Determination of 32 Kinds of Pesticide Residues in Raw Milk by Supported Liquid Extraction with LC-MS/MS
-
摘要: 将固相支撑液液萃取与超高效液相色谱串联质谱法结合，建立生乳中32种农药残留的快速检测方法，为保障生乳食品安全提供技术支持。样品加入乙腈沉淀蛋白，高速离心分离，上清液用固相支撑液液萃取小柱净化，C18色谱柱梯度洗脱分离后，经串联质谱电喷雾模式扫描，多反应监测模式检测，以基质匹配校准曲线外标法定量。结果表明，32种目标物在一定范围内线性关系良好，相关系数大于0.9962，检出限为0.1~2.5 μg/kg，定量限为0.3~7.5 μg/kg，平均回收率为69.4%~113.8%，相对标准偏差（n=6）小于8.2%。该方法简单、快速、可靠，适用于生乳中32种农药残留的测定。
-
关键词:
- 固相支撑液液萃取 /
- 超高效液相色谱-串联质谱法 /
- 农药残留.
Abstract: To provide scientific support for guaranteeing food safety in raw milk, a rapid method for the determination of pesticide residues in raw milk was developed using supported liquid extraction technique and ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. The sample was precipitated with acetonitrile and then separated by high speed centrifugation. The supernatant was purified by SLE column. Separation of pesticide residues was achieved by a CORTECS C18 column. Pesticide residues were detected by ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry with electrospray ionization in the multiple reaction monitoring mode, and the quantification was accomplished by external standard method of matrix standard curve. Method validation revealed satisfactory linearities with correlation coefficients higher than 0.9962, and limits of detection and quantification for target compounds were 0.1~2.5 μg/kg and 0.3~7.5 μg/kg, the average recoveries at three spiked levels were in the range of 69.4%~113.6% with relative standard deviation (RSD, n=6) less than 8.2%. This method is simple, quickly and reliable, and shows great promise for detecting 32 different pesticide residues in raw milk.-
Keywords:
- supported liquid extraction /
- LC-MS/MS /
- pesticide residues
-
乳及乳制品营养丰富，是人们生活中的重要食品之一。生乳作为配方乳粉、液体乳及其他乳制品的主要原料，其质量安全问题向来是消费者和行业关注的焦点。研究表明，包括生乳在内的动物源性食品不仅受到兽药残留、金属元素等危害因素的影响，还面临着农药残留的污染等问题[1]。我国作为农业大国，农药用量大、利用率低等问题普遍。环境中的农药残留通过食物、饮水、杀虫、环境接触等途径进入动物体内，易在脂肪含量较高的乳类等产品中蓄积，通过食物链持续影响人类健康[2-3]。对此，食品法典委员会、欧盟等制定了严格的限量标准以降低其对健康造成的风险[4-5]。我国GB 2763-2021规定了生乳中125种农药残留的最大限量，涉及检验方法25项[6]。存在操作复杂、项目不全、检出限高于限量值等问题，限量标准配套方法尚不完善[7-8]。文献报道动物源性食品中农残检测多为肉及其制品、水产品、鸡蛋等[9-11]，有关生乳的检测项目少、种类单一[10,12]，难以满足生乳中农药多残留快速筛查的要求[12]。因此，建立生乳中农药多残留快速检测方法对保障乳制品食品安全具有现实意义。
生乳中农药多残留检测面临两大挑战：a. 目标物种类多，性质差异大，用同一种方法难以获得好的回收率；b. 含量水平低，基质效应强，前处理复杂，生乳不易保存、时效性要求高[13]。传统的液液萃取、固相萃取处理步骤多、操作繁琐[14-15]，QuEChERS影响因素多、方法摸索耗时长[16-17]、凝胶色谱需专用设备[18]等，简单、高效的样品前处理方法有待进一步研究[19]。固相支撑液液萃取（supported liquid extraction，SLE）是1997年Johnson团队提出的一种新型的样品前处理技术[20]。以均匀多孔材料为支撑介质，吸附水性样品形成理想的液膜萃取界面，加入与水不相溶的洗脱溶剂后，溶剂与样本之间形成连续的浓度差，从而实现目标物的高效萃取，萃取流程见图1。SLE在生物样本中药物、环境污染物、烟草及其代谢物的检测中应用广泛[21-25]。SLE本质是液液萃取，但克服了传统液液萃取效率低、易乳化等缺点，且操作十分简单，只需上样和洗脱两个步骤。在水系样本有机物萃取方面优势明显，可用于生乳中农药多残留样品的前处理，在农药残留方面的应用暂无相关报道。
本研究以农业农村部《禁限用农药名录》中32种高风险禁限用农药残留为目标物，采用固相支撑液液萃取进行样品前处理，结合液相色谱串联质谱在多残留分析中灵敏度高、速度快、抗干扰能力强的优势[10-12]，建立生乳中32种农药残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法，为动物源性样品中农药多残留的检测提供新思路。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
