Study on Preparation of Compound Natural Preservative and Its Effect on Preservation of Sauropus androgynus(L.) Merr.
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摘要: 为了筛选出适于树仔菜的复合天然保鲜剂,本实验以海南树仔菜为实验材料,在单因素实验的基础上进行正交试验,考察壳聚糖、茶树油纳米乳液、茶皂素复配溶液处理对储存期间树仔菜叶绿素含量、VC含量、感官品质及失重率的影响。再以蒸馏水处理组作对照,比较最佳配方的复合天然保鲜剂与传统化学保鲜剂(二氧化氯)对树仔菜的保鲜效果。结果表明,复合保鲜剂最佳配方为茶皂素2 mg/mL、茶树油纳米乳液4 mg/mL、壳聚糖15 mg/mL,用该配方处理树仔菜,储存6 d,其叶绿素和VC损失较少,失重率低,能较好地保持其感官品质,保鲜效果的综合评分为86.05分。复合天然保鲜剂和化学保鲜剂的保鲜效果均明显优于对照组,且复合天然保鲜剂的保鲜效果略优于传统化学保鲜剂,尤其在保持叶绿素含量及减少失重方面效果更佳。本实验筛选的复合天然保鲜剂对树仔菜有良好的保鲜效果,在树仔菜的绿色保鲜上具有巨大的应用前景。Abstract: The study aimed to screen out the compound natural preservative suitable for Sauropus androgynus(L.) Merr.. In this experiment, the Hainan Sauropus androgynus(L.) Merr. was as experiment material, and three natural preservatives were investigated by L9(34) orthogonal test based on single factor experiment. The effects of chitosan, tea tree oil nanoemulsion and tea saponin solution on chlorophyll content, VC content, sensory quality and weight loss rate of Sauropus androgynus(L.) Merr. during storage were investigated. Then the distilled water treatment group was used as the control, the preservation effect was compared between the natural preservative and the traditional chemical preservative(chlorine dioxide). The results showed that the optimal compound preservative formula was tea saponin 2 mg/mL, tea tree oil nanoemulsion 4 mg/mL and chitosan solution 15 mg/mL. With this formula, the contents of chlorophyll and VC lost less, and the weight loss rate was low, and the sensory quality of Sauropus androgynus(L.) Merr. could be maintained well after 6 days storage. The comprehensive score of preservation effect was 86.05. The preservation effects of the compound natural preservative and the chemical preservative were better than that of the control group, and the preservation effect of compound natural preservative was slightly better than that of traditional chemical preservative, especially in maintaining chlorophyll content and reducing weight loss. The compound natural preservative selected in this experiment has a good effect on the preservation of Sauropus androgynus(L.) Merr.. And it has great application prospect as the green preservative of Sauropus androgynus(L.) Merr..
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树仔菜(Sauropus androgynus(L.) Merr.)原名守宫木,又称五指山野菜、天绿香、绿兰菜、越南菜等,为大戟科守宫木属多年生常绿小灌木,其顶端幼嫩茎叶可作蔬菜食用,质地脆爽,味道清香,口感独特[1-3]。其主产于南洋群岛和东南亚,在我国海南、云南等地有野生,也有零散栽培[3]。海南民间有用树仔菜煲骨头汤食用的习俗,认为其具有清热、解毒、消肿的作用[1]。研究发现,树仔菜富含多种人体必需的矿物质和蛋白质,VC含量也高于一般蔬菜;还具有抗氧化、降血压、抗炎等保健作用;其叶子和根还被用来缓解发烧、治疗耳痛及泌尿系统等疾病;是集美食、食疗、药用为一体的珍稀驯化野菜[1,4-7]。随着人们对“天然绿色食品”的追求,树仔菜的市场需求越来越大,海南树仔菜种植面积迅速扩增,己被列为海南省重点开发的无公害高效农产品,出岛量大,是当地农民重要的收入来源[3]。但树仔菜不耐储存、保鲜,邓爱妮等[8]研究发现,按传统低温保鲜方法储存2 d,VC含量开始下降,储存4 d下降明显,严重影响树仔菜的品质。但目前市面上尚未见专用于树仔菜的保鲜剂,且常见的蔬菜保鲜剂多是化学保鲜剂。随着人们对食品安全要求的提高,研究和开发适用于蔬菜保鲜的绿色、天然保鲜剂,对减少蔬菜损耗、增加经济收益及促进绿色食品发展具有重要意义。
