Study on Antioxidant Activity of Tricholoma matsutake Polysaccharide in Vitro and Its Effect on Mice Damaged by Ethanol Oxidation
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摘要: 本文以超氧阴离子自由基（Superoxide anion radicals，O2－ · ）、2，2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐（2,2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)，ABTS）自由基清除能力、总还原能力为指标研究松茸多糖（Tricholoma matsutake polysaccharide，TMP）体外抗氧化能力；建立乙醇氧化损伤小鼠模型，通过测定小鼠血清中谷丙转氨酶（Alanine transaminase，ALT）、谷草转氨酶（Aspartate transaminase，AST）和碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，AKP）的活力以及肝脏中过氧化氢酶（Catalase，CAT）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）的水平研究松茸多糖的体内抗氧化活性。体外抗氧化结果表明，松茸多糖对超氧阴离子自由基和ABTS自由基有较好的清除能力，当浓度为1 mg/mL时，清除率分别为56.67%和96.60%，而松茸多糖的总还原能力较低，当浓度为1 mg/mL，吸光值为0.163；动物实验结果表明，连续灌胃四周后，与模型对照组相比，松茸多糖可以使小鼠血清中的ALT、AST和AKP活力显著降低（P<0.05），使肝脏中CAT、SOD和GSH-Px的水平显著升高（P<0.05），MDA的含量显著降低（P<0.05），且呈剂量依赖性。研究表明松茸多糖有一定的抗氧化活性，可为松茸多糖的后续开发应用提供思路。Abstract: In order to study the antioxidant activity of Tricholoma matsutake polysaccharides (TMP), its antioxidant capacity in vitro was investigated using superoxide anion radical (O2－ · ) scavenging capacity, total reducing capacity and ABTS radical scavenging capacity as indicators; and then the mouse model of ethanol oxidative damage was established, and the antioxidant activity of Tricholoma matsutake polysaccharides in vivo were measured by measuring alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) and alkaline phosphatase (AKP) in the serum of mice and the activity of catalase (CAT), malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) in the liver. In vitro antioxidant results showed that Tricholoma matsutake polysaccharides had better scavenging ability on superoxide anion free radical and ABTS free radical, and the scavenging rate reached 56.67% and 96.60% when the concentration was 1 mg/mL. However, the total reducing ability of Tricholoma matsutake polysaccharides was not obvious. When the concentration was 1 mg/mL, the absorbance value could reach 0.163. Animal experiment results showed that after four weeks of