Predictive Analysis of Potential Functional Components in Mori Folium Based on Fingerprint and Network Pharmacology
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摘要: 目的：建立桑叶指纹图谱，并通过联合网络药理学及分子对接技术，预测桑叶中的潜在功能成分。方法：采用高效液相色谱（HPLC）技术建立桑叶指纹图谱，并进行相似度评价和主成分分析。进一步，结合网络药理学构建“成分-靶点-通路”网络，并通过分子对接进行虚拟验证。结果：通过HPLC技术建立了13批桑叶指纹图谱，并在13个共有峰中指认出1号峰为新绿原酸、3号峰绿原酸、4号峰隐绿原酸、6号峰芦丁、7号峰异槲皮苷、9号峰异绿原酸 B、10号峰紫云英苷、11号峰异绿原酸 A、12号峰异绿原酸 C。主成分分析发现，桑叶指纹图谱中的13个共有峰均可作为特征化学成分参与质量控制过程。网络药理学分析预测得到异绿原酸 A、异绿原酸 B、异绿原酸 C、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷可作为桑叶的潜在功能成分，作用于肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、胱天蛋白酶1/3/8（CASP1/3/8）等7个潜在靶点，并通过调节脂质与动脉粥样硬化、癌症和血清素能突触等信号通路发挥抗衰老、保护神经和心血管的效用。分子对接的结果进一步验证了这些核心成分与潜在靶点间具有良好的结合性能。结论：通过HPLC指纹图谱及网络药理学预测了桑叶的潜在功能成分及作用机制，为桑叶的质量控制与功效应用开发提供了科学依据。Abstract: Objective: To establish the high-performance liquid chromatography (HPLC) fingerprints of Mori Folium and predict its potential functional ingredients using network pharmacology and molecular docking approaches. Method: HPLC was utilized to create the fingerprint profile of Mori Folium, followed by similarity assessment and principal component analysis. A "component-target-pathway" network was then constructed employing network pharmacology, complemented by molecular docking for virtual validation. Results: The fingerprints of 13 batches of Mori Folium were established. Among the 13 common peaks, neochlorogenic acid (peak 1), chlorogenic acid (peak 3), cryptochlorogenic acid (peak 4), rutin (peak 6), isoquercitrin (peak 7), isochlorogenic acid B (peak 9), astragalin (peak 10), isochlorogenic acid A (peak 11), and isochlorogenic acid C (peak 12) were identified. Additionally, principal component analysis revealed that all 13 common peaks in Mori Folium could be utilized in the quality control process as characteristic chemical components. Network pharmacology predicted that isochlorogenic acid A, isochlorogenic acid B, isochlorogenic acid C, rutin, isoquercitrin, and astragalin could act as potential functional ingredients of Mori Folium, acting on seven key targets (TNF-α, CASP1, CASP3, CASP8, etc.) and regulating the lipid-atherosclerosis, cancer and serotonergic synapses signaling pathways, thereby exerting anti-aging, neuroprotective, and cardiovascular protective effects. The molecular docking results further demonstrated good binding interactions between these core components and the core targets. Conclusion: Utilizing HPLC fingerprinting and network pharmacology, this study has delineated the potential functional ingredients and their mechanisms of action in Mori Folium, establishing a foundation for its quality control and subsequent functional development.
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桑叶为桑科植物桑（Morus alba L.）的干燥叶，在《本草纲目》中记载“人食之老翁为小童”，1993年国家卫生部纳入首批药食同源物质[1]。桑叶富含酚类、黄酮类、多糖类和生物碱类等化合物，具有抗氧化、降血糖、降血脂、抗癌和抗炎等药理作用[2−3]，其不仅是常用的大宗中药材，同时还作为食品开发原材料应用，已开发桑叶茶、桑叶饮料、桑叶烘焙制品等系列产品[4−5]。高质量原材料是功能食品开发应用中安全有效的前提。由于栽培环境、加工方式等因素的影响，桑叶中功能活性成分种类和含量存在不同程度的差异，加强其质量控制和功能成分研究有利于桑叶向食品、保健品、化妆品等领域的全面开发。
指纹图谱是运用色谱等现代仪器检测得到的能反映该食品内部特征的图谱，具有整体性、系统性、特征性和稳定性的特点，可用于食品产地鉴别、真伪鉴别和生产过程的质量控制等[6−7]。目前，文献报道的桑叶指纹图谱多采用单波长检测[8−10]，这可能会导致部分化学成分在非最大吸收波长处被检测，进而导致响应值降低甚至消失。而多波长切换技术则弥补了这一缺陷，能够尽可能多地展现桑叶中的化学成分信息，已被应用于多个食品原材料的质量控制中[11−13]。网络药理学“多靶点-多通路”的理念与天然药食同源物质多靶点综合起效的特色相契合，常用于探索其功能成分与疾病靶标之间的复杂关系[14−15]。目前，基于桑叶开展的网络药理学分析，多将功能成分作用靶点与单一疾病靶点融合，以预测桑叶治疗糖尿病以及发挥抗氧化、抗病毒等功能的物质基础和作用机制[16−18]，尚缺乏对桑叶潜在功能成分的整体分析。本研究通过建立桑叶HPLC指纹图谱，结合主成分分析对不同产地桑叶样品进行质量评价，确认引起桑叶质量差异的主要成分，并联合网络药理学和分子对接技术探究桑叶潜在功能成分及作用机制，以期为桑叶整体质量控制和开发利用提供参考。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
