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中国精品科技期刊2020

不同加工方法对芝麻体外钙释放率和小鼠体内促钙吸收作用的影响

万元, 柳巧翠, 梁煜, 卫梦亚, 谭雅丽, 侯焘

万元,柳巧翠,梁煜,等. 不同加工方法对芝麻体外钙释放率和小鼠体内促钙吸收作用的影响[J]. 食品工业科技,2024,45(20):59−67. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023110157.
引用本文: 万元,柳巧翠,梁煜,等. 不同加工方法对芝麻体外钙释放率和小鼠体内促钙吸收作用的影响[J]. 食品工业科技,2024,45(20):59−67. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023110157.
WAN Yuan, LIU Qiaocui, LIANG Yu, et al. Effects of Different Processing Methods on Calcium Release Rate of Sesame in Vitro and Calcium Absorption Promotion in Mice[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(20): 59−67. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023110157.
Citation: WAN Yuan, LIU Qiaocui, LIANG Yu, et al. Effects of Different Processing Methods on Calcium Release Rate of Sesame in Vitro and Calcium Absorption Promotion in Mice[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(20): 59−67. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023110157.

不同加工方法对芝麻体外钙释放率和小鼠体内促钙吸收作用的影响

详细信息
    作者简介:

    万元(1999−),女,硕士研究生,研究方向:生物活性肽与分子营养,E-mail:wanyuan0223@163.com

    通讯作者:

    侯焘(1989−),男,博士,副教授,研究方向:生物活性肽与分子营养,E-mail:houtao@mail.hzau.edu.cn

  • 中图分类号: TS201.1

Effects of Different Processing Methods on Calcium Release Rate of Sesame in Vitro and Calcium Absorption Promotion in Mice

  • 摘要: 为探究并解决芝麻钙含量丰富,但鲜有作为补钙食品的现实问题,本研究以两种黑白芝麻为原料,采用蒸煮、微波、烘烤、超高压四种方式进行加工,后对其基本组分进行分析,利用体外模拟消化测定芝麻中钙离子的释放率,并构建植酸抑制钙吸收小鼠模型,评价不同加工方式对芝麻钙生物利用率的影响。结果表明,蒸煮加工、烘烤180 ℃使得黑白芝麻植酸含量显著下降(P<0.05),微波加工后的黑白芝麻植酸含量下降但并不显著(P>0.05),而超高压加工后的黑白芝麻植酸含量增加(P<0.05);所有加工方式均提高了芝麻的灰分含量以及蛋白质含量;蒸煮50 min使得黑芝麻钙释放率显著升高(P<0.001),微波加工方式提高芝麻钙释放率效果并不显著(P>0.05),烘烤120 ℃也使得白芝麻钙释放率显著升高(P<0.001),超高压加工方式均使得黑白芝麻钙释放率显著升高(P<0.001)。动物实验表明,添加了加工黑芝麻饲料组的小鼠血清碱性磷酸酶水平显著低于添加未加工黑芝麻组的小鼠(P<0.05),微波、烘烤、超高压加工过的芝麻饲料对小鼠具有明显的钙补充效果,骨钙含量显著增加(P<0.001)。综上所述,超高压加工显著提高芝麻中钙离子释放率,且在动物实验中效果表现最佳,最有利于改善芝麻在体内的钙生物利用率,微波加工以及烘烤加工次之。
    Abstract: In order to investigate and solve the reality that sesame seeds were rich in calcium, but rarely used as calcium supplement food. In this study, two kinds of black and white sesame seeds were used as raw materials, which were processed in four ways: Steaming, microwave, baking and ultra-high pressure (UHP). Afterwards, the basic components were analyzed, the release rate of calcium ions from sesame seeds was determined using in vitro simulated digestion, and a mouse model of phytic acid inhibition of calcium absorption was constructed to evaluate the effects of different processing methods on the calcium bioavailability of sesame seeds. The results showed that steaming processing and roasting at 180 ℃ resulted in a significant decrease (P<0.05) in phytic acid content of black and white sesame seeds, microwave processing resulted in a decrease but not significant (P>0.05) in phytic acid content of black and white sesame seeds, and UHP processing resulted in a significant increase (P<0.05) in phytic acid content of black and white sesame seeds. All processing methods increased the ash content as well as the protein content of sesame seeds. Steaming for 50 min resulted in a significant increase in calcium release from black sesame seeds (P<0.001), microwave processing did not have a significant effect on calcium release from sesame seeds (P>0.05), baking at 120 ℃ also resulted in a significant increase in calcium release from white sesame seeds (P<0.001), and UHP processing resulted in a significant increase in calcium release from both black and white sesame seeds (P<0.001). Animal experiments showed that the serum alkaline phosphatase (ALP) level of mice in the group with processed black sesame feed was significantly lower than that of mice in the group with unprocessed black sesame feed (P<0.05), and that microwave, baked, and UHP processed sesame feed had a significant calcium-supplementation effect on mice, with a significant increase in bone calcium content (P<0.001). In summary, UHP processing significantly increased the release rate of calcium ions from sesame seeds and showed the best results in animal experiments, most favorable to improve the bioavailability of calcium in sesame seeds in vivo, followed by microwave processing as well as baking processing.
  • 芝麻又名胡麻,与大豆、花生、油菜并列为中国四大传统食用油料作物[1]。根据种质颜色的不同,芝麻可以分为白芝麻、黑芝麻和黄芝麻,其中黑芝麻和白芝麻是更常见和广泛种植的优势品种。芝麻中矿物质含量丰富,其中钙的含量最高,达到8 mg/g,其次是磷、镁、铁和锌[2]。然而,芝麻却并不是大众普遍认为的良好的补钙食品,因为芝麻皮中含有大量的草酸、植酸和人体不能消化的粗纤维以及色素,芝麻籽中也含有高浓度的草酸(2%~3%)和植酸(1.44%~5.36%)[3],因此,芝麻中过半的钙以钙盐的形式存在,其生物利用率如何尚未可知。

