Preparation and Stability of Nanoparticles Containing Astaxanthin from Haematococcus pluvialis
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摘要: 为改善雨生红球藻虾青素的稳定性和水溶性，本文使用蜗牛酶进行雨生红球藻虾青素的破壁提取，并以阿拉伯胶和乳清蛋白粉（富含乳脂肪球膜）为壁材，利用复合凝聚法制备虾青素纳米颗粒，此外对纳米颗粒的稳定性进行研究。结果表明：虾青素纳米颗粒的最佳制备条件为：pH4.0，乳清蛋白与阿拉伯胶质量比为2:1，虾青素浓度为60 μmol/L，此工艺条件下虾青素的包封率为92.93%±0.19%。该纳米颗粒平均粒径为265.71±0.55 nm，Zeta电位为−13.44±0.14 mV，并具备良好的贮藏稳定性，在4 ℃条件下贮藏15 d，粒径增幅仅为6.1%，虾青素保留率为90.78%±0.25%，DPPH清除率为79.31%±0.18%。本研究改善了雨生红球藻虾青素的稳定性和水溶性，为虾青素的高效利用提供了技术支持。Abstract: In order to improve the stability and water solubility of astaxanthin, the snailase was used for the wall-breaking extraction of astaxanthin from Haematococcus pluvialis, and gum arabic and whey protein powder (rich in milk fat globule membrane) were used as wall materials to prepare astaxanthin nanoparticles using a complex coacervation method, in addition, the stability of the nanoparticles was investigated. The results showed that the optimum conditions for the preparation of astaxanthin nanoparticles were pH4.0, protein/gum arabic mass ratio of 2:1 and astaxanthin concentration of 60 μmol/L. The encapsulation rate of astaxanthin under these conditions was 92.93%±0.19%. The average particle size was 265.71±0.55 nm and the Zeta potential was −13.44±0.14 mV. The nanoparticles showed good storage stability with only 6.1% increased in size, 90.78%±0.25% retention of astaxanthin and 79.31%±0.18% clearance of DPPH after 15 d storage at 4 ℃. This study would improve the stability and water solubility of astaxanthin and provide technical support for the efficient utilization of astaxanthin.
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Keywords:
- Haematococcus pluvialis /
- astaxanthin /
- milk fat globule membrane /
- nanoparticle /
- stability
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虾青素（3,3’-二羟基-4,4’-二酮-β, β’胡萝卜素，astaxanthin）是一种类胡萝卜素[1]，属于萜烯类不饱和化合物，是在自然界有机体中发现的抗氧化能力极强的物质[2]。雨生红球藻（Haematococcus pluvialis）是一种新资源食品，被公认为天然虾青素最好的生物来源，受到人们越来越多的关注[3]。然而其具有较厚的细胞壁，对机械和化学物质都具有极强的抵抗力，阻碍了虾青素的提取，因此常采用生物酶法对雨生红球藻进行破壁处理来提取虾青素[4]。蜗牛酶作为一种包含果胶酶、纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶等多种酶的混合酶，可用于酵母和雨生红球藻的破壁研究[5]。
