Storage Characteristics, Isolation and Identification of Spoilage Bacteria, and Spoilage Characters of Boxed Tofu
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摘要: 为探究腐败微生物对盒装豆腐品质的影响及其腐败特性，以感官评分和菌落总数为指标，研究贮藏温度（4、25、37 ℃）对盒装老豆腐和内酯豆腐保存期的影响，并对盒装豆腐中腐败菌进行分离鉴定，观测其腐败性状和生长特性。结果显示：4 ℃贮藏时盒装老豆腐和内酯豆腐的保存期均超过30 d，25 ℃贮藏时盒装老豆腐和内酯豆腐的保存期约为36和48 h，37 ℃贮藏时二者的保存期分别为12和30 h左右。从新鲜和腐败变质的盒装老豆腐和内酯豆腐中共分离鉴定出52株腐败菌，其中芽孢杆菌属细菌43株，其他属细菌9株，表明芽孢杆菌是导致盒装豆腐腐败变质的主要微生物。贮藏温度对腐败菌的多样性有影响，4和25 ℃贮藏时腐败菌种类较丰富。回接芽孢杆菌后在25 ℃贮藏时对盒装豆腐的品质影响较大，其中蜡样芽孢杆菌会导致盒装老豆腐发生褐变，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌会引起盒装老豆腐胀袋，回接枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的盒装内酯豆腐的腐败性状与空白样品基本一致，豆腐的最终腐败性状是各种细菌综合作用所致。本研究在前人的基础上进一步丰富了豆腐来源芽孢杆菌和其他细菌的种类，对于指导豆制品企业在生产和贮运过程中采取针对性措施控制盒装豆腐中芽孢杆菌的数量，进而延缓其腐败变质和延长保存期具有较好的理论意义。Abstract: In order to explore the effects of spoilage microorganisms on the quality of boxed tofu and their spoilage characteristics, sensory score and aerobic plate count were used as indexes to study the effect of storage temperature (4, 25 and 37 ℃) on the storage life of boxed firm tofu and lactone tofu. The spoilage bacteria in boxed tofu were isolated and identified, and their spoilage and growth characteristics were observed. The results showed that the storage life of boxed firm tofu and lactone tofu stored at 4 ℃ was both more than 30 days. The storage life of boxed firm tofu and lactone tofu stored at 25 ℃ was about 36 and 48 h, respectively. The storage life of boxed firm tofu and lactone tofu stored at 37 ℃ was about 12 and 30 h, respectively. Fifty-two strains of spoilage bacteria were isolated and identified from fresh and spoilage boxed firm tofu and lactone tofu, including 43 strains of Bacillus sp. and 9 strains of other genus bacteria, which indicated that Bacillus sp. were the main microorganisms that caused spoilage of boxed tofu. The diversity of spoilage bacteria was affected by storage temperature, and the species of spoilage bacteria were more abundant when the boxed tofu were stored at 4 and 25 ℃. The quality of boxed tofu was greatly affected by Bacillus sp. when stored at 25 ℃, in which Bacillus cereus could cause browning of boxed firm tofu, and Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis could cause boxed firm tofu to swell. The spoilage characteristics of boxed lactone tofu back inoculated Bacillus subtilis and Bacillus cereus were basically the same as those of the control sample. The final spoilage characters of tofu were caused by the comprehensive action of various bacteria. This study further enriched the species of Bacillus sp. and other bacteria from tofu on the basis of previous studies, and it had good theoretical significance for guiding soybean products enterprises to take targeted measures to control the number of Bacillus sp. in boxed tofu in the process of production, storage and transportation, so as to delay its spoilage and prolong its storage life.
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Keywords:
- boxed tofu /
- storage life /
- spoilage bacteria /
- separation and identification /
- Bacillus /
- spoilage characters
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豆腐富含蛋白质、维生素、矿物质等营养成分，具有很高的营养价值[1−2]，深受大众喜爱。按照使用凝固剂的不同，豆腐可分为老豆腐（北豆腐）、嫩豆腐（南豆腐）、酸浆豆腐（豆清豆腐）和内酯豆腐[3−6]。豆腐常见的包装方式有盒装和散装，其中较大规模的豆制品企业一般采用塑料盒密封包装的方式，而豆腐作坊一般采用大块散装的方式[7]。盒装豆腐采用巴氏杀菌，卫生安全，产品质量稳定。但由于豆腐含水量高、营养丰富，容易发生腐败变质，导致豆腐产品货架期较短，对豆制品企业扩大销售半径、提高产量规模产生较大影响，也容易引发食品安全问题[8]。因此，如何有效控制盒装豆腐的微生物数量，延长产品的保藏期，是提升豆制品企业竞争力亟待解决的问题。
已有研究表明，豆腐产地、种类、生产季节、加工工艺、包装方式和贮藏条件的不同可能会导致豆腐腐败菌种类的差异。韩翠萍等[9]从散装豆腐和盒装豆腐中分离出4株优势腐败微生物，分别为溶血性葡萄球菌、克假丝酵母、短芽孢杆菌、托尔豪特链球菌。王宸之等[10]在全豆豆腐中分离出蜡状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。郑玉玺等[11]在不同产地不同盒装豆腐中分离出枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。吴丽樱[12]在盒装内酯豆腐中分离出枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌，在简易包装老豆腐中分离出库特氏菌、荧光假单胞菌、肠膜明串珠菌和产气肠杆菌。Lee等[13]在变质豆腐中分离出蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌。Rossi等[14]在小规模豆腐企业生产的豆腐中分离出魏氏菌属、乳酸乳球菌、肠球菌等。Ananchaipattana等[15]在豆腐样品中分离出大肠杆菌、假单胞菌、乳酸菌、葡萄球菌和芽孢杆菌等。Fouad等[16]在2~3 ℃保存的真空包装豆腐分离出了乳酸菌、肠道细菌和假单胞菌属。然而，不同种类的腐败菌与豆腐的腐败性状相关性如何，不同腐败阶段何种腐败菌发挥主要作用等，还鲜有研究。
