的制备工艺和辅助技术，挖掘带鱼活性肽的加工专用酶，分析酶的催化机制，为实现特定结构和序列的多肽加工提供核心工具；另外，带鱼活性肽的结构修饰和生物制造也是重要的研究方向，突破活性肽传统制备方法存在的耗时且鉴定难度大的技术瓶颈；最后，加强对带鱼活性肽在体内的活性验证，通过临床实验和动物模型研究，确保其安全性和有效性，这将为未来将带鱼活性肽应用于人类健康管理提供更加可靠的科学依据。
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表 1 带鱼活性肽的制备条件
Table 1 Preparation conditions of active peptides from hairtail
序号 活性 来源 蛋白酶种类 酶解条件 水解度 文献 时间（h） 温度（℃） pH 加酶量 料液比（g/mL） 1 抗氧化 带鱼 碱性蛋白酶 4 55 7.5 0.6% 1:2 / [17] 2 带鱼 碱性蛋白酶 2 50 9.0 4% 1:5 26.3% [19] 风味蛋白酶 3.5 45 7.0 4% 3 带鱼 碱性蛋白酶 3.8 48 / 1.65% 1:3 / [37] 4 5.5 50 / 1.6% 1:2 / 5 2 50 / 0.6% 1:20 / 6 3 50 / 3.2% 1:3 / 7 带鱼肉 木瓜蛋白酶 5 50 7.0 2% 1:5 / [38] 碱性蛋白酶 6 50 8.5 2% 8 带鱼鱼糜 中性蛋白酶 12.1 44.74 / 1858.85 U/g / / [40−41] 9 生长调节 带鱼鱼糜 木瓜蛋白酶 8 35~40 6.5 20000 U/g 1:10 / [30] 10 带鱼副产物 胃蛋白酶 12 60 6.5 25000 U/g 1:8 / [44] 11 带鱼鱼糜 木瓜蛋白酶 8 40 6.5 0.1% 1:3 / [45] 12 抗菌 带鱼副产物 风味蛋白酶+动物复合酶 / 40 7.0 6×103 IU/100 mL 41:1000 / [4] 13 带鱼 木瓜蛋白酶+胃蛋白酶 4.2 36.5 4.4 0.2% 1:10 32.64% [9] 14 带鱼 胃蛋白酶 / 35 3.5 0.2% 1:10 / [16] 木瓜蛋白酶 40 6.5 0.05% 15 带鱼 碱性蛋白酶 9 45 8.0 22000 U/g / 52.22% [32] 木瓜蛋白酶 8 45 6.0 22000 U/g / 16 抗疲劳 带鱼鱼糜 中性蛋白酶 / 44.7 6.5 / 1:4 / [29] 17 带鱼鱼糜 木瓜蛋白酶 8 45 6.5 / 1:10 / [59] 18 抗贫血 带鱼 碱性蛋白酶 8 40 7.0 0.1% 1:3 / [31] 19 带鱼鱼糜 木瓜蛋白酶 8 40 7.0 / 1:5 / [33] 20 降血糖 带鱼 风味蛋白酶 4.5 45 7.0 1.6% 1:3 / [7] 21 降血压 带鱼脊骨 酸性蛋白酶 3 40 3.0 1% 1:2 / [8] 22 降尿酸 带鱼肉 碱性蛋白酶 5 49 / 5000 U/g 1:3 21.9% [22] 23 降血脂 带鱼副产物 中性蛋白酶+风味蛋白酶 / 50 7.0 0.1% 1:1 / [65] 24 抗抑郁 冻干带鱼 胃蛋白酶 4 37 2.0 2400 U/g 1:20 / [66] 胰蛋白酶 4 37 7.5 300 U/g 
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表 2 带鱼活性肽的活性、理化性质及活性评价
Table 2 Activity, physicochemical properties and evaluation of the activity of active peptides from hairtail
活性 来源 肽序或分子量 活性评价 文献 抗氧化 带鱼 337~6007 Da DPPH自由基清除率46.15%；
OH自由基清除率75.65%；
O2−自由基清除率82.5%[17] 带鱼 / DPPH自由基清除率60.72%±1.05%；
OH自由基清除率58.17%±1.53%[19] 带鱼 / DPPH自由基清除率60.13%；
OH自由基清除率58.73%；
ABTS+自由基清除率69.58%；
O2−自由基清除率47.31%[37] 带鱼肉 KA；217.1 Da DPPH自由基清除率53.45%±1.05%；
OH自由基清除率48.76%±1.64%[38] AKG；274.1 Da IYG；351.0 Da 带鱼鱼糜 DLYANTVLSGGTTMYPGIADR；
2214.0627 Da总抗氧化能力29.7085±0.9226 U/mL [40−41] 带鱼鱼糜清洗水 <4 kDa 抗氧化能力1.59 mmol/L FeSO4当量 [15] 动物生长调节 带鱼鱼糜 / 成活率、增重率、特定生长率提高；
肌肉组织弹性增强，硬度加大，品质增强[30] 带鱼副产物 / 成活率、增重率、特定生长率和肌肉指标值提高 [44] 带鱼鱼糜 / 脂肪酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶和丙二醛活性升高；
肠道菌群中乳酸杆菌和芽孢杆菌增加[45] 抑菌 带鱼副产物 <2 kDa 大肠杆菌的抑菌圈直径为14.1 mm；
金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为13.8 mm[4] 带鱼 / 对大肠杆菌抑菌率为78.56% [9] 带鱼 HYD；<3 kDa 对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为0.20 mg/mL；
最小杀菌浓度为0.26 mg/mL[32] 抗疲劳 带鱼鱼糜 / 小鼠力竭游泳时间延长 [29] 带鱼鱼糜 / 大鼠力竭游泳时间延长 [59] 抗贫血 带鱼 / 血红蛋白含量、平均红细胞体积、血红蛋白分布
宽度和铁蛋白浓度增加[31] 带鱼鱼糜 / 贫血大鼠血红蛋白含量和红细胞数升高 [33] 降血糖 带鱼 / DPP-IV抑制率为96.97% [7] 降血压 带鱼脊骨 <3000 u ACE抑制率91.56% [8] 降尿酸 带鱼肉 <1 kDa 黄嘌呤氧化酶抑制率52.03% [22] 降血脂 带鱼副产物 / 抑制高血脂大鼠的TC、TG、HDL升高 [65] 抗抑郁 冻干带鱼 LPNSLYQQ、FEVFW、FADAME、LPNSLYQK MAO-A抑制活性为71.97%±0.86% [66]
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