随着人们生活方式和饮食习惯的变化，高脂血症患者人数逐年增加，其严重威胁着国民健康的同时也对社会造成了重大影响。有研究表明^[1-2]，血脂代谢异常与肥胖症之间存在着密切联系，并会导致高血压、冠心病、糖尿病等一系列慢性疾病。目前治疗高脂血症的药物以中药、西药为主，但长时间服用西药会产生一定程度的副作用^[3]。随着现代医药文化的快速发展，植物药市场不断扩充，人们逐渐趋向于使用中药治疗高脂血症^[4]。国内外对此也展开了大量研究，如利用纳豆红曲复合物^[5]、善清金花茶^[6]、鹧鸪茶^[7]和丹红注射液^[8]等。

复合沙棘原液以沙棘原液为主，辅以山楂、生决明、荷叶、山药、红曲等配伍而成。其中沙棘富含多种化学活性物质，其成分中的天然类黄酮被证实具有调节血脂紊乱及降低血糖的作用^[9-10]，沙棘果肉中还含有丰富的脂肪油，不仅能够调节代谢紊乱还能起到抗氧化的作用^[11-12]。此外，山楂能够通过抑制胆固醇合成酶的作用，促进脂质排泄^[13]；决明子中的蒽醌类物质可通过减少脂质吸收、增加其排泄而达到调脂效果^[14]；荷叶中的荷叶碱可通过增加脂酶活性、减少氧化应激及调控脂质合成与氧化代谢相关酶等改善小鼠高脂血症^[15]；山药中的多糖物质能有效平衡机体总胆固醇、三酰甘油等相关血脂指标的正常水平，对机体脂质代谢紊乱有一定的调节作用^[16]；红曲中的洛伐他汀与人体内的HMG-CoA还原酶结构相似，存在竞争性抑制，能够减少内源性胆固醇的合成，从而达到调血脂的目的^[17]。因此，将沙棘与山楂、生决明、荷叶、山药、红曲等复合或可协同增加降脂功效，且这些药材均属于药食同源类物质，增效的同时能大大提高复合沙棘原液的食用安全性。

目前，市售产品多以沙棘为单一成分制备，复合产品较少，且沙棘含酸量过高，口感较差^[18]，辅以其它中药配伍可改善其口感。并且沙棘、山楂、生决明、荷叶、山药、红曲均可药食两用，复合沙棘原液的食用安全性大大提高。此外，复合沙棘原液的开发也有利于降低亚健康人群患高脂血症的概率且在一定程度上能够辅助治疗高脂血症患者，这对预防或改善高脂血症具有重要意义。因此本研究以复合沙棘原液为研究对象，通过喂食高脂饲料建立高脂血症大鼠模型，经4周灌胃给药后考察各组大鼠的体重、Lee’s指数、血清血脂水平、抗氧化水平、肝脏指数及肝脏病理形态，以验证复合沙棘原液的降脂功效，为复合沙棘原液的进一步开发与利用提供科学基础。

1.   材料与方法

1.1   材料与仪器

沙棘复合原液　由沙棘原液与山楂、生决明、荷叶、山药、红曲浓缩液（浓缩液各药材配比为1:1:1:1:1）3:1配比而成，山西献果园生物科技有限公司生产提供；SPF级Wistar雄性大鼠　6~8周龄，体质量180~220 g，许可证编号为：SCXK（京）2019-0010，购于斯贝福（北京）生物技术有限公司，饲养于山西中医药大学动物房，温度保持在23~26 ℃，湿度保持在30%~40%，动物实验经山西中医药大学医学伦理委员会批准，批准编号为：2022DW265；基础维持饲料　由玉米、豆粕、鱼粉、磷酸氢钙、氨基酸、多种维生素及矿物质等制成，其营养成分为水分97 g/kg、蛋白194.8 g/kg、脂肪46 g/kg、纤维20 g/kg、灰分56 g/kg、钙13.4 g/kg、总磷8.2 g/kg，购自斯贝福（北京）生物技术有限公司；高脂饲料　严格按照国食药监保化[2012]107号文件中辅助降低血脂功能检验方法的要求配制，即在基础维持饲料中加入20%蔗糖、15%猪油、1.2%胆固醇、0.2%胆酸钠，适量的酪蛋白、磷酸氢钙和石粉等，由实验室配制，以上配料均购自斯贝福（北京）生物技术有限公司；洛伐他汀胶囊　国药准字H10980272，购自江苏海岸药业有限公司；血清总胆固醇（total obolesterol, TC）、甘油三酯（triglyceride, TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C）试剂盒、丙二醛（malondial dehyde, MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）测定试剂盒　均购于南京建成生物工程研究。