32种农药残留标准品 100 mg/L，农业部环境保护科研监测所；乙腈、甲酸铵、甲酸 LC-MS级，德国Merck公司；二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯 HPLC级，德国Merck公司；去离子水 18.0 MΩ·cm，由Milli-Q去离子水发生器制备；生乳样品 采自本地乳品生产企业及鲜乳配送点，4 ℃冷藏保存。
ACQUITY Xevo TQ-S超高效液相色谱-串联质谱仪、Wat200609固相萃取装置 美国Waters公司；IKA MS3漩涡混合器 德国IKA公司；5810R高速冷冻离心机 德国Eppendorf公司；N-EVAP112氮吹浓缩仪 美国Organomation公司；Milli-Q去离子水发生器 美国Millipore公司；SLE萃取柱 3 mL 美国Agilent公司；Mini-UniPrep聚四氟乙烯非针式过滤器 0.2 μm 英国Whatman公司。
1.2 实验方法
1.2.1 标准溶液配制
准确吸取0.1 mL单标溶液于10 mL容量瓶，乙腈定容至刻度，配制成1 mg/L混合标准溶液，用生乳空白基质溶液稀释为0.2、1、2、5、10、20、50 μg/L系列标准工作溶液。
1.2.2 样品前处理
准确称取1 g（精确至0.01 g）混匀的生乳样品，注入装有1.5 mL乙腈的离心管，涡旋混匀，4000 r/min离心5 min，取上清液。样品沉淀加入0.5 mL水冲洗，合并清液，转移至SLE小柱，等待5 min。用4.5 mL二氯甲烷洗脱2次，待无液滴落下后抽真空5 s，洗脱液氮吹至近干，用20%乙腈甲酸（0.1%）水溶液定容至0.5 mL，非针式过滤器过滤。
1.2.3 色谱条件
色谱柱：Waters CORTECS C18柱（100 mm×2.1 mm，2.7 μm）；流动相：A为0.1%甲酸溶液（含5 mmol/L甲酸铵），B为0.1%甲酸乙腈（含5 mmol/L甲酸铵），梯度洗脱程序：0~2 min，20% B；2~13 min，B升至100%；13~15 min，保持100% B；15~16 min，B降至20%；16~18 min，保持20% B；进样体积：5 μL；流速：0.30 mL/min；柱温：30 ℃。
1.2.4 质谱条件
离子源：电喷雾离子源（ESI），氟虫腈为负离子模式，其余31种为正离子模式；监测方式：多反应监测（MRM）模式；毛细管电压：3.0 kV；离子源温度：150 ℃；脱溶剂气温度：450 ℃；各化合物参考保留时间、监测离子、锥孔电压、碰撞电压等参数见表1。
表 1 32种目标物的保留时间和质谱参数Table 1. Retention times and mass parameters of target compounds序号 化合物 保留时间
（min）母离子
（m/z）子离子
（m/z）锥孔
电压（V）1 涕灭威砜 1.100 240.0 223.0*, 86.0 23 2 久效磷 1.110 224.1 127.1*, 193.1 28 3 涕灭威亚砜 1.139 207.1 132.0*, 89.0 25 4 杀虫脒 1.730 197.2 117.2*, 46.2 50 5 3-羟基克百威 2.180 238.0 181.1*, 163.2 35 6 硫环磷 3.919 256.0 140.1*, 168.1 35 7 涕灭威 4.751 116.2 89.2*, 70.0 30 8 磷胺 5.332 300.0 174.1*, 127.1 35 9 苯线磷亚砜 5.437 320.0 171.1*, 292.1 30 10 甲磺隆 6.342 382.0 199.2*, 167.3 30 11 克百威 6.407 222.0 165.2*, 123.2 20 12 苯线磷砜 6.456 336.0 266.2*, 188.3 45 13 氯磺隆 6.705 358.0 141.0*, 167.0 15 14 甲拌磷亚砜 6.899 277.0 199.0*, 171.1 25 15 胺苯磺隆 6.997 411.1 196.3*, 168.3 35 16 氟虫腈 7.278 435.0 250.0*, 333.0 25 17 内吸磷 7.719 259.1 89.2*, 61.1 15 18 特丁硫磷亚砜 8.074 305.1 187.2*, 97.0 30 19 甲拌磷砜 8.219 293.0 171.0*, 247.0 25 20 水胺硫磷 8.257 231.0 1210*, 65.0 40 21 杀扑磷 8.416 303.0 145.0*, 85 10 22 苯线磷 8.801 304.0 214.2*, 234.3 45 23 灭线磷 9.026 243.0 131.1*, 97.0 30 24 特丁硫磷砜 9.176 321.1 171.2*, 143.0 35 25 氯唑磷 10.006 314.0 162.3*, 120.2 30 26 对硫磷 10.393 292.0 264.0*, 235.9 10 27 硫线磷 10.548 271.1 159.2*, 131.1 25 28 蝇毒磷 10.668 363.0 227.2*, 307.1 30 29 甲基异柳磷 10.682 231.0 121.0*, 65.0 40 30 地虫硫磷 10.790 247.0 137.0*, 109.0 14 31 治螟磷 10.891 323.0 171.2*, 115.0 35 32 甲拌磷 10.975 260.9 75.1*, 47.0 20 注：带“*”为定量离子。 1.3 数据处理
采用基质匹配校准曲线外标法定量，通过标准加入法和控制变量法优化实验条件。应用仪器配套Masslynx工作站进行数据采集与标准曲线绘制，导出数据使用Origin 2017进行数据分析与作图。前处理和分析条件优化中实验重复测试3次取均值，回收率与精密度实验重复测试6次计算相对标准偏差。
2. 结果与分析
2.1 预处理条件优化
生乳含有大量的蛋白、脂肪和磷脂等物质，易残留在液质系统中，改变分析物峰型，增加色谱柱压力，影响离子化效率，上机测试前应尽量去除[26]，固相支撑液液萃取以改性多孔材料为支撑，表面活性低、比表面积大，可形成微孔液膜实现目标物的高效萃取。同时，保留样本中的磷脂、蛋白等干扰物，有效减少基质干扰[27]。SLE只有上样和洗脱两个步骤，上柱样本状态及洗脱液的选取是影响实验的关键因素[25]。上样前对样本进行稀释、调酸碱度、沉淀蛋白等预处理可以获得更好的萃取与净化效果[23]。生乳含有大量蛋白直接上柱易造成柱子堵塞影响柱效，采用有机试剂沉淀蛋白后上柱，可大幅降低样品中的蛋白含量，且水溶性有机溶剂的加入可改善部分极性化合物萃取率[28]。实验比较了甲醇、乙腈、0.1%甲酸乙腈三种溶剂的沉淀效果，乙腈沉淀效果优于甲醇，少量酸的加入有利于稳定酸性农药但不利于蛋白沉淀，故选择乙腈为沉淀剂。比较加入0.5、1.0、1.5、2.0 mL乙腈的沉淀效果，不同体积乙腈沉淀效果见图2，当加入体积达到1.5 mL，离心后样本呈澄清状态，且最终回收率在60%~120%之间，符合GB/T 27404对回收率的要求，故选择1.5 mL乙腈进行沉淀。此外，将生乳样品注入乙腈中，可以让样本与溶剂充分接触，沉淀效果更好。
