Nutritional Composition, Antioxidant Capacity and Protective Activity against DNA Damage of Yaowang Tea (Potentilla glabra var. mandshurica) Endemic to Qinling Mountain
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摘要: 目的：揭示秦岭特色药食同源植物药王茶的营养保健功效与活性物质基础，为药王茶资源的开发利用提供参考。方法：采用高效液相色谱法、等离子体发射光谱法等分析药王茶的化学组成，测定其营养素和活性成分的种类与水平，采用自由基清除实验等评价其抗氧化活性，采用琼脂糖凝胶电泳技术研究其抗DNA损伤作用。结果：药王茶含有槲皮苷、槲皮素和没食子酸，提取物中含量依次为0.17%±0.00%、0.29%±0.01%和0.28%±0.01%。必需氨基酸含量为65.65±1.97 mg/g。锰、硒、镁的含量分别为1.19±0.04、0.43±0.02、2.80±0.05 mg/kg，砷、镉、汞、铅等重金属均未超过国家限量标准。清除DPPH、ABTS自由基的EC50值分别为0.0704、0.3810 mg/mL，具有较高的还原力。对DNA损伤的保护作用具有明显的剂量依赖性，在药王茶提取物浓度达到1×10−2 mg/mL时抗DNA损伤作用强于抗坏血酸。结论：药王茶含有多种生物活性物质，重金属含量符合标准，具有一定的体外抗氧化能力和抗DNA损伤作用。Abstract: Objective: In order to provide evidence to scientific exploitation of Yaowang tea endemic to Qinling mountain, nutritional value, health benefits and their material basis of Yaowang tea were investigated. Methods: Chemical composition as well as nutrients and bioactive constituents profile of Yaowang tea was analyzed by high performance liquid chromatography and plasma emission spectroscopy, etc. Antioxidant activity was determined by free radical scavenging experiment, and protective effect on DNA damage was studied by agarose gel eletrophoresis. Results: Quercitrin, quercetin and gallic acid were determined in Yaowang tea, and their contents were 0.17%±0.00%, 0.29%±0.01% and 0.28%±0.01%, respectively. Content of essential amino acids was 65.65±1.97 mg/g. Contents of manganese, selenium and magnesium were 1.19±0.04, 0.43±0.02 and 2.80±0.05 mg/kg, respectively, while heavy metals (e.g., arsenic, cadmium, mercury, lead) did not exceed the national permissible limit. Yaowang tea extract exhibited the ability to scavenge DPPH and ABTS radicals with EC50 values of 0.0704 and 0.3810 mg/mL, respectively. Protective activity of Yaowang tea extract against DNA damage was in dose-dependent manner. Protective effect of 1×10−2 mg/mL Yaowang tea extract against DNA damage was higher than that of ascorbic acid. Conclusion: Yaowang tea contains several bioactive constituents, and it is safe in respect to heavy metals. Yaowang tea possesses in vitro antioxidant activity and protective effect against DNA damage.