HC-2015高速离心机　安徽中科中佳科学仪器有限公司；AR223CN电子天平　奥豪斯仪器有限公司；SpectraMax 190酶标仪　北京生元诚业科技有限公司；HH-4A数显恒温水浴锅　常州金坛精达仪器制造有限公司。

1.2   实验方法

1.2.1   造模及分组给药

以基础维持饲料适应性喂养Wistar大鼠3 d，将大鼠随机分为空白对照组、高脂模型组、阳性对照组、复合沙棘原液低、中、高剂量组，共6组，每组各10只。造模期间，以基础维持饲料饲喂空白对照组，剩余各组均采用高脂饲料饲喂，以造模3周后大鼠的体重变化辅以实验结束时高脂模型组TC、TG水平是否升高为依据判断高脂血症模型是否建造成功。造模结束后仍给空白对照组的大鼠喂食基础维持饲料，剩余各组依然饲喂高脂饲料，且阳性对照组及复合沙棘原液低、中、高剂量组分别按照1.80 mg/kg·bw洛伐他汀胶囊及3.57、7.14、14.28 mL/kg·bw剂量的复合沙棘原液进行灌胃给药（洛伐他汀胶囊人体一般日用量为20 mg，其剂量依据大鼠折算系数换算而得；复合沙棘原液人体一般日用量为50 mL，其高、中、低剂量依据人体建议日用量折合后剂量的5、10、20倍换算而得），空白对照组和高脂模型组则灌胃生理盐水，连续灌胃4周，每3 d称量一次大鼠体重，并根据体重及时调整受试物的灌胃量^[19]。

1.2.2   大鼠体重、Lee’s指数的测定

给药结束后，测量各组大鼠最终体重及体长，计算其Lee’s指数^[20]，计算公式如下：

1.2.3   血样指标测定

给药结束后禁食12 h，于大鼠腹主动脉取血4~5 mL，静置30 min，以3500 r/min离心15 min，收集上层血清待后续指标测定。对大鼠血清中的TC、TG、LDL-C、HDL-C含量及SOD活力、MDA含量进行测定，测定方法均严格按照相应的试剂测试盒说明书进行操作。

1.2.4   大鼠肝脏病理学检测

处死大鼠后，快速打开大鼠腹腔，将肝脏分离并置于冷的生理盐水中，对肝脏表面血液进行漂洗，后用滤纸将肝脏拭干后观察各组肝脏形态并称重记录，计算其肝脏系数^[21]。肝脏系数公式如下：

取肝脏同一部位于组织固定液中浸泡，经HE染色后观察各组肝脏病理学形态变化并进行分析。

1.3   数据处理

通过SPSS 26.0与GraphPad Prism 6.01软件分析数据结果，实验数据以均数±标准差（$\overline {\rm{x}} \pm {\rm{s}}$）表示，单因素方差分析适用于多组比较，LSD检验适用于多组之间两两比较^[22]，以P<0.05，P<0.01表示差异具有显著性。