河南是人口大省和豆腐消费大省，也是北豆腐或老豆腐的典型产区。目前有关河南地区盒装豆腐腐败微生物的研究鲜有报道。本文以河南省豆制品龙头企业—郑州新农源绿色食品有限公司生产的盒装老豆腐和内酯豆腐为研究对象，研究不同贮藏温度下盒装豆腐的保存期，并对其腐败微生物进行分离鉴定，通过回接实验探明主要微生物生长导致豆腐腐败的腐败性状，以期为盒装豆腐生产和贮运过程中的微生物控制提供理论依据，并为企业下一步开发有针对性的芽孢控制技术提供菌种来源。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
盒装老豆腐（L）、盒装内酯豆腐（N） 郑州新农源绿色食品有限公司；营养琼脂培养基、营养肉汤培养基 广东环凯微生物科技有限公司；氯化钠 天津市大茂化学试剂厂；细菌基因组DNA 提取试剂盒、λDNA HindIII Marker、D2000 DNA Marker、ddH2O、2×Taq PCR MasterMix II 天根生化科技（北京）有限公司；革兰氏染色试剂盒、50×TAE电泳缓冲液、6×DNA上样缓冲液 北京索莱宝科技有限公司；琼脂糖、Goldview核酸染料 北京兰杰柯科技有限公司；琼脂糖凝胶DNA小量回收试剂盒 广州美基生物科技有限公司；16S rRNA通用引物（27F和1492R） 生工生物工程（上海）股份有限公司合成。
XFH-50CA电热式压力蒸汽灭菌器 浙江新丰医疗器械有限公司；SW-CJ-2D超净工作台 上海尚道仪器制造有限公司；ME104E电子天平 托利多仪器（上海）有限公司；SPX-250B生化培养箱 上海坤天实验室仪器有限公司；Axio Vert.A1倒置显微镜 德国卡尔蔡司显微镜有限公司；Pico 17高速离心机 赛默飞世尔（中国）有限公司；TProfessionaL standard 96 Gradient梯度PCR仪 德国耶拿分析仪器股份公司；JY600电泳仪 北京君意东方电泳设备有限公司；Tanon-5200MuLti全自动凝胶图像分析系统 上海天能科技有限公司；FE28-Micro pH计 梅特勒-托里多仪器（上海）有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 样品采集与处理
取生产线上经巴氏杀菌并冷却后的新鲜盒装老豆腐和内酯豆腐，2 h内由2~8 ℃冷藏车运输至实验室。新鲜样品立即进行感官评价和菌落总数测定，并分离腐败菌。其余样品分别在4、25、37 ℃下放置，分别每隔3 d、12 h、6 h进行感官评价和菌落总数测定，直至样品腐败变质。完全腐败后（感官评分低于5.5分）的样品用于分离腐败菌。不同处理样品标注见表1。
表 1 盒装豆腐不同类型和贮藏条件的样品标注Table 1. Sample labeling of boxed tofu for different types and storage conditions豆腐类型 贮藏条件 新鲜样品 4 ℃ 25 ℃ 37 ℃ 盒装老豆腐 XL 4L 25L 37L 盒装内酯豆腐 XN 4N 25N 37N 1.2.2 感官评价
选择10名经过培训的专业人员，参照郑玉玺[17]的感官评分表并稍作修改，对样品的气味、色泽、口感、组织状态进行感官评价。盒装老豆腐和内酯豆腐的感官评价标准分别见表2和表3。根据Torry[18]方案当样品的感官评分在5.5分以下时，即认为样品已经达到不可接受状态，即达到腐败标准。
表 2 盒装老豆腐感官评价标准Table 2. Sensory evaluation standards of boxed firm tofu感官评价指标 分值 气味 色泽 口感 组织状态 豆腐香气 淡黄色 豆香味浓 成块、有弹性、质地细腻 9~10 无香味、无异味 微黄色、无黏腻感 豆香味淡 软硬适中、有轻微掉渣 7~8 略有酸味 黄色、轻微黏腻感 有一定豆腥味 豆水略有浑浊 5~6 有较强酸味 褐色、失水、黏腻 无豆腐滋味 豆水浑浊、质地略硬 3~4 酸臭味严重 灰褐色、失水严重 酸涩味严重 豆水严重浑浊、质地变硬 1~2 表 3 盒装内酯豆腐感官评价标准Table 3. Sensory evaluation standards of boxed lactone tofu感官评价指标 分值 气味 色泽 口感 组织状态 豆腐香气淡 乳白色 细腻、略甜 块型完整 9~10 无香味、无异味 白色 细腻 软硬适中、有轻微掉渣 7~8 略有酸味 淡黄色 略有酸涩味 表面粘连，稍有失水 5~6 有较强酸味 灰色 酸涩味较重 粘连、失水、易碎 3~4 酸臭味严重 色泽暗淡 颗粒感较强 严重失水、难以成型 1~2 1.2.3 菌落总数的测定
参考GB 4789.2-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数的测定》中所规定的方法对样品的菌落总数进行测定[19]。
1.2.4 腐败菌的分离纯化
无菌操作下取25 g豆腐样品置于无菌均质袋中，加入225 mL无菌生理盐水，充分拍打混匀，以10倍稀释法稀释若干倍。选取合适的稀释梯度，分别吸取200 μL样液均匀涂布在营养琼脂平板上，置于37 ℃恒温培养箱中倒置培养18~24 h。挑取5～10个形态特征差异明显的单个菌落，在营养琼脂平板上划线，置于37 ℃恒温培养箱中倒置培养18～24 h。重复上述划线分离步骤，直至得到纯菌株。将纯化后的腐败菌接种至营养肉汤培养基中，37 ℃ 120 r/min振荡培养18～24 h，取部分培养液用20%甘油在-20 ℃保藏菌种，部分培养液用于革兰氏染色和细菌基因组DNA提取。
1.2.5 腐败菌的形态观察
腐败菌经革兰氏染色后，在显微镜油镜下观察其形态特征，根据染色结果及细胞形态简单分类。
1.2.6 腐败菌的16S rRNA分子鉴定
采用细菌基因组DNA提取试剂盒提取腐败菌基因组DNA，用1%琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像系统检测提取结果，然后进行16S rRNA PCR扩增。通用引物[20]：27F 5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’，1492R 5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’。PCR反应体系（50 μL）：模板DNA 4 μL，引物27F 2 μL，引物1492R 2 μL，2×Taq PCR MasterMix 25 μL，ddH2O 17 μL。PCR扩增条件：94 ℃预变性5 min，30个循环（94 ℃变性30 s，52 ℃退火45 s，72 ℃延伸90 s），72 ℃延伸7 min。PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，切下长度1500 bp左右目标条带，采用琼脂糖凝胶DNA小量回收试剂盒纯化PCR产物。纯化产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测后，送至生工生物工程（上海）股份有限公司测序。获得的序列在NCBI上利用BLAST搜索与已知种属最接近的序列，进行同源性比对分析。
1.2.7 腐败菌回接
取样新鲜老豆腐和内酯豆腐，在无菌环境下分割成4 cm×4 cm×4 cm的小块，放入无菌袋中，95 ℃杀菌30 min，以减少样品初始菌量，冷却至室温备用。
保藏菌种解冻后，接种至营养肉汤培养基中，37 ℃ 120 r/min振荡培养24 h，菌落计数确定活化腐败菌的浓度，根据新鲜豆腐样品的质量添加菌液，腐败菌的添加量为103 CFU/g，用无菌涂布棒将菌液均匀涂抹于豆腐表面，随即密封。腐败菌回接后的豆腐样品在25 ℃下贮藏，每隔12 h记录其腐败特征，测定菌落总数和pH。
1.2.8 腐败特征的描述
记录腐败菌回接样品贮藏过程中是否出现发酸、发臭、发黏、褐变、产生刺激性气味、胀袋等腐败特征。
1.2.9 pH的测定
无菌操作下取25 g样品，置于无菌均质袋中，加入225 mL灭菌生理盐水，充分拍打混匀，制成10−1稀释液，用pH计测定pH。
1.3 数据处理
所有数据均以平均值±标准差（n＝3）表示。采用SPSS 20.0软件进行统计分析，显著性差异分析为单因素方差分析，多重比较采用LSD检验，P<0.05具有显著性差异。采用Origin 2021软件作图。
2. 结果与分析
2.1 贮藏温度对盒装豆腐保存期的影响
豆腐的保存期可分别用感官评分和菌落总数进行评价。当感官评分为5.5时，可认为豆腐样品已达到感官拒绝状态。一般认为，食品能被接受的最大微生物限量值为7 lg CFU/g [21−22]。将盒装老豆腐和内酯豆腐分别置于4、25、37 ℃进行贮藏，分别每隔3 d、12 h、6 h进行感官评价和菌落总数测定，其在贮藏期间的感官评分和菌落总数变化见图1～图3。
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图 1 4 ℃贮藏盒装豆腐感官评分和菌落总数变化Figure 1. Changes of sensory score and total number of colonies of boxed tofu stored at 4 ℃![]()