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Keywords:
- Yaowang tea /
- nutritional value /
- heavy metal /
- antioxidant activity /
- DNA damage
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药王茶是蔷薇科（Rosaceae）委陵菜属（Potentilla L.）落叶灌木白毛银露梅（Potentilla glabra var. mandshurica）的叶和花，主要生长在秦岭太白山地区的高山草甸上[1]。相传药王茶被“药王”孙思邈发现并长期饮用，因此得名。药王茶能够“治暑热眩晕、两目不清、胃气不和、滞食及月经不调”[1]，是具有地方特色的药食同源植物[2]。白吉庆等[3]对药王茶总黄酮含量进行了测定，发现不同采收月份药王茶的总黄酮含量各异；郑麟枫等[4]利用响应面方法对药王茶总黄酮提取工艺进行了优化，所得最优工艺参数为液料比16:1、乙醇溶液浓度65%、提取时间60 min；崔小敏等[5]利用质谱技术从药王茶中鉴定出36种有机酸和黄酮类化合物。大量研究发现，DNA损伤与癌症、免疫缺陷、胃肠疾病、炎症等多种疾病密切相关[6-9]。药王茶的部分生物活性（如胃肠疾病防治功效）可能与其对DNA损伤的作用有关，但是目前国内外鲜见有关药王茶抗DNA损伤活性的研究报道，其营养学、功能学、毒理学等方面的数据也较少，严重制约了药王茶资源的科学开发和安全应用。本研究采用等离子体发射光谱法、高效液相色谱法等分析了药王茶中蛋白质、氨基酸、矿物质等营养成分以及多酚、黄酮类化合物等活性物质的种类与水平，在此基础上分析了药王茶的体外抗氧化活性，并首次研究了其对DNA损伤的保护作用，以期揭示药王茶营养组成和活性物质基础，促进其资源开发利用。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
药王茶 购自陕西省太白县医药公司，由西安神龙制药厂毛水龙研究员鉴定；pBR322质粒 日本TaKaRa公司；标准对照品芦丁、葡萄糖以及ABTS、DPPH、琼脂糖、TAE缓冲液（50×）、2 mol/L福林酚、PBS缓冲液（pH6.6、7.4）、loading buffer（6×） 均为分析纯，美国sigma公司；标准对照品没食子酸、槲皮素、槲皮苷与氨基酸 上海源叶公司；抗坏血酸 分析纯，国药集团化学试剂公司；矿物质元素标准液 北京普天公司；磷酸 色谱级，天津科密欧公司；甲醇、乙腈 色谱级，德国Merck公司。
JPCQ0328全数字式超声波清洗机 武汉嘉鹏公司；MultiskanGo全波长酶标仪、DIONEX UltiMate3000高效液相色谱仪（配备Aglient C18柱）、5110电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES） 美国Thermo Electron公司；FDU-1200真空冷冻干燥机 日本Tokyo Rikakikai公司；MARS6微波消解仪配消解管 美国CEM公司；L-8900氨基酸分析仪 日本HITACHI公司；DYY-8C电泳电源配DNA电泳装置 北京六一公司；JS-6800凝胶成像系统 上海培清公司；Kjeltec 2300全自动凯氏定氮仪 丹麦FOSS公司。
1.2 实验方法
1.2.1 药王茶的处理与提取物制备
用清水漂洗1次药王茶除去其中灰尘等杂物，烘箱中40±5 ℃烘干，烘干后用粉碎机粉碎至200 目。将预处理后的药王茶按料液比1:100（g/mL）放入95±5 ℃热水中浸提30±5 min，浸提之后立即抽滤，将滤液真空减压浓缩至原体积的1/3~1/4，得到浓缩液，在温度为−48±3 ℃、真空度20±3 Pa条件下对浓缩液进行冻干得到提取物。
1.2.2 药王茶化学组成的测定
1.2.2.1 蛋白质定量分析
参考国家标准采用凯氏定氮法[10]测定其含氮量，并计算其蛋白质含量。
1.2.2.2 氨基酸分析
使用氨基酸分析仪测定药王茶中氨基酸含量（因仪器限制，不能检测天冬酰胺、谷氨酰胺、色氨酸），参考文献[11-13]方法对药王茶的氨基酸质量（氨基酸评分（AAS）、化学评分（CS）、氨基酸比值（RAA）、氨基酸比值系数（RC）、必需氨基酸与半必需氨基酸的总和占总氨基酸比例（E/T值））进行评价。氨基酸含量测定结果以平均值±标准差（