2.   结果与分析

2.1   复合沙棘原液对大鼠体重、Lee’s指数的影响

高脂血症与肥胖关系密切，随着人体肥胖程度的增加，高脂血症发生率也明显增加，且高脂血症的发生容易诱发心血管疾病，因此控制体重对于改善高脂血症尤为重要，而在大鼠实验中体重与Lee’s指数就是判断其肥胖程度的重要指标^[23-24]。由表1可知，6组大鼠初始体重无显著差异（P>0.05）。经过3周模型的建立，与空白对照组相比，阳性对照组体重显著增加（P<0.05），其余4组体重极显著增加（P<0.01），表明高脂血症模型建立成功。经过2周给药后，与高脂模型组相比，阳性对照组体重极显著下降（P<0.01），其余给药组则仅具有下降趋势，并无统计学意义（P>0.05）。经过4周给药后，与高脂模型组相比，阳性对照组大鼠体重、Lee’s指数均极显著降低（P<0.01）；复合沙棘原液高剂量组大鼠体重显著降低（P<0.05）、Lee’s指数极显著降低（P<0.01）。表明阳性药洛伐他汀见效快，能够较好地改善高脂血症大鼠的肥胖程度，而复合沙棘原液则见效较缓慢，但长期、大量服用也具有改善高脂血症大鼠肥胖程度的作用。

表  1  复合沙棘原液对大鼠体重、Lee’s指数的影响（$\overline {\rm{x}} \pm {\rm{s}}$）

Table  1.  Effects of compound seabuckthorn concentrate on rat body weight and Lee’s index ($\overline {\rm{x}} \pm {\rm{s}}$)

组别	体重（g）				Lee’s指数
	起始	造模3周	给药2周	给药4周
空白对照组	211.39±6.69	317.89±11.85	385.91±33.71	443.64±35.49	0.307±0.007
高脂模型组	217.07±6.32	359.59±29.22**	480.84±38.98**	533.83±43.12**	0.322±0.007**
阳性对照组	218.08±6.32	351.41±23.78*	426.44±16.95*##	466.44±23.63##	0.306±0.007##
低剂量组	217.44±8.81	361.56±21.61**	468.20±47.88**	512.46±47.50**	0.314±0.010*
中剂量组	215.27±5.43	371.53±26.26**	459.05±32.53**	494.85±37.65*	0.311±0.005##
高剂量组	215.45±6.09	361.91±35.08**	454.40±42.37**	490.30±41.39*#	0.305±0.009##
注：与空白对照组相比，“*”表示P<0.05，“**”表示P<0.01；与高脂模型组相比，“#”表示P<0.05，“##”表示P<0.01；表2、表3、图2。

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2.2   复合沙棘原液对大鼠血清指标的影响

2.2.1   对大鼠血脂指标的影响

TC、TG、LDL-C、HDL-C是高脂血症的特征指标，在高脂血症患者中具体表现为TC、TG、LDL-C水平升高，和/或HDL-C水平下降^[25]。由表2可知，高脂模型组与空白对照组相比，血清中TC、TG、LDL-C水平极显著升高，HDL-C水平极显著下降（P<0.01），进一步表明高脂模型建立成功。与高脂模型组相比，阳性对照组与复合沙棘原液各剂量组TC、TG水平极显著下降（P<0.01），TC水平的降低表明人体内胆固醇堆积减少，脂质堆积情况减轻；TG水平的降低缓解了TG在体内的过量聚集，从而有利于改善高脂血症。同时，阳性对照组与高脂模型组相比LDL-C水平极显著下降（P<0.01），HDL-C水平显著上升（P<0.05）；复合沙棘原液高剂量组与高脂模型组相比，LDL-C水平显著下降（P<0.05），HDL-C水平显著上升（P<0.05）。LDL-C是负责将胆固醇转运至肝外，其水平与高脂血症的发生率呈正相关；HDL-C则是负责将胆固醇从肝外转运至肝内进行代谢，其水平与高脂血症的患病率呈负相关^[26]，因此LDL-C水平的降低，和/或HDL-C水平的升高有利于改善高脂血症。

表  2  复合沙棘原液对高血脂症大鼠血脂指标的影响（$\overline {\rm{x}} \pm {\rm{s}}$）

Table  2.  Effects of compound seabuckthorn concentrate on blood lipid indexes of hyperlipidemia rats ($\overline {\rm{x}} \pm {\rm{s}}$)