虾青素具有极强的抗氧化性，在光和热等条件下不稳定且不溶于水，为了提高虾青素在食品中的稳定性和生物利用度，常通过乳液[6]、脂质体[7]、微囊化[8]和纳米颗粒[9]等技术对虾青素进行包埋处理。食品级蛋白质因其具有天然来源、无毒且高营养价值的特点，在提高脂溶性活性物质的生物利用度方面得到广泛的应用，如玉米醇溶蛋白[10]、β-乳球蛋白[11]、酪蛋白[12]等。乳脂肪球膜的各组分具有两亲性，可用来作为天然的乳化剂，主要成分为特异性膜蛋白和磷脂，其中蛋白质含量在25%~70%，主要的乳脂肪球膜蛋白包括有嗜乳脂蛋白、黏液素、黄嘌呤氧化还原酶、乳凝集素等[13]。然而，由单一蛋白质制成的纳米颗粒封装通常不稳定，在胃肠消化中会被蛋白酶降解，破坏纳米颗粒结构，因此蛋白质基通常需要涂上一层其他化合物，以提高稳定性和封装效率，大多情况下会与多糖复合以达到更佳效果[14]。阿拉伯胶作为一种两亲性多糖[15]，是一种携带羧基的弱聚电解质，可以通过静电相互作用与带正电的粒子交联，因其较高的溶解性和较低的黏度，易与大分子间粘合，故常被用作食品乳化剂和稳定剂。乳脂肪球膜蛋白的分子量为48~225 kDa，高于β-乳球蛋白和酪蛋白，高分子量蛋白质比低分子量蛋白质具有更高的覆盖率，这可以提高运载体系的稳定性[16]。此外，乳脂肪球膜被认为是制备富含β-胡萝卜素的O/W乳液的理想材料[17]。
基于此，本研究通过蜗牛酶对雨生红球藻进行酶解破壁提取虾青素，并以富含乳脂肪球膜的乳清蛋白粉与阿拉伯胶制备虾青素纳米颗粒，选择最佳的pH、蛋白与阿拉伯胶质量比以及虾青素添加浓度；通过虾青素纳米颗粒的傅里叶红外光谱分析和贮藏稳定性，探究该纳米颗粒的性质，为虾青素在食品、药品等领域的应用提供一定的参考价值。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
虾青素标准品 Sigma公司；雨生红球藻粉（虾青素含量4%） 昆明白鸥微藻技术有限公司；蜗牛酶（含有纤维素酶、果胶酶、蛋白酶等20多种酶） 生工生物工程（上海）股份有限公司；无水乙醇 南京化学试剂股份有限公司；乳清蛋白粉（富含乳脂肪球膜） 美国Hilmar公司；阿拉伯胶 上海麦克林生化科技有限公司；所有试剂均为分析纯。
Zetasizer Nano-ZS纳米粒度及电位仪 英国马尔文公司；GL-22M型高速冷冻离心机 上海赵迪生物科技有限公司；MCFD5005型真空冷冻干燥机 上海优浦科学仪器有限公司；电热恒温水浴锅 上海新苗医疗器械有限公司；Nexus 670型傅里叶变换红外光谱 美国尼高力公司。
1.2 实验方法
1.2.1 雨生红球藻虾青素的酶法提取工艺
参考张晔等[18]和Duan等[19]的方法，稍加修改。按2%（w/v）称取一定量雨生红球藻粉至0.2 mol/L乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，调节pH至6.0，加入0.4 mg/mL的蜗牛酶于35 ℃下酶解反应4 h，结束后进行75 ℃灭酶处理5 min[20]，取酶解后的残渣按0.5%（w/v）加入无水乙醇，在50 ℃水浴锅中提取1 h，收集上清液，重复操作直至上清液澄清，用0.45 μm针头式过滤器过滤备用[21]。
1.2.2 虾青素纳米颗粒的制备
1.2.2.1 pH的选择
参照Liu等[22]的方法，将蛋白粉溶于超纯水制备1 mg/mL的溶液，500 r/min于25 ℃搅拌30 min后，用1.0 mol/L的HCl调节pH至4，继续搅拌60 min。加入阿拉伯胶使得体系终浓度为1.5 mg/mL，以500 r/min搅拌60 min。将体系的pH调至2~7之间（2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、7）[23]，继续搅拌2 h，置于4 ℃冰箱过夜，以确保充分水化。使用马尔文Nano-ZS电位及纳米粒度分析仪在25 ℃测定各体系的Zeta电位值[24]。
在固定壁材总浓度为0.15%，蛋白与阿拉伯胶质量比为2:1，虾青素添加浓度为60 μmol/L的情况下，调节体系的pH至2.5、3.0、3.5、4.0和4.5，继续搅拌2 h。参考Huang等[25]的方法，取36 mg虾青素冻干品溶于360 μL食品级乙醇中，得到0.1 g/mL的虾青素-乙醇母液，将其分散到上述各体系以获得虾青素终浓度为60 μmol/L的分散体，涡旋5 min后避光搅拌60 min，测定包封率。
1.2.2.2 壁材比例的选择
在固定壁材总浓度为0.15%，pH为4.0，虾青素添加量为60 μmol/L的情况下，参照牛付阁[26]的方法，考察不同的蛋白与阿拉伯胶质量比（1:4、1:2、1:1、2:1和4:1）对虾青素包埋效果的影响。
1.2.2.3 虾青素浓度的选择
在固定壁材总浓度为0.15%，pH为4.0，蛋白与阿拉伯胶质量比为2:1的情况下，考察虾青素的不同添加量（20、40、60、80和100 μmol/L）对虾青素包埋效果的影响[22,25]。