桑叶 13批样品信息见表1，经新疆医科大学肖辉教授鉴定均为桑（Morus alba L.）干燥叶；乙腈、甲醇 色谱纯，德国Meker公司；磷酸 分析纯，天津市光复精细化工研究所；水 超纯水；新绿原酸（批号：220404）、绿原酸（批号：220413）、隐绿原酸（批号：220312）、芦丁（批号：220301）、紫云英苷（批号：220503） 质量分数均≥98%，均购于成都植标化纯生物技术有限公司；异槲皮苷（批号：MUST-22041603）、异绿原酸B（批号：MUST-23012705）、异绿原酸A（批号：MUST-22110413）、异绿原酸C（批号：MUST-22081001） 质量分数均≥98%，均购于成都曼斯特生物科技有限公司。
表 1 桑叶样品信息Table 1. Information of Mori Folium samples样品 采收日期/批次 产地 来源 S1 2212079 广西 购买 S2 20221122 陕西商洛 购买 S3 2022.7 新疆吐鲁番 采收 S4 2022.6 新疆喀什 采收 S5 2022.6 新疆喀什 采收 S6 2022.7 新疆托克逊 采收 S7 2022.7 四川宜宾 采收 S8 2022.7 四川宜宾 采收 S9 2022.6 新疆喀什 采收 S10 200901 河南南阳 购买 S11 121123-201806 国标物质 购买 S12 20200417 安徽亳州 购买 S13 221221 安徽太和 购买 Waters ACQUITY UPLC H-CLASS型高效液相色谱仪 沃特世科技有限公司；色谱柱Agilent TC-C18（规格为250 mm×4.6 mm，5 μm） 安捷伦科技有限公司；MS205DU型十万分之一电子分析天平、ME802型电子天平 梅特勒托利多仪器有限公司；KQ-600 KED型数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司；3-30K型离心机 德国Sigma公司；U2型超纯水仪 四川优普超纯科技有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 供试品溶液的配制
精密称取各批次桑叶1.00 g，加入50 mL 50%甲醇，称定并记录重量，室温超声提取30 min，放至室温后，以50%甲醇补足失重，4 ℃离心（7000 r/min）10 min，取上清液，经0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。
1.2.2 对照品溶液的配制
精密称定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸B、紫云英苷、异绿原酸A、异绿原酸C对照品适量，分别置于10 mL容量瓶中，甲醇超声溶解并定容至刻度，配制成质量浓度为1 mg/mL的对照品贮备液。吸取上述贮备液适量，加50%甲醇定容至5 mL，配制成新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸B、紫云英苷、异绿原酸A、异绿原酸C浓度分别为28、52、22、21、24、40、12、12、10 μg/mL的混合对照品溶液。
1.2.3 液相色谱条件
色谱柱为Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸水（B）；梯度洗脱（0~6 min，8%~12%A；6~15 min，12%~30%A；15~25 min，30%~40%A；25~26 min，40%~8%A）；检测波长320 nm（0~13 min、17.4~26 min）、260 nm（13~17.4 min）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。系统平衡色谱柱时间为15 min。
1.2.4 参照峰的选择
芦丁作为2020年版《中国药典》一部评价桑叶质量的指标性成分，其分离度良好，峰面积和保留时间适中，相对稳定，所以选择芦丁作为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间（指纹峰保留时间/参照峰保留时间）及相对峰面积（指纹峰峰面积/参照峰峰面积）。
1.2.5 方法学考察
取同一桑叶供试品溶液（S6），按照“1.2.3”项下色谱条件连续进样6次，以芦丁为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，进行精密度考察；取同一批次桑叶（S6），平行制备6份供试品溶液，分别进样，计算相对保留时间和相对峰面积，进行重复性考察。取同一桑叶供试品溶液（S6），分别在0、2、4、8、12、24 h进样，计算相对保留时间和相对峰面积，进行稳定性考察。
1.2.6 指纹图谱建立和相似度评价
取桑叶样品，按照“1.2.1”项方法制备供试品溶液，按照“1.2.3”项色谱条件进样，记录。色谱图积分，以cdf.格式导出，利用中药指纹图谱相似度评价系统（2012版），以S6样品色谱图作为参照图谱，设置时间窗口为0.5 min，采用中位数法，经多点校正和全谱峰匹配，生成13批桑叶HPLC叠加图谱和对照指纹图谱（R），并进行相似度评价。
1.2.7 基于网络药理学的桑叶潜在功能成分预测
将桑叶指纹图谱中识别的化学成分信息输入SwissTargetPrediction数据库，预测其潜在的作用靶点。利用CytoScape 3.9.1软件平台对关键靶点进行筛选，并使用David数据库执行基因本体（Gene Ontology，GO）功能富集分析及京都基因和基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路分析。通过构建“成分-靶点-通路”网络图，揭示桑叶的潜在功能成分及其作用机制。
1.3 数据处理
利用Waters Empower 3.0色谱工作站提取色谱数据，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）软件生成桑叶指纹图谱共有模式，进行相似度评价。应用 IBM SPSS Statistics 25.0对HPLC图谱共有峰进行主成分分析。
2. 结果与分析
2.1 方法学考察
采用“1.2.3”项所述色谱条件，S6供试品溶液连续测定6次，各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别小于0.15%和1.80%，说明仪器和方法的精密度良好。重复性试验结果显示，各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.03%~0.48%和0.49%~2.34%，表明本方法具有良好的重复性。同一样品在24 h内的6次测定结果中，各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.01%~0.45%和0.26%~2.44%，表明桑叶供试品溶液在室温下放置24 h内稳定。
2.2 指纹图谱共有模式的确定和相似度评价
13批桑叶HPLC叠加图谱见图1，共标定13个共有峰，共有峰的峰面积之和均大于总峰面积的90%。以上共有峰，经与对照品比对，指认了其中9个色谱峰，各样品HPLC指纹图谱共有模式和混合对照品色谱图见图2。以6号芦丁共有峰为参照峰，计算各样品共有峰的相对保留时间与相对峰面积，结果见表2和表3。13个共有峰的相对保留时间RSD≤1.11%，说明不同批次桑叶样品间的共有峰在保留时间上较为稳定，而相对峰面积的RSD值相差较大，说明峰面积存在较大差异，各化学成分含量有一定差异。以生成的对照图谱作为参照图谱（R）进行相似度评价，各样品相似度在0.932~0.998之间，表明各批次桑叶的质量相对稳定，其化学成分基本一致，见表4。