![]()
图 2 不同乙腈用量对生乳样品的沉淀效果Figure 2. Precipitation effect of different acetonitrile volumes on raw milk samples2.2 萃取柱条件优化
固相支撑液液萃取的本质是目标物在两相中的分配，32种目标化合物中含有机磷、氨基甲酸酯、磺酰脲、苯基吡唑等多类化合物，油水分配系数差异大，洗脱溶剂的选择需充分考虑目标物的极性和溶解度。实验考察乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷、正己烷四种常用溶剂的洗脱效果。结果表明，正己烷极性小，对苯线磷、涕灭威、久效磷等水溶性较好的农药洗脱效果不佳。乙腈极性大，与水性样本互溶，容易造成样品穿漏，影响净化效果。乙酸乙酯洗脱甲基异柳磷、蝇毒磷、氟虫腈回收率低于20.0%，二氯甲烷对各目标化合物的回收率均较理想，平均回收率为69.4%~113.6%，故选择二氯甲烷作为洗脱溶剂。进一步优化洗脱溶剂用量，考察溶剂体积分别为柱容量2、3、4倍时的洗脱效果，加标浓度为10 μg/kg时总体回收率比较见图3。由图可知，当体积达到9 mL时全部目标物回收率均超过60.0%，平均回收率为89.8%，继续增加溶剂体积总体回收率增幅不明显，基于后续操作及环保考虑不再增加溶剂用量。根据分配定律，同样体积的溶剂多次萃取比单次萃取效率高，比较9 mL×1和4.5 mL×2洗脱效果，结果与理论一致，最终选择用4.5 mL二氯甲烷洗脱2次。
![]()
图 3 目标化合物回收率与洗脱溶剂用量的关系Figure 3. Relationship between the recovery of target compounds and the amount of elution solvent2.3 色谱条件优化
液相色谱串联质谱分析农药多残留，流动相多选择水、甲醇或乙腈的流动相体系。实验对比了几种常用流动相的分离效果，水相包括0.1%甲酸、5 mmol/L甲酸铵、5 mmol/L甲酸铵（含0.1%甲酸），有机相包括5 mmol/L甲酸铵甲醇、5 mmol/L甲酸铵乙腈、5 mmol/L甲酸铵乙腈（含0.1%甲酸）。实验发现，5 mmol/L甲酸铵（含0.1%甲酸）-5 mmol/L甲酸铵乙腈（含0.1%甲酸）流动相体系分离效果最佳[17]。乙腈洗作为流动相洗脱力强峰型更加尖锐对称。目标物多为酸性农药，加入少量甲酸有利于[M-H]+离子的生成，保持化合物稳定，减少基质中共萃物的干扰，提高方法的稳定性和重现性。加入甲酸铵有利于[M-H]−离子的生成，增强离子响应强度，同时降低保留时间长的化合物的柱保留，可有效改善色谱峰型[9]。初始流动相水相比例过高久效磷等极性较大的化合物难以保留，易与极性基质一起流出影响测定。调低初始水相比例至80%，保持2 min，有利于极性化合物的分离与测定。
2.4 基质效应评价
基质效应（matrix effect，ME）是指受样品基质影响导致化合物响应值增强或抑制的现象[29]。痕量水平残留检测易受基质效应影响，目前有关动物源性样本对农药残留的基质效应的研究较少。本实验用生乳空白基质标曲与纯溶剂标曲的斜率比值对基质效应大小进行评估。ME值大于1.2为基质增强，ME值小于0.8为基质抑制，ME值在0.8~1.2认为基质效应可接受，32种农残ME值分布见图4。32种目标化合物产生基质抑制效应的农残占比34.4%，产生基质增强效应的农残占比9.4%。目标物在生乳中的基质效应不可忽略，实验中采用基质匹配标准曲线减小基质效应，提高测定结果的准确度。
2.5 线性范围和检出限
在优化条件下测试1.2.1配制的基质匹配标准工作溶液。以目标物峰面积（y）对质量浓度（x，μg/L）进行线性拟合，得到32种农药残留的线性方程（见表2）。由表可知，32种目标物在相应浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.9962。选择低添加水平样品，以3倍信噪比（S/N=3）计算检出限，以10倍信噪比（S/N=10）计算定量限，结合样品前处理过程，得到检出限为0.1~2.5 μg/kg，定量限为0.3~7.5 μg/kg。
表 2 线性范围、线性方程、相关系数、方法检出限和定量限Table 2. Linear equations, linear ranges, correlation coefficients, detection limits and quantitation limits化合物名称 线性范围（μg/L） 线性回归方程 相关系数 检出限（μg/kg） 定量限（μg/kg） 涕灭威砜 0.5~50 y=44512.7x+25973.9 0.9979 0.2 0.6 久效磷 0.5~50 y=63527.9x+5762.0 0.9996 0.2 0.6 涕灭威亚砜 2.0~50 y=6005.3x+1752.7 0.9980 0.8 2.4 杀虫脒 0.5~50 y=15750.3x−4292.5 0.9990 0.4 1.2 3-羟基克百威 0.5~50 y=34677.5x+6371.4 0.9998 0.3 0.9 硫环磷 0.5~50 y=168357.0x−9738.8 0.9986 0.1 0.3 涕灭威 2.0~50 y=9532.7x-602.7 0.9998 0.5 1.5 磷胺 0.2~50 y=173563.0x+50442.3 0.9981 0.1 0.3 苯线磷亚砜 0.5~50 y=24535.2x−1744.0 0.9995 0.3 0.9 甲磺隆 0.5~50 y=88118.2x+70700.1 0.9988 0.2 0.6 克百威 0.2~50 y=229342.0x+141040 0.9975 0.1 0.3 苯线磷砜 0.5~50 y=41128x−1637.1 0.9995 0.3 0.9 氯磺隆 0.5~50 y=24303.8x+3916.4 0.9986 0.3 0.9 甲拌磷亚砜 0.5~50 y=56654.0x−13235.3 0.9993 0.3 0.9 胺苯磺隆 0.5~50 y=147058x+102576 0.9971 0.2 0.6 氟虫腈 1.0~50 y=44988.0x+14936.3 0.9979 0.3 1.0 内吸磷 5.0~50 y=917.3x−493.0 0.9987 2.0 6.0 特丁硫磷亚砜 2.0~50 y=6946.7x+6446.1 0.9976 0.6 1.9 甲拌磷砜 2.0~50 y=5031.4x+1385.4 0.9987 0.7 2.1 水胺硫磷 0.2~50 y=258722x+262847 0.9962 0.1 