continuous gastric administration, compared with the model control group, Tricholoma matsutake polysaccharides could significantly reduce ALT, AST and AKP viability in mice serum (P<0.05); it also significantly increased the levels of CAT, SOD and GSH-Px in liver (P<0.05), when the content of MDA was significantly reduced (P<0.05). All these indicators showed a dose-response relationship. The experimental results showed that Tricholoma matsutake polysaccharides had certain antioxidant activity, hoping to provide ideas for the subsequent development and application of Tricholoma matsutake polysaccharides.
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松茸（Tricholoma matsutake），是一种著名的野生食用菌和功能菌，广泛分布于我国西南地区[1-2]。近年来，松茸的需求量在不断增加，但当前松茸产品多数以初加工形式呈现，而深加工的松茸产值是初加工后的3倍以上，因此深入研究松茸资源具有重大意义[3]。松茸含有多种活性物质，而松茸多糖作为松茸中的主要活性物质之一，已被证实具有免疫活性、抗微生物、降血糖和抗肿瘤等多种功能[4-8]。
自由基是各种生化反应代谢的中间产物，人体中的自由基和抗氧化剂之间的不平衡引发身体氧化应激，会导致细胞膜功能丧失、酶失活和核酸损伤，最终导致癌症、心血管疾病、动脉粥样硬化和多种神经系统疾病[9-10]。已有研究表明多糖可以通过与自由基结合、抑制自由基生成、阻止脂质过氧化物分解和提高内抗氧化酶（如SOD、GSH-Px等）的活性起到抗氧化的作用[11-12]。
目前，国内外对松茸多糖抗氧化研究主要集中在体外自由基清除能力、细胞实验以及体内抗衰老作用方面，Chen等[13]发现通过超声提取分离出的松茸多糖TMP80具有良好的体外抗氧化活性；吴杨洋等[14]研究发现了使用不同提取方式提取的松茸多糖抗氧化活性存在差异；Ding等[15]通过研究松茸多糖的体外自由基清除能力以及细胞实验发现松茸多糖具有良好的自由基清除能力并且可以减少过氧化氢对PC12细胞的氧化损伤；刘刚等[16]通过动物实验建立D-半乳糖致衰老模型，发现松茸多糖可能通过清除体内自由基，降低细胞的过氧化程度发挥抗衰老的作用。然而，松茸多糖对酒精引起的机体氧化损伤的影响还未见研究。
因此本文以从四川省甘孜州松茸中提取的多糖为材料，以超氧阴离子自由基、ABTS自由基清除能力和总还原能力为指标研究其体外抗氧化能力；通过建立乙醇氧化损伤小鼠模型研究松茸多糖的体内抗氧化活性，为进一步开发松茸提供实验参考。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
六周雄性昆明小鼠48只，体质量（30±2）g 购自成都达硕实验动物有限公司，实验动物生产许可证号SCXK（川）2020-030。本实验符合动物实验伦理学标准，并获得西南民族大学伦理委员会的批准；野生松茸（Tricholoma matsutake） 采自四川省甘孜藏族自治州巴塘县；ABTS（AR） 酷尔化学科技（北京）有限公司；抗坏血酸（AR）、铁氰化钾（AR）、邻苯三酚（AR） 成都迪康生物技术有限公司；GPT试剂盒、GOT试剂盒、碱性磷酸酶（AKP）试剂盒、过氧化氢（CAT）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒、SOD试剂盒、谷胱甘肽过氧化氢酶（GSH-Px）试剂盒、总蛋白定量测试盒 南京建成生物工程研究所。
V-1000型可见分光光度计 翱艺仪器（上海）有限公司；ALPHA 1-4 LSC冷冻干燥机 德国Martin Christ公司；TG16-WS台式高速离心机 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；RE-52AA旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂；CKX31倒置显微镜 奥林巴斯仪器科技有限公司；ELX800酶标仪 美国伯腾仪器有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 松茸多糖的提取与纯化