1.2.2.4 虾青素包封率的测定
根据Hu等[27]的方法，稍作修改。将1.0 mL纳米颗粒与1.0 mL无水乙醇混合后，以10000 ×g离心10 min，收集上清液，重复操作至上清液呈无色。其中，游离虾青素含量是指上清液中未结合的虾青素含量，将收集的上清液合并，用紫外可见分光光度计于476 nm处测量吸光度，并根据标准曲线回归方程（y=0.1051x+0.1038，R2=0.9963）计算虾青素的含量。包封率按下列公式计算。
(1) 1.2.3 雨生红球藻虾青素纳米颗粒的性质研究
1.2.3.1 傅里叶红外光谱
根据Zhang等[28]的方法，稍作修改。取1 mg虾青素纳米颗粒冻干品放置于玛瑙研钵中，加入100 mg的干燥溴化钾粉末，均匀研磨后，压制成透明的样品片，累计扫描32次，仪器分辨率为4 cm−1，光谱扫描范围为4000~500 cm−1。
1.2.3.2 贮藏稳定性
在已优化的条件下制备虾青素纳米分散体，将其放置于4、25和37 ℃环境下避光保存[29]，分别在0、5、10和15 d时测量其粒径、Zeta电位、虾青素保留率和DPPH清除能力。
1.2.3.3 粒径和Zeta电位的测定
按照方法1.2.2.1进行。
1.2.3.4 虾青素保留率的测定
参照谢灏婷[30]的方法，稍作修改。取1 mL纳米颗粒溶液置于离心管中，加入5 mL无水乙醇，旋涡振荡器振荡60 s，以充分萃取颗粒内的虾青素，振荡结束后10000×g离心10 min，收集上清液，重复操作至上清液呈无色，在476 nm处测量吸光度。虾青素保留率按下列公式计算。
(2) 式中：V表示上清液合并后的体积，mL；C1表示虾青素浓度，µg/mL；m表示所用的虾青素质量，mg。
1.2.3.5 DPPH自由基清除能力的测定
实验组为200 µL虾青素纳米颗粒与800 µL的0.2 mmol/L DPPH混合，暗处反应30 min后于517 nm测定吸光值；空白对照组为无水乙醇溶液代替DPPH，对照组为200 µL无水乙醇与800 µL DPPH混合测定的吸光值[31]。
(3) 式中：Ai表示实验组吸光值；Aj表示空白组吸光值；A0表示对照组吸光值。
1.3 数据处理
采用SPSS 26软件对实验数据进行ANOVA和Duncan分析，通过Origin 8.0、Design Eepert 8.0.6和Graphpad 8.0做图，实验结果以平均值±标准差表示。
2. 结果与分析
2.1 雨生红球藻虾青素纳米颗粒制备工艺研究
2.1.1 纳米颗粒pH的选择
通过考察体系的Zeta电位，分析蛋白质和多糖复合凝聚的作用力。如图1所示，当pH从7.0降至2.0时，蛋白质的电位值从−32.03±0.09 mV增加到+17.27± 0.14 mV，当pH小于4.5时，蛋白质所带电荷由负转正。单一的阿拉伯胶溶液也表现出相似的趋势，在降到pH2.1时开始由负转正，这可能是因为pH在低于阿拉伯胶侧链基团的解离常数时，侧链上的羧基基团被质子化而带有部分正电荷[26]。当蛋白与阿拉伯胶带相反电荷时，两者之间才有可能发生复凝聚反应，随着溶液pH降低，蛋白多糖复合体系的电位值持续变大，经静电相互作用而发生复合凝聚。因此，制备虾青素纳米颗粒的最佳pH范围应在2.5~4.5之间。
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图 1 蛋白、阿拉伯胶及复合体系的Zeta电位随pH变化的情况Figure 1. Variation of Zeta potential of proteins, gum arabic and composite systems with pH如图2所示，不同pH条件下的虾青素纳米颗粒包封率不同，在pH为2.5~4.0之间，包封率随pH的增加而增加，这是因为阿拉伯胶带有较多的负电荷，蛋白的正电荷减少，两者能够很好地交联，当pH为4.0时，虾青素包封率高达92.93%±0.19%。随着pH继续增加至4.5时，蛋白到达等电点，与带负电荷的阿拉伯胶交联程度不够，因而包封率降低。周庆新等[32]在探究pH对虾青素酯包埋率的影响时，也确定pH4.0为制备虾青素酯微胶囊的最佳条件。本文的研究结果与暴莎莎[33]在研究不同pH对南极磷虾油微胶囊的形成和产率影响类似。所以，pH4.0为虾青素纳米颗粒的最佳制备条件。
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图 2 不同pH对虾青素包封率的影响注：不同小写字母表示各组样品间存在显著性差异（P<0.05）。Figure 2. Effect of different pH values on the encapsulation rate of astaxanthin2.1.2 纳米颗粒壁材比例的选择