0.3 杀扑磷 1.0~50 y=19836.9x+4547.4 0.9987 0.4 1.2 苯线磷 0.5~50 y=63199.3x−7672.74 0.9999 0.2 0.6 灭线磷 0.5~50 y=75253.5x−655.612 0.9992 0.2 0.6 特丁硫磷砜 0.5~50 y=12833.0x+2106.1 0.9996 0.4 1.2 氯唑磷 0.5~50 y=54603.2x−5826.5 0.9999 0.3 0.9 对硫磷 2.0~50 y=34248.21−1357.15 0.9979 0.8 2.4 硫线磷 0.5~50 y=99648.7x+39252.1 0.9962 0.2 0.6 蝇毒磷 0.5~50 y=31648.4x−668.3 0.9986 0.3 0.9 甲基异柳磷 0.2~50 y=178788x+492404 0.9974 0.1 0.3 地虫硫磷 0.5~50 y=15988.9x−2226.2 0.9988 0.4 1.2 治螟磷 0.5~50 y=79606.9x+2488.4 0.9984 0.2 0.6 甲拌磷 5.0~50 y=1314.1x−926.2 0.9988 2.5 7.5 2.6 回收率与精密度
选取阴性生乳样品，开展低、中、高3水平加标回收实验，平行测试6次，结果见表3。32种目标物平均回收率为69.4%~113.8%，相对标准偏差（RSD，n=6）为1.4%~8.2%，符合GB/T 27404[30]对食品理化检测的质量控制要求，方法具有良好的回收率与精密度。
表 3 加标回收和精密度的测定结果（n=6）Table 3. Determination results of recovery and precision (n=6)化合物名称 回收率（%） 精密度（%） 5 μg/kg 10 μg/kg 50 μg/kg 5 μg/kg 10 μg/kg 50 μg/kg 涕灭威砜 79.2 76.2 81.2 6.3 4.9 5.1 久效磷 76.5 84.5 89.1 4.2 4.5 3.7 涕灭威亚砜 96.8 88.9 96.5 2.8 4.1 3.5 杀虫脒 73.3 77.6 81.0 4.0 2.8 5.6 3-羟基克百威 76.5 83.7 86.4 2.7 5.6 3.5 硫环磷 107.6 97.5 98.3 1.5 3.5 1.4 涕灭威 87.6 93.3 92.6 3.6 4.9 2.1 磷胺 92.0 95.9 97.4 6.3 5.6 1.4 苯线磷亚砜 96.5 101.9 98.0 3.1 2.8 2.7 甲磺隆 113.6 105.2 99.9 4.4 2.8 3.3 克百威 89.0 93.4 90.4 3.5 3.5 2.1 苯线磷砜 103.1 93.1 95.4 2.1 2.1 2.8 氯磺隆 95.9 97.8 98.2 4.9 3.5 6.1 甲拌磷亚砜 82.2 72.3 92.1 5.6 6.3 4.2 胺苯磺隆 99.3 99.0 108.1 5.1 2.1 1.9 氟虫腈 108.4 103.1 101.4 3.7 2.6 4.4 内吸磷 111.9 105.2 97.7 2.1 4.9 3.7 特丁硫磷亚砜 102.4 83.9 87.9 2.6 6.3 4.9 甲拌磷砜 97.6 92.5 95.5 4.2 3.5 5.7 水胺硫磷 113.8 98.5 102.6 2.9 4.9 3.5 杀扑磷 69.4 88.5 79.9 5.6 5.6 4.2 苯线磷 94.0 102.4 98.1 6.3 6.3 2.1 灭线磷 80.5 79.8 86.2 1.4 2.2 4.9 特丁硫磷砜 110 96.9 95.8 6.3 1.7 6.3 氯唑磷 79.6 85.0 86.6 2.1 6.1 5.3 对硫磷 88.3 80.5 86.1 4.9 2.4 2.9 硫线磷 98.2 89.3 88.5 8.2 2.1 5.7 蝇毒磷 80.8 94.2 89.7 5.6 5 2.4 甲基异柳磷 96.7 86.9 88.3 5.4 1.8 4.9 地虫硫磷 71.2 86.5 81.0 6.1 6.3 5.6 治螟磷 74.8 79.0 84.3 5.6 2.8 4.2 甲拌磷 84.4 95.0 94.6 2.8 1.9 2.6 2.7 实际样品的检测
采用本方法测定乳品企业样品9份，配送鲜乳样品9份，均未检出32种农药残留。
3. 结论
本研究结合固相支撑液液萃取在水系样本有机物萃取方面的优势，建立了生乳中32种农药残留的超高效液相色谱-串联质谱快速检测方法。前处理过程无需活化，沉淀蛋白后上柱洗脱即可，15 min内完成样品上柱与洗脱。相比于传统的液液萃取、固相萃取，简单快速，影响因素少，易于自动化。32种目标物检出限为0.1~2.5 μg/kg，定量限为0.3~7.5 μg/kg，平均回收率为69.4%~113.8%，相对标准偏差小于8.2%，符合GB/T 27404标准要求。以生乳基质为研究对象, 充实了动物源性食品中农药残留的检测方法，可为乳制品中农药残留的监管和风险评价提供技术支持。
-
![]()
图 2 不同乙腈用量对生乳样品的沉淀效果
Figure 2. Precipitation effect of different acetonitrile volumes on raw milk samples
![]()
图 3 目标化合物回收率与洗脱溶剂用量的关系
Figure 3. Relationship between the recovery of target compounds and the amount of elution solvent
表 1 32种目标物的保留时间和质谱参数
Table 1 Retention times and mass parameters of target compounds
序号 化合物 保留时间
（min）母离子
（m/z）子离子
（m/z）锥孔