准确称取一定量干松茸，用粉碎机磨成粉末，过100目筛，置于盛有80%乙醇的锥形瓶中（料液比为1:20），放入恒温振荡器（60 ℃）内振荡4.5 h后，8000 r/min离心10 min，收集沉淀烘干后获得脱脂松茸粉。按1:25的料液比向脱脂松茸粉中加入蒸馏水，于恒温水浴（90 ℃）中浸提3 h，静置后离心，重复浸提2次，合并上清液进行浓缩，加入4倍体积95%乙醇4 ℃醇沉过夜，离心并收集沉淀物，再用一定量蒸馏水溶解，向溶液中加入Sevage试剂（三氯甲烷:正丁醇=4:1（V/V），多糖:Sevage=3:1（V/V）），密封后在摇床中振荡30 min后将其倒入分液漏斗中静置30 min，移除下层有机相，重复3~5次，随后使用截留量为3500 Da的透析袋用流动水对其透析72 h，除去小分子杂质，再将15 mL多糖溶液（50 mg/mL）在4 BV/h的流速下加载到层析柱中进行脱色和进一步脱蛋白，用蒸馏水冲洗并收集洗脱液，浓缩、冻干得松茸多糖[6]。根据标准曲线y=8.8686x−0.0258（R2=0.9956）计算出其纯度为81.25%。
1.2.2 体外抗氧化活性指标测定
1.2.2.1 超氧阴离子自由基清除率的测定
向25 ℃的4 mL 0.05 mol/L的Tris-HCl缓冲液（pH=8.2）中加入1.0 mL邻苯三酚（6 mmol/L）和1 mL不同浓度的样品，再在相同温度下水浴5 min，最后加入两滴浓盐酸以终止反应，在320 nm波长处测定吸光值[17]。
超氧阴离子自由基清除率(%)=A0−(Ax−Ax0)A0×100 式中：A0为超纯水代替样品时的吸光值，Ax为多糖组吸光值，
Ax0 为超纯水代替邻苯三酚和盐酸的吸光值。1.2.2.2 总还原能力的测定
参考孔沛筠等[18]的方法。依次向1 mL不同浓度的样品溶液中添加0.2 mol/mL pH6.6的PBS溶液和1.0% K3[Fe（CN）6]溶液各2.5 mL，50 ℃水浴20 min后立即冷却，添加10% TCA 2.5 mL，离心取上层清液5 mL，向其中添加4 mL去离子水及1 mL 0.1%的FeCl3摇匀，静置10 min后在700 nm处测定吸光值。按照以上操作步骤以VC为阳性对照，最后绘制吸光值与溶液浓度间的曲线。
1.2.2.3 ABTS自由基清除能力的测定
分别向1 mL不同浓度的样品溶液中加入6 mL的ABTS阳离子溶液，25 ℃黑暗条件下反应10 min后于734 nm处测定吸光值[19]。
ABTS自由基清除率(% ) = A0−(Ai−As)A0×100 式中：A0为用超纯水代替样品时的吸光值；Ai为样品组吸光值；As为超纯水代替ABTS后的吸光度值。
1.2.3 乙醇氧化损伤模型动物实验设计
将小鼠分笼饲养于环境温度20~25 ℃，相对湿度50%~60%的动物房中，昼夜均为12 h，小鼠自由进食进水并每日更换垫料，进行7 d的适应性喂养。随后将适应性饲养后的小鼠每组8只按表1进行分组和灌胃。各剂量组给药剂量参照《抗氧化功能评价方法》[20]、《保健食品检验与评价规范》[21]等设定。
表 1 实验小鼠分组及处理Table 1. Grouping and treatment of experimental mice组别 灌胃试剂 灌胃剂量 空白对照组 生理盐水 0.3 mL 模型对照组 生理盐水 0.3 mL 阳性对照组 VC 100 mg/kg 低剂量组 松茸多糖溶液 100 mg/kg 中剂量组 松茸多糖溶液 200 mg/kg 高剂量组 松茸多糖溶液 400 mg/kg 小鼠连续灌胃四周后，除空白对照组外，其他各组小鼠一次性灌胃12 mL/kg的50%乙醇溶液，以建立乙醇氧化损伤小鼠模型。
1.2.4 实验动物一般情况观察
每日为小鼠称重，观察并记录六组小鼠在给予50%乙醇后的精神状态、行为活动和摄食状况的变化情况[22]。
1.2.5 体内抗氧化活性指标测定
1.2.5.1 样品制备
乙醇灌胃6 h后称量小鼠体重并对小鼠进行眼眶采血，离心（4 ℃，3000 r/min，15 min）分离出血清，−20 ℃保存备用[23]；取血后的小鼠颈椎脱臼处死，迅速摘取肝以冰生理盐水洗净，用滤纸拭干表面水分后称重；准确称取组织重量，按1:9（g/mL）的比例加入预冷的生理盐水，冰水浴条件下匀浆，4 ℃，3000 r/min离心15 min取上清液保存待测；随机取单个小鼠的肝脏组织，多聚甲醛浸泡，石蜡包埋后切片。
1.2.5.2 小鼠肝脏组织切片的制备与观察
参照彭勇胜[24]的方法进行苏木精-伊红法（HE染色法）染色，在光镜下观察小鼠的肝组织切片。
1.2.5.3 小鼠血清中ALT、AST、AKP活力的测定
按照试剂盒中的方法测定相关指标。
1.2.5.4 小鼠肝脏中SOD、MDA、CAT和GSH-Px水平的测定