¯X ±SD）表示，以平均值进行评分。1.2.2.3 多糖定量分析
采用苯酚-硫酸法进行多糖含量测定[14]。标准曲线方程为y=0.0049x−0.0134（式中：x为葡萄糖溶液浓度，mg/mL；y为吸光度），R2=0.9944。多糖分析结果以平均值±标准差（
¯X ±SD）表示。1.2.2.4 总多酚定量分析
参考国家标准[15]进行多酚的提取与测定。标准曲线方程为y=0.0431x+0.0624（式中：x为没食子酸溶液浓度，μg/mL；y为吸光度），R2=0.9971。总多酚分析结果以没食子酸当量表示，记作平均值±标准差（
¯X ±SD）。1.2.2.5 总黄酮定量分析
采用白吉庆等[3]的方法提取总黄酮，采用国家标准[16]的分光光度法测定总黄酮含量。标准曲线方程为y=0.1106x+0.0434（式中：x为芦丁溶液浓度，mg/mL；y为吸光度），R2=0.9986。总黄酮分析结果以芦丁当量表示，记作平均值±标准差（
¯X ±SD）。1.2.2.6 酚类化合物、黄酮类化合物高效液相色谱分析
参考何晶晶等[17]的方法测定药王茶中的槲皮苷与槲皮素的含量，色谱条件：使用C18色谱柱（4.6×250 mm，5 μm）分离，以乙腈和0.5%磷酸溶液为流动相。按照《中国药典》[18]的方法测定药王茶中的没食子酸含量。槲皮苷标准曲线方程为y=0.99375x−5.9625，R2=0.9985；槲皮素标准曲线方程为y=0.308x+1.4，R2=0.9873；没食子酸标准曲线方程为y=0.46x+1.5，R2=0.9974（以上各式中：x为标准品浓度，mg/L；y为响应值，mAU）。高效液相色谱分析结果以平均值±标准差（
¯X ±SD）表示。1.2.2.7 矿物质与重金属分析
参考国家标准[19-21]分析药王茶中的矿物质与重金属，简述如下：精密称取0.2 g药王茶样品于消解管中，加入浓硝酸，微波消解30 min，赶酸后用蒸馏水定容至10 mL，制得20 g/L的药王茶消解液，使用ICP-OES上机测定。元素含量测定回归方程如表1所示。
表 1 元素测定回归方程Table 1. Regression equation of element assay元素 波长（nm） 回归方程 R2 As 188.980 y=735.2x−25.666 0.9983 Cd 226.502 y=45850x−1912.3 0.9986 Cr 205.560 y=7184.73x+12.83 0.9982 Hg 184.887 y=161.84x-8.63 1.0000 Pb 182.143 y=395.56x−1.2042 0.9980 Cu 324.754 y=27182x−617.9 0.9985 Mo 202.032 y=7445.5x−302.96 0.9981 Se 206.279 y=128.19x+231.31 0.9987 Sr 407.771 y=7379191x+849.60 1.0000 Zn 202.548 y=28193.95x+147.88 0.9904 Fe 259.940 y=15705.71x+57.80 0.9997 Mg 280.270 y=69128x+849946 0.9306 Mn 257.610 y=268032x−22217 0.9982 注：x为元素浓度，mg/L；y为响应值，mAU。 1.2.3 体外抗氧化活性测定
按照文献方法分别测定DPPH自由基[22]、ABTS自由基[23]、羟基自由基（·OH）[19]清除活性以及总还原力[24]，并计算EC25和EC50值，以抗坏血酸为阳性对照。
1.2.4 DNA损伤保护作用测定
参考YANG等[9]的方法进行体外DNA损伤保护试验，分为药王茶提取物实验组、抗坏血酸对照组、PBS缓冲液对照组与质粒组。在药王茶提取物实验组中，将FeSO4溶液、H2O2溶液和不同浓度的药王茶提取物溶液（1×10−2、1×10−3、1×10−4、1×10−5 mg/mL）加入反应杯中，再加入pBR322质粒，37 ℃下孵育30 min后加入loadingbuffer进行电泳。电泳条件优化如下：72 V电泳15 min之后在122 V条件下继续电泳40 min。电泳完成后用凝胶成像系统进行拍照。在抗坏血酸对照组、PBS缓冲液对照组和质粒组中，除了分别用1×10−3 mg/mL的抗坏血酸溶液、0.01 mol/L的PBS缓冲液（pH7.4）和蒸馏水代替药王茶提取物溶液以外，其余操作与药王茶样品处理组相同。