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图 2 桑叶指纹图谱共有峰模式图（A）及混合对照品色谱图（B）注：1-新绿原酸，2-未确认，3-绿原酸，4-隐绿原酸，5-未确认，6-芦丁，7-异槲皮苷，8-未确认，9-异绿原酸 B，10-紫云英苷，11-异绿原酸 A，12-异绿原酸 C，13-未确认。Figure 2. Fingerprints of Mori Folium with common peak pattern (A) and chromatogram of mixed reference substance (B)表 2 各共有峰的相对保留时间Table 2. Relative retention time of each common peak峰号 相对保留时间 RSD（%） S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 1 0.591 0.590 0.606 0.591 0.591 0.605 0.605 0.605 0.601 0.603 0.591 0.592 0.593 1.11 2 0.738 0.738 0.739 0.738 0.738 0.738 0.740 0.739 0.738 0.739 0.738 0.739 0.739 0.10 3 0.763 0.763 0.769 0.763 0.763 0.768 0.769 0.769 0.767 0.768 0.762 0.764 0.764 0.35 4 0.788 0.788 0.794 0.789 0.789 0.793 0.794 0.794 0.792 0.793 0.788 0.789 0.789 0.34 5 0.858 0.858 0.858 0.857 0.857 0.858 0.858 0.859 0.857 0.858 0.858 0.858 0.858 0.06 6 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.00 7 1.048 1.048 1.049 1.048 1.048 1.018 1.049 1.049 1.049 1.049 1.048 1.048 1.048 0.82 8 1.071 1.072 1.070 1.072 1.071 1.048 1.070 1.070 1.070 1.070 1.072 1.072 1.071 0.59 9 1.095 1.095 1.096 1.095 1.095 1.096 1.096 1.096 1.096 1.097 1.095 1.095 1.095 0.07 10 1.123 1.123 1.122 1.123 1.123 1.122 1.123 1.123 1.123 1.123 1.123 1.123 1.123 0.03 11 1.136 1.136 1.139 1.135 1.135 1.139 1.139 1.140 1.139 1.139 1.135 1.136 1.136 0.16 12 1.167 1.167 1.168 1.157 1.157 1.167 1.168 1.168 1.168 1.168 1.166 1.167 1.167 0.33 13 1.186 1.186 1.186 1.186 1.186 1.187 1.187 1.187 1.187 1.187 1.186 1.186 1.186 0.04 表 3 各共有峰的相对峰面积Table 3. Relative peak area of each common peak峰号 相对峰面积 RSD（%） S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 1 0.648 0.806 1.272 0.598 0.760 1.284 1.113 1.249 1.017 1.113 0.729 0.252 0.616 36.17 2 0.296 0.291 0.415 0.254 0.207 0.381 0.258 0.222 0.304 0.401 0.367 0.263 0.266 22.55 3 5.002 3.976 3.132 5.796 7.764 4.157 7.174 7.921 3.874 7.542 5.885 4.392 5.028 29.76 4 1.355 1.443 1.786 1.265 1.644 1.792 1.903 2.588 1.503 2.178 1.869 0.794 1.221 27.93 5 0.324 0.292 0.362 0.579 0.380 0.301 0.352 0.319 0.185 0.661 0.431 0.316 0.321 33.69 6 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.00 7 1.721 1.465 1.858 0.949 0.792 0.414 1.060 0.554 1.227 1.484 1.483 1.120 1.506 36.57 8 0.380 0.275 0.360 0.200 0.133 0.600 0.266 0.262 0.165 0.250 0.281 0.188 0.267 42.68 9 0.803 0.780 1.115 0.834 0.829 1.279 1.747 1.650 1.349 0.906 1.368 1.128 1.172 27.86 10 0.579 0.324 0.477 0.170 0.111 0.376 0.254 0.171 0.205 0.327 0.379 0.235 0.383 43.42 11 0.295 0.322 0.289 0.127 0.148 0.362 0.631 0.935 0.290 0.482 0.486 0.305 0.294 56.11 12 0.183 0.219 0.198 0.090 0.081 0.244 0.270 0.269 0.205 0.368 0.299 0.136 0.243 37.67 13 0.517 0.318 0.650 0.306 0.199 0.678 0.866 0.848 0.432 0.286 0.638 0.374 0.530 42.11 表 4 桑叶HPLC指纹图谱相似度评价Table 4. Similarity evaluation of HPLC fingerprint of Mori Folium样品 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 R S1 1.000 0.989 0.932 0.978 0.963 0.971 0.975 0.958 0.965 0.984 0.989 0.984 0.994 0.992 S2 0.989 1.000 0.962 0.958 0.942 0.987 0.965 0.951 0.986 0.979 0.984 0.970 0.985 0.989 S3 0.932 0.962 1.000 0.867 0.835 0.985 0.896 0.875 0.968 0.900 0.928 0.893 0.923 0.932 S4 0.978 0.958 0.867 1.000 0.994 0.933 0.985 0.978 0.935 0.989 0.981 0.982 0.981 0.985 S5 0.963 0.942 0.835 0.994 1.000 0.911 0.981 0.981 0.919 0.987 0.971 0.971 0.969 0.975 S6 0.971 0.987 0.985 0.933 0.911 1.000 0.957 0.941 0.989 0.955 0.975 0.949 0.970 0.978 S7 0.975 0.965 0.896 0.985 0.981 0.957 1.000 0.995 0.962 0.986 0.993 0.983 0.987 0.993 S8 0.958 0.951 0.875 0.978 0.981 0.941 0.995 1.000 0.947 0.982 0.983 0.965 0.970 0.982 S9 0.965 0.986 0.968 0.935 0.919 0.989 0.962 0.947 1.000 0.958 0.974 0.955 0.970 0.978 S10 0.984 0.979 0.900 0.989 0.987 0.955 0.986 0.982 0.958 1.000 0.989 0.977 0.984 0.992 S11 0.989 0.984 0.928 0.981 0.971 0.975 0.993 0.983 0.974 0.989 1.000 0.988 0.995 0.998 S12 0.984 0.970 0.893 0.982 0.971 0.949 0.983 0.965 0.955 0.977 0.988 1.000 0.995 0.988 S13 0.994 0.985 0.923 0.981 0.969 0.970 0.987 0.970 0.970 0.984 0.995 0.995 1.000 0.996 R 0.992 0.989 0.932 0.985 0.975 0.978 0.993 0.982 0.978 0.992 0.998 0.988 0.996 1.000 2.3 主成分分析（Principal Component Analysis，PCA）