图 3 37 ℃贮藏盒装豆腐感官评分和菌落总数变化Figure 3. Changes of sensory score and total number of colonies of boxed tofu stored at 37 ℃![]()
图 2 25 ℃贮藏盒装豆腐感官评分和菌落总数变化Figure 2. Changes of sensory score and total number of colonies of boxed tofu stored at 25 ℃结果显示，贮藏温度为4 ℃时，盒装豆腐在30 d时仍未达到感官拒绝状态，菌落总数低于4 lg CFU/g。贮藏温度为25 ℃时，盒装老豆腐和内酯豆腐分别在36和48 h左右达到感官拒绝状态，菌落总数均超过7 lg CFU/g。贮藏温度为37 ℃时，盒装老豆腐和内酯豆腐分别在12和30 h左右达到感官拒绝状态，菌落总数也超过7 lg CFU/g。由此可见，贮藏温度对盒装豆腐的保存期有较大影响，温度越低保存期越长。
实验结果还显示，盒装内酯豆腐的保存期略长于老豆腐，这与二者的加工方式不同有关。内酯豆腐生产时，豆浆加入凝固剂葡萄糖酸内酯后即进行装盒密封，然后经升温成型，煮后的豆浆与外界环境接触时间较短[23]。老豆腐生产时，豆浆加入凝固剂后要经过蹲脑、压制、分切等处理后才装盒密封，与外界环境接触时间较长，污染残存的微生物数量较多，故保存期较短。此外，当样品达到感官拒绝状态前，其菌落总数已经达到7 lg CFU/g，表明在界定盒装豆腐的腐败标准时，感官评价要迟滞于微生物指标。
通过前期的调研可知，该企业盒装豆腐产品标注的保存期是1~7 ℃下10 d，企业采用冷库贮藏和冷藏车运输，能够较好保持低温环境，但产品运输到超市后的贮藏和销售温度难以保证，有些消费者也未能将所购产品及时置于冰箱中冷藏，导致产品实际的保存期受到较大影响。因此，增强销售商的冷藏意识和管理水平，以及消费者的食品保藏知识，对提升豆腐等易腐食品的安全性、延长保存期、降低销售损耗具有重要意义。
2.2 盒装豆腐中腐败菌的分离纯化结果
从新鲜的和不同温度贮藏后腐败变质的盒装豆腐样品中共分离出52株不同菌落形态的腐败菌。革兰氏染色结果显示大多数腐败菌为革兰氏阳性菌（40株），少数腐败菌为革兰氏阴性菌（12株）；腐败菌在细胞形态上多呈杆状，其中46株为杆菌，6株为球菌。部分腐败菌的菌落特征和细胞形态见图4和图5。韩翠萍等[9]从腐败散装与盒装豆腐中均分离出4株腐败菌，其中3株为革兰氏阳性细菌，1株为革兰氏阳性酵母；郑玉玺[17]从不同产地不同种类豆腐中分离纯化得8株纯菌株，均为革兰氏阳性菌，其中6株均为杆菌，2株为球菌。本研究分离的豆腐腐败菌在革兰氏染色和细胞形态上与前人的研究结果一致，即大部分腐败菌为革兰氏阳性菌，呈杆状。
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图 4 盒装老豆腐部分腐败菌菌落特征及细胞形态（1000×）Figure 4. Colony characteristics and cell morphology of some spoilage bacteria from boxed firm tofu (1000×)![]()
图 5 盒装内酯豆腐部分腐败菌菌落特征及细胞形态（1000×）Figure 5. Colony characteristics and cell morphology of some spoilage bacteria from boxed lactone tofu (1000×)2.3 盒装豆腐腐败菌的菌种鉴定结果
对盒装豆腐中分离纯化出的腐败菌进行16S rRNA分子鉴定，结果见表4。
表 4 盒装豆腐中分离细菌16S rRNA序列比对结果Table 4. 16S rRNA sequence alignment results of isolated bacteria from boxed tofu样品 菌株编号 最相似菌株 序列登录号 相似度（%） 种属 门类 XL XL1 Bacillus sp. strain WR-3 MG371991.1 99.76 芽孢杆菌属 厚壁菌门 XL7 Bacillus sp. strain 210_24 GQ199726.1 98.08 芽孢杆菌属 厚壁菌门 XL2 Bacillus subtilis strain EGI132 MN704439.1 99.50 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 XL3 Bacillus cereus strain NPK1_1_30 MN691552.1 100.00 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 XL4 Bacillus licheniformis strain QT331 MT043736.1 98.83 地衣芽孢杆菌 厚壁菌门 XL5 Lysinibacillus sp. strain 4515C KM242578.1 94.12 赖氨酸芽孢杆菌 厚壁菌门 XL6 Bacillus thuringiensis strain Bt57 MT292096.1 98.75 苏云金芽胞杆菌 厚壁菌门 XN XN1 Bacillus sp. strain A9 OM957541.1 98.96 芽孢杆菌属 厚壁菌门 XN2 Bacillus subtilis strain B11 KJ870191.1 99.55 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 XN4 Bacillus subtilis strain P62 KU551208.1 99.30 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 XN6 Bacillus subtilis strain CG-6 OK037059.1 99.89 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 XN7 Bacillus subtilis strain 4I2 MW380591.1 99.19 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 XN3 Bacillus jeotgali strain NIOT-Ba-4 KJ575006.1 98.30 咸海鲜芽孢杆菌 厚壁菌门 XN5 Pantoea agglomerans strainATY79 HQ219998.1 99.87 成团泛菌 变形菌门 4L 4L1 Rummeliibacillus pycnus strain M9-19 KT382255.1 99.70 鲁梅尔芽胞杆菌 厚壁菌门 4L3 Rummeliibacillus pycnus strain NBRC 101231 NR_041521.1 99.56 鲁梅尔芽胞杆菌 厚壁菌门 4L2 Bacillus cereus strain BPH33 HM771262.1 99.63 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 4L4 Bacillus siamensis strain MDJK10 KY967281.1 99.54 暹罗芽孢杆菌 厚壁菌门 4L5 Enterococcus durans strain KLDS 6.0933 KJ818114.1 99.73 耐久肠球菌 厚壁菌门 4L6 Brevibacillus sp. strain SNH_M11 MN577380.1 99.73 短芽孢杆菌属 厚壁菌门 4N 4N1 Chryseobacterium sp. strain FF12 partiaL LN810503.1 98.68 金黄杆菌属 拟杆菌门 4N2 Chryseobacterium sp. strain CBo1 MK095750.1 98.98 金黄杆菌属 拟杆菌门 4N3 Rummeliibacillus pycnus strain M9-19 KT382255.1 99.18 鲁梅尔芽胞杆菌 厚壁菌门 4N5 Enterococcus faecium strain 1718 MT597585.1 99.54 屎肠球菌 厚壁菌门 4N6 Enterococcus faecium strain CAU:201 MF369855.1 99.55 屎肠球菌 厚壁菌门 25L 25L1 Bacillus sp. strain LSB24 MK600540.1 99.81 芽孢杆菌属 厚壁菌门 25L3 Bacillus sp. strain BYT-24 JQ773351.1 99.63 芽孢杆菌属 厚壁菌门 25L2 Bacillus cereus strain ZK2 JQ773351.1 99.66 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 25L5 Bacillus cereus strain W1 KT970711.1 99.63 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 25L4 Brevibacillus agri strain SJ6 OM049334.1 99.24 土壤芽孢杆菌 厚壁菌门 25L6 Brevibacillus agri strain Y17 KF641808.1 