1.3 数据处理
所有实验平行重复3次，结果以平均值±标准差（
¯X ±SD）表示。采用SPSS 26.0软件进行方差分析（One-Way ANOVA）。2. 结果与分析
2.1 药王茶的化学组成
2.1.1 蛋白质与氨基酸
药王茶的蛋白质含量为10.43%±0.16%，其中含量最高的氨基酸是丙氨酸（29.14±0.55 mg/g），占总氨基酸的15.36%，含量最高的必需氨基酸是苯丙氨酸（17.84±0.64 mg/g），占总氨基酸的9.41%（表2）。药王茶的总氨基酸含量为189.52±5.78 mg/g，其中必需氨基酸含量为65.65±1.97 mg/g，半必需氨基酸含量为20.39±0.91 mg/g，非必需氨基酸含量为103.48±2.90 mg/g，E/T值为45.4%，说明了药王茶中必需氨基酸、半必需氨基酸含量较高。由表3可知，除亮氨酸外，其它必需氨基酸的AAS均高于100，这说明药王茶中必需氨基酸含量较高，基本可以满足成年人相关氨基酸需求。药王茶的氨基酸与对照鸡蛋氨基酸的种类、含量的相似度较高。除异亮氨酸和亮氨酸外，其它氨基酸的CS均高于100，提示药王茶的氨基酸质量总体上略优于鸡蛋氨基酸。
表 2 药王茶中氨基酸种类与水平Table 2. Type and level of amino acids in Yaowang tea氨基酸 含量（mg/g） 氨基酸 含量（mg/g） Thr* 5.96±0.04 Ser 8.48±0.33 Met* 11.86±0.53 Glu 15.15±0.42 Ile* 4.61±0.05 Gly \ Leu* 6.30±0.12 Ala 29.14±0.55 Phe* 17.84±0.64 Cys \ Lys* 10.45±0.31 Pro 10.65±0.41 Val* 8.63±0.28 总氨基含量 4.60±0.21 Arg# 6.68±0.32 总氨基酸 189.52±5.78 His# 13.71±0.59 必需氨基酸 65.65±1.97 Tyr 24.95±0.61 半必需氨基酸 20.39±0.91 Asp 15.11±0.58 非必需氨基酸 103.48±2.90 E/T值（%） 45.4 注：\代表未检出，*代表必需氨基酸，#代表半必需氨基酸，E/T值代表必需氨基酸与半必需氨基酸的总和占总氨基酸比例。 表 3 药王茶的氨基酸评分（AAS）、化学评分（CS）、氨基酸的比值（RAA）及其系数（RC）Table 3. Amino acid score (AAS), chemical score (CS), amino acid ratio (RAA) and its coefficient (RC) of Yaowang tea氨基酸（AA） 药王茶中氨基酸
含量（mg/g）氨基酸评分（AAS） 化学评分（CS） 氨基酸比值（RAA） RAA系数（RC） Ile 4.61±0.05 115.35 69.908 1.154 0.457 Leu 6.30±0.12 89.971 89.966 0.9 0.356 Lys 10.45±0.31 190.055 163.333 1.901 0.752 Thr 5.96±0.04 148.875 116.765 1.489 0.589 Val 8.63±0.28 172.52 118.17 1.725 0.683 His 13.71±0.59 \ 427.868 \ \ Phe+Tyr 42.79±1.21 713.117 215.662 7.131 2.822 Met+Cys 11.86±0.53 338.886 189.132 3.389 1.341 合计 104.31±3.13 \ \ 2.527 \ 注：\代表无法计算或计算无意义。 RAA通常用来表示氨基酸在一定量食物中的含量占模式氨基酸的倍数，而RC则表示氨基酸在食物内与模式氨基酸的偏离程度[25]。由表3可知，除亮氨酸外，药王茶其余必需氨基酸的RAA均高于模式氨基酸，其第一限制性氨基酸为亮氨酸，这与前文的AAS分析结果相吻合。药王茶中苯丙氨酸+酪氨酸、甲硫氨酸+半胱氨酸的RC值均大于1，说明药王茶中这4种氨基酸相对过剩；而异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苏氨酸与缬氨酸RC值均小于1，可能是因为药王茶中苯丙氨酸+酪氨酸、甲硫氨酸+半胱氨酸等含量过高从而提高了RAA的平均值所致，并非药王茶缺乏这些氨基酸。