按照试剂盒中的方法测定相关指标。
1.3 数据处理
所有测定结果均重复三次，数据用平均值±标准差“x±s”表示，单因素方差分析利用SPSS 26.0软件进行，IC50值利用IC50 Calculator进行计算，利用Origin2021进行绘图，P<0.05表示具有显著差异，P<0.01表示差异极显著。
2. 结果与分析
2.1 松茸多糖的体外抗氧化活性结果分析
2.1.1 松茸多糖对超氧阴离子自由基的清除能力
O2－·是人体产生的一种活性氧自由基，在一定条件下会形成其它的氧自由基，导致脂质过氧化以及细胞的损伤[25]。因此，通过对O2－·的清除也能达到抗氧化作用。由图1可以看出在实验范围内，O2－·清除率与多糖浓度呈正相关，且当浓度达到1 mg/mL时，其清除率可达56.67%，但小于相同浓度下VC超氧阴离子清除能力。松茸多糖对超氧自由基的IC50值为0.76 mg/mL，VC的IC50值为0.13 mg/mL，以上结果表明松茸多糖对O2－·清除率低于VC。
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图 1 松茸多糖对超氧阴离子自由基的清除能力Figure 1. The scavenging ability of Tricholoma matsutake polysaccharides on superoxide anion free radicals2.1.2 松茸多糖的总还原能力
总还原能力是指自由基接收到来自抗氧化物质提供的电子后，使自由基转化为稳定物质的能力，抗氧化能力随总还原能力的增强而增强[26]。由图2可知，在实验浓度范围内，松茸多糖总还原能力随之上升（P>0.05），吸光度从0.054提升至0.163，可以看出其虽然具有一定的总还原能力但较弱，且与VC的总还原能力相差较大。
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图 2 松茸多糖的总还原能力Figure 2. The total reducing power of Tricholoma matsutake polysaccharides2.1.3 松茸多糖对ABTS自由基清除能力
ABTS法是使用最广泛的一种间接检测抗氧化能力的方法[27]。由图3可知，在实验范围内，随着浓度的升高，多糖清除率随之上升，且当多糖浓度达到0.8 mg/mL时，清除率可以达到96.60%，并且到达稳定状态，其IC50值为0.25 mg/mL，但VC在其浓度为0.03 mg/mL时其清除率已到达100%，VC的IC50为0.0058 mg/mL，由此可见松茸多糖虽具有良好的ABTS自由基清除能力，但与VC相比还有一定的差距。
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图 3 松茸多糖对ABTS自由基的清除能力Figure 3. The ability of Tricholoma matsutake polysaccharides to scavenge ABTS free radicals2.2 灌胃期间小鼠体重的变化
从表2可以看出，各组小鼠在实验期间的体重均没有显著性差异（P>0.05），说明连续服用不同剂量的松茸多糖不会对小鼠体重产生明显影响。
表 2 小鼠体重变化Table 2. Changes in body weight of mice组别 小鼠体重（g） 0 d 7 d 14 d 21 d 28 d 空白对照组 30.4±0.32 31.9±0.42 33.7±0.51 34.8±0.37 36.0±0.22 模型对照组 29.8±0.55 32.3±0.62 33.1±0.35 34.3±0.44 35.7±0.29 阳性对照组 30.2±0.45 32.1±0.58 33.4±0.61 34.9±0.45 35.8±0.71 低剂量组 30.3±0.37 32.3±0.32 33.8±0.29 34.9±0.54 35.6±0.27 中剂量组 30.5±0.28 31.8±0.33 33.5±0.56 35.0±0.27 36.2±0.61 高剂量组 30.1±0.43 32.5±0.51 33.6±0.36 34.9±0.41 36.1±0.52 2.3 松茸多糖对乙醇氧化损伤小鼠的一般情况观察
实验过程中，所有小鼠的行为均正常；第29 d，除空白对照组，其他5组小鼠均给予50%的乙醇进行酒精造模，5组小鼠起初均表现异常兴奋，约30 min后，小鼠开始站立不稳，甚至出现摔倒的现象，渐渐的减少活动，直至停止活动。其中模型组的部分小鼠出现抽搐现象，松茸多糖低剂量组有个别小鼠出现抽搐现象，而其他组别中均未有小鼠出现抽搐现象。12 h后空白组小鼠饮食，饮水正常，精神状态良好，行动灵活；模型组小鼠状态普遍较差，食欲、精神状态较差且行动迟缓；阳性及松茸多糖各剂量组小鼠精神状态虽不及空白组，但与模型组相比均有所改善。这些现象表明松茸多糖对乙醇氧化损伤小鼠有一定的保护作用。