99.53 土壤芽孢杆菌 厚壁菌门 25L7 Enterococcus durans strain 3883 MT538726.1 99.07 耐久肠球菌 厚壁菌门 25N 25N1 Bacillus cereus strain K1M2 AB473013.1 99.70 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 25N2 Bacillus cereus strain DS-2 ON005108.1 99.34 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 25N3 Bacillus pumiLus strain S8 FJ236809.1 99.89 短小芽孢杆菌 厚壁菌门 25N4 Staphylococcus sp. strain GG 54 MT459283.1 97.91 葡萄球菌 厚壁菌门 25N5 Bacillus subtilis strain FL37 KY818955.1 99.49 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 25N6 Microbacterium lacticum strain B19/II6 MZ841732.1 97.85 乳微杆菌 厚壁菌门 37L 37L1 Bacillus sp. strain LPB22 MT673802.1 100.00 芽孢杆菌属 厚壁菌门 37L4 Bacillus sp. strain KT70 KJ734004.1 98.89 芽孢杆菌属 厚壁菌门 37L2 Bacillus licheniformis strain AD242 MT642944.1 99.35 地衣芽孢杆菌 厚壁菌门 37L3 Bacillus tequilensis strain M53-1 JF411295.1 99.06 特基拉芽孢杆菌 厚壁菌门 37L6 Bacillus tequilensis strain KM34 JF411313.1 99.44 特基拉芽孢杆菌 厚壁菌门 37L5 Bacillus cereus strain G5 HQ418488.1 98.64 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 37L7 Bacillus subtilis strain X303 KU240494.1 99.30 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 37N 37N1 Bacillus sp. strain JSM 164012 MG893180.1 99.64 芽孢杆菌属 厚壁菌门 37N4 Bacillus sp. strain NII-73 FJ897479.1 98.22 芽孢杆菌属 厚壁菌门 37N2 Bacillus cereus strain Lmb017 KT986088.1 98.79 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 37N5 Bacillus cereus strain EM10 KJ612536.1 99.03 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 37N6 Bacillus cereus strain DS16 EU834245.1 99.73 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 37N7 Bacillus cereus strain S45 GQ462533.1 100.00 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 37N3 Bacillus licheniformis strain B21-023 MK063827.1 99.05 地衣芽孢杆菌 厚壁菌门 表4显示，每种豆腐样品的腐败菌为6~7株。腐败菌主要为芽孢杆菌（共43株），包括蜡样芽孢杆菌（11株）、芽孢杆菌属（9株）、枯草芽孢杆菌（7株）、地衣芽孢杆菌（3株）、鲁梅尔芽胞杆菌（3株）、土壤芽孢杆菌（2株）、特基拉芽孢杆菌（2株），赖氨酸芽孢杆菌、苏云金芽胞杆菌、咸海鲜芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌、短芽孢杆菌属、短小芽孢杆菌各1株。其他腐败菌包括金黄杆菌属、屎肠球菌、耐久肠球菌各2株，成团泛菌、葡萄球菌、乳微杆菌各1株。由此可见，芽孢杆菌是盒装豆腐腐败菌中的优势菌，这与郑玉玺等[11]、吴丽樱等[24]、王敏等[25]的研究结果一致。
表5显示，豆腐类型和贮藏温度对腐败菌的种类也有一定影响。贮藏温度对盒装内酯豆腐腐败菌多样性的影响较大，对盒装老豆腐影响较小，而且4和25 ℃贮藏的盒装内酯豆腐腐败菌种类比其他样品都要丰富。当贮藏温度为4 ℃时，盒装内酯豆腐中的腐败菌为芽孢杆菌属（1株）、肠球菌属（2株）和金黄杆菌属（2株）。其余样品中腐败菌多为芽孢杆菌属。由于低温会显著抑制大多数微生物的代谢活动，且4 ℃贮藏样品分离腐败菌时，样品并未达到腐败状态，因此导致4 ℃贮藏盒装老豆腐和盒装内酯豆腐腐败菌种类的差异。同时盒装老豆腐和盒装内酯豆腐两者的加工方式、原辅料、机械化程度的不同都会导致其在不同贮藏温度时腐败菌种类的差异。吴丽樱[12]研究发现不同贮藏温度对简易包装老豆腐的腐败菌菌相有较大影响，郑玉玺[17]报道不同贮藏温度下盒装豆腐腐败菌多样性也会发生较大变化，这与本研究结果相似。
表 5 盒装豆腐中腐败菌的分布情况Table 5. Distribution of spoilage bacteria in boxed tofu样品 腐败菌种类 芽孢杆菌属 肠球菌属 微杆菌属 金黄杆菌属 葡萄球菌属 泛菌属 XL 7 4L 5 1 25L 6 1 37L 7 XN 6 1 4N 1 2 2 25N 4 1 1 37N 7 2.4 盒装豆腐腐败菌的腐败性状和生长特性
根据腐败菌分离鉴定结果，分别从盒装老豆腐和内酯豆腐中选取出现频率较高的腐败菌各5株（见表6），将每株菌分别回接到灭菌后的盒装豆腐样品中，在25 ℃下贮藏，观察其腐败性状、菌落总数和pH的变化情况。
表 6 回接实验中选取的腐败菌菌株Table 6. Spoilage strains selected in the back inoculation experiment样品 菌株英文名称 菌株中文名称 菌株编号 盒装老豆腐 Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌 XL2 Bacillus cereus 蜡样芽孢杆菌 XL3 Enterococcus durans 耐久肠球菌 4L5 Brevibacillus agri 土壤芽孢杆菌 25L6 Bacillus licheniformis 地衣芽孢杆菌 37L2 盒装内酯豆腐 Pantoea agglomerans 成团泛菌 XN5 Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌 XN6 Enterococcus faecium 屎肠球菌 4N5 Bacillus pumilus 短小芽孢杆菌 25N3 Bacillus cereus 蜡样芽孢杆菌 37N7 2.4.1 腐败菌的腐败性状
表7和表8显示，接种腐败菌的盒装老豆腐样品和空白的老豆腐样品25 ℃贮藏时，在24 h出现腐败性状（枯草芽孢杆菌除外），接种腐败菌的盒装内酯豆腐样品25 ℃贮藏时，在12 h即出现腐败性状，而空白内酯豆腐样品在24 h出现腐败性状。表明回接腐败菌的内酯豆腐较老豆腐更容易腐败，这可能是由于回接至内酯豆腐中的腐败菌（如成团泛菌、屎肠球菌、短小芽孢杆菌）其代谢分解豆腐中营养物质的速率快于回接至老豆腐中的腐败菌（如耐久肠球菌、土壤芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌）。腐败初期（12~24 h）的性状大体表现为腐败味、发粘等，中期（36~48 h）则表现为酸腐味、发粘、刺激性气味等，后期（60 h）出现臭味、胀袋等性状。老豆腐和内酯豆腐的腐败性状有明显差异，可能与二者的制作工艺、所用凝固剂不同有关[7]，也与二者的含水量、pH有关[4-6]。不同腐败菌的腐败性状也有一定差异，如蜡样芽孢杆菌会导致老豆腐发生褐变，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌引起老豆腐胀袋；成团泛菌会在内酯豆腐表面形成一层菌膜，短小芽孢杆菌则在内酯豆腐中产生黏液；不同腐败菌均会引起内酯豆腐产生刺激性气味和胀袋。韩翠萍等[9]发现克假丝酵母、溶血性葡萄球菌及托尔豪特链球菌是导致豆腐发粘、涨袋及质构变软的主要微生物，而短芽孢杆菌对豆腐腐败变质无明显影响。综上，豆腐的不同产地、来源和种类及贮藏时间都会直接影响其腐败进程和性状，豆腐的最终腐败性状也是各种腐败菌综合作用所致。
表 7 盒装老豆腐回接腐败菌后的腐败性状Table 7. Spoilage characters of boxed firm tofu after back inoculated with spoilage bacteria样品 贮藏时间（h） 0 12 24 36 48 60 空白对照 无 无 酸臭味