2.1.2 多糖、黄酮类化合物、酚类化合物
药王茶中多糖含量较高（11.88%±0.13%），总黄酮含量为1.51%±0.04%，多酚含量为7.47%±0.08%，槲皮苷、槲皮素、没食子酸单体的含量分别为0.17%±0.00%、0.29%±0.01%和0.28%±0.01%（图1）。多糖特别是植源性多糖往往具有调节免疫、降低血糖、调节肠道菌群、抗肿瘤、清除体内自由基等作用[26]。植物多酚具有一定的清除自由基、调节氧化酶系与抗氧化酶系、控制高价态金属元素与DNA的螯合、抗动脉粥样硬化、抗菌、抗辐射、抗肿瘤、延迟衰老、控制肥胖等作用[27]。黄酮类化合物具有抗氧化、抗癌症、调节人体生理机能、抗病毒与抗辐射等作用[28]。槲皮苷具有一定的抗氧化和消炎作用[29-30]；槲皮素具有抗氧化、抗病毒、抗炎等作用，对肝脏疾病、神经系统疾病等具有一定的积极作用[31]；没食子酸对肝脏具有一定的保护作用[32]。今后可对药王茶多糖的结构与生物活性以及黄酮类化合物、酚类化合物的种类与功能进行深入研究。
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图 1 药王茶的高效液相色谱分析注：A、B、C和D分别为槲皮苷+槲皮素混合标准品图谱、没食子酸标准品图谱、药王茶黄酮类化合物图谱和药王茶酚类化合物图谱；1、2和3分别为槲皮苷、槲皮素和没食子酸。Figure 1. High-performance liquid chromatogram of Yaowang tea2.1.3 矿物质与重金属
由表4可知，在药王茶中，有害元素砷、镉、铬、汞、铅含量均未超过国家限量标准[33]。药王茶中含有多种人体需要的矿物质元素，包括铁、锰、锶、硒、锌、镁等（表4）。其中，锰、硒、镁的含量依次为1.19±0.04、0.43±0.02、2.80±0.05 mg/kg，高于广西甜茶（蔷薇科悬钩子属（Rubus L.）落叶灌木甜茶（Rubus chingii var. suavissimus）的叶片）的锰、硒、镁含量（依次为0.15、0.13、0.26 mg/kg）[34-35]。镁属于宏量元素，铁、锰、硒、锌等属于微量元素[34-42]。锶元素与钙元素具有一定的协同效应，可以强壮骨骼、改善心血管功能[36]；硒元素的摄入有助于人体抑制癌细胞生长、保护和改善胰腺功能、帮助肝脏分解毒素、保护肾小管与肾小球细胞、减少外周血管阻力、保护心脑细胞、防止心肌缺血缺氧性损伤、保护视力，特别是在新型冠状病毒（COVID-19）肺炎疫情防治过程中可能具有重要作用[39]；锌元素具有增高抵抗力、提升食欲、促进人体正常发育、降低糖尿病风险、防止肝硬化与抗癌等作用[34]；镁元素能够促进骨骼生长、调节神经兴奋性、改善肾功能、维护胃肠道和肌肉功能、减少免疫细胞产生促炎症细胞因子[41-42]。药王茶含有较丰富的锰、硒、镁等矿物质元素，在重金属方面较为安全。
表 4 药王茶中重金属与矿物质种类与水平Table 4. Type and level of heavy metals and mineral elements in Yaowang tea元素 含量（mg/kg） 国标限量（mg/kg） As 0.05±0.00 ≤0.500 Cd 0.04±0.00 ≤0.050 Cr 0.02±0.00 ≤1.000 Hg 0.02±0.00 ≤0.050 Pb 0.08±0.00 ≤2.000 Cu 0.15±0.01 \ Mo 0.05±0.01 \ Se 0.43±0.02 \ Sr 0.55±0.03 \ Zn 0.48±0.05 \ Fe 1.14±0.04 \ Mg 2.80±0.05 \ Mn 1.19±0.04 \ 注：\表示国家标准未规定该元素在食物中的限量。 2.2 药王茶的体外抗氧化活性