电压（V）1 涕灭威砜 1.100 240.0 223.0*, 86.0 23 2 久效磷 1.110 224.1 127.1*, 193.1 28 3 涕灭威亚砜 1.139 207.1 132.0*, 89.0 25 4 杀虫脒 1.730 197.2 117.2*, 46.2 50 5 3-羟基克百威 2.180 238.0 181.1*, 163.2 35 6 硫环磷 3.919 256.0 140.1*, 168.1 35 7 涕灭威 4.751 116.2 89.2*, 70.0 30 8 磷胺 5.332 300.0 174.1*, 127.1 35 9 苯线磷亚砜 5.437 320.0 171.1*, 292.1 30 10 甲磺隆 6.342 382.0 199.2*, 167.3 30 11 克百威 6.407 222.0 165.2*, 123.2 20 12 苯线磷砜 6.456 336.0 266.2*, 188.3 45 13 氯磺隆 6.705 358.0 141.0*, 167.0 15 14 甲拌磷亚砜 6.899 277.0 199.0*, 171.1 25 15 胺苯磺隆 6.997 411.1 196.3*, 168.3 35 16 氟虫腈 7.278 435.0 250.0*, 333.0 25 17 内吸磷 7.719 259.1 89.2*, 61.1 15 18 特丁硫磷亚砜 8.074 305.1 187.2*, 97.0 30 19 甲拌磷砜 8.219 293.0 171.0*, 247.0 25 20 水胺硫磷 8.257 231.0 1210*, 65.0 40 21 杀扑磷 8.416 303.0 145.0*, 85 10 22 苯线磷 8.801 304.0 214.2*, 234.3 45 23 灭线磷 9.026 243.0 131.1*, 97.0 30 24 特丁硫磷砜 9.176 321.1 171.2*, 143.0 35 25 氯唑磷 10.006 314.0 162.3*, 120.2 30 26 对硫磷 10.393 292.0 264.0*, 235.9 10 27 硫线磷 10.548 271.1 159.2*, 131.1 25 28 蝇毒磷 10.668 363.0 227.2*, 307.1 30 29 甲基异柳磷 10.682 231.0 121.0*, 65.0 40 30 地虫硫磷 10.790 247.0 137.0*, 109.0 14 31 治螟磷 10.891 323.0 171.2*, 115.0 35 32 甲拌磷 10.975 260.9 75.1*, 47.0 20 注：带“*”为定量离子。 
下载: 导出CSV
表 2 线性范围、线性方程、相关系数、方法检出限和定量限
Table 2 Linear equations, linear ranges, correlation coefficients, detection limits and quantitation limits
化合物名称 线性范围（μg/L） 线性回归方程 相关系数 检出限（μg/kg） 定量限（μg/kg） 涕灭威砜 0.5~50 y=44512.7x+25973.9 0.9979 0.2 0.6 久效磷 0.5~50 y=63527.9x+5762.0 0.9996 0.2 0.6 涕灭威亚砜 2.0~50 y=6005.3x+1752.7 0.9980 0.8 2.4 杀虫脒 0.5~50 y=15750.3x−4292.5 0.9990 0.4 1.2 3-羟基克百威 0.5~50 y=34677.5x+6371.4 0.9998 0.3 0.9 硫环磷 0.5~50 y=168357.0x−9738.8 0.9986 0.1 0.3 涕灭威 2.0~50 y=9532.7x-602.7 0.9998 0.5 1.5 磷胺 0.2~50 y=173563.0x+50442.3 0.9981 0.1 0.3 苯线磷亚砜 0.5~50 y=24535.2x−1744.0 0.9995 0.3 0.9 甲磺隆 0.5~50 y=88118.2x+70700.1 0.9988 0.2 0.6 克百威 0.2~50 y=229342.0x+141040 0.9975 0.1 0.3 苯线磷砜 0.5~50 y=41128x−1637.1 0.9995 0.3 0.9 氯磺隆 0.5~50 y=24303.8x+3916.4 0.9986 0.3 0.9 甲拌磷亚砜 0.5~50 y=56654.0x−13235.3 0.9993 0.3 0.9 胺苯磺隆 0.5~50 y=147058x+102576 0.9971 0.2 0.6 氟虫腈 1.0~50 y=44988.0x+14936.3 0.9979 0.3 1.0 内吸磷 5.0~50 y=917.3x−493.0 0.9987 2.0 6.0 特丁硫磷亚砜 2.0~50 y=6946.7x+6446.1 0.9976 0.6 1.9 甲拌磷砜 2.0~50 y=5031.4x+1385.4 0.9987 0.7 2.1 水胺硫磷 0.2~50 y=258722x+262847 0.9962 0.1 0.3 杀扑磷 1.0~50 y=19836.9x+4547.4 0.9987 0.4 1.2 苯线磷 0.5~50 y=63199.3x−7672.74 0.9999 0.2 0.6 灭线磷 0.5~50 y=75253.5x−655.612 0.9992 0.2 0.6 特丁硫磷砜 0.5~50 y=12833.0x+2106.1 0.9996 0.4 1.2 氯唑磷 0.5~50 y=54603.2x−5826.5 0.9999 0.3 0.9 对硫磷 2.0~50 y=34248.21−1357.15 0.9979 0.8 2.4 硫线磷 0.5~50 y=99648.7x+39252.1 0.9962 0.2 0.6 蝇毒磷 0.5~50 y=31648.4x−668.3 0.9986 0.3 0.9 甲基异柳磷 0.2~50 y=178788x+492404 0.9974 0.1 0.3 地虫硫磷 0.5~50 y=15988.9x−2226.2 0.9988 0.4 1.2 治螟磷 0.5~50 y=79606.9x+2488.4 0.9984 0.2 0.6 甲拌磷 5.0~50 y=1314.1x−926.2 0.9988 2.5 7.5
下载: 导出CSV
表 3 加标回收和精密度的测定结果（n=6）
Table 3 Determination results of recovery and precision (n=6)
化合物名称 回收率（%） 精密度（%） 5 μg/kg 10 μg/kg 50 μg/kg 5 μg/kg 10 μg/kg 50 μg/kg 涕灭威砜 79.2 76.2 81.2 6.3 4.9 5.1 久效磷 76.5 84.5 89.1 4.2 4.5 3.7 涕灭威亚砜 96.8 88.9 96.5 2.8 4.1 3.5 杀虫脒 73.3 77.6 81.0 4.0 2.8 5.6 3-羟基克百威 76.5 83.7 86.4 2.7 5.6 3.5 硫环磷 107.6 97.5 98.3 1.5 3.5 1.4 涕灭威 87.6 93.3 92.6 3.6 4.9 2.1 磷胺 92.0 95.9 97.4 6.3 5.6 1.4 苯线磷亚砜 96.5 101.9 98.0 3.1 2.8 2.7 甲磺隆 113.6 105.2 99.9 4.4 2.8 3.3 克百威 89.0 93.4 90.4 3.5 3.5 2.1 苯线磷砜 103.1 93.1 95.4 2.1 2.1 2.8 氯磺隆 95.9 97.8 98.2 4.9 3.5 6.1 甲拌磷亚砜 82.2 