2.4 松茸多糖对乙醇氧化损伤小鼠肝脏组织学切片观察结果
从图4可以看出，小鼠肝脏经HE染色后，空白对照组小鼠的肝组织结构正常，每个细胞之间都规律的排列着，可以看出静脉形态正常，无扩张肝血窦；模型对照组小鼠肝组织切片染色增强，且出现了明显的双核肝细胞，肝细胞的分布较为松散，肝血窦出现严重扩张；而阳性对照组的小鼠肝细胞结构几乎与正常小鼠相同，肝索排列整齐未出现异常；低剂量组肝细胞连接松散，肝血窦也出现扩张现象，同时也有双核肝细胞的存在；中、高剂量组肝细胞形态与对照组相比逐渐恢复正常，肝血窦缩小，双细胞核细胞数量降低。说明阳性对照组与高剂量组松茸多糖均对肝损伤有着较强的保护作用，另外低、中剂量组也对肝损伤有一定的保护效果且与浓度有关。
2.5 松茸多糖对乙醇氧化损伤小鼠血清中AST、ALT、AKP活性的影响
由表3可以看出，与空白对照组相比，模型组小鼠血清ALT、AST、AKP含量均有了显著的升高（P<0.05）；同时与模型组相比，松茸多糖各剂量组小鼠血清ALT、AST、AKP含量均表现出下降趋势，且随着松茸多糖剂量的增加血清中ALT、AST、AKP含量不断降低，低、中、高三个剂量组的治疗作用均具有显著性（P<0.05）。其中松茸多糖高剂量组与模型组相比，血清中ALT、AST、AKP含量分别降低了28.82%、33.17%、39.72%，其中ALT与AST含量的降低效果与VC相当（P>0.05）。
表 3 松茸多糖对小鼠血清中ALT、AST、AKP活力的影响Table 3. Effect of Tricholoma matsutake polysaccharides on the activities of ALT, AST and AKP in the serum of mice组别 剂量
（mg/kg）ALT
(U/L)AST
（U/L）AKP
（U/L）空白对照组 0 14.61±0.59 32.43±1.37 56.26±3.28 模型对照组 0 28.33±1.29# 60.19±1.72# 182.28±9.42# 阳性对照组 100 17.76±1.02* 37.22±1.02* 75.89±4.78* 低剂量组 100 24.56±1.06*& 45.64±1.27*& 147.65±11.92*& 中剂量组 200 22.34±1.39*& 42.96±1.43*& 136.02±10.21*& 高剂量组 400 20.16±1.03* 40.22±1.04* 109.88±6.28*& 注：#：与空白对照组比较，差异显著（P<0.05）； *：与模型对照组比较，差异显著（P<0.05）； &：与阳性对照组比，差异显著（P<0.05）；表4同。 2.6 松茸多糖对乙醇氧化损伤小鼠肝脏中SOD、CAT、MDA、GSH-Px水平的影响
在经过50%乙醇灌胃后，各组肝脏指标如表4所示。与空白对照组相比，模型组的CAT、SOD、GSH-Px活力均出现显著降低（P<0.05），而MDA含量出现显著上升（P<0.05），表明实验造模成功。
表 4 松茸多糖对小鼠肝脏中CAT、MDA、SOD和GSH-Px水平的影响Table 4. Effects of Tricholoma matsutake polysaccharides on the levels of CAT, MDA, SOD and GSH-Px in the liver of mice组别 剂量
(mg/kg)CAT
(U/mg prot)SOD
(U/mg prot)MDA
(nmol/mg prot)GSH-Px
(U/mg prot)空白对照组 0 97.03±2.84 152.83±2.88 4.60±0.38 78.60±3.83 模型对照组 0 44.41±1.63# 110.58±2.17# 10.61±0.27# 41.67±1.23# 阳性对照组 100 89.05±3.24* 150.88±2.65* 5.23±0.22* 74.46±2.98* 低剂量组 100 56.73±1.67*& 117.44±1.89& 8.30±0.66*& 48.55±1.09& 中剂量组 200 62.45±2.21*& 120.89±1.22*& 8.16±0.94*& 47.93±1.94& 高剂量组 400 72.42±1.78*& 144.52±2.51* 6.29±0.44* 68.47±2.06* 在经过松茸多糖灌胃后，与模型对照组相比，肝脏中CAT含量在低、中、高三个剂量组中均显著增加（P<0.05），分别增加了27.74%、40.62%、63.07%；肝脏中SOD含量在中、高两个剂量组中显著增加（P<0.05），其含量分别增加了9.32%和30.69%；肝脏中GSH-Px仅在高剂量组中出现显著增加（P<0.05），增加了64.31%。同时，CAT与SOD与灌胃松茸多糖含量呈现正相关。