为综合评价不同批次桑叶样品的质量，本研究以13批桑叶样品中13个共有峰的峰面积为原始数据，利用SPSS 25.0统计软件进行13×13阶数据矩阵的主成分分析，计算相关矩阵的特征值及其方差贡献率见表5，碎石图见图3。以特征值>1为提取标准得到4个主成分，其累积方差贡献率为86.878%（>80%），即提取的4个主成分包含了桑叶样品中13个共有峰86.878%的信息，同时碎石图也清晰呈现出前4个主成分陡坡落差幅度较大，说明前4个主成分可以解释大多数引起样品特征差异的信息。
表 5 桑叶HPLC指纹图谱的主成分信息和方差贡献率Table 5. Principal component information and variance contribution of the HPLC fingerprint of Mori Folium峰号 初始特征值 提取载荷平方和 总计 方差百分比 累积（%） 总计 方差百分比 累积（%） 1 5.734 44.110 44.110 5.734 44.110 44.110 2 2.539 19.533 63.642 2.539 19.533 63.642 3 1.756 13.509 77.151 1.756 13.509 77.151 4 1.265 9.727 86.878 1.265 9.727 86.878 5 0.594 4.570 91.448 − − − 6 0.520 4.003 95.451 − − − 7 0.354 2.721 98.172 − − − 8 0.129 0.996 99.168 − − − 9 0.075 0.574 99.743 − − − 10 0.027 0.211 99.954 − − − 11 0.006 0.044 99.998 − − − 12 0.000 0.002 100.000 − − − 13 −3.47E-16 −2.67E-15 100.000 − − − 将得到的成分矩阵进行正交旋转得到13个共有峰在4个主成分中的旋转矩阵（表6）。旋转后的主成分载荷矩阵反映了各变量对主成分的贡献大小和方向，载荷的绝对值越大，对主成分的贡献越大，主成分载荷矩阵见图4，较直观反映出各变量对主成分的贡献率：指认出的对照品成分和其他未知成分均作为主要信息参与了桑叶药材质量的表达，其中主成分1主要反映了11号峰（异绿原酸A）、9号峰（异绿原酸B）、13号峰、4号峰（隐绿原酸）、12号峰（异绿原酸C）的信息表达，主成分2主要反映了7号峰（异槲皮苷）、10号峰（紫云英苷）、2号峰、6号峰（芦丁）的信息表达，主成分3主要反映了8号峰、1号峰（新绿原酸）的信息表达，主成分4主要反映了5号峰和3号峰（绿原酸）的信息表达。根据各共有峰在不同因子上的载荷（图4），可确定桑叶13个共有峰均可作为特征化学成分。
表 6 旋转后的成分矩阵Table 6. Component matrix after rotation峰号 主成分1 主成分2 主成分3 主成分4 11 0.921 −0.130 0.066 −0.116 9 0.838 0.247 0.234 0.201 13 0.803 0.323 0.415 0.046 4 0.654 −0.056 0.625 0.014 12 0.645 0.318 0.404 −0.418 7 −0.025 0.930 −0.277 −0.020 10 0.086 0.850 0.310 −0.030 2 0.127 0.738 0.608 0.108 6 0.356 0.633 0.218 0.535 8 0.116 0.106 0.913 0.084 1 0.448 0.092 0.775 −0.128 5 −0.281 0.186 0.087 0.825 3 0.510 −0.279 −0.168 0.722 Y1=0.187X1+0.053X2+0.213X3+0.273X4−0.117X5+0.149X6−0.010X7+0.048X8+0.350X9+0.036X10+0.385X11+0.269X12+0.335X13；
Y2=0.058X1+0.463X2-0.175X3-0.035X4+0.117X5+0.397X6+0.584X7+0.067X8+0.155X9+0.533X10-0.082X11+0.200X12+0.203X13；
Y3=0.585X1+0.459X2−0.127X3+0.472X4+0.066X5+0.165X6−0.209X7+0.689X8+0.177X9+0.234X10+0.050X11+0.305X12+0.313X13；
Y4=−0.114X1+0.096X2+0.642X3+0.012X4+0.734X5+0.476X6−0.018X7+0.075X8+0.179X9−0.027X10−0.103X11−0.372X12+0.041X13。
其中，Y1、Y2、Y3、Y4表示4个主成分，X1、X2……X13表示13个共有色谱峰标准化峰面积。在4个主成分中，Y1是最主要的特征指标，Y1模型中，X11、X9、X13的系数绝对值较大，表明这些色谱峰在桑叶的质量控制中起到重要作用，可作为质量评价控制的重要依据。结合4个主成分方差贡献率，桑叶质量综合评价表达式Y综合得分=（Y1×44.110+Y2×19.533+Y3×13.509+Y4×9.727）/86.878，根据以上公式得到不同批次桑叶综合评价得分及排名，见表7。综合得分越高，表明该样品质量越好，表7可见排名前3的桑叶样品S6、S7、S3分别来自新疆托克逊、四川宜宾和新疆吐鲁番，其中S6主成分1、2、3均表现突出，S7主成分1表现突出，S3主成分2和3表现突出。
表 7 主成分得分及综合得分排名Table 7. Principal component scores and overall score ranking样品 Y1得分 Y2得分 Y3得分 Y4得分 Y综合得分 排名 S1 0.38 2.88 0.78 0.92 1.07 4 S2 −1.76 −1.01 −2.00 −2.20 −1.68 9 S3 0.73 3.21 2.69 −0.28 1.48 3 S4 −2.15 −1.31 −2.25 2.56 −1.45 8 S5 −1.71 −2.71 −2.66 1.45 −1.73 10 S6 2.59 1.98 6.70 0.39 2.85 1 S7 2.57 -0.01 1.49 0.66 1.61 2 S8 2.06 −2.27 0.58 −0.68 0.55 6 S9 0.98 0.92 1.08 −1.06 0.75 5 S10 −2.18 −2.29 −2.52 −1.59 −2.19 11 S11 −1.53 −1.65 −2.26 −2.09 −1.73 10 S12 0.36 1.74 −0.66 2.51 0.75 5 S13 −0.35 0.53 −0.97 −0.58 −0.28 7 2.4 基于网络药理学的桑叶潜在功能成分预测
2.4.1 候选成分靶点预测
通过检索PubChem数据库，查找桑叶指纹图谱指认的9个化合物的分子结构和SMILES符号，上传至Swiss target prediction进行靶点预测（筛选条件：“Homo sapiens”且“Probability>0.1”），合并去重后得到82个关联靶点。
2.4.2 蛋白互作网络构建
将82个关联靶点提交至STRING 11.5数据库（https://string-db.org）构建蛋白互作（Protein-Protein Interaction，PPI）网络模型[19]，物种设定为“Homo sapiens”，蛋白交互评分值“high confidence>0.4”，去掉单一节点，采用CytoScape 3.9.1软件平台建立PPI网络图，见图5。利用“Network Analyzer”功能对PPI网络进行拓扑分析，筛选出度值（Degree）≥14（二倍中位数），介数中心性（Betweenness）和接近中心性（Closeness）均大于中位数的靶点作为核心靶点[20]，经筛选得到28个核心靶点，结果见表8。
表 8 核心靶点拓扑学性质Table 8. Topological properties of core targets靶点 名称 度值 中介
中心性接近