72.3 92.1 5.6 6.3 4.2 胺苯磺隆 99.3 99.0 108.1 5.1 2.1 1.9 氟虫腈 108.4 103.1 101.4 3.7 2.6 4.4 内吸磷 111.9 105.2 97.7 2.1 4.9 3.7 特丁硫磷亚砜 102.4 83.9 87.9 2.6 6.3 4.9 甲拌磷砜 97.6 92.5 95.5 4.2 3.5 5.7 水胺硫磷 113.8 98.5 102.6 2.9 4.9 3.5 杀扑磷 69.4 88.5 79.9 5.6 5.6 4.2 苯线磷 94.0 102.4 98.1 6.3 6.3 2.1 灭线磷 80.5 79.8 86.2 1.4 2.2 4.9 特丁硫磷砜 110 96.9 95.8 6.3 1.7 6.3 氯唑磷 79.6 85.0 86.6 2.1 6.1 5.3 对硫磷 88.3 80.5 86.1 4.9 2.4 2.9 硫线磷 98.2 89.3 88.5 8.2 2.1 5.7 蝇毒磷 80.8 94.2 89.7 5.6 5 2.4 甲基异柳磷 96.7 86.9 88.3 5.4 1.8 4.9 地虫硫磷 71.2 86.5 81.0 6.1 6.3 5.6 治螟磷 74.8 79.0 84.3 5.6 2.8 4.2 甲拌磷 84.4 95.0 94.6 2.8 1.9 2.6
下载: 导出CSV
-
[1] SUH J H. Critical review: Metabolomics in dairy science-evaluation of milk and milk product quality[J]. Food Research International,2022,154:110984. doi: 10.1016/j.foodres.2022.110984
[2] LI C, ZHU H, LI C, et al. The present situation of pesticide residues in China and their removal and transformation during food processing[J]. Food Chemistry,2021,354:129552. doi: 10.1016/j.foodchem.2021.129552
[3] TUDI M, DANIEL RUAN H, WANG L, et al. Agriculture development, pesticide application and its impact on the environment[J]. International Journal of Environmental Research and Public Health,2021,18(3):1112. doi: 10.3390/ijerph18031112
[4] 张峰祖, 朴秀英, 李富根. 国际食品法典委员会动物源性食品中农药最大残留限量制定现状[J]. 农药学学报,2021,23(1):22−30. [ZHANG F Z, PIAO X Y, LI F G. Current situation on setting of pesticide maximum residue limits in food commodities of animal origin in Codex Alimentarius Commission[J]. Chinese Journal of Pesticide Science,2021,23(1):22−30. doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2021.0019 [ZHANG F Z, PIAO X Y, LI F G. Current situation on setting of pesticide maximum residue limits in food commodities of animal origin in Codex Alimentarius Commission[J]. Chinese Journal of Pesticide Science, 2021, 23(1): 22-30. doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2021.0019
[5] 袁娜, 杨臻, 乔璐, 等. 中国与主要贸易国水产品中农药残留限量标准对比分析[J]. 食品安全质量检测学报,2021,12(10):4244−4256. [YUAN N, YANG Z, QIAO L, et al. Comparative analysis of pesticide residue limit standards in aquatic products between China and major trading countries[J]. Journal of Food Safety & Quality,2021,12(10):4244−4256. doi: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2021.10.054 YUAN N, YANG Z, QIAO L, et al. Comparative analysis of pesticide residue limit standards in aquatic products between China and major trading countries[J]. Journal of Food Safety & Quality, 2021, 12(10): 4244-4256. doi: 10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2021.10.054
[6] 中华人民共和国国家卫生健康委员会, 中华人民共和国农业农村部, 国家市场监督管理总局. GB 2763-2021食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量[S]. 北京: 中国农业出版社, 2021 The People’s Republic of China, National Health Commission, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, State Administration for Market Regulation. GB 2763-2021 National food safety standard-Maximum residue limits for pesticides in food[S]. Beijing: China Agriculture Press, 2021.