    小肠是钙离子吸收的主要部位,正常生理条件下通过小肠吸收的钙约占钙吸收总量的90%。钙通过两种途径吸收,一种是能量依赖的主动跨细胞途径,另一种是通过紧密连接的被动细胞旁途径[4]。植酸等抗营养因子在生理条件下带负电荷,因此在肠道中会与金属离子特别是钙离子进行强螯合形成不溶性沉淀,由于人体缺乏肠道植酸酶,所以无法消化或吸收利用植酸钙[5]。近年来,越来越多的研究关注加工方式对于芝麻中抗营养因子水平变化的影响。芝麻榨油过程增加了抗营养因子的含量,如植酸从2%增加到5%,粗纤维增加到5.3%[6];去皮的种子也仍然保留了大量的纤维(4%~4.5%)以及植酸和草酸(通常分别大于2%和3%)[7]。同时,也有研究显示芝麻种子中植酸盐和草酸盐可以通过加工特别是发芽过程降低到可接受的限度[8];煮沸[9]、高压灭菌[10]、微波蒸煮[11]和烘烤[12]加工均显著降低了植酸、胰蛋白酶抑制剂等抗营养素的水平。植酸含量的下降可能是由于其水溶性导致的,热加工过程中部分植酸浸出到浸泡介质中从而发生损失。或者由于高压条件下肌醇六磷酸化学结构的变化,使得其与蛋白质或矿物质形成不溶性复合物,从而使得检测到植酸含量下降的现象[13]。也有研究表明烘烤使得棕色和白色芝麻部分消除了所研究的抗营养素,如植酸、单宁(减少幅度为15.6%至61.2%)[14-15]。然而,以上研究只关注了抗营养因子绝对量的增减,尚未有研究系统的从体内外两个层面探究不同加工方式对不同品种芝麻中钙的生物利用率的影响。

    因此,本研究首先使用不同加工方式如微波、烘烤、蒸煮、超高压对两种不同品种的芝麻进行加工,对其进行基本组分分析;然后通过体外模拟消化以及构建植酸抑制钙吸收小鼠模型评价钙的释放率以及吸收率,从而研究不同加工方式对钙的生物利用率影响。以上结果将为芝麻作为补钙食品原料用于食品工业生产提供理论指导。

    中芝1号黑芝麻、中芝25号白芝麻 中国农业科学院油料作物研究所提供;胃蛋白酶(3000 U/g)、胰酶(200 U/mg)、植酸钠(高纯度,98%) 上海源叶生物科技有限公司;盐酸、氢氧化钠、高氯酸、钙标准溶液(以上为分析纯)、硝酸(优级纯) 国药集团化学试剂有限公司;血清碱性磷酸酶测定试剂盒、血清钙测定试剂盒、血清磷测定试剂盒 南京建成生物有限公司;不同方式加工后的芝麻定制饲料(芝麻添加量与正常AIN-93M饲料添加量比例1:10) 睿迪生物科研(深圳)有限公司;SPF级昆明雄性小鼠120只,体重20±2 g,4周龄 购于湖北省疾病预防控制中心,实验动物许可证号:SYXK(鄂)2020-0084,伦理编号:HZAUMO-2023-0257,伦理审批单位:华中农业大学动物实验中心。