组别	TC（mmol/L）	TG（mmol/L）	LDL-C（mmol/L）	HDL-C（mmol/L）
空白对照组	1.37±0.15	0.52±0.11	0.49±0.31	1.14±0.47
高脂模型组	2.54±0.44**	1.67±0.35**	2.19±0.64**	0.46±0.22**
阳性对照组	1.49±0.28##	1.09±0.20**##	0.82±0.31##	0.91±0.46#
低剂量组	1.81±0.35**##	1.22±0.20**##	1.73±0.58**	0.61±0.28**
中剂量组	1.77±0.37*##	1.21±0.12**##	1.58±0.70**#	0.73±0.22*
高剂量组	1.71±0.15*##	1.08±0.27**##	1.53±0.67**#	0.87±0.26#

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以上实验结果表明，复合沙棘原液能够降低高脂血症大鼠TC、TG、LDL-C水平，升高HDL-C水平。这可能与复合沙棘原液中的沙棘黄酮、山楂黄酮、荷叶碱、决明子蒽醌、山药多糖、红曲洛伐他汀类等成分的降脂作用相关，且沙棘与红曲联用^[27]、沙棘与山楂^[28]联用都能够加快血清脂质的代谢，以降低高脂血症动物的血脂水平。此外，Guo等^[29]研究表明沙棘冻干粉能够通过调节固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）、激素敏感脂酶（HSL）、肉毒碱棕榈酰转移酶1（CPT-1）、过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶（ACOX）有效减少脂肪堆积，且也能通过改变肠道微生物菌群的组成和结构来调节经高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠脂质代谢的紊乱。而复合沙棘原液中以沙棘原液为主，其也有可能通过调节SREBP-1c、PPAR-γ、ACC、SCD1、HSL、CPT-1、ACOX脂质相关基因表达及改变肠道微生物菌群来调节高脂血症大鼠血脂水平，为后续实验验证复合沙棘原液的降脂通路提供了研究思路。

2.2.2   对大鼠抗氧化指标的影响

高脂血症的发展与氧化应激密不可分，其患者或实验动物体内易产生氧化与抗氧化失衡的危机^[6]。SOD含量与氧化应激密切相关，其大小能反映氧化应激水平的高低^[30]；MDA作为评价脂质过氧化作用的可靠指标，可间接反映脂质过氧化损伤的状况，同时与体内氧化应激反应也相关联^[31-32]。由表3可知，与高脂模型组相比，阳性对照组与复合沙棘原液各剂量组血清中SOD活力极显著上升（P<0.01），阳性对照组与复合沙棘原液高剂量组血清中的MDA水平极显著下降（P<0.01）。表明复合沙棘原液可使高脂血症大鼠自身SOD活力提升以增强其机体抗氧化能力，同时能够降低MDA含量以缓解大鼠体内的脂质过氧化作用。这可能与复合沙棘原液中沙棘、山楂、荷叶、决明子、山药、红曲均具有抗氧化的功效相关^[16,33-36]，然而在这其中起主要作用的成分还需通过实验进一步验证。

表  3  复合沙棘原液对高脂血症大鼠抗氧化指标的影响（$\overline {\rm{x}} \pm {\rm{s}}$）

Table  3.  Effects of compound seabuckthorn concentrate on antioxidant indexes in hyperlipidemia rats ($\overline {\rm{x}} \pm {\rm{s}}$)

组别	SOD活力（U/mL）	MDA含量（nmol/mL）
空白对照组	156.02±4.58	5.88±1.96
高脂模型组	130.54±2.46**	12.23±4.28**
阳性对照组	152.21±12.32##	5.62±2.55##
低剂量组	153.03±11.05##	10.13±6.15*
中剂量组	153.39±11.20##	9.09±3.36
高剂量组	154.91±13.74##	6.01±2.88##

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2.3   复合沙棘原液对大鼠肝脏组织病理学的影响

2.3.1   对大鼠肝脏大体形态的影响

如图1所示，空白对照组肝脏并无明显异常，颜色暗红、均匀且形状规则，肝脏边缘锐利，具有良好韧性；高脂模型组肝脏则明显异常，肝脏体积膨大、颜色泛浅、油性较大、肿胀明显、边缘较圆钝，同时肝脏具有一定的脆性；阳性对照组相比模型组颜色稍深，其余变化并不明显；复合沙棘原液各剂量组与模型组相比，肝脏变化并不显著。表明高脂饮食诱导的高脂血症模型会对肝脏造成一定损伤，而这种损伤在一定范围内是可逆的，通过药物干预肝脏会有一定的好转。