[7] 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会, 中华人民共和国农业农村部, 国家市场监督管理总局. GB 23200.85-2016食品安全国家标准 乳及乳制品中多种拟除虫菊酯农药残留量的测定 气相色谱-质谱法[S]. 北京: 中国农业出版社, 2016: 2−3 The People’s Republic of China, National Health and Family Planning Commission, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, State Administration for Market Regulation. GB 23200.85-2016 National food safety standards-Determination of multiple pyrethroid pesticide residues in dairy products gas chromatography-mass spectrometry[S]. Beijing: China Agriculture Press, 2016: 2−3.
[8] 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会, 中华人民共和国农业农村部, 国家市场监督管理总局. 23200.86-2016食品安全国家标准 乳及乳制品中多种有机氯农药残留量的测定 气相色谱-质谱/质谱法[S]. 北京: 中国农业出版社, 2016: 2−3 The People’s Republic of China, National Health and Family Planning Commission, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, State Administration for Market Regulation. GB 23200.86-2016 National food safety standards-Determination of multiple residue of organochlorine pesticides in milk and dairy products gas chromatography-mass spectrometry[S]. Beijing: China Agriculture Press, 2016: 2−3.
[9] WENG R, LOU S, PANG X, et al. Multi-residue analysis of 126 pesticides in chicken muscle by ultra-high-performance liquid chromatography coupled to quadrupole time-of-flight mass spectrometry[J]. Food Chemistry,2020,309:125503. doi: 10.1016/j.foodchem.2019.125503
[10] PARK J A, ABD EL-ATY A M, ZHENG W J, et al. Simultaneous determination of clanobutin, dichlorvos, and naftazone in pork, beef, chicken, milk, and egg using liquid chromatography tandem mass spectrometry[J]. Food Chemistry,2018,252:40−48. doi: 10.1016/j.foodchem.2018.01.085
[11] HILDMANN F, GOTTERT C, FRENZEL T, et al. Pesticide residues in chicken eggs-A sample preparation methodology for analysis by gas and liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A,2015,1403:1−20. doi: 10.1016/j.chroma.2015.05.024
[12] 文静, 莫楠, 张立佳, 等. 超高效液相色谱-串联质谱法测定牛乳中氯虫苯甲酰胺、氟苯虫酰胺和2甲4氯的残留[J]. 食品工业科技,2023,44(5):285−291. [WEN J, MO N, ZHANG L J, et al. Determination of chlorantraniliprole, flubendiamide and 2-methy 4-chlorophenoxyacetic acid residues in milk by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Science and Technology of Food Industry,2023,44(5):285−291. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022050039 WEN J, MO N, ZHANG L J, et al. Determination of chlorantraniliprole, flubendiamide and 2-methy 4-chlorophenoxyacetic acid residues in milk by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(5): 285-291. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2022050039
[13] LEDOUX M. Analytical methods applied to the determination of pesticide residues in foods of animal origin: A review of the past two decades[J]. Journal of Chromatography A,2011,1218(8):1021−1036. doi: 10.1016/j.chroma.2010.12.097
[14] BANERJEE K. Novel GC/MS, HPLC/MS, and HPLC-diode array detector-based methods for determination of pesticide residues in food, feed, water, and soil samples[J]. Journal of AOAC International,2010,93(2):353−354. doi: 10.1093/jaoac/93.2.353
[15] LI Y, AN Q, ZHANG C, et al. Comparison of Sin-QuEChERS nano and d-SPE methods for pesticide multi-residues in lettuce and chinese chives[J]. Molecules,2020,25(15):3391. doi: 10.3390/molecules25153391
[16] DUBEY J K, PATYAL S K, SHARMA A. Validation of QuEChERS analytical technique for organochlorines and synthetic pyrethroids in fruits and vegetables using GC-ECD[J]. Environmental Monitoring and Assessment,2018,190(4):231. doi: 10.1007/s10661-018-6584-8
[17] 张朋杰, 张宪臣, 李云松, 等. QuEChERS结合超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法快速测定禽畜肉中157种农药残留[J]. Journal of Food Safety & Quality,2022,13(16):5391−5400. [ZHANG P J, ZHANG X C, LI Y S, et al. Rapid determination of 157 kinds of pesticide residues in livestock and poultry meat by QuEChERS combined with ultra performance liquid chromatography-quadrupole/electrostatic field orbitrap high resolution mass spectrometry[J]. Journal of Food Safety & Quality,2022,13(16):5391−5400. ZHANG P J, ZHANG X C, LI Y S, et al. Rapid determination of 157 kinds of pesticide residues in livestock and poultry meat by QuEChERS combined with ultra performance liquid chromatography-quadrupole/electrostatic field orbitrap high resolution mass spectrometry[J]. Journal of Food Safety & Quality, 2022, 13(16): 5391-5400.
[18] 张蓉, 陈跃, 郑培, 等. 凝胶渗透色谱-气相色谱-离子阱质谱法测定桔梗原药和当归提取物中101种农药残留[J]. 色谱, 2023, 41(2): 178-186 ZHANG R, CHEN Y, ZHENG P, et al. Determination of 101 Pesticide Residues in platycodis radix and extracts of angelica sinensis by gel permeation chromatograpgy gas chromatograpgy-ion trap mass spectrometry[J]. Chinese Journal of Chromatography, 2023, 41(2): 178-186.
[19] ZHOU S, ZHANG L, GUO C X, et al. Comparing liquid-liquid, solid-phase, and supported-liquid extraction for the determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in serum samples and their application for human biomonitoring[J]. Microchemical Journal,2022,181:107182.