    M1-l213B型美的微波炉、MP-ZG24G02美的电煮锅 广东美的有限公司;PT3506W美的电烤箱 广东美的有限公司;PP600MPa/3-5L超高压冷杀菌机 包头科发高压科技有限责任公司;olayks迷你破壁机 广东立时电器科技有限公司;5810/R低温高速冷冻离心机 德国Marin Christ公司;AA-6300C原子吸收分光光度计 日本岛津公司。

    将芝麻与水以1:5的比例(质量比)浸入沸水中,分别煮沸浸泡30、50 min,60 ℃烘干后放置于常温,−20 ℃储存备用[16]

    将20 g芝麻单层放置于微波炉中,微波炉以2450 MHz的频率和800 W的功率分别运行6、8 min,放置于常温,−20 ℃储存备用[15]

    将200 g整粒芝麻单层放置于铝箔盘中,然后放入空气烤箱中,在120 ℃烘烤30 min、180 ℃烘烤10 min,放置于常温,−20 ℃储存备用[17]

    取生芝麻籽粒500 g,置于真空袋抽真空处理后放入超高压设备,分别以300、500 MPa/5 min加工芝麻。保压时间300 s,油箱温度30 ℃,增压时间130 s,−20 ℃储存备用[18]

    芝麻中钙含量的测定参考GB 5009.92-2016《食品中钙的测定》中第一法火焰原子吸收光谱法对原料中钙含量进行测定。水分的测定参照GB 5009.3-2016《食品中水分的测定》。灰分的测定参照GB 5009.4-2016《食品中灰分的测定》。蛋白质的测定参照GB 5009.5-2016《食品中蛋白质的测定》。

    植酸的测定参考文献[15]的实验方法并进行了一些修改。50 mL、2.4%的盐酸提取1 g干燥样品,静置1 h后离心(3000 r/30 min),取上清液;将3 mL样品溶液中加入1 mL韦德试剂(0.03% FeC13·6H2O含0.3%磺基水杨酸水溶液)。植酸标准曲线的制作:向编号为A、B、C、D、E、F、G的玻璃试管中分别加入0.1 g/L植酸标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.4 mL,然后依次加入蒸馏水3.0、2.8、2.6、2.4、2.2、2.0、1.6 mL,最后分别向7支试管中加入1.0 mL的0.03% FeCl3·6H2O、0.3%磺基水杨酸试剂,摇匀,利用可见分光光度计于500 nm处比色测定吸光值。标准曲线回归方程:y=−0.216x+0.2728(相关系数R2=0.9918),式中y为样品吸光度,x为样品浓度(g/L)。根据下式计算植酸浓度:

    C=A0.27280.216×50×0.1

    其中C为植酸浓度(g/100 g),A为500 nm吸光度下样品的吸光度(abs值)。

    体外模拟消化实验参考文献[1920]的方法并进行了一些修改。样品均经过研磨机粉碎并保存于−20 ℃。

    胃消化:将2 g芝麻样品加入20 mL模拟胃液中并混合均匀(模拟胃液即为胃蛋白酶溶液,其浓度为10 mg/mL,调节去离子水溶液 pH至2.0后加入胃蛋白酶),调节混匀后的样品pH至2.0,在37 ℃恒温振荡器中孵化120 min,以模拟人体胃消化环境。

    肠消化:将经过胃消化120 min后的芝麻消化液的pH调至7.4后加入20 mL肠消化液(模拟肠液即为胰酶溶液,其浓度为10 mg/mL,于去离子水中溶解),调节混匀后的样品pH至7.4,在37 ℃恒温振荡器中孵化120 min,以模拟人体肠消化环境。

    酶灭活:将样品置于沸水中水浴10 min,水浴结束后用冰水迅速冷却至室温,并在10000×g下离心30 min,收集上清液为芝麻消化液。

    实验过程中样品溶液的pH均使用1 mol/L HCl或1 mol/L NaOH进行调节。

    用原子吸收分光光度法直接测定芝麻消化液中钙离子(GB/T 5009.92-2016《食品中钙的测定》)的含量。根据下式计算钙的释放率:

    W(%)=M1M0×100

    其中W为钙的释放率(%);M0为芝麻原料中的钙(g);M1为经体外模拟消化后的消化液中释放的游离钙(g)。

    120只小鼠经过5 d的标准饲料适应性喂养后,随机分成12组(n=10),分组如表1所示。以灌胃的方式给予各组实验小鼠相应的植酸药物(1 mL/100 g bw),每日18时灌胃植酸,自由摄食含芝麻样品的定制饲料(芝麻添加量与正常AIN-93M饲料添加量比例1:10),每两天测量一次小鼠体重。饲养6周后,禁食12 h,取血并迅速分离血清;脱颈致死后,分离肝脏、肾脏、回肠并存放在−80 ℃备用,分离股骨、胫骨,并剔去肌肉及软组织,存放于生理盐水中,以待进一步分析。