由图3可看出，蛋白与阿拉伯胶的配比对虾青素包封率存在较大影响。从数据上来看，当蛋白与阿拉伯胶质量比从1:4增加至2:1时，虾青素包封率由74.61%±0.25%增至92.93%±0.19%，而继续增加蛋白用量时，包封率开始呈现负相关，下降至81.40%±0.92%。这种变化是体系中阿拉伯胶的数量减少，阿拉伯胶糖链被蛋白饱和吸附，从而导致虾青素包封率降低。谢灏婷[30]发现了增大薏米醇溶蛋白与阿拉伯胶配比，虾青素包封率先增大后减小，这与本文的研究类似。所以最佳的蛋白与阿拉伯胶配比为2:1。
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图 3 不同蛋白与阿拉伯胶质量比对虾青素包封率的影响Figure 3. Effect of protein to gum arabic mass ratios values on the encapsulation rate of astaxanthin2.1.3 纳米颗粒虾青素浓度的选择
由图4可知，当固定其他因素不变，随着虾青素的投入量增加，包封率先增大后减小。当虾青素浓度为20 μmol/L增加至60 μmol/L时，包封率从64.87%±0.22%增加至92.93%±0.19%，而当继续增加虾青素投入量时，蛋白与阿拉伯胶分子和虾青素的结合已经饱和，超过了一定的负荷，降低了虾青素的包封率。胡方斌[34]在研究虾青素浓度对虾青素PLGA纳米粒制备的影响时，也发现了虾青素浓度与包封率大小先成正相关而后呈负相关。因此，本文选择60 μmol/L的浓度制备虾青素纳米颗粒。综上，虾青素纳米颗粒的最佳制备条件是：pH为4.0，乳清蛋白与阿拉伯胶质量比为2:1，虾青素添加浓度为60 μmol/L。
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图 4 不同虾青素浓度对虾青素包封率的影响Figure 4. Effect of different astaxanthin concentrations on the encapsulation rate of astaxanthin2.2 雨生红球藻虾青素纳米颗粒的性质研究
2.2.1 雨生红球藻虾青素纳米颗粒的性质
在2.1的最佳条件下制备的虾青素纳米颗粒，粒径为265.71±0.55 nm，电位为−13.44±0.14 mV，包封率高达92.93%±0.19%。如图5所示，虾青素在水中的溶解性得到明显改善。
2.2.2 傅里叶红外光谱分析
虾青素的FTIR透射光谱及其特征峰与先前文献的报道基本一致[35]。由图6可知，虾青素有以下特征峰[34,36]：O-H伸缩振动吸收峰（3434 cm−1）、-CH3伸缩振动峰（2922 cm−1）、C=O伸缩振动峰（1648 cm−1）、C=C伸缩振动峰（1551 cm−1）和C-H疏水性伸缩振动峰（976 cm−1）。虾青素与壁材混合制备虾青素纳米颗粒后，虾青素在976 cm−1处的吸收峰没有显现出来，而在3434、2922、1648和1551 cm−1处的吸收峰发生了转移，表明虾青素在被包埋后O-H、-CH3、C=O和C=C的伸缩振动受到了限制，虾青素与壁材之间通过氢键和疏水作用相互结合，并有效包封在此基质中。樊永康[36]在研究糖基化酪蛋白包封槲皮素时也发现了类似的结果。
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图 6 虾青素（a）、壁材（b）和虾青素纳米颗粒（c）的FTIR光谱图Figure 6. FTIR spectrum of astaxanthin (a), wall material (b) and astaxanthin nanoparticles (c)2.2.3 虾青素纳米颗粒的贮藏稳定性
如图7A所示，新鲜制备的虾青素纳米颗粒的粒径为265.71±0.55 nm，在贮藏15 d内，体系的平均粒径随贮藏时间的延长而增大。15 d时，4、25和37 ℃条件下贮藏的纳米颗粒粒径分别为：283.82±0.51、291.68±0.78和301.14±0.69 nm，差异显著（P<0.05）。体系粒径在37 ℃贮藏条件下增幅最大，为13.1%，这可能是因为较高温度下颗粒碰撞几率增大而导致的体系平均粒径增加。在4 ℃条件下，虾青素纳米颗粒表现出更好的贮藏稳定性，粒径增幅仅为6.1%。Hou等[37]的研究也证实了乳清蛋白基人参皂苷Rg3纳米乳液在贮藏期间内粒径变大，以4 ℃贮藏温度增幅最小。