[20] BREITENBUCHER J G, ARIENTI K L, MCCLURE K J. Scope and limitations of solid-supported liquid-liquid extraction for the high-throughput purification of compound libraries[J]. Journal of Combinatorial Chemistry,2001,3(6):528−533. doi: 10.1021/cc010039f
[21] BYLDA C, THIELE R, KOBOLD U, et al. Recent advances in sample preparation techniques to overcome difficulties encountered during quantitative analysis of small molecules from biofluids using LC-MS/MS[J]. Analyst,2014,139(10):2265−2276. doi: 10.1039/c4an00094c
[22] YAKIMAVETS V, QIU T, PANUWET P, et al. Simultaneous quantification of urinary tobacco and marijuana metabolites using solid-supported liquid-liquid extraction coupled with liquid chromatography tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography B,2022,1208:123378. doi: 10.1016/j.jchromb.2022.123378
[23] MOON J Y, LEE H S, KIM J H, et al. Supported liquid extraction coupled to gas chromatography-selective mass spectrometric scan modes for serum steroid profiling[J]. Analytica Chimica Acta,2018,1037:281−292. doi: 10.1016/j.aca.2018.02.059
[24] CHEN S, LI S, FANG K, et al. Rapid determination of 93 banned industrial dyes in beverage, fish, cookie using solid-supported liquid-liquid extraction and ultrahigh-performance liquid chromatography quadrupole orbitrap high-resolution mass spectrometry[J]. Food Chemistry,2022,388:132976. doi: 10.1016/j.foodchem.2022.132976
[25] 商婷, 赵灵娟, 李佩, 等. 固相支撑液液萃取-液相色谱-串联质谱法测定尿液中10种单羟基多环芳烃[J]. 分析化学,2019,47(6):876−882. [SHANG T, ZHAO L J, LI P, et al. Determination of 10 kinds of monohydroxylated polycyclic aromatic hydrocarbons in human urine by supported liquid extraction followed by liquid chromatographytandem mass spectrometry[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry,2019,47(6):876−882. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.191069 SHANG T, ZHAO L J, LI P, et al. Determination of 10 kinds of monohydroxylated polycyclic aromatic hydrocarbons in human urine by supported liquid extraction followed by liquid chromatographytandem mass spectrometry[J]. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2019, 47(6): 876-882. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.191069
[26] 陈雅莉, 扈洪志, 肖小华, 等. 乳制品样品前处理与分析检测技术研究进展[J]. 分析测试学报,2021,40(7):1098−1108. [CHEN Y L, HU H Z, XIAO X H, et al. Progress of sample preparation and analytical methods for dairy products[J]. Journal of Instrumental Analysis,2021,40(7):1098−1108. doi: 10.3969/j.issn.1004-4957.2021.07.019 CHEN Y L, HU H Z, XIAO X H, et al. Progress of sample preparation and analytical methods for dairy products[J]. Journal of Instrumental Analysis, 2021, 40(7): 1098-1108. doi: 10.3969/j.issn.1004-4957.2021.07.019
[27] ISMAIEL O A, ZHANG T, JENKINS R G, et al. Investigation of endogenous blood plasma phospholipids, cholesterol and glycerides that contribute to matrix effects in bioanalysis by liquid chromatography/mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography B,2010,878(31):3303−3316. doi: 10.1016/j.jchromb.2010.10.012
[28] KAUFMANN A, BUTCHER P, MADEN K, et al. Multi-residue quantification of veterinary drugs in milk with a novel extraction and cleanup technique: salting out supported liquid extraction (SOSLE)[J]. Analytica Chimica Acta,2014,820:56−68. doi: 10.1016/j.aca.2014.02.038
[29] RYSKA M. How to deal with the "matrix effect" as an unavoidable phenomenon[J]. European Journal of Mass Spectrometry,2015,21(3):423−432. doi: 10.1255/ejms.1355
[30] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局. GB/T 27404-2008实验室质量控制规范 食品理化检测[S]. 北京: 中国标准出版社, 2008: 26−27 General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the People’s Republic of China. GB/T 27404-2008 Criterion on quality control of laboratories-chemical testing of food[S]. Beijing: China Standards Press, 2008: 26−27.
-
期刊类型引用(10)
1. 滕琳，闫智慧，郝鹏鹏，郑祉泓. 均匀设计法在枣树皮抑菌活性物提取工艺优化的应用. 天津化工. 2025(01): 103-108 . 
百度学术
2. 刘坤，付鑫垚，郭彤，张婉月，赵庆生，孔泽娟，程华，宋恒. 桑树桑黄总三萜的提取纯化及其生物活性研究. 广西植物. 2025(02): 217-227 . 百度学术
3. 金鑫，马小龙，李萍，熊川，黄文丽，朱宇. 川赤芍总苷提取工艺优化、组成和抗氧化活性分析. 中国食品添加剂. 2024(01): 109-118 . 百度学术
4. 吴艳钦，张锶莹，翁馨，黄千慧，魏奇. 响应面法优化蛹虫草猴头菇银耳复合蛋糕加工工艺. 宁德师范学院学报(自然科学版). 2024(02): 174-180 . 百度学术
5. 李茂淋，王三，王毅，蒲晗旭，唐仁勇，郭秀兰，王国泽. 葛根素-猴头菇不溶性膳食纤维复合微胶囊的制备及理化性质的研究. 食品工业科技. 2024(14): 71-80 . 本站查看
6. 刘泽华，周媛，刘航，胡伦，喻仕瑞，郑华艳. 贵州灵芝三萜提取及其配制酒抗氧化性研究. 农产品加工. 2024(15): 1-4+11 . 百度学术
7. 陈林. 液态发酵茯苓菌有机相提取物抗氧化活性研究. 化工设计通讯. 2023(11): 217-219 . 百度学术
8. 张鑫，朱青永，徐慧敏，吴梦园，陈小娥，陈启和，刘政捷. 黄绿卷毛菇中原伊鲁烷型倍半萜芳基酯提取工艺优化及活性研究. 浙江大学学报(农业与生命科学版). 2023(06): 813-824 . 百度学术
9. 聂健，杨水莲，彭真福，莫美华. 均匀设计法优化灵芝三萜提取工艺. 食品安全导刊. 2022(06): 135-139 . 百度学术
10. 么越，荣丹，唐梦瑜，姜明，于莹莹，张越涵，于明航. 羊肚菌药用价值及产品开发现状. 中国食用菌. 2022(07): 13-17+21 . 百度学术
其他类型引用(3)
下载:
计量
- 文章访问数:
- HTML全文浏览量:
- PDF下载量:
- 被引次数: 13