    表  1  小鼠分组
    Table  1.  Grouping of mice
    分组处理内容
    正常组正常饲料+生理盐水
    模型组正常饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    No-1组未加工中芝1号黑芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    No-25组未加工中芝25号白芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    Z50-1组蒸煮50 min中芝1号黑芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    Z50-25组蒸煮50 min中芝25号白芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    W8-1组微波8 min中芝1号黑芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    W8-25组微波8 min中芝25号白芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    K180-1组烘烤180 ℃中芝1号黑芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    K180-25组烘烤180 ℃中芝25号白芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    G500-1组超高压500 MPa中芝1号黑芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    G500-25组超高压500 MPa中芝25号白芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
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    采用GB 5009.92-2016《食品安全国家标准 食品中钙的测定》法测定小鼠血清、肝脏、肾脏、股骨和胫骨中的钙含量。

    血清碱性磷酸酶(ALP)、血清钙、血清磷的测定均根据试剂盒说明书进行测定。

    将小鼠左腿股骨、胫骨在室温下解冻,并将股骨、胫骨置于110 ℃烘箱中烘至恒重,分析天平上称重,记录骨干重,并根据下式计算骨干重指数:

    (103)=/×1000

    采用扫描电镜分析小鼠股骨的微观结构形态。将股骨固定于粘有双面胶粘带的铝板上,在分辨率200 A°和操作电压15 kV的条件下,观察股骨。

    试验结果采用平均数±标准差的方式表示,采用统计分析软件SPSS 25.0进行单因素方差分析(One-way ANOVA),P<0.05表示差异显著,采用软件Origin 7.0绘制图形。

    表2表3为不同方式加工后的两种芝麻基本组分含量表。由表2表3可知,芝麻中钙元素含量丰富,黑芝麻中钙含量为3963.20 mg/kg,白芝麻中钙含量为4133.64 mg/kg。不同加工方式对芝麻中钙的含量产生不同的影响,所有组别中,超高压300 MPa加工后的黑芝麻钙含量最高,为5367.64 mg/kg,蒸煮50 min加工后的白芝麻钙含量最高,结果为4717.54 mg/kg。加工也使得植酸含量有不同程度的增减,蒸煮加工使得黑白芝麻植酸含量显著下降(P<0.05),微波8 min加工的黑芝麻植酸含量显著低于微波6 min(P<0.05),微波时间越长,降植酸含量效果更明显,高温(180 ℃)烘烤均会使植酸含量显著下降(P<0.05)。

    表  2  不同方式加工后的中芝1号黑芝麻基本组分含量
    Table  2.  Contents of basic components of Zhongzhi No.1 black sesame after processing in different ways
    样品组别 钙(mg/kg) 水分(%) 蛋白质(%) 植酸(%) 灰分(%)
    未加工 3963.20±153.43cd 4.08±0.02b 19.72±0.50d 3.13±0.00bc 0.04±0.00f
    蒸煮30 min 4145.00±230.63c 1.65±0.15e 21.64±0.82a 2.94±0.15d 0.05±0.00ef
    蒸煮50 min 3438.01±100.04e 1.8406±0.01d 20.94±1.92cd 2.99±0.16cd 0.05±0.00de
    微波6 min 4054.94±293.15c 1.51±0.07e 26.76±0.93a 3.26±0.08b 0.05±0.00bc
    微波8 min 4887.30±456.81ab 1.11±0.11f 20.12±0.07cd 2.99±0.16cd 0.06±0.01a
    烘烤120 ℃ 4001.64±391.57cd 0.39±0.011g 19.66±0.25d 3.21±0.01b 0.05±0.00cd
    烘烤180 ℃ 3524.37±281.79de 0.29±0.02g 23.03±0.15b 2.64±0.07e 0.05±0.00bc
    超高压300 MPa 4700.97±203.57b 4.73±0.08a 21.52±1.18bc 3.92±0.03a 0.05±0.00b
    超高压500 MPa 5309.60±63.74a 3.84±0.14c 21.75±0.23bc 3.90±0.23a 0.05±0.00ab
    注:同列数值标有不同字母表示各组之间存在显著性差异(P<0.05)。
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    表  3  不同方式加工后的中芝25号白芝麻基本组分含量
    Table  3.  Contents of basic components of Zhongzhi No.25 white sesame after processing in different ways
    样品组别 钙(mg/kg) 水分(%) 蛋白质(%) 植酸(%) 灰分(%)
    未加工 4133.64±153.43bcd 3.76±0.03b 22.33±0.48de 3.22±0.11bc 0.04±0.00f
    蒸煮30 min 4585.17±283.37ab 1.91±0.06e 24.24±0.46b 2.74±0.15e 0.04±0.00f
    蒸煮50 min 4717.54±419.56a 1.34±0.13f 30.96±0.84a 3.00±0.23cd 0.05±0.00e
    微波6 min 4586.62±222.73ab 2.34±0.15d 23.44±0.25bcd 3.34±0.04b 0.05±0.00c
    微波8 min 4462.21±125.75abc 0.49±0.01g 23.81±1.10bc 3.30±0.29b 0.05±0.00b
    烘烤120 ℃ 3906.91±312.86d 0.21±0.01h 22.16±0.78e 3.45±0.01b 0.05±0.00d
    烘烤180 ℃ 4501.85±193.27abc 0.25±0.01h 22.89±0.84cde 2.79±0.05de 0.05±0.00b
    超高压300 MPa 4065.00±210.67cd 4.10±0.10a 21.65±0.34e 3.95±0.03a 0.05±0.00c
    超高压500 MPa 3454.38±125.58e 3.04±0.08c 21.89±0.61e 4.18±0.02a 0.05±0.00a
    注:同列数值标有不同字母表示各组之间存在显著性差异(P<0.05)。
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    除超高压300 MPa加工之外,其余加工方式均使黑白芝麻水分含量下降,具有显著性差异(P<0.05),超高压500 MPa加工后芝麻水分含量下降量小于10%,而其他热加工使得水分减少量均超过50%。此外,不同加工方式对芝麻蛋白的含量产生不同的影响。黑芝麻微波6 min后蛋白质含量最高,为26.76%,白芝麻蒸煮50 min后蛋白质含量最高,为30.96%。所有加工方式均提高了芝麻的灰分含量,总体而言,灰分增加幅度排序为:超高压>微波>烘烤>蒸煮;且蒸煮时间越久,微波时间越长,烘烤温度越高,灰分含量越高。