发黏酸味
发黏酸味
发黏酸腐味
刺激性气味
发黏枯草芽孢杆菌 无 腐败味 酸腐味 酸腐味
失水酸腐味
发黏酸味
胀袋蜡样芽孢杆菌 无 无 酸臭味
发黏
褐变腐臭味
发黏
褐变酸腐味
发黏
褐变酸腐味
失水
褐变耐久肠球菌 无 无 腐败味 酸腐味
发黏腐败味 腐败味
失水土壤芽孢杆菌 无 无 腐败味 酸味 酸腐味 酸臭味 地衣芽孢杆菌 无 无 腐败味
刺激性气味
发黏腐败味
发黏酸腐味
发黏酸腐味
发黏
胀袋表 8 盒装内酯豆腐回接腐败菌后的腐败性状Table 8. Spoilage characters of boxed lactone tofu after back inoculated with spoilage bacteria样品 贮藏时间（h） 0 12 24 36 48 60 空白对照 无 无 腐败味 酸腐味 酸臭味
腐败味
胀袋腐臭味
胀袋成团泛菌 无 腐败味 腐败味
刺激性气味腐败味
刺激性气味
菌膜酸腐味
刺激性气味
胀袋腐臭味
刺激性气味
胀袋枯草芽孢杆菌 无 腐败味 腐败味 酸腐味 酸腐味
刺激性气味酸腐味
胀袋屎肠球菌 无 腐败味 腐败味
刺激性气味酸腐味 酸腐味
刺激性气味
胀袋酸腐味
刺激性气味
胀袋短小芽孢杆菌 无 腐败味 腐败味 腐败味
刺激性气味腐败味
刺激性气味
发黏
胀袋酸腐味
刺激性气味
胀袋蜡样芽孢杆菌 无 腐败味 腐败味 酸腐味 酸腐味
刺激性气味酸腐味
刺激性气味
胀袋2.4.2 腐败菌的生长特性
图6显示，回接腐败菌后盒装老豆腐样品的菌落总数在前24 h快速增长，之后趋于平缓。回接枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌样品的菌落总数增速快于空白样品，而回接耐久肠球菌、蜡样芽孢杆菌和土壤芽孢杆菌的增速慢于空白样品，表明枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌可能在盒装老豆腐的腐败初期（12~24 h）发挥主要作用。图7显示，回接腐败菌后的内酯豆腐样品也是在前24 h菌落总数增幅较快，之后有所趋缓。回接成团泛菌、枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌样品的菌落总数增速快于空白样品，回接屎肠球菌和短小芽孢杆菌的增速慢于空白样品，结合腐败性状（表8）来看，接种成团泛菌、枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌后12 h即出现腐败味，而空白在24 h才出现，表明成团泛菌、枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌可能在盒装内酯豆腐的腐败初期（12~24 h）发挥主要作用。
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图 6 盒装老豆腐回接腐败菌后的菌落总数变化情况Figure 6. Changes of the total number of colonies of boxed firm tofu after back inoculated with spoilage bacteria![]()
图 7 盒装内酯豆腐回接腐败菌后的菌落总数变化情况Figure 7. Changes of the total number of colonies of boxed lactone tofu after back inoculated with spoilage bacteria2.4.3 pH的变化情况
图8和图9显示，回接腐败菌后的豆腐样品随贮藏时间延长pH逐渐降低，其中盒装老豆腐样品的pH从初始的6.5左右降至60 h最低的5.0左右，盒装内酯豆腐样品的pH从初始的5.7左右降至60 h最低的4.7左右，从而导致豆腐在贮藏后期呈现酸腐味或酸臭味。老豆腐样品在贮藏前24 h的pH降速较快，与感官评价中的酸腐味出现时间一致（表7），随后降幅趋于平缓，其中枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的pH变化趋势与空白样品几乎一致，前24 h的pH降幅较快，之后则趋于稳定，但始终低于空白样品，结果与其菌落总数的增速快于空白有关（图6）。由于凝固剂的原因，内酯豆腐的初始pH低于老豆腐，其中屎肠球菌pH的变化趋势与空白样品接近，而成团泛菌的pH最低，这与其菌落总数的增长最快有关（图7）。
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图 8 盒装老豆腐回接腐败菌后pH的变化情况Figure 8. Changes of pH of boxed firm tofu after back inoculated with spoilage bacteria![]()
图 9 盒装内酯豆腐回接腐败菌后pH的变化情况Figure 9. Changes of pH of boxed lactone tofu after back inoculated with spoilage bacteria3. 结论
贮藏温度对盒装豆腐保存期和主要腐败菌的影响较大。4 ℃贮藏时盒装老豆腐和内酯豆腐的保存期均超过30 d，25 ℃贮藏时盒装老豆腐和内酯豆腐的保存期约为36和48 h，37 ℃贮藏时盒装老豆腐和内酯豆腐的保存期仅为12和30 h左右。因此，增强豆腐销售商的冷藏意识和管理水平，以及消费者的食品保藏知识，有助于提升豆腐等易腐食品的安全性，延长保存期，减少销售损耗。从新鲜和不同温度贮藏腐败变质的盒装豆腐中分离鉴定出52株腐败菌，主要为芽孢杆菌（共43株）。贮藏温度对盒装内酯豆腐腐败菌的多样性影响较大，对盒装老豆腐影响较小，且4和25 ℃盒装内酯豆腐的腐败菌种类较为丰富。分别选取出现频率较高的5株腐败菌回接到灭菌后的盒装豆腐样品中，盒装内酯豆腐在常温贮藏12 h出现腐败性状，老豆腐样品在24 h出现腐败性状（枯草芽孢杆菌除外）。腐败初期（12~24 h）的性状大体表现为腐败味、发粘等，中期（36~48 h）则表现为酸腐味、发粘、刺激性气味等，后期（60 h）出现臭味、胀袋等性状。老豆腐和内酯豆腐的腐败性状有明显差异，不同腐败菌的腐败性状也有一定差异，豆腐的最终腐败性状是各种腐败菌综合作用所致。总体来看，盒装豆腐中残留的耐热芽孢杆菌是后期贮藏过程中导致豆腐腐败的主要菌种，而芽孢由于其极强的抗逆性，在豆腐生产各环节普遍存在，且巴氏杀菌难以彻底杀灭。因此，后续将研究相关芽孢控制技术，如使用微酸性电解水处理生产各环节，采取合适的条件促使芽孢萌发后再对产品进行二次杀菌等，以指导企业生产并延长盒装豆腐的保存期。
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图 1 4 ℃贮藏盒装豆腐感官评分和菌落总数变化
Figure 1. Changes of sensory score and total number of colonies of boxed tofu stored at 4 ℃
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图 3 37 ℃贮藏盒装豆腐感官评分和菌落总数变化
Figure 3. Changes of sensory score and total number of colonies of boxed tofu stored at 37 ℃
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图 2 25 ℃贮藏盒装豆腐感官评分和菌落总数变化
Figure 2. Changes of sensory score and total number of colonies of boxed tofu stored at 25 ℃
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图 4 盒装老豆腐部分腐败菌菌落特征及细胞形态（1000×）
Figure 4. Colony characteristics and cell morphology of some spoilage bacteria from boxed firm tofu (1000×)
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图 5 盒装内酯豆腐部分腐败菌菌落特征及细胞形态（1000×）
Figure 5. Colony characteristics and cell morphology of some spoilage bacteria from boxed lactone tofu (1000×)
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图 6 盒装老豆腐回接腐败菌后的菌落总数变化情况
Figure 6. Changes of the total number of colonies of boxed firm tofu after back inoculated with spoilage bacteria
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图 7 盒装内酯豆腐回接腐败菌后的菌落总数变化情况