中心性TNF-α Tumor necrosis factor-alpha 80 1555.1714 0.2774 CASP3 Caspase-3 70 787.6654 0.2676 PTGS2 Cyclooxygenase-2 54 434.3813 0.255 MMP2 Matrix metalloproteinase 2 44 126.0129 0.246 IL2 Interleukin-2 40 463.3299 0.2517 APP Beta amyloid A4 protein 38 175.7571 0.2492 CTSB Cathepsin（B and K） 38 139.7348 0.2375 CASP1 Caspase-1 36 51.9783 0.2405 CASP8 Caspase-8 34 63.4589 0.2382 CTSS Cathepsin S 34 41.4673 0.2375 MMP1 Matrix metalloproteinase 1 30 49.5249 0.239 BRAF Serine/threonine-protein kinase B-raf 28 122.478 0.2368 BACE1 Beta-secretase 1 26 187.6491 0.2436 PRKCA Protein kinase C-alpha 26 122.17 0.2368 CTSL Cathepsin L 26 72.762 0.2324 ELANE Leukocyte elastase 26 20.5098 0.2303 FYN Tyrosine-protein kinase FYN 22 637.5817 0.2397 PRKCD Protein kinase C delta 22 142.7672 0.2397 CTSK Cathepsin K 22 101.5491 0.236 XDH Xanthine dehydrogenase 22 91.3385 0.236 AKR1B1 Aldose reductase 20 463.4146 0.242 ABCB1 P-glycoprotein 1 18 214.045 0.2331 NOX4 NADPH oxidase 4 18 28.5921 0.2331 CA9 Carbonic anhydrase IX 16 608.233 0.239 ACHE Acetylcholinesterase 16 144.9062 0.2375 DHFR Dihydrofolate reductase 16 87.7879 0.2303 AGTR1 Type-1 angiotensin II receptor 14 155.6755 0.2269 TYMS Thymidylate synthase 14 102.5151 0.2255 2.4.3 GO功能富集分析和KEGG通路分析
利用DAVID数据库（https://david.ncifcrf.gov/）对28个潜在核心靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析，选择物种为“人源”，选取P<0.05为具有统计学意义。GO功能分析主要用于描述基因靶点的功能，包括生物功能（Biological Process，BP）、细胞功能（Cellular Component，CC）和分子功能（Molecular Function，MF），共筛选出157个条目，其中BP占110个，主要涉及蛋白分解、应答异型生物质刺激和炎症反应的正向调节等；CC相关20个，主要富集在内溶酶体腔、膜筏、线粒体和质膜等；MF相关27个，主要涉及半胱氨酸型肽酶活性、蛋白多糖结合和胶原蛋白结合等。利用微生信（http://www. bioinformatics.com.cn/）对P值最小的前10位BP、CC、MF条目绘制成柱状图，见图6。
KEGG富集分析可以得到潜在靶点所富集的信号通路，筛选得到42条相关通路，根据P值由小到大排序，对前20条信号通路绘制气泡图，主要涉及癌症通路（Pathways in cancer，9个靶点）、多种疾病的神经变性通路（Pathways of neurodegeneration-multiple diseases，8个靶点）、阿尔茨海默病（Alzheimer disease，8个靶点）、糖尿病并发症中的 AGE-RAGE 信号通路（AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications，7个靶点）、细胞凋亡（Apoptosis，7个靶点）、C 型凝集素受体信号通路（C-type lectin receptor signaling pathway，6个靶点）、癌症中的蛋白聚糖通路（Proteoglycans in cancer，6个靶点）、脂质与动脉粥样硬化通路（Lipid and atherosclerosis，6个靶点）等，表明桑叶可能主要通过调节以上通路发挥功效。结果见图7。
2.4.4 “成分-靶点-通路”网络构建
通过Cytoscape 3.9.1软件对筛选得到的桑叶9个成分、82个核心靶点和42条信号通路构建其相互作用的“成分-靶点-通路”网络图，见图8。利用“Network Analysis”对网络进行分析，以度值（Degree）为参考，发现肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3，CASP3）、胱天蛋白酶-8（Caspase-8，CASP8）、蛋白激酶C-δ（Protein kinase C delta，PRKCA）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-raf（Serine/threonine-protein kinase B-raf，BRAF）、基质金属蛋白酶-2（Matrix metalloproteinase 2，MMP2）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1，CASP1）这7个靶点度值较高（≥12），脂质与动脉粥样硬化通路（hsa05417）、癌症中的蛋白聚糖通路（hsa05205）、血清素能突触通路（hsa04726）、癌症通路（hsa05200）、多种疾病的神经变性途径（hsa05022）、阿尔茨海默病（hsa05010）这6个通路与核心靶点关联密切。
2.4.5 分子对接
根据上述网络药理学结果，筛选桑叶活性成分中对应较多靶点的芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 B、紫云英苷、异绿原酸 A和异绿原酸 C与“2.4.4”项筛选出的核心靶蛋白进行初步分子对接验证。在TCMSP数据库下载6个核心活性成分（小分子配体）的mol2结构，从PDB数据库下载7个核心靶点（大分子受体）的pdb格式结构图，导入AutoDock软件对靶蛋白进行预处理（除去水、氢、小分子配体等），模拟半柔性对接，统计结合稳定性参数，通过PyMOL软件进行对接结果可视化。化合物与蛋白结合自由能越低，说明二者之间结合越稳定。对接结果见表9，结果显示对接最小结合能小于−5.0 kcal/mol的有26组，表明化合物与大部分靶点对接良好[21−22]；结合能小于−7.0 kcal/mol的有5组，提示其间强烈的结合活性。对接能量热图见图9，结果可见6个核心成分均与PRKCA和MMP2蛋白对接良好，异槲皮苷和异绿原酸 A均与7个核心蛋白对接良好，其中异槲皮苷与CASP1、MMP2对接活性最高。选取部分结果进行可视化分析，结果显示异槲皮苷通过氢键分别与CASP1中的氨基酸残基ARG-391、SER-298、LYS-296、PHE-295、VAL-293、ARG-240，MMP2中的残基ARG-149、LEU-137、GLY-135、LEU-116相互作用，具体见图10。以上结果表明，桑叶中的活性成分可通过与7种核心蛋白结合以发挥功效。
表 9 核心网络图分子对接验证（kcal/mol）Table 9. Molecular docking verification in core network (kcal/mol)核心靶点 活性成分 芦丁 异槲皮苷 异绿原酸
B紫云英苷 异绿原酸
A异绿原酸