    图1是经过加工后的芝麻经过体外模拟消化之后钙离子释放率对比图。蒸煮50 min后的黑芝麻其钙释放率显著高于未加工的黑芝麻(P<0.001)。经过蒸煮后,白芝麻的钙释放率均显著降低,可能是在蒸煮加工后原料钙含量增加所导致的。微波加工使得黑芝麻钙离子释放率增加,但未有显著性差异。烘烤对于两种不同品种的芝麻产生不同影响,烘烤加工后的黑芝麻钙释放率显著低于未加工黑芝麻(P<0.05),而白芝麻钙释放率则高于未加工的样品。其中,120 ℃烘烤30 min白芝麻钙释放率具有显著性差异,为6.63%。超高压加工对于两种芝麻钙释放率的提升效果均为最好,且均具有显著性差异(P<0.001),超高压500 MPa加工黑芝麻,其钙离子释放率在所有加工方式中最高,为9.16%,超高压500 MPa加工白芝麻钙离子释放率同样在所有加工方式中最高,为14.14%。总体而言,与其他加工方式相比,超高压加工后的黑白芝麻其钙释放率表现最佳。

    图  1  不同加工方式对芝麻中钙离子释放率的影响
    注:*或#表示与未加工组相比差异显著(P<0.05);**或##表示与未加工组相比差异显著(P<0.01);***或###表示与未加工组相比差异显著(P<0.001)。
    Figure  1.  Effects of different processing methods on the release rate of calcium in sesame

    图2A所示,植酸对小鼠体重有抑制作用,正常组以及芝麻饲料组小鼠体重均显著高于模型组(P<0.05)。摄入含有芝麻的饲料后,小鼠体重显著高于PA组(P<0.05)。由图2B图2C可知,各组小鼠肝脏指数、肾脏指数未表现出显著差异(P>0.05),且并未表现出明显萎缩状态,由此可推测植酸未显现出对其他脏器有毒性作用。

    图  2  不同加工方式芝麻饲料对小鼠生理指标的影响
    注:*表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.05);**表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.01);***表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.001)。
    Figure  2.  Effects of different processing methods of sesame feed on physiological indexes of mice

    血清碱性磷酸酶可以直接反映成骨细胞的活性和功能,因此常被用来反应钙摄取是否不足的指标[21]。如图3A所示,模型组血清ALP显著高于正常饲料组(P<0.05)以及芝麻饲料组(P<0.05),表明植酸模型组具有发生骨质疏松症的风险,提示植酸抑制钙吸收小鼠模型构建成功。对于黑芝麻而言,加工方式黑芝麻饲料组ALP水平显著低于未加工黑芝麻组(P<0.05),微波加工黑芝麻组ALP水平最低为40.03 U/L。对于白芝麻而言,超高压加工芝麻组ALP含量显著低于白芝麻其它组别(P<0.05)。如图3B图3C所示,各组小鼠与模型组小鼠血清钙水平之间均无显著性差异(P<0.05),实验组小鼠除超高压500 MPa组外血清磷水平均有下降趋势,其余各组与植酸模型组相比具有显著性差异(P<0.05),模型组血清磷显著高于正常组(P<0.05)。