在经过低、中、高剂量组灌胃后，小鼠肝脏中的MDA含量均不同程度的显著低于（P<0.05）模型对照组，同时实验结果表明小鼠肝脏中的MDA含量与灌胃松茸多糖的剂量呈现负相关。
此外，高剂量组中SOD、MDA与GSH-Px三项指标与阳性对照组均无显著差异（P>0.05）。
3. 讨论
3.1 松茸多糖的体外抗氧化活性
抗氧化作用是真菌多糖一种重要的生物活性，本实验通过测定松茸多糖清除O2－·、ABTS自由基的能力以及总还原能力来评价其体外抗氧化能力，结果表明松茸多糖的体外抗氧化能力较强。其中超氧阴离子自由基清除能力高于李艺萌等[28]使用热水提取法提取的黑菇多糖以及许女等[29]提取的鸡腿菇多糖，与董博斐等[30]提取的红平菇胞外多糖的超氧阴离子清除率相当；松茸多糖的ABTS自由基清除率与桦褐孔菌多糖组分相比显示出更优异的清除率[31]；同时松茸多糖的总还原能力高于黑木耳多糖的总还原能力[32]。松茸多糖与其他真菌多糖体外抗氧化能力差异可能是由于不同多糖的结构不同造成的。
3.2 松茸多糖对乙醇氧化损伤小鼠血清指标的影响
乙醇及其衍生物的代谢反应会导致肝毒性，诱发炎症反应，产生氧自由基，导致肝损伤[33]。当肝细胞受到损伤时，肝细胞中的转氨酶便进入血液，血液中ALT和AST水平升高[34]。AKP又叫碱性磷酸酶或者ALP，其水平主要用于诊断肝胆系统疾病，如肝癌、肝硬化等疾病[35]。因此，ALT、AST和AKP三者的水平可以反映肝细胞的受损程度。由此可知在经过50%乙醇溶液灌胃后，导致了小鼠肝脏的损伤，使得模型组小鼠血清中的ALT、AST和AKP含量显著升高，表明实验造模成功。而经过灌胃不同剂量的松茸多糖的小鼠，均出现抑制血清中ALT、AST和AKP含量上升的现象，因此松茸多糖可以在一定程度上减轻乙醇对肝脏的损伤。
3.3 松茸多糖对乙醇氧化损伤小鼠肝脏指标的影响
过氧化氢在细胞内的大量存在时会对细胞造成损伤，过氧化氢酶（CAT）可以将过氧化氢分解成氧和水，降低过氧化氢在细胞内的水平[36]。超氧化物歧化酶（SOD）是一种最有效的内源性抗氧化剂，在细胞内可以将超氧阴离子自由基转化为H2O2，与许多疾病的发生紧密相关[37]。谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）可以清除由ROS和自由基诱发的脂质过氧化物，保护细胞膜结构和功能的完整性[38]。本实验中，在经高浓度的乙醇灌胃后，模型组三种酶的活力均受到了不同程度的抑制，进一步验证了实验造模成功，而通过松茸多糖的处理组别，这三种酶的活力均得到了一定的恢复，表明松茸多糖可以通过提高机体的内源抗氧化酶活性提高机体的抗氧化能力。
过多的活性氧（ROS）会导致脂质过氧化，从而导致细胞损伤，这一破坏过程的最终产物之一是丙二醛（MDA），因此MDA的含量可以反映机体脂质过氧化和组织过氧化损伤程度[39-40]。在本实验中，松茸多糖组MDA含量相较于模型组出现显著降低，表明松茸多糖可以降低机体内脂质和组织过氧化的程度，进而减少MDA的含量。同时肝脏切片结果显示松茸多糖可以减轻由乙醇引发的肝损伤。
综上，实验结果表明，松茸多糖可以通过恢复肝脏中氧化酶活力，降低MDA的含量从而表现出一定的抗氧化活性。
4. 结论
在体外抗氧化实验中，松茸多糖表现出一定的体外抗氧化能力，当浓度为1 mg/mL时，其对O2－·和ABTS+·的清除率分别为56.67%和96.60%，其总还原能力的吸光值为0.163；动物实验结果显示，连续灌胃四周后，与模型对照组相比，松茸多糖可以使小鼠血清中的ALT、AST和AKP活力显著降低（P<0.05），使肝脏中CAT、SOD和GSH-Px的水平显著升高（P<0.05），MDA的含量显著降低（P<0.05），且呈剂量依赖性。综上，松茸多糖表现出良好的体内外抗氧化能力。
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图 1 松茸多糖对超氧阴离子自由基的清除能力
Figure 1. The scavenging ability of Tricholoma matsutake polysaccharides on superoxide anion free radicals
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图 2 松茸多糖的总还原能力
Figure 2. The total reducing power of Tricholoma matsutake polysaccharides
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图 3 松茸多糖对ABTS自由基的清除能力
Figure 3. The ability of Tricholoma matsutake polysaccharides to scavenge ABTS free radicals