由图2可见，在0~0.5 mg/mL浓度范围内，随着药王茶提取物浓度的升高，其DPPH、ABTS、羟基自由基清除率也逐渐升高，显示出明显的剂量依赖性。药王茶清除DPPH、ABTS自由基的EC50值分别为0.0704、0.3810 mg/mL（表5）。由表5可知，药王茶的体外抗氧化活性与抗坏血酸接近，显示出较高的体外自由基清除能力和总还原力，这可能与药王茶中多酚、黄酮类化合物含量较多有关。
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图 2 药王茶提取物和抗坏血酸的DPPH、ABTS、羟基自由基清除率曲线注：A、B、C分别为药王茶提取物的DPPH、ABTS、羟基自由基清除率曲线；D、E、F分别为抗坏血酸的DPPH、ABTS、羟基自由基清除率曲线。Figure 2. DPPH, ABTS and OH radical-scavenging curves of Yaowang tea extract and ascorbic acid表 5 药王茶的抗氧化活性Table 5. Antioxidant activity of Yaowang tea extract种类 自由基 拟合方程 R2 EC25（mg/mL） EC50（mg/mL） 药王茶 DPPH y=−1147.8x2+755.54x+2.4633 0.9844 0.0313 0.0704 ABTS y=102.07x2+96.441x−1.5653 0.9929 0.2229 0.3810 OH y=−215.52x2+167.94x+0.4675 0.9921 0.1948 \ 总还原力 y=−1.6971x2+1.7109x−0.0182 0.9420 \ \ VC DPPH y=−19074x2+2728.3x−20.572 0.9805 0.0193 0.0339 ABTS y=−3508.2x2+1190.8x−35.438 0.9461 0.0621 0.1030 OH y=−131.81x2+194.52x+4.5486 0.9667 0.1139 \ 总还原力 y=1.422x+0.0535 0.9999 \ \ 注：y为体外抗氧化活性；x为物质浓度，mg/mL；\表示无法计算或计算结果为负值。 2.3 药王茶对DNA损伤的保护作用
细胞DNA损伤可能导致DNA复制和转录异常。大量体内、体外实验证明部分抗氧化剂有助于维持DNA稳定性，防止DNA损伤[6-9]。本研究采用质粒DNA体外实验分析药王茶对DNA损伤的保护作用，根据电泳图谱中各条带的亮度判断DNA损伤的程度以及目标物质的保护作用[9, 43]。在正常情况下，pBR322质粒DNA呈超螺旋状态，加入FeSO4与H2O2溶液后，H2O2产生的羟基自由基可使超螺旋质粒DNA氧化，变成开环甚至线状，造成泳动迁移率变小，在电泳图谱中表现为条带2亮度减小、条带1亮度增大[9]。由图3可见，随着药王茶提取物浓度的增加，条带2的亮度也逐渐增加，说明药王茶对DNA损伤的保护作用呈剂量依赖关系；1×10−2 mg/mL的药王茶提取物对DNA损伤的保护作用远高于抗坏血酸，1×10−3 mg/mL的药王茶提取物对DNA损伤的保护作用与抗坏血酸接近。药王茶对DNA损伤的保护作用可能与其中所含的酚类化合物、黄酮类化合物（如槲皮素）有关。已有研究发现，DNA损伤与胃肠疾病密切相关[44]，药王茶对“胃气不和”、“滞食”等的缓解作用可能与其抗DNA损伤活性有关。近期的研究还发现，DNA损伤与老年痴呆、肝病等也存在一定的关联[45]，今后可从这些方面多角度探究药王茶的保健作用。
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图 3 药王茶提取物对DNA损伤的保护作用注：泳道1为质粒组，泳道2~5分别为1×10−2、1×10−5、1×10−4、1×10−3 mg/mL药王茶提取物实验组，泳道6为1×10−3 mg/mL抗坏血酸对照组，泳道7为PBS缓冲液对照组。Figure 3. Protective effect of Yaowang tea extract on DNA oxidative damage3. 结论