    图  3  不同加工方式芝麻饲料对小鼠血清指标的影响
    注:不同小写字母表示各组间差异显著(P<0.05)。
    Figure  3.  Effects of different processing methods of sesame feed on serum indexes of mice

    图4A图4C所示,与正常组相比,模型组股骨的骨钙含量以及骨干重指数更低,且股骨干重指数与正常组相比具有显著性差异(P<0.05),提示植酸对于小鼠的骨生长具有明显抑制作用,模型组小鼠处于钙缺乏状态。Z50-1、W8-1、W8-25、K180-1、K180-25、G500-1、G500-25组与模型组相比,股骨骨钙含量显著增加(P<0.001),W8-25、K180-1、K180-25、G500-1、G500-25组与模型组相比,胫骨骨钙含量也显著增加(P<0.001)。这表明微波、烘烤、超高压加工过的芝麻饲料对小鼠具有明显的钙补充效果。图4C图4D显示了股骨、胫骨干重指数,No-1、No-25、Z50-25组与模型组相比,股骨骨干重指数显著升高(P<0.05),No-25、W8-1、K180-25组与模型组相比,胫骨骨干重指数显著升高(P<0.05)。

    图  4  不同加工方式芝麻饲料对小鼠骨指标的影响
    注:*表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.05);**表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.01);***表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.001)。
    Figure  4.  Effects of different processing methods of sesame feed on bone indexes of mice

    图5所示,正常组在电子显微镜下表面几乎无明显空隙,表面光滑,呈较浅沟壑,表明骨头密度较好,无患骨质疏松的风险。与正常组相比,模型组骨骼表面凹凸不平,有较多突起,显示出基质有大量缺失,表面出现扇形凹坑。实验组则表现出较好的改善效果,表现为表面光滑无突起,且表面更加致密,蒸煮50 min白芝麻组显示出与模型组类似的凹坑与凸起,表明其效果不佳。总体而言,相对于其他组别,超高压组小鼠骨表面致密光滑无凸起,优于其他芝麻加工方式,其对逆转PA抑制作用更加显著。

    图  5  各组小鼠股骨扫描电子显微镜图(1000×)
    Figure  5.  Scanning electron microscopy of femur in each group (1000×)

    本实验聚焦于不同方式加工后的芝麻基本组分特别是钙生物利用率的变化,并通过体外模拟消化实验以及植酸抑制钙吸收动物实验探究不同加工方式对于芝麻中钙生物利用率的影响。体外模拟消化实验结果表明,与未加工组相比,超高压加工方式具有显著提高钙离子释放率的效果(P<0.001)。动物实验从生理、血清、骨指标三方面考察加工后的芝麻是否具有补钙效果,结果表明植酸模型组具有发生骨质疏松的风险,与模型组相比,烘烤组以及超高压组的小鼠股骨、胫骨骨钙含量显著增加(P<0.001),具有明显补钙效果,股骨扫描电镜结果显示,超高压组芝麻表现出改善骨损伤效果。体外实验与体内实验结果基本一致。