CTNF-α −4.06 −6.05 −5.93 −5.86 −7.55 −3.81 CASP3 −4.76 −5.81 −5.26 −5.12 −6.51 −3.66 CASP8 −3.56 −4.75 −4.18 −5.10 −5.48 −3.13 PRKCA −5.51 −5.83 −5.97 −6.33 −7.46 −6.81 BRAF −3.38 −5.41 −4.12 −4.14 −4.73 −3.54 MMP2 −5.37 −7.73 −5.09 −5.36 −6.52 −5.52 CASP1 −3.73 −8.42 −2.87 −4.64 −7.40 −5.12 ![]()
图 10 桑叶功效核心成分与关键核心靶点的分子对接Figure 10. Molecular docking of efficacy core components and key targets of Mori Folium3. 讨论与结论
目前，单一波长进行质量控制已不能全面科学地反映食品原材料的内在产品质量，建立多波长切换法已经成为指纹图谱质量研究的重要发展方向[11−12]。本研究采用波长切换技术建立了桑叶HPLC指纹图谱检测方法，提高了灵敏度并减少了杂质峰干扰，实现了同时对桑叶中多组分的分离。对13批桑叶进行指纹图谱分析，13个共有峰得到确认，并确定了其中9个色谱峰（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、异绿原酸 B、紫云英苷、异绿原酸 A、异绿原酸 C），进一步补充检测了3种潜在的异绿原酸类功能成分[8−10],可更为全面地反映桑叶的整体质量。13批桑叶样品间HPLC指纹图谱相似度在0.835~0.995之间，各批次样品与对照图谱相似度在0.932~0.998之间，说明各批次样本具有较好的一致性。主成分分析结果显示，桑叶指纹图谱的13个共有峰对4个主成分均有较大贡献，表明13个共有峰均可作为特征化学成分参与质量控制过程。各主成分载荷值的综合得分表明不同产地的桑叶质量存在差异，其中新疆、四川、广西地区的桑叶化学品质相对优于其他产地，与邓明慧等[23]结果基本一致，说明环境、生长年限等多因素可影响桑叶的化学质量。
为阐明桑叶潜在作用的功效物质和核心靶点，本研究在HPLC指纹图谱基础上联合网络药理学技术，筛选出了6个潜在的功效关联物质，包括3种二咖啡酰基奎宁酸类化合物（异绿原酸A、B、C）和3种黄酮苷类化合物（芦丁、异槲皮苷、紫云英苷）。“成分-靶点-通路”网络图筛选发现，上述6个潜在功效物质主要作用于7个关键核心靶点，包括TNF-α、CASP3、CASP8和PRKCA等，通过脂质与动脉粥样硬化、癌症中的蛋白聚糖、血清素能突触、多种疾病的神经变性途径和阿尔茨海默病等关键信号通路发挥抗衰老、神经和心血管保护等作用，与黄青昕等[24]研究结果一致。黄青昕等[24]通过模拟体外消化（发酵）过程发现，桑叶中绿原酸、芦丁、异槲皮苷和紫云英苷等分解产生的咖啡酸、槲皮素和山柰酚可能通过抑制慢性炎症反应对阿尔茨海默病、癌症和糖尿病3种疾病起到治疗效应。
深入分析相关关键靶点发现，以细胞凋亡、炎症反应相关的靶点为主，如TNF-α、CASP（1/3/8）和PRKCA靶点。TNF-α是一种多效性细胞因子，是稳态和疾病发病机制中的关键调节剂，能够推动炎症反应的全身进展与器官功能障碍的发生[25]。CASP1、CASP3、CASP8是Caspase家族成员，在细胞凋亡、炎症和免疫中起重要作用，其中，CASP3是细胞凋亡信号转导过程的中心环节，与癌症、衰老、心血管疾病的发生等有着重要联系[26−27]。PRKCA是蛋白激酶C家族的10个成员之一，在多种肿瘤类型的细胞侵袭、增殖和凋亡中发挥着重要的调节作用[28]。分子对接结果显示，桑叶6个核心功能成分与7个关键核心靶点的亲和力良好，其中异槲皮苷、异绿原酸A与核心靶点均对接良好。实验研究显示，异槲皮苷可抑制β-catenin蛋白的表达，进一步减少Wnt靶蛋白（c-myc和MMP 2）的异常表达，从而减轻糖尿病神经病变大鼠的行为疼痛和神经功能指标参数，达到对糖尿病神经病变的神经保护作用[29]。异绿原酸A、B、C是异绿原酸的三种异构体，是许多植物中存在的主要抗氧化剂，可通过破坏含pyrin结构域NOD样受体家族3（NOD-like receptors family pyrin domain containing 3，NLRP3）炎症小体的形成，进一步抑制CASP1的激活，减少白介素18（Interleukin-18，IL-18 ）和白介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）的形成，从而减轻炎症[30−31]；也可通过抑制血管紧张素刺激引起的细胞外调节蛋白激酶1/2（Extracellular regulated protein kinases 1/2，ERK1/2）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun NH2-terminal kinase，JNK）和丝氨酸/苏氨酸激酶（Serine/threonine kinase，Akt）的磷酸化，以保护内皮细胞、抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移以达到对心血管的保护作用[30]。综上表明，桑叶中6个潜在功效物质主要通过调节氧化应激水平、抑制炎症因子表达以及增加抗凋亡活性的分子机制达到对衰老及心血管相关疾病的保护作用。
综上所述，本研究基于HPLC指纹图谱结合主成分分析发现，桑叶13个共有峰均可作为特征化学成分参与质量控制过程；联合网络药理学构建了桑叶中指认的9个成分的“成分-靶标-网络”图，预测了桑叶防治疾病的潜在分子机制，结合文献进一步分析，发现关键靶点与主要通路与桑叶抗衰老、保护神经和心血管功效密切相关，初步确证异绿原酸 A、异绿原酸 B、异绿原酸 C、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷可作为桑叶的潜在功效关联物质，为进一步建立提升桑叶的质量控制提供了参考。本研究尚有不足之处，指纹图谱联合网络药理学的预测只能初步确证功效关联物质，在此基础上，后续可以结合多种分析手段，如利用液质联用建立桑叶全成分指纹图谱，依据全成分分析结果与网络药理学结合，深入挖掘其药效物质和作用机制，并进一步在细胞及动物水平上进行验证，以明确目标分子的真实性和可靠性。
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图 2 桑叶指纹图谱共有峰模式图（A）及混合对照品色谱图（B）
注：1-新绿原酸，2-未确认，3-绿原酸，4-隐绿原酸，5-未确认，6-芦丁，7-异槲皮苷，8-未确认，9-异绿原酸 B，10-紫云英苷，11-异绿原酸 A，12-异绿原酸 C，13-未确认。
Figure 2. Fingerprints of Mori Folium with common peak pattern (A) and chromatogram of mixed reference substance (B)
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图 10 桑叶功效核心成分与关键核心靶点的分子对接
Figure 10. Molecular docking of efficacy core components and key targets of Mori Folium
表 1 桑叶样品信息
Table 1 Information of Mori Folium samples
样品 采收日期/批次 产地 来源 S1 2212079 广西 购买 S2 20221122 陕西商洛 购买 S3 2022.7 新疆吐鲁番 采收 S4 2022.6 新疆喀什 采收 S5 2022.6 新疆喀什 采收 S6 2022.7 新疆托克逊 采收 S7 2022.7 四川宜宾 采收 S8 2022.7 四川宜宾 采收 S9 2022.6 新疆喀什 采收 S10 200901 河南南阳 购买 S11 121123-201806 国标物质 购买 S12 20200417 安徽亳州 购买 S13 221221 安徽太和 购买 
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表 2 各共有峰的相对保留时间
Table 2 Relative retention time of each common peak