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图 7 虾青素纳米颗粒贮藏期间的粒径（A）、Zeta电位（B）、虾青素保留率（C）和DPPH自由基清除率（D）注:不同小写字母表示同一温度下不同贮藏天数样品的显著性差异（P<0.05）；不同大写字母表示同一贮藏天数下不同温度样品的显著性差异（P<0.05）。Figure 7. Particle size (A), Zeta potential (B), astaxanthin retention (C) and DPPH free radical clearance (D) of astaxanthin nanoparticles during storage如图7B所示，新鲜制备的虾青素纳米颗粒的电位为−13.44±0.14 mV，在贮藏15 d内，体系的电位绝对值随贮藏时间的延长而降低，表明贮藏期间内体系静电荷减少，这可能是由于阿拉伯胶少量脱落导致的[30]。如图7C所示，虾青素保留率随贮藏时间的延长而降低，但在15 d内，4、25和37 ℃不同的温度下，虾青素保留率均在80%以上，表明壁材对虾青素具有较好的包封作用，其中，以4 ℃的保留率最高，为90.78%±0.25%，这与Boonlao等[29]在研究不同温度下虾青素乳液中虾青素保留率的结果类似。由图7D可知，虾青素纳米颗粒的DPPH自由基清除能力随贮藏时间的延长而降低，这是由于贮藏期间内虾青素发生降解，保留率降低，进而导致体系的抗氧化能力减弱，4、25和37 ℃条件下贮藏15 d时，体系的DPPH自由基清除能力分别为79.31%±0.18%、74.82%±0.20%和69.34%±0.21%。综上可见，在15 d的贮藏期内，虾青素纳米颗粒能够保持均匀分散，温度越高引起的粒径增幅越大，Zeta电位的绝对值降低越快，进而导致虾青素保留率降低，体系的DPPH自由基清除能力降低。而4 ℃低温贮藏对纳米颗粒的粒径、电位、虾青素保留率及DPPH自由基清除能力影响最小，能够更好地保证虾青素纳米颗粒的稳定。
3. 结论
本实验利用蜗牛酶水解提取雨生红球藻虾青素，并使用富含乳脂肪球膜的乳清蛋白粉与阿拉伯胶共同制备虾青素纳米颗粒，通过对pH、蛋白与阿拉伯胶质量比以及虾青素添加浓度的选择，获得稳定性强的虾青素纳米颗粒，包封率高达92.93%±0.19%。经傅里叶红外光谱分析表明虾青素与壁材之间通过氢键和疏水作用相互结合，且虾青素有效地包封在壁材内。在4 ℃条件下贮藏15 d，虾青素保留率高达90.78%±0.25%。因此，基于富含乳脂肪球膜的乳清蛋白与阿拉伯胶制备的雨生红球藻虾青素纳米颗粒有助于改善虾青素的稳定性，有助于虾青素在水中溶解，并进一步拓展虾青素在食品、医药和化妆品等领域中的应用。
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图 1 蛋白、阿拉伯胶及复合体系的Zeta电位随pH变化的情况
Figure 1. Variation of Zeta potential of proteins, gum arabic and composite systems with pH
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图 2 不同pH对虾青素包封率的影响
注：不同小写字母表示各组样品间存在显著性差异（P<0.05）。
Figure 2. Effect of different pH values on the encapsulation rate of astaxanthin
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图 3 不同蛋白与阿拉伯胶质量比对虾青素包封率的影响
Figure 3. Effect of protein to gum arabic mass ratios values on the encapsulation rate of astaxanthin
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图 4 不同虾青素浓度对虾青素包封率的影响
Figure 4. Effect of different astaxanthin concentrations on the encapsulation rate of astaxanthin
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图 6 虾青素（a）、壁材（b）和虾青素纳米颗粒（c）的FTIR光谱图
Figure 6. FTIR spectrum of astaxanthin (a), wall material (b) and astaxanthin nanoparticles (c)
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[1] LIU Z W, ZENG X A, CHENG J H, et al. The efficiency and comparison of novel techniques for cell wall disruption in astaxanthin extraction from Haematococcus pluvialis[J]. International Journal of Food Science & Technology,2018,53(9):2212−2219.