药王茶中含有较丰富的矿物质、蛋白质等营养素以及多酚、黄酮类化合物、多糖等活性成分，具有一定的DPPH、ABTS、羟基自由基清除能力和较高的总还原力，对DNA损伤具有明显的保护作用。药王茶中槲皮苷、槲皮素和没食子酸含量较高，必需氨基酸种类较为齐全且含量丰富，铁、锰、锶、硒、锌、镁等矿物质元素含量较高，砷、镉、汞、铅等有害元素含量均未超过国家限量标准。药王茶的体外抗氧化活性和DNA损伤保护作用可能与其中所含黄酮类化合物、酚类化合物有关。本研究为秦岭特色药食同源植物药王茶的科学开发和利用提供了参考。
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图 1 药王茶的高效液相色谱分析
注：A、B、C和D分别为槲皮苷+槲皮素混合标准品图谱、没食子酸标准品图谱、药王茶黄酮类化合物图谱和药王茶酚类化合物图谱；1、2和3分别为槲皮苷、槲皮素和没食子酸。
Figure 1. High-performance liquid chromatogram of Yaowang tea
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图 2 药王茶提取物和抗坏血酸的DPPH、ABTS、羟基自由基清除率曲线
注：A、B、C分别为药王茶提取物的DPPH、ABTS、羟基自由基清除率曲线；D、E、F分别为抗坏血酸的DPPH、ABTS、羟基自由基清除率曲线。
Figure 2. DPPH, ABTS and OH radical-scavenging curves of Yaowang tea extract and ascorbic acid
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图 3 药王茶提取物对DNA损伤的保护作用
注：泳道1为质粒组，泳道2~5分别为1×10−2、1×10−5、1×10−4、1×10−3 mg/mL药王茶提取物实验组，泳道6为1×10−3 mg/mL抗坏血酸对照组，泳道7为PBS缓冲液对照组。
Figure 3. Protective effect of Yaowang tea extract on DNA oxidative damage
表 1 元素测定回归方程
Table 1 Regression equation of element assay
元素 波长（nm） 回归方程 R2 As 188.980 y=735.2x−25.666 0.9983 Cd 226.502 y=45850x−1912.3 0.9986 Cr 205.560 y=7184.73x+12.83 0.9982 Hg 184.887 y=161.84x-8.63 1.0000 Pb 182.143 y=395.56x−1.2042 0.9980 Cu 324.754 y=27182x−617.9 0.9985 Mo 202.032 y=7445.5x−302.96 0.9981 Se 206.279 y=128.19x+231.31 0.9987 Sr 407.771 y=7379191x+849.60 1.0000 Zn 202.548 y=28193.95x+147.88 0.9904 Fe 259.940 y=15705.71x+57.80 0.9997 Mg 280.270 y=69128x+849946 0.9306 Mn 257.610 y=268032x−22217 0.9982 注：x为元素浓度，mg/L；y为响应值，mAU。 
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表 2 药王茶中氨基酸种类与水平
Table 2 Type and level of amino acids in Yaowang tea
氨基酸 含量（mg/g） 氨基酸 含量（mg/g） Thr* 5.96±0.04 Ser 8.48±0.33 Met* 11.86±0.53 Glu 15.15±0.42 Ile* 4.61±0.05 Gly \ Leu* 6.30±0.12 Ala 29.14±0.55 Phe* 17.84±0.64 Cys \ Lys* 10.45±0.31 Pro 10.65±0.41 Val* 8.63±0.28 总氨基含量 4.60±0.21 Arg# 6.68±0.32 总氨基酸 189.52±5.78 His# 13.71±0.59 必需氨基酸 65.65±1.97 Tyr 24.95±0.61 半必需氨基酸 20.39±0.91 Asp 15.11±0.58 非必需氨基酸 103.48±2.90 E/T值（%） 45.4 注：\代表未检出，*代表必需氨基酸，#代表半必需氨基酸，E/T值代表必需氨基酸与半必需氨基酸的总和占总氨基酸比例。