峰号 相对保留时间 RSD（%） S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 1 0.591 0.590 0.606 0.591 0.591 0.605 0.605 0.605 0.601 0.603 0.591 0.592 0.593 1.11 2 0.738 0.738 0.739 0.738 0.738 0.738 0.740 0.739 0.738 0.739 0.738 0.739 0.739 0.10 3 0.763 0.763 0.769 0.763 0.763 0.768 0.769 0.769 0.767 0.768 0.762 0.764 0.764 0.35 4 0.788 0.788 0.794 0.789 0.789 0.793 0.794 0.794 0.792 0.793 0.788 0.789 0.789 0.34 5 0.858 0.858 0.858 0.857 0.857 0.858 0.858 0.859 0.857 0.858 0.858 0.858 0.858 0.06 6 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.00 7 1.048 1.048 1.049 1.048 1.048 1.018 1.049 1.049 1.049 1.049 1.048 1.048 1.048 0.82 8 1.071 1.072 1.070 1.072 1.071 1.048 1.070 1.070 1.070 1.070 1.072 1.072 1.071 0.59 9 1.095 1.095 1.096 1.095 1.095 1.096 1.096 1.096 1.096 1.097 1.095 1.095 1.095 0.07 10 1.123 1.123 1.122 1.123 1.123 1.122 1.123 1.123 1.123 1.123 1.123 1.123 1.123 0.03 11 1.136 1.136 1.139 1.135 1.135 1.139 1.139 1.140 1.139 1.139 1.135 1.136 1.136 0.16 12 1.167 1.167 1.168 1.157 1.157 1.167 1.168 1.168 1.168 1.168 1.166 1.167 1.167 0.33 13 1.186 1.186 1.186 1.186 1.186 1.187 1.187 1.187 1.187 1.187 1.186 1.186 1.186 0.04
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表 3 各共有峰的相对峰面积
Table 3 Relative peak area of each common peak
峰号 相对峰面积 RSD（%） S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 1 0.648 0.806 1.272 0.598 0.760 1.284 1.113 1.249 1.017 1.113 0.729 0.252 0.616 36.17 2 0.296 0.291 0.415 0.254 0.207 0.381 0.258 0.222 0.304 0.401 0.367 0.263 0.266 22.55 3 5.002 3.976 3.132 5.796 7.764 4.157 7.174 7.921 3.874 7.542 5.885 4.392 5.028 29.76 4 1.355 1.443 1.786 1.265 1.644 1.792 1.903 2.588 1.503 2.178 1.869 0.794 1.221 27.93 5 0.324 0.292 0.362 0.579 0.380 0.301 0.352 0.319 0.185 0.661 0.431 0.316 0.321 33.69 6 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.00 7 1.721 1.465 1.858 0.949 0.792 0.414 1.060 0.554 1.227 1.484 1.483 1.120 1.506 36.57 8 0.380 0.275 0.360 0.200 0.133 0.600 0.266 0.262 0.165 0.250 0.281 0.188 0.267 42.68 9 0.803 0.780 1.115 0.834 0.829 1.279 1.747 1.650 1.349 0.906 1.368 1.128 1.172 27.86 10 0.579 0.324 0.477 0.170 0.111 0.376 0.254 0.171 0.205 0.327 0.379 0.235 0.383 43.42 11 0.295 0.322 0.289 0.127 0.148 0.362 0.631 0.935 0.290 0.482 0.486 0.305 0.294 56.11 12 0.183 0.219 0.198 0.090 0.081 0.244 0.270 0.269 0.205 0.368 0.299 0.136 0.243 37.67 13 0.517 0.318 0.650 0.306 0.199 0.678 0.866 0.848 0.432 0.286 0.638 0.374 0.530 42.11
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表 4 桑叶HPLC指纹图谱相似度评价
Table 4 Similarity evaluation of HPLC fingerprint of Mori Folium
样品 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 R S1 1.000 0.989 0.932 0.978 0.963 0.971 0.975 0.958 0.965 0.984 0.989 0.984 0.994 0.992 S2 0.989 1.000 0.962 0.958 0.942 0.987 0.965 0.951 0.986 0.979 0.984 0.970 0.985 0.989 S3 0.932 0.962 1.000 0.867 0.835 0.985 0.896 0.875 0.968 0.900 0.928 0.893 0.923 0.932 S4 0.978 0.958 0.867 1.000 0.994 0.933 0.985 0.978 0.935 0.989 0.981 0.982 0.981 0.985 S5 0.963 0.942 0.835 0.994 1.000 0.911 0.981 0.981 0.919 0.987 0.971 0.971 0.969 0.975 S6 0.971 0.987 0.985 0.933 0.911 1.000 0.957 0.941 0.989 0.955 0.975 0.949 0.970 0.978 S7 0.975 0.965 0.896 0.985 0.981 0.957 1.000 0.995 0.962 0.986 0.993 0.983 0.987 0.993 S8 0.958 0.951 0.875 0.978 0.981 0.941 0.995 1.000 0.947 0.982 0.983 0.965 0.970 0.982 S9 0.965 0.986 0.968 0.935 0.919 0.989 0.962 0.947 1.000 0.958 0.974 0.955 0.970 0.978 S10 0.984 0.979 0.900 0.989 0.987 0.955 0.986 0.982 0.958 1.000 0.989 0.977 0.984 0.992 S11 0.989 0.984 0.928 0.981 0.971 0.975 0.993 0.983 0.974 0.989 1.000 0.988 0.995 0.998 S12 0.984 0.970 0.893 0.982 0.971 0.949 0.983 0.965 0.955 0.977 0.988 1.000 0.995 0.988 S13 0.994 0.985 0.923 0.981 0.969 0.970 0.987 0.970 0.970 0.984 0.995 0.995 1.000 0.996 R 0.992 0.989 0.932 0.985 0.975 0.978 0.993 0.982 0.978 0.992 0.998 0.988 0.996 1.000