[2] YU C, LI X, HAN B, et al. Simultaneous improvement of astaxanthin and lipid production of Haematococcus pluvialis by using walnut shell extracts[J]. Algal Research,2021:54.
[3] 陈祝. 低温等离子体刺激雨生红球藻生长及虾青素积累机制的研究[D]. 合肥: 中国科学技术大学, 2020. CHEN Z. The stimulation of the growth and astaxanthin accumulation of Haematococcus pluvialis induced by low-temperature plasma[D]. Hefei: University of Science and Technology of China, 2020.
[4] 高岩, 邢丽红, 孙伟红, 等. 不同来源虾青素提取、纯化及定量检测方法的研究进展[J]. 食品安全质量检测学报,2020,11(5):1414−1423. [GAO Y, XING L H, SUN W H, et al. Research progress on extraction, purification and quantitative detection methods of astaxanthin from different sources[J]. Journal of Food Safety and Quality,2020,11(5):1414−1423. GAO Y, XING L H, SUN W H, et al. Research progress on extraction, purification and quantitative detection methods of astaxanthin from different sources[J]. Journal of Food Safety and Quality, 2020, 11(05): 1414-1423.
[5] CUI C, ZHANG Y, HAN H, et al. Improvement of FISH-FCM enumeration performance in filamentous yeast species in activated sludge by snailase partial digestion[J]. Yeast,2012,29(3−4):111−117. doi: 10.1002/yea.2894
[6] YANG J, HUA S, HUANG Z, et al. Comparison of bioaccessibility of astaxanthin encapsulated in starch-based double emulsion with different structures[J]. Carbohydr Polym,2021,272:118475. doi: 10.1016/j.carbpol.2021.118475
[7] PAN L, LI H, HOU L, et al. Gastrointestinal digestive fate of whey protein isolate coated liposomes loading astaxanthin: Lipolysis, release, and bioaccessibility[J]. Food Bioscience,2022:45.
[8] ZHOU Q, YANG L, XU J, et al. Evaluation of the physicochemical stability and digestibility of microencapsulated esterified astaxanthins using in vitro and in vivo models[J]. Food Chem,2018,260:73−81. doi: 10.1016/j.foodchem.2018.03.046
[9] CHEN Y, TIE S, ZHANG X, et al. Preparation and characterization of glycosylated protein nanoparticles for astaxanthin mitochondria targeting delivery[J]. Food Funct,2021,12(17):7718−7727. doi: 10.1039/D1FO01751A
[10] GE S, JIA R, LI Q, et al. Pickering emulsion stabilized by zein/Adzuki bean seed coat polyphenol nanoparticles to enhance the stability and bioaccessibility of astaxanthin[J]. Journal of Functional Foods,2022:88.