Figure 7. Changes of the total number of colonies of boxed lactone tofu after back inoculated with spoilage bacteria
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图 8 盒装老豆腐回接腐败菌后pH的变化情况
Figure 8. Changes of pH of boxed firm tofu after back inoculated with spoilage bacteria
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图 9 盒装内酯豆腐回接腐败菌后pH的变化情况
Figure 9. Changes of pH of boxed lactone tofu after back inoculated with spoilage bacteria
表 1 盒装豆腐不同类型和贮藏条件的样品标注
Table 1 Sample labeling of boxed tofu for different types and storage conditions
豆腐类型 贮藏条件 新鲜样品 4 ℃ 25 ℃ 37 ℃ 盒装老豆腐 XL 4L 25L 37L 盒装内酯豆腐 XN 4N 25N 37N 
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表 2 盒装老豆腐感官评价标准
Table 2 Sensory evaluation standards of boxed firm tofu
感官评价指标 分值 气味 色泽 口感 组织状态 豆腐香气 淡黄色 豆香味浓 成块、有弹性、质地细腻 9~10 无香味、无异味 微黄色、无黏腻感 豆香味淡 软硬适中、有轻微掉渣 7~8 略有酸味 黄色、轻微黏腻感 有一定豆腥味 豆水略有浑浊 5~6 有较强酸味 褐色、失水、黏腻 无豆腐滋味 豆水浑浊、质地略硬 3~4 酸臭味严重 灰褐色、失水严重 酸涩味严重 豆水严重浑浊、质地变硬 1~2
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表 3 盒装内酯豆腐感官评价标准
Table 3 Sensory evaluation standards of boxed lactone tofu
感官评价指标 分值 气味 色泽 口感 组织状态 豆腐香气淡 乳白色 细腻、略甜 块型完整 9~10 无香味、无异味 白色 细腻 软硬适中、有轻微掉渣 7~8 略有酸味 淡黄色 略有酸涩味 表面粘连，稍有失水 5~6 有较强酸味 灰色 酸涩味较重 粘连、失水、易碎 3~4 酸臭味严重 色泽暗淡 颗粒感较强 严重失水、难以成型 1~2
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表 4 盒装豆腐中分离细菌16S rRNA序列比对结果
Table 4 16S rRNA sequence alignment results of isolated bacteria from boxed tofu
样品 菌株编号 最相似菌株 序列登录号 相似度（%） 种属 门类 XL XL1 Bacillus sp. strain WR-3 MG371991.1 99.76 芽孢杆菌属 厚壁菌门 XL7 Bacillus sp. strain 210_24 GQ199726.1 98.08 芽孢杆菌属 厚壁菌门 XL2 Bacillus subtilis strain EGI132 MN704439.1 99.50 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 XL3 Bacillus cereus strain NPK1_1_30 MN691552.1 100.00 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 XL4 Bacillus licheniformis strain QT331 MT043736.1 98.83 地衣芽孢杆菌 厚壁菌门 XL5 Lysinibacillus sp. strain 4515C KM242578.1 94.12 赖氨酸芽孢杆菌 厚壁菌门 XL6 Bacillus thuringiensis strain Bt57 MT292096.1 98.75 苏云金芽胞杆菌 厚壁菌门 XN XN1 Bacillus sp. strain A9 OM957541.1 98.96 芽孢杆菌属 厚壁菌门 XN2 Bacillus subtilis strain B11 KJ870191.1 99.55 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 XN4 Bacillus subtilis strain P62 KU551208.1 99.30 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 XN6 Bacillus subtilis strain CG-6 OK037059.1 99.89 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 XN7 Bacillus subtilis strain 4I2 MW380591.1 99.19 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 XN3 Bacillus jeotgali strain NIOT-Ba-4 KJ575006.1 98.30 咸海鲜芽孢杆菌 厚壁菌门 XN5 Pantoea agglomerans strainATY79 HQ219998.1 99.87 成团泛菌 变形菌门 4L 4L1 Rummeliibacillus pycnus strain M9-19 KT382255.1 99.70 鲁梅尔芽胞杆菌 厚壁菌门 4L3 Rummeliibacillus pycnus strain NBRC 101231 NR_041521.1 99.56 鲁梅尔芽胞杆菌 厚壁菌门 4L2 Bacillus cereus strain BPH33 HM771262.1 99.63 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 4L4 Bacillus siamensis strain MDJK10 KY967281.1 99.54 暹罗芽孢杆菌 厚壁菌门 4L5 Enterococcus durans strain KLDS 6.0933 KJ818114.1 99.73 耐久肠球菌 厚壁菌门 4L6 Brevibacillus sp. strain SNH_M11 MN577380.1 99.73 短芽孢杆菌属 厚壁菌门 4N 4N1 Chryseobacterium sp. strain FF12 partiaL LN810503.1 98.68 金黄杆菌属 拟杆菌门 4N2 Chryseobacterium sp. strain CBo1 MK095750.1 98.98 金黄杆菌属 拟杆菌门 4N3 Rummeliibacillus pycnus strain M9-19 KT382255.1 99.18 鲁梅尔芽胞杆菌 厚壁菌门 4N5 Enterococcus faecium strain 1718 MT597585.1 99.54 屎肠球菌 厚壁菌门 4N6 Enterococcus faecium strain CAU:201 MF369855.1 99.55 屎肠球菌 厚壁菌门 25L 25L1 Bacillus sp. strain LSB24 MK600540.1 99.81 芽孢杆菌属 厚壁菌门 25L3 Bacillus sp. strain BYT-24 JQ773351.1 99.63 芽孢杆菌属 厚壁菌门 25L2 Bacillus cereus strain ZK2 JQ773351.1 99.66 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 25L5 Bacillus cereus strain W1 KT970711.1 99.63 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 25L4 Brevibacillus agri strain SJ6 OM049334.1 99.24 土壤芽孢杆菌 厚壁菌门 25L6 Brevibacillus agri strain Y17 KF641808.1 99.53 土壤芽孢杆菌 厚壁菌门 25L7 Enterococcus durans strain 3883 MT538726.1 99.07 耐久肠球菌 厚壁菌门 25N 25N1 Bacillus cereus strain K1M2 AB473013.1 99.70 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 25N2 Bacillus cereus strain DS-2 ON005108.1 99.34 