图  1  大鼠肝脏病理变化

注：①空白对照组；②高脂模型组；③阳性对照组；④低剂量组；⑤中剂量组；⑥高剂量组；图3同。

Figure  1.  Pathological changes of rats livers

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2.3.2   对大鼠肝脏系数的影响

如图2所示，高脂模型组肝脏系数相比空白对照组肝脏系数极显著增加（P<0.01），表明长期的高脂饮食不利于肝脏的正常代谢，会使得肝脏中脂质堆积，导致肝脏肥大。阳性对照组、复合沙棘原液高剂量组与高脂模型组相比，肝脏系数均极显著下降（P<0.01）。复合沙棘原液低、中剂量组的肝脏系数虽呈现一定的下降趋势，但与高脂模型组相比并无显著差异（P>0.05）。

图  2  复合沙棘原液对大鼠肝脏系数的影响（$\overline {\rm{x}} \pm {\rm{s}}$）

Figure  2.  Effects of compound seabuckthorn concentrate on liver coefficient of rats ($\overline {\rm{x}} \pm {\rm{s}}$)

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2.3.3   对大鼠肝脏组织病理学的影响

如图3所示，空白对照组肝组织结构并无明显异常，肝小叶分界清晰且排列规则，细胞结构清晰且排列整齐。高脂模型组肝组织的脂肪变性严重，肝实质内可见大量的肝细胞呈气球样变，肝细胞极度肿胀，胞质疏松，与2.3.1、2.3.2实验结果一致，进一步表明高脂饮食会对肝脏造成一定影响，使得肝脂质代谢功能紊乱。阳性对照组肝细胞恢复较好，大量脂肪空泡消失。复合沙棘原液各剂量组肝细胞肿胀程度逐渐减缓，胞质中的脂肪空泡相对减少。

图  3  肝脏病理学切片（200×）

Figure  3.  Pathological sections of livers （200×）

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上述实验结果显示，高脂饮食诱导的高脂血症模型大鼠的肝脏也会受到一定影响，随着大鼠脂肪摄入含量的增加，其体内热量积聚使得肝内合成大量TG，肝细胞脂质含量增加，从而导致高脂血症大鼠肝脏脂质代谢受损，后期还有可能会转化为脂肪肝^[27]。而复合沙棘原液能够降低高脂血症大鼠的TG水平及肝脏系数，同时也能改善大鼠的肝脏病理形态，说明复合沙棘原液有利于大鼠肝脏脂质的代谢，并具有一定的肝脏保护作用。

3.   结论

本实验通过建立高脂血症大鼠模型，探究复合沙棘原液的降脂作用。经研究发现通过高脂饮食诱导3周后，大鼠血清中TC、TG、LDL-C含量明显增加，HDL-C含量明显减少，表明高脂血症大鼠模型构建成功。造模成功后的大鼠经过复合沙棘原液干预后，TC、TG、LDL-C含量降低，HDL-C含量升高，表明复合沙棘原液能够调控大鼠血脂水平。此外高脂血症能够引发大鼠SOD活力降低、MDA含量增多，经复合沙棘原液干预后，大鼠血清中SOD、MDA的含量得到改善，表明复合沙棘原液能够缓解由高脂血症引发的氧化应激反应；同时经过对比各实验组大鼠肝脏及计算其肝脏指数发现，复合沙棘原液对高脂血症大鼠肝脏也具有一定的保护作用。

综上所述，复合沙棘原液具有调节高脂血症大鼠血脂水平的作用，同时在一定程度上具有抗氧化及保护肝脏的作用，其中以高剂量效果为佳，表明复合沙棘原液可以预防及辅助治疗高脂血症，为后续相关药食同源产品的研发提供了科学基础。