表 1 实验小鼠分组及处理
Table 1 Grouping and treatment of experimental mice
组别 灌胃试剂 灌胃剂量 空白对照组 生理盐水 0.3 mL 模型对照组 生理盐水 0.3 mL 阳性对照组 VC 100 mg/kg 低剂量组 松茸多糖溶液 100 mg/kg 中剂量组 松茸多糖溶液 200 mg/kg 高剂量组 松茸多糖溶液 400 mg/kg 
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表 2 小鼠体重变化
Table 2 Changes in body weight of mice
组别 小鼠体重（g） 0 d 7 d 14 d 21 d 28 d 空白对照组 30.4±0.32 31.9±0.42 33.7±0.51 34.8±0.37 36.0±0.22 模型对照组 29.8±0.55 32.3±0.62 33.1±0.35 34.3±0.44 35.7±0.29 阳性对照组 30.2±0.45 32.1±0.58 33.4±0.61 34.9±0.45 35.8±0.71 低剂量组 30.3±0.37 32.3±0.32 33.8±0.29 34.9±0.54 35.6±0.27 中剂量组 30.5±0.28 31.8±0.33 33.5±0.56 35.0±0.27 36.2±0.61 高剂量组 30.1±0.43 32.5±0.51 33.6±0.36 34.9±0.41 36.1±0.52
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表 3 松茸多糖对小鼠血清中ALT、AST、AKP活力的影响
Table 3 Effect of Tricholoma matsutake polysaccharides on the activities of ALT, AST and AKP in the serum of mice
组别 剂量
（mg/kg）ALT
(U/L)AST
（U/L）AKP
（U/L）空白对照组 0 14.61±0.59 32.43±1.37 56.26±3.28 模型对照组 0 28.33±1.29# 60.19±1.72# 182.28±9.42# 阳性对照组 100 17.76±1.02* 37.22±1.02* 75.89±4.78* 低剂量组 100 24.56±1.06*& 45.64±1.27*& 147.65±11.92*& 中剂量组 200 22.34±1.39*& 42.96±1.43*& 136.02±10.21*& 高剂量组 400 20.16±1.03* 40.22±1.04* 109.88±6.28*& 注：#：与空白对照组比较，差异显著（P<0.05）； *：与模型对照组比较，差异显著（P<0.05）； &：与阳性对照组比，差异显著（P<0.05）；表4同。
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表 4 松茸多糖对小鼠肝脏中CAT、MDA、SOD和GSH-Px水平的影响
Table 4 Effects of Tricholoma matsutake polysaccharides on the levels of CAT, MDA, SOD and GSH-Px in the liver of mice
组别 剂量
(mg/kg)CAT
(U/mg prot)SOD
(U/mg prot)MDA
(nmol/mg prot)GSH-Px
(U/mg prot)空白对照组 0 97.03±2.84 152.83±2.88 4.60±0.38 78.60±3.83 模型对照组 0 44.41±1.63# 110.58±2.17# 10.61±0.27# 41.67±1.23# 阳性对照组 100 89.05±3.24* 150.88±2.65* 5.23±0.22* 74.46±2.98* 低剂量组 100 56.73±1.67*& 117.44±1.89& 8.30±0.66*& 48.55±1.09& 中剂量组 200 62.45±2.21*& 120.89±1.22*& 8.16±0.94*& 47.93±1.94& 高剂量组 400 72.42±1.78*& 144.52±2.51* 6.29±0.44* 68.47±2.06*
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1. 史文锦，刘仁慧. 山药在糖尿病及其并发症治疗中的作用机制研究进展. 山东医药. 2025(01): 144-149 . 
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