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 25N3 Bacillus pumiLus strain S8 FJ236809.1 99.89 短小芽孢杆菌 厚壁菌门 25N4 Staphylococcus sp. strain GG 54 MT459283.1 97.91 葡萄球菌 厚壁菌门 25N5 Bacillus subtilis strain FL37 KY818955.1 99.49 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 25N6 Microbacterium lacticum strain B19/II6 MZ841732.1 97.85 乳微杆菌 厚壁菌门 37L 37L1 Bacillus sp. strain LPB22 MT673802.1 100.00 芽孢杆菌属 厚壁菌门 37L4 Bacillus sp. strain KT70 KJ734004.1 98.89 芽孢杆菌属 厚壁菌门 37L2 Bacillus licheniformis strain AD242 MT642944.1 99.35 地衣芽孢杆菌 厚壁菌门 37L3 Bacillus tequilensis strain M53-1 JF411295.1 99.06 特基拉芽孢杆菌 厚壁菌门 37L6 Bacillus tequilensis strain KM34 JF411313.1 99.44 特基拉芽孢杆菌 厚壁菌门 37L5 Bacillus cereus strain G5 HQ418488.1 98.64 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 37L7 Bacillus subtilis strain X303 KU240494.1 99.30 枯草芽孢杆菌 厚壁菌门 37N 37N1 Bacillus sp. strain JSM 164012 MG893180.1 99.64 芽孢杆菌属 厚壁菌门 37N4 Bacillus sp. strain NII-73 FJ897479.1 98.22 芽孢杆菌属 厚壁菌门 37N2 Bacillus cereus strain Lmb017 KT986088.1 98.79 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 37N5 Bacillus cereus strain EM10 KJ612536.1 99.03 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 37N6 Bacillus cereus strain DS16 EU834245.1 99.73 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 37N7 Bacillus cereus strain S45 GQ462533.1 100.00 蜡样芽孢杆菌 厚壁菌门 37N3 Bacillus licheniformis strain B21-023 MK063827.1 99.05 地衣芽孢杆菌 厚壁菌门
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表 5 盒装豆腐中腐败菌的分布情况
Table 5 Distribution of spoilage bacteria in boxed tofu
样品 腐败菌种类 芽孢杆菌属 肠球菌属 微杆菌属 金黄杆菌属 葡萄球菌属 泛菌属 XL 7 4L 5 1 25L 6 1 37L 7 XN 6 1 4N 1 2 2 25N 4 1 1 37N 7
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表 6 回接实验中选取的腐败菌菌株
Table 6 Spoilage strains selected in the back inoculation experiment
样品 菌株英文名称 菌株中文名称 菌株编号 盒装老豆腐 Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌 XL2 Bacillus cereus 蜡样芽孢杆菌 XL3 Enterococcus durans 耐久肠球菌 4L5 Brevibacillus agri 土壤芽孢杆菌 25L6 Bacillus licheniformis 地衣芽孢杆菌 37L2 盒装内酯豆腐 Pantoea agglomerans 成团泛菌 XN5 Bacillus subtilis 枯草芽孢杆菌 XN6 Enterococcus faecium 屎肠球菌 4N5 Bacillus pumilus 短小芽孢杆菌 25N3 Bacillus cereus 蜡样芽孢杆菌 37N7
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表 7 盒装老豆腐回接腐败菌后的腐败性状
Table 7 Spoilage characters of boxed firm tofu after back inoculated with spoilage bacteria
样品 贮藏时间（h） 0 12 24 36 48 60 空白对照 无 无 酸臭味
发黏酸味
发黏酸味
发黏酸腐味
刺激性气味
发黏枯草芽孢杆菌 无 腐败味 酸腐味 酸腐味
失水酸腐味
发黏酸味
胀袋蜡样芽孢杆菌 无 无 酸臭味
发黏
褐变腐臭味
发黏
褐变酸腐味
发黏
褐变酸腐味
失水
褐变耐久肠球菌 无 无 腐败味 酸腐味
发黏腐败味 腐败味
失水土壤芽孢杆菌 无 无 腐败味 酸味 酸腐味 酸臭味 地衣芽孢杆菌 无 无 腐败味
刺激性气味
发黏腐败味
发黏酸腐味
发黏酸腐味
发黏
胀袋
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表 8 盒装内酯豆腐回接腐败菌后的腐败性状
Table 8 Spoilage characters of boxed lactone tofu after back inoculated with spoilage bacteria
样品 贮藏时间（h） 0 12 24 36 48 60 空白对照 无 无 腐败味 酸腐味 酸臭味
腐败味
胀袋腐臭味
胀袋成团泛菌 无 腐败味 腐败味
刺激性气味腐败味
刺激性气味
菌膜酸腐味
刺激性气味
胀袋腐臭味
刺激性气味
胀袋枯草芽孢杆菌 无 腐败味 腐败味 酸腐味 酸腐味
刺激性气味酸腐味
胀袋屎肠球菌 无 腐败味 腐败味
刺激性气味酸腐味 酸腐味
刺激性气味
胀袋酸腐味
刺激性气味
胀袋短小芽孢杆菌 无 腐败味 腐败味 腐败味
刺激性气味腐败味
刺激性气味
发黏
胀袋酸腐味
刺激性气味
胀袋蜡样芽孢杆菌 无 腐败味 腐败味 酸腐味 酸腐味
刺激性气味酸腐味
刺激性气味
胀袋
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[1] HUANG Z, LIU H, ZHAO L, et al. Evaluating the effect of different processing methods on fermented soybean whey-based tofu quality, nutrition, and flavour[J]. LWT-Food Science and Technology,2022,158:113139. doi: 10.1016/j.lwt.2022.113139
[2] YIN L, ZHANG Y, WU H, et al. Improvement of the phenolic content, antioxidant activity, and nutritional quality of tofu fermented with Actinomucor elegans[J]. LWT-Food Science and Technology,2020,133:110087. doi: 10.1016/j.lwt.2020.110087
[3] 刘宁, 高艺笑, 孙钰姬, 等. 豆腐凝固剂的研究进展[J]. 中国调味品,2021,46(3):189−194 doi: 10.3969/j.issn.1000-9973.2021.03.039 LIU N, GAO Y X, SUN Y J, et al. Research progress of tofu coagulants[J]. China Condiment,2021,46(3):189−194. doi: 10.3969/j.issn.1000-9973.2021.03.039
[4] 戴意强, 周剑忠, 刘小莉, 等. 不同凝固剂对豆腐品质特性及风味成分的影响[J]. 食品工业科技,2021,42(15):17−26 DAI Y Q, ZHOU J Z, LIU X L, et al. Effects of different coagulants on quality characteristics and flavor components of tofu[J]. Science and Technology of Food Industry,2021,42(15):17−26.