[11] LIU C Z, LIU Z, SUN X, et al. Fabrication and characterization of β-lactoglobulin-based nanocomplexes composed of chitosan oligosaccharides as vehicles for delivery of astaxanthin[J]. J Agric Food Chem,2018,66(26):6717−6726. doi: 10.1021/acs.jafc.8b00834
[12] ZHANG X, ZHAO X, TIE S, et al. Ultrasonic self-emulsification nanocarriers for cellular enhanced astaxanthin delivery[J]. J Agric Food Chem,2021,69(9):2719−2728. doi: 10.1021/acs.jafc.0c05983
[13] 姬晓曦. 乳源乳脂肪球膜蛋白组学分析及其对细胞凋亡的作用机制[D]. 哈尔滨: 哈尔滨工业大学, 2017. JI X X. The proteome analysis of MFGM original from different milk and the apoptosis mechanism of MFGM proteins on tumor cells [D]. Harbin: Harbin Institute of Technology, 2017.
[14] 郭静, 胡坦, 潘思轶. 食品运载体系包埋叶黄素的研究进展[J]. 食品科学,2022,43(1):313−320. [GUO J, HU T, PAN S Y. Research progress on food delivery systems for lutein encapsulation[J]. Food Science,2022,43(1):313−320. doi: 10.7506/spkx1002-6630-20210330-373 GUO J, HU T, PAN S Y. Research progress on food delivery systems for lutein encapsulation[J]. Food Science, 2022, 43(1): 313-320. doi: 10.7506/spkx1002-6630-20210330-373
[15] JAIN A, THAKUR D, GHOSHAL G, et al. Microencapsulation by complex coacervation using whey protein isolates and gum acacia: An approach to preserve the functionality and controlled release of β-carotene[J]. Food and Bioprocess Technology,2015,8(8):1635−1644. doi: 10.1007/s11947-015-1521-0
[16] LI Q, HE S, XU W, et al. Formation, stability and in vitro digestion of β-carotene in oil-in-water milk fat globule membrane protein emulsions[J]. Food Biophysics,2018,13(2):198−207. doi: 10.1007/s11483-018-9525-8
[17] HE S, YE A. Formation and gastrointestinal digestion of β-carotene emulsion stabilized by milk fat globule membrane[J]. Journal of Food Process Engineering, 2019, 42(8): e13301.
[18] 张晔, 刘志伟, 谭兴和. 响应面法优化复合酶提取雨生红球藻中虾青素的工艺[J]. 食品工业科技,2019,40(22):87−92. [ZHANG Y, LIU Z W, TAN X H. Optimization of multi-enzymatic extraction of astaxanthin from Haematococcus pluvialis by response surface methodology[J]. Science and Technology of Food Industry,2019,40(22):87−92. ZHANG Y, LIU Z W, TAN X H. Optimization of multi-enzymatic extraction of astaxanthin from Haematococcus pluvialis by response surface methodology[J]. Science and Technology of Food Industry, 2019, 40(22): 87-92.
[19] DUAN Z, ZHU C, SHI J, et al. High efficiency production of ginsenoside compound K by catalyzing ginsenoside Rb1 using snailase[J]. Chinese Journal of Chemical Engineering,2018,26(7):1591−1597. doi: 10.1016/j.cjche.2018.02.004
[20] WANG L, HU J, LÜ W, et al. Optimized extraction of astaxanthin from shrimp shells treated by biological enzyme and its separation and purification using macroporous resin[J]. Food Chem,2021,363:130369. doi: 10.1016/j.foodchem.2021.130369
[21] ZHAO X, ZHANG X, LIU H, et al. Enzyme-assisted extraction of astaxanthin from Haematococcus pluvialis and its stability and antioxidant activity[J]. Food Sci Biotechnol,2019,28(6):1637−1647. doi: 10.1007/s10068-019-00608-6
[22] LIU Z W, ZHOU Y X, WANG L H, et al. Multi-spectroscopies and molecular docking insights into the interaction mechanism and antioxidant activity of astaxanthin and β-lactoglobulin nanodispersions[J]. Food Hydrocolloids,2021:117.
[23] 邹文洁. 卵白蛋白—藻酸丙二醇酯复合纳米颗粒包载花青素及其显色包装薄膜的研究[D]. 武汉: 华中农业大学, 2020. ZOU W J. The investigation of ovalbumin-propylene glycol alginate complex nanoparticles on encapsulation of anthocyanin and its visable mebarance [D]. Wuhan: Huazhong Agricultural University, 2020.
[24] CHEN X, ZHAO Y, ZHAO Y, et al. Effect of ultra-high pressure treatment on the characteristics of a tea polysaccharide conjugate aqueous solution[J]. Industrial Crops and Products,2021:171.