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表 3 药王茶的氨基酸评分（AAS）、化学评分（CS）、氨基酸的比值（RAA）及其系数（RC）
Table 3 Amino acid score (AAS), chemical score (CS), amino acid ratio (RAA) and its coefficient (RC) of Yaowang tea
氨基酸（AA） 药王茶中氨基酸
含量（mg/g）氨基酸评分（AAS） 化学评分（CS） 氨基酸比值（RAA） RAA系数（RC） Ile 4.61±0.05 115.35 69.908 1.154 0.457 Leu 6.30±0.12 89.971 89.966 0.9 0.356 Lys 10.45±0.31 190.055 163.333 1.901 0.752 Thr 5.96±0.04 148.875 116.765 1.489 0.589 Val 8.63±0.28 172.52 118.17 1.725 0.683 His 13.71±0.59 \ 427.868 \ \ Phe+Tyr 42.79±1.21 713.117 215.662 7.131 2.822 Met+Cys 11.86±0.53 338.886 189.132 3.389 1.341 合计 104.31±3.13 \ \ 2.527 \ 注：\代表无法计算或计算无意义。
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表 4 药王茶中重金属与矿物质种类与水平
Table 4 Type and level of heavy metals and mineral elements in Yaowang tea
元素 含量（mg/kg） 国标限量（mg/kg） As 0.05±0.00 ≤0.500 Cd 0.04±0.00 ≤0.050 Cr 0.02±0.00 ≤1.000 Hg 0.02±0.00 ≤0.050 Pb 0.08±0.00 ≤2.000 Cu 0.15±0.01 \ Mo 0.05±0.01 \ Se 0.43±0.02 \ Sr 0.55±0.03 \ Zn 0.48±0.05 \ Fe 1.14±0.04 \ Mg 2.80±0.05 \ Mn 1.19±0.04 \ 注：\表示国家标准未规定该元素在食物中的限量。
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表 5 药王茶的抗氧化活性
Table 5 Antioxidant activity of Yaowang tea extract
种类 自由基 拟合方程 R2 EC25（mg/mL） EC50（mg/mL） 药王茶 DPPH y=−1147.8x2+755.54x+2.4633 0.9844 0.0313 0.0704 ABTS y=102.07x2+96.441x−1.5653 0.9929 0.2229 0.3810 OH y=−215.52x2+167.94x+0.4675 0.9921 0.1948 \ 总还原力 y=−1.6971x2+1.7109x−0.0182 0.9420 \ \ VC DPPH y=−19074x2+2728.3x−20.572 0.9805 0.0193 0.0339 ABTS y=−3508.2x2+1190.8x−35.438 0.9461 0.0621 0.1030 OH y=−131.81x2+194.52x+4.5486 0.9667 0.1139 \ 总还原力 y=1.422x+0.0535 0.9999 \ \ 注：y为体外抗氧化活性；x为物质浓度，mg/mL；\表示无法计算或计算结果为负值。
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