    在加工过程中本研究发现钙离子以及灰分含量有不同程度的上升,有研究认为热加工以及超高压加工过程会提高芝麻种子的消化率,从而引发一些矿物质的释放和增加。传统的加工方式会显著降低芝麻当中的水分含量(P<0.05),例如蒸煮、微波以及烘烤[22],而超高压方式则完美的避免了这种影响,超高压加工是一种新型的加工技术,具有能耗少、处理温度低、营养维持多等优点[23],使得芝麻最大限度地保留了其本身的水分含量,更有利于其应用于食品配料的加工制作。同时,在加工过程中由于芝麻中水分的损失,其籽粒中脂类等有机物的浓度会随之增加,故在不同的加工过程中亦可以观察到芝麻蛋白质含量的变化,如葫芦巴种子在烘烤、水煮和压力蒸煮条件下,蛋白质含量也会显著增加[24]。有研究表明,煮沸、微波和高压灭菌时间越长,植酸含量越低[25]。结果显示蒸煮、微波等加工方式均减少了芝麻中植酸的含量,其中烘烤180 ℃/10 min表现出最好的降植酸效果。植酸主要存在于芝麻的种皮中并具有水溶性,因此在煮沸过程中会发生损失现象[26]。除此之外,植酸盐含量的明显降低可能部分是由于植酸盐的不耐热性以及与其他成分之间形成了不溶性复合物,如植酸盐-蛋白质和植酸盐-蛋白质-矿物复合物,或由于六磷酸氨基醇水解为五磷酸和四磷酸引起的[27]。然而,超高压加工方式使芝麻当中植酸含量增加,这可能与芝麻本身密度与种皮含有更多植酸有关[28],蒸煮等加工方式会使得芝麻中种皮发生损失。同时,本研究通过体外模拟消化过程测定不同方式加工后芝麻钙离子的释放率。Cian等[29]同样的使用体外模拟消化实验中的可溶性组分来确定营养物质的生物可及性,即食物基质经胃肠道消化后所能释放出来的矿物质营养组分。结果表明超高压加工后的芝麻钙离子释放率显著提高。超高压也被用于加工红豆粉,改善红豆粉物理化学和功能特性,并增强其微生物安全性。钙释放率为游离钙与芝麻钙之比,一方面超高压加工后的黑芝麻总钙含量产生减少导致了释放率的升高;另一方面,超高压加工后的白芝麻蛋白质含量下降,肽钙螯合物的减少导致了游离钙的增多,钙释放率升高。传统蒸煮方式受蒸煮时长以及品种影响,对钙释放率的提升效果并不显著,蒸煮50 min后黑芝麻钙释放率显著增加归因于蒸煮过程中芝麻钙含量的大幅损失以及抗营养因子植酸含量的下降,微波方式加工后芝麻钙释放率无显著增加,烘烤120 ℃加工后的白芝麻钙释放率亦显著提高。

    植酸抑制钙吸收小鼠模型动物实验中,植酸使模型组小鼠体重受到明显抑制,这是因为植酸会与饲料中的蛋白质、氨基酸和淀粉结合,降低了这些营养素的消化率和饲料利用率,使得小鼠体重增加受阻[30]。血清碱性磷酸酶(ALP)是骨骼和肝胆疾病的广泛使用的标志物,ALP水平可以帮助检测肝胆疾病、骨质疏松症和脂肪肝疾病[31],在哺乳动物骨骼研究中经常使用小鼠ALP进行测定研究[32],ALP水平高低与成骨细胞作用及活性密切相关,是常见的骨转换代谢指标[33]。模型组ALP水平明显升高提示其具有患骨质疏松症的风险,而在小鼠的膳食中添加芝麻可以缓解这一风险,经过超高压加工过后的芝麻缓解这一风险的效率更高。血清钙浓度在所有组别中趋于平稳,这是因为血清钙是肠内钙吸收和骨钙溶出的共同结果,其受甲状旁腺素、性激素、维生素D和食源供给量的共同影响,处在一个比较稳定的水平,与摄入钙不存在正相关关系[34]。骨标本的宏观指标如生物力学性质与骨的形状大小可以直接或间接反映骨骼的健康状况,骨组织总量越小,骨钙含量越低,骨骼的材料力学性能越差,则越容易出现骨质疏松或发生骨折现象[35-36]。植酸干扰膳食矿物质消化率会对全身矿物质浓度,特别是骨骼结构中的矿物质沉积产生影响[37]。模型组骨钙浓度最低,摄入芝麻可以缓解这种钙缺乏状态,烘烤加工以及超高压加工甚至可以达到一定的补钙效果。加工后芝麻当中植酸含量下降与芝麻蛋白含量增加都有助于小鼠对于钙的吸收。骨干重指数与体重相关,经过加工后的芝麻饲料组股骨、胫骨干重指数下降可能与小鼠体重上升相关。扫描电镜结果也显示出相应的结论。

    综上,本研究发现对芝麻进行不同的加工,尤其是超高压加工,能促进芝麻当中钙的生物利用率。后续将进一步探究超高压技术加工对芝麻微观结构的影响,从微观结构变化进一步明确其改善钙生物利用的作用机制。本研究结果将应用于芝麻产品的开发,为传统食品的功能进行科学注释,为传统产品的更新换代、推动产业升级提供重要的科学支撑,为传统油料作物的副产物利用提供新思路、新方法。

  • 图  1   不同加工方式对芝麻中钙离子释放率的影响

    注:*或#表示与未加工组相比差异显著(P<0.05);**或##表示与未加工组相比差异显著(P<0.01);***或###表示与未加工组相比差异显著(P<0.001)。

    Figure  1.   Effects of different processing methods on the release rate of calcium in sesame

    图  2   不同加工方式芝麻饲料对小鼠生理指标的影响

    注:*表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.05);**表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.01);***表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.001)。

    Figure  2.   Effects of different processing methods of sesame feed on physiological indexes of mice

    图  3   不同加工方式芝麻饲料对小鼠血清指标的影响

    注:不同小写字母表示各组间差异显著(P<0.05)。

    Figure  3.   Effects of different processing methods of sesame feed on serum indexes of mice