[25] HUANG L, LI D, MA Y, et al. Dietary fatty acid-mediated protein encapsulation simultaneously improving the water-solubility, storage stability, and oral absorption of astaxanthin[J]. Food Hydrocolloids,2022:123.
[26] 牛付阁. 卵白蛋白-阿拉伯胶相互作用及其在油水界面的吸附特性[D]. 无锡: 江南大学, 2015. NIU F G. Ovalbumin-gum arabic interactions and the adsorption properties at the oil-water interface[D]. Wuxi: Jiangnan University, 2015.
[27] HU Y, KOU G, CHEN Q, et al. Protection and delivery of mandarin
(Citrus reticulata Blanco) peel extracts by encapsulation of whey protein concentrate nanoparticles[J]. LWT,2019,99:24−33. doi: 10.1016/j.lwt.2018.09.044 [28] ZHANG T, SU M, LIU M, et al. Optimization of encapsulation using milk polar lipid liposomes with S-Layer protein and transport study of the ACE-inhibitory peptide RLSFNP[J]. J Agric Food Chem, 2021.
[29] BOONLAO N, SHRESTHA S, SADIQ M B, et al. Influence of whey protein-xanthan gum stabilized emulsion on stability and in vitro digestibility of encapsulated astaxanthin[J]. Journal of Food Engineering,2020:272.
[30] 谢灏婷. 基于薏米醇溶蛋白的虾青素纳米颗粒的构建及其特性研究[D]. 长沙: 中南林业科技大学, 2021. XIE H T. The research on the construction and characteristics of astaxanthin complex nanoparticles based on coixin[D]. Changsha: Central South University of Forestry and Technology, 2021.
[31] ZHAO X, ZHANG X, FU L, et al. Effect of extraction and drying methods on antioxidant activity of astaxanthin from Haematococcus pluvialis[J]. Food and Bioproducts Processing,2016,99:197−203. doi: 10.1016/j.fbp.2016.05.007
[32] 周庆新, 杨鲁, 陈芳甜, 等. 雨生红球藻虾青素酯微胶囊制备及其稳定特性研究[J]. 中国食品添加剂,2017(7):131−139. [ZHOU Q X, YANG L, CHEN F T, et al. Study on preparation and stability of microcapsule containing esterified astaxanthins from Haematococcus pluvialis[J]. China Food Additives,2017(7):131−139. doi: 10.3969/j.issn.1006-2513.2017.07.014 ZHOU Q X, YANG L, CHEN F T, et al. Study on preparation and stability of microcapsule containing esterified astaxanthins from Haematococcus pluvialis[J]. China Food Additives, 2017(7): 131-139. doi: 10.3969/j.issn.1006-2513.2017.07.014
[33] 暴莎莎. 基于复凝聚法和喷雾干燥法制备南极磷虾油微胶囊的研究[D]. 大连: 大连工业大学, 2016. BAO S S. Preparation for the antarctic krill oil microcapsules based on complex coacervation and spray drying technique[D]. Dalian: Dalian Polytechnic University, 2016.
[34] 胡方斌. PLGA载虾青素纳米粒的优化制备及其对HaCaT细胞光损伤保护作用的研究[D]. 广州: 华南理工大学, 2019. HU F B. Study on optimization of PLGA nanoparticles loaded with astaxanthin and evaluation of anti-photodamage effect in vitro[D]. Guangzhou: South China University of Technology, 2019.
[35] ZHAO Y, LIU J, GUAN L, et al. Fabrication of aqueous nanodispersion from natural DNA and chitosan as eminent carriers for water-insoluble bioactives[J]. Int J Biol Macromol, 2018, 118(Pt A): 263-270.
[36] 樊永康. 载荷槲皮素的糖基化酪蛋白纳米粒子的制备、表征及性能研究[D]. 杭州: 浙江大学, 2020. FAN Y K. Study on the preparation, characterization and properties of quercetin-loaded glycosylated casein nanoparticles[D]. Hangzhou: Zhejiang University, 2020.
[37] HOU P, PU F, ZOU H, et al. Whey protein stabilized nanoemulsion: A potential delivery system for ginsenoside Rg3 whey protein stabilized nanoemulsion: Potential Rg3 delivery system[J]. Food Bioscience,2019:31.
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