[5] 陶康, 任凯, 于政鲜, 等. 凝固剂种类及添加量对豆腐质构的影响[J]. 南昌大学学报(理科版),2020,44(3):268−273 doi: 10.3969/j.issn.1006-0464.2020.03.012 TAO K, REN K, YU Z X, et al. Effect of the type and amount of coagulant on texture of tofu[J]. Journal of Nanchang University (Natural Science),2020,44(3):268−273. doi: 10.3969/j.issn.1006-0464.2020.03.012
[6] 江振桂, 王秋普, 张一震, 等. 不同凝固剂对豆腐品质的影响[J]. 食品与发酵工业,2019,45(7):229−234 JIANG Z G, WANG Q P, ZHANG Y Z, et al. Effects of different coagulants on the quality of tofu[J]. Food and Fermentation Industries,2019,45(7):229−234.
[7] 赵良忠, 尹乐斌. 豆制品加工技术[M]. 北京:化学工业出版社, 2020 ZHAO L Z, YIN L B. Soybean product processing technology[M]. Beijing:Chemical Industry Press, 2020.
[8] 曲敏, 陈红丽, 王宇, 等. 传统豆制品腐败菌污染及抑制研究进展[J]. 食品科学技术学报,2022,40(3):167−178 doi: 10.12301/spxb202100341 QU M, CHEN H L, WANG Y, et al. Research progress of spoilage bacteria pollution and inhibition of traditional soy products[J]. Journal of Food Science and Technology,2022,40(3):167−178. doi: 10.12301/spxb202100341
[9] 韩翠萍, 葛子榜, 刘庆冠, 等. 豆腐中主要腐败菌的分离鉴定及与品质的相关性分析[J]. 中国食品学报,2019,19(7):283−291 HAN C P, GE Z B, LIU Q G, et al. Isolation and identification of main spoilage bacteria in tofu and its correlation with quality[J]. Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology,2019,19(7):283−291.
[10] 王宸之, 杜沁岭, 周思懿, 等. 全豆豆腐中腐败菌分离、鉴定及货架期研究[J]. 东北农业大学学报,2018,49(6):59−69 doi: 10.3969/j.issn.1005-9369.2018.06.007 WANG C Z, DU Q L, ZHOU S Y, et al. Study on isolation, identification of spoilage bacterium and shelf life in whole soybean curd[J]. Journal of Northeast Agricultural University,2018,49(6):59−69. doi: 10.3969/j.issn.1005-9369.2018.06.007
[11] 郑玉玺, 贾强, 董蕾, 等. PCR-DGGE结合传统分离培养分析盒装豆腐腐败菌多样性[J]. 食品与发酵科技,2018,54(5):110−116 ZHENG Y X, JIA Q, DONG L, et al. Analyze of spoilage bacteria diversity in boxed tofu by PCR-DGGE combined with traditional isolated culture[J]. Food and Fermentation Sciences & Technology,2018,54(5):110−116.
[12] 吴丽樱. 豆腐主要腐败菌的研究及其来源分析[D]. 无锡:江南大学, 2017 WU L Y. Study on the main spoilage bacteria and their source analysis in tofu[D]. Wuxi:Jiangnan University, 2017.
[13] LEE D Y, KWON K H, CHAI C, et al. Microbial contamination of tofu in Korea and growth characteristics of Bacillus cereus isolates in tofu[J]. LWT-Food Science and Technology,2017,78:63−69. doi: 10.1016/j.lwt.2016.11.081
[14] ROSSI F, FELIS G E, MARTINELLI A, et al. Microbiological characteristics of fresh tofu produced in small industrial scale and identification of specific spoiling microorganisms (SSO)[J]. LWT-Food Science and Technology,2016,70:280−285. doi: 10.1016/j.lwt.2016.02.057
[15] ANANCHAIPATTANA C, HOSOTANI Y, KAWASAKI S, et al. Bacterial contamination of soybean curd (tofu) sold in Thailand[J]. Food Science and Technology Research,2013,18(6):843−848.
[16] FOUAD K E, HEGEMAN G D. Microbial spoilage of Tofu (soybean curd)[J]. Journal of Food Protection,1993,56(2):157−164. doi: 10.4315/0362-028X-56.2.157
[17] 郑玉玺. 盒装豆腐腐败菌多样性及品质变化研究[D]. 广州:华南理工大学, 2018 ZHENG Y X. Study on spoilage bacteria diversity and quality changes in boxed tofu[D]. Guangzhou:South China University of Technology, 2018.
[18] ÓLAFSDÓTTIR G, LAUZON H L, MARTINSDOTTIR E, et al. Influence of storage temperature on microbial spoilage characteristics of haddock fillets ( Melanogrammus aeglefinus) evaluated by multivariate quality prediction[J]. International Journal of Food Microbiology,2006,111(2):112−125. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2006.04.045
[19] 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会, 国家食品药品监督管理总局. GB 4789.2-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定[S]. 北京:中国标准出版社, 2016 National Health and Family Planning Commission of the People's Republic of China, State Administration for Food and Drug. GB 4789.2-2016 National standard for food safety:Determination of total number of colonies for microbiology inspection of food[S]. Beijing:China Standards Press, 2016.
[20] PATO U, RIFTYAN E, JONNAIDI N N, et al. Isolation, characterization, and antimicrobial evaluation of bacteriocin produced by lactic acid bacteria against Erwinia carotovora[J]. Food Science and Technology,2022,42:e11922. doi: 10.1590/fst.11922
[21] KIM D H, LEE K S. Effects of coagulants on storage of packed tofu[J]. Korean Journal of Food Science and Technology,1992,24(1):92−96.
[22] 李除夕, 董明盛, 陈晓红, 等. 豆腐中库特氏菌生长动力学模型和货架期预测[J]. 农业工程学报,2009,25(Supp.1):82−86 LI C X, DONG M S, CHEN X H, et al. Construction of microbial growth kinetics prediction model of Kurthia in tofu and shelf life prediction[J]. Transactions of the CSAE,2009,25(Supp.1):82−86.
[23] 杨红, 胡庆国, 徐红. 内酯豆腐保鲜工艺条件的优化[J]. 食品与生物技术学报,2013,32(2):155−162 YANG H, HU Q G, XU H. Fresh-keeping technology's optimization of lactone tofu[J]. Journal of Food Science and Biotechnology,2013,32(2):155−162.
[24] 吴丽樱, 成玉梁, 郭亚辉, 等. 豆腐在不同储藏温度下腐败菌菌相比较[J]. 食品研究与开发,2017,38(18):180−184 WU L Y, CHENG Y L, GUO Y H, et al. The comparison of spoilage microflora of tofu at different storage temperatures[J]. Food Research and Development,2017,38(18):180−184.
[25] 王敏, 檀建新, 路玲, 等. 非发酵豆制品主要腐败菌的分离鉴定[J]. 中国酿造,2006(6):68−70 WANG M, TAN J X, LU L, et al. Isolation and identification of the main spoilage microorganisms in non-fermented soybean products[J]. China Brewing,2006(6):68−70.
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