    图  4   不同加工方式芝麻饲料对小鼠骨指标的影响

    注:*表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.05);**表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.01);***表示与模型组(PA)相比差异显著(P<0.001)。

    Figure  4.   Effects of different processing methods of sesame feed on bone indexes of mice

    图  5   各组小鼠股骨扫描电子显微镜图(1000×)

    Figure  5.   Scanning electron microscopy of femur in each group (1000×)

    表  1   小鼠分组

    Table  1   Grouping of mice

    分组处理内容
    正常组正常饲料+生理盐水
    模型组正常饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    No-1组未加工中芝1号黑芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    No-25组未加工中芝25号白芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    Z50-1组蒸煮50 min中芝1号黑芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    Z50-25组蒸煮50 min中芝25号白芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    W8-1组微波8 min中芝1号黑芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    W8-25组微波8 min中芝25号白芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    K180-1组烘烤180 ℃中芝1号黑芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    K180-25组烘烤180 ℃中芝25号白芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    G500-1组超高压500 MPa中芝1号黑芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
    G500-25组超高压500 MPa中芝25号白芝麻饲料+植酸(1500 mg/kg bw)
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    表  2   不同方式加工后的中芝1号黑芝麻基本组分含量

    Table  2   Contents of basic components of Zhongzhi No.1 black sesame after processing in different ways

    样品组别 钙(mg/kg) 水分(%) 蛋白质(%) 植酸(%) 灰分(%)
    未加工 3963.20±153.43cd 4.08±0.02b 19.72±0.50d 3.13±0.00bc 0.04±0.00f
    蒸煮30 min 4145.00±230.63c 1.65±0.15e 21.64±0.82a 2.94±0.15d 0.05±0.00ef
    蒸煮50 min 3438.01±100.04e 1.8406±0.01d 20.94±1.92cd 2.99±0.16cd 0.05±0.00de
    微波6 min 4054.94±293.15c 1.51±0.07e 26.76±0.93a 3.26±0.08b 0.05±0.00bc
    微波8 min 4887.30±456.81ab 1.11±0.11f 20.12±0.07cd 2.99±0.16cd 0.06±0.01a
    烘烤120 ℃ 4001.64±391.57cd 0.39±0.011g 19.66±0.25d 3.21±0.01b 0.05±0.00cd
    烘烤180 ℃ 3524.37±281.79de 0.29±0.02g 23.03±0.15b 2.64±0.07e 0.05±0.00bc
    超高压300 MPa 4700.97±203.57b 4.73±0.08a 21.52±1.18bc 3.92±0.03a 0.05±0.00b
    超高压500 MPa 5309.60±63.74a 3.84±0.14c 21.75±0.23bc 3.90±0.23a 0.05±0.00ab
    注:同列数值标有不同字母表示各组之间存在显著性差异(P<0.05)。
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    表  3   不同方式加工后的中芝25号白芝麻基本组分含量

    Table  3   Contents of basic components of Zhongzhi No.25 white sesame after processing in different ways

    样品组别 钙(mg/kg) 水分(%) 蛋白质(%) 植酸(%) 灰分(%)
    未加工 4133.64±153.43bcd 3.76±0.03b 22.33±0.48de 3.22±0.11bc 0.04±0.00f
    蒸煮30 min 4585.17±283.37ab 1.91±0.06e 24.24±0.46b 2.74±0.15e 0.04±0.00f
    蒸煮50 min 4717.54±419.56a 1.34±0.13f 30.96±0.84a 3.00±0.23cd 0.05±0.00e
    微波6 min 4586.62±222.73ab 2.34±0.15d 23.44±0.25bcd 3.34±0.04b 0.05±0.00c
    微波8 min 4462.21±125.75abc 0.49±0.01g 23.81±1.10bc 3.30±0.29b 0.05±0.00b
    烘烤120 ℃ 3906.91±312.86d 0.21±0.01h 22.16±0.78e 3.45±0.01b 0.05±0.00d
    烘烤180 ℃ 4501.85±193.27abc 0.25±0.01h 22.89±0.84cde 2.79±0.05de 0.05±0.00b
    超高压300 MPa 4065.00±210.67cd 4.10±0.10a 21.65±0.34e 3.95±0.03a 0.05±0.00c
    超高压500 MPa 3454.38±125.58e 3.04±0.08c 21.89±0.61e 4.18±0.02a 0.05±0.00a
    注:同列数值标有不同字母表示各组之间存在显著性差异(P<0.05)。
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出版历程
  • 收稿日期:  2023-11-16
  • 网络出版日期:  2024-09-01
  • 刊出日期:  2024-10-14

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