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表 5 桑叶HPLC指纹图谱的主成分信息和方差贡献率
Table 5 Principal component information and variance contribution of the HPLC fingerprint of Mori Folium
峰号 初始特征值 提取载荷平方和 总计 方差百分比 累积（%） 总计 方差百分比 累积（%） 1 5.734 44.110 44.110 5.734 44.110 44.110 2 2.539 19.533 63.642 2.539 19.533 63.642 3 1.756 13.509 77.151 1.756 13.509 77.151 4 1.265 9.727 86.878 1.265 9.727 86.878 5 0.594 4.570 91.448 − − − 6 0.520 4.003 95.451 − − − 7 0.354 2.721 98.172 − − − 8 0.129 0.996 99.168 − − − 9 0.075 0.574 99.743 − − − 10 0.027 0.211 99.954 − − − 11 0.006 0.044 99.998 − − − 12 0.000 0.002 100.000 − − − 13 −3.47E-16 −2.67E-15 100.000 − − −
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表 6 旋转后的成分矩阵
Table 6 Component matrix after rotation
峰号 主成分1 主成分2 主成分3 主成分4 11 0.921 −0.130 0.066 −0.116 9 0.838 0.247 0.234 0.201 13 0.803 0.323 0.415 0.046 4 0.654 −0.056 0.625 0.014 12 0.645 0.318 0.404 −0.418 7 −0.025 0.930 −0.277 −0.020 10 0.086 0.850 0.310 −0.030 2 0.127 0.738 0.608 0.108 6 0.356 0.633 0.218 0.535 8 0.116 0.106 0.913 0.084 1 0.448 0.092 0.775 −0.128 5 −0.281 0.186 0.087 0.825 3 0.510 −0.279 −0.168 0.722
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表 7 主成分得分及综合得分排名
Table 7 Principal component scores and overall score ranking
样品 Y1得分 Y2得分 Y3得分 Y4得分 Y综合得分 排名 S1 0.38 2.88 0.78 0.92 1.07 4 S2 −1.76 −1.01 −2.00 −2.20 −1.68 9 S3 0.73 3.21 2.69 −0.28 1.48 3 S4 −2.15 −1.31 −2.25 2.56 −1.45 8 S5 −1.71 −2.71 −2.66 1.45 −1.73 10 S6 2.59 1.98 6.70 0.39 2.85 1 S7 2.57 -0.01 1.49 0.66 1.61 2 S8 2.06 −2.27 0.58 −0.68 0.55 6 S9 0.98 0.92 1.08 −1.06 0.75 5 S10 −2.18 −2.29 −2.52 −1.59 −2.19 11 S11 −1.53 −1.65 −2.26 −2.09 −1.73 10 S12 0.36 1.74 −0.66 2.51 0.75 5 S13 −0.35 0.53 −0.97 −0.58 −0.28 7
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表 8 核心靶点拓扑学性质
Table 8 Topological properties of core targets
靶点 名称 度值 中介
中心性接近
中心性TNF-α Tumor necrosis factor-alpha 80 1555.1714 0.2774 CASP3 Caspase-3 70 787.6654 0.2676 PTGS2 Cyclooxygenase-2 54 434.3813 0.255 MMP2 Matrix metalloproteinase 2 44 126.0129 0.246 IL2 Interleukin-2 40 463.3299 0.2517 APP Beta amyloid A4 protein 38 175.7571 0.2492 CTSB Cathepsin（B and K） 38 139.7348 0.2375 CASP1 Caspase-1 36 51.9783 0.2405 CASP8 Caspase-8 34 63.4589 0.2382 CTSS Cathepsin S 34 41.4673 0.2375 MMP1 Matrix metalloproteinase 1 30 49.5249 0.239 BRAF Serine/threonine-protein kinase B-raf 28 122.478 0.2368 BACE1 Beta-secretase 1 26 187.6491 0.2436 PRKCA Protein kinase C-alpha 26 122.17 0.2368 CTSL Cathepsin L 26 72.762 0.2324 ELANE Leukocyte elastase 26 20.5098 0.2303 FYN Tyrosine-protein kinase FYN 22 637.5817 0.2397 PRKCD Protein kinase C delta 22 142.7672 0.2397 CTSK Cathepsin K 22 101.5491 0.236 XDH Xanthine dehydrogenase 22 91.3385 0.236 AKR1B1 Aldose reductase 20 463.4146 0.242 ABCB1 P-glycoprotein 1 18 214.045 0.2331 NOX4 NADPH oxidase 4 18 28.5921 0.2331 CA9 Carbonic anhydrase IX 16 608.233 0.239 ACHE Acetylcholinesterase 16 144.9062 0.2375 DHFR Dihydrofolate reductase 16 87.7879 0.2303 AGTR1 Type-1 angiotensin II receptor 14 155.6755 0.2269 TYMS Thymidylate synthase 14 102.5151 0.2255
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表 9 核心网络图分子对接验证（kcal/mol）
Table 9 Molecular docking verification in core network (kcal/mol)
核心靶点 活性成分 芦丁 异槲皮苷 异绿原酸
B紫云英苷 异绿原酸
A异绿原酸
CTNF-α −4.06 −6.05 −5.93 −5.86 −7.55 −3.81 CASP3 −4.76 −5.81 −5.26 −5.12 −6.51 −3.66 CASP8 −3.56 −4.75 −4.18 −5.10 −5.48 −3.13 PRKCA −5.51 −5.83 −5.97 −6.33 −7.46 −6.81 BRAF −3.38 −5.41 −4.12 −4.14 −4.73 −3.54 MMP2 −5.37 −7.73 −5.09 −5.36 −6.52 −5.52 CASP1 −3.73 −8.42 −2.87 −4.64 −7.40 −5.12
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