壳聚糖、茶树油纳米乳液和茶皂素均是效果较佳的天然保鲜剂。ALI等[9]用1.0%~2.0%壳聚糖溶液处理新鲜木瓜,发现能有效延迟木瓜的成熟期,降低失重率,对硬度、表皮感官色泽的保持效果较好。赵博[10]发现壳聚糖和生姜大蒜提取物的复配液对草莓保鲜效果优于壳聚糖的单独使用。SATHIYASEELAN等[11]用壳聚糖-茶树油纳米乳处理鲜切红甜椒,可使其在4 ℃储存18 d,有效地延长了保质期。张文婷[12]发现茶皂素对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用;李迅[13]将茶皂素用于草莓保鲜,可减少草莓储存期间的腐烂率、失重、VC损失、硬度变化、总酸变化,延长草莓保质期。
本研究以海南树仔菜为对象,以叶绿素含量、VC含量、失重率及感官评分为评价指标,考察茶皂素、茶树油纳米乳液和壳聚糖三种天然保鲜剂复配对树仔菜保鲜效果的影响,筛选出最佳复配比例,并与传统保鲜剂进行对比,评价其保鲜效果,以期为树仔菜的绿色保鲜开辟一条新途径。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
树仔菜 海口市南北蔬菜批发市场(由五指山种植基地当天采摘供货);茶皂素 食品级,广东洋虎生物科技有限公司;茶树油(互叶白千层油) 食品级,陕西圣莱元生物科技有限公司;壳聚糖(脱乙酰度92%) 食品级,山东卫康生物医药科技有限公司;吐温80 西陇化工股份有限公司;抗坏血酸标准品 纯度≥99%,天津市大茂化学试剂厂;二氧化氯化学保鲜剂 山西可利尔生物科技有限公司。
TDL-40B大型低速水平离心机 上海安亭科学仪器厂;SCIENTZ-1200E超声波细胞粉碎机、SCIENTZ-48L冷冻型高通量组织研磨器 宁波新芝生物科技股份有限公司;722N可见分光光度计 上海仪电分析仪器有限公司;HR3865破壁料理机 飞利浦(中国)投资有限公司;DF101S集热式恒温磁力搅拌器 江苏科析仪器有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 样品处理
将市场购回的树仔菜去除机械损伤部分后,按试验设计分组,每组(1 kg)分别均匀喷洒30 mL一定浓度的保鲜剂,于25 ℃室温下晾干20 min,用PE保鲜袋包装后置于4 ℃冰箱保存。
1.2.2 茶树油纳米乳液制备
称取20 g茶树油和30 g吐温80(表面活性剂)混匀,作为油相;无水乙醇为助表面活性剂,按表面活性剂:助表面活性剂为7:1(质量比),称取无水乙醇4.3 g,用50 mL去离子水混匀,用去离子水定容至100 mL,作为水相。用玻璃棒匀速搅拌油相并缓慢加入上述100 mL水相,再加入搅拌子,放至磁力搅拌器搅拌2 min至均匀,形成粗乳液[14]。最后使用超声波细胞粉碎机对粗乳液进行超声匀质(超声功率405 W,15 min,同时冰水浴降温[15])。在纳米乳溶液的基础上直接加入去离子水以配制不同浓度的茶树油纳米乳溶液。
1.2.3 单因素实验
1.2.3.1 不同浓度茶皂素处理对树仔菜保鲜效果的影响
参考相关研究[16-18]的方法,将不同浓度(0.5、1、2、4、8 mg/mL)的茶皂素水溶液分别均匀喷洒于各组树仔菜上,晾干,各处理组取适量进行第一次指标(叶绿素含量、VC含量、质量及感官评分)测定,其余用PE保鲜袋包装置于4 ℃的冰箱中储存,于第6 d(前期预实验发现从第6 d开始检测样品的叶绿素含量、VC含量、失重率及感官评分,不同处理组间差异较大,故选取第6 d的测定结果作为评价依据)再次测定上述指标;每个处理组重复测3次,取平均值;用上述测定结果计算综合评分。考察不同浓度茶皂素对树仔菜保鲜效果的影响。
1.2.3.2 不同浓度茶树油纳米乳液处理对树仔菜保鲜效果的影响
参考钟业俊等[19]的方法,将不同浓度(1、2、3、4、5 mg/mL)的茶树油纳米乳液水溶液均匀喷洒于树仔菜上,晾干,包装冷藏,分别于第1、6 d测定各指标,操作同1.2.3.1。考察不同浓度茶树油纳米乳对树仔菜保鲜效果的影响。
1.2.3.3 不同浓度壳聚糖处理对树仔菜保鲜效果的影响
参考闫安等[16]和刘亚平[20]的方法,将不同浓度(5、10、15、20、25 mg/mL)壳聚糖水溶液均匀喷洒于树仔菜上,晾干,包装冷藏,分别于第1、6 d测定各指标,操作同1.2.3.1。考察不同浓度壳聚糖对树仔菜保鲜效果的影响。
1.2.4 正交试验
在单因素结果的基础上,以茶皂素浓度(A)、茶树油纳米乳液浓度(B)和壳聚糖浓度(C)为因素,以综合评分为评价指标,进行L9(34)正交试验,以确定最佳配方。试验因素水平见表1。
表 1 正交试验因素水平表Table 1. Factors and levels of orthogonal test水平 因素 A茶皂素
(mg/mL)B茶树油纳米乳液
(mg/mL)C壳聚糖
(mg/mL)1 1 3 10 2 2 4 15 3 4 5 20 1.2.5 复合天然保鲜剂与传统化学保鲜剂对树仔菜的保鲜效果比较
将等量的上述最佳配方的复合天然保鲜剂、传统化学保鲜剂(二氧化氯,浓度0.25 mg/mL)、蒸馏水(空白对照组)分别均匀喷洒于等量的树仔菜上,晾干,各组取适量树仔菜测定储存第1 d的指标(包括叶绿素含量、VC含量、质量及感官评分),包装冷藏,于第6 d再次测定上述指标,每个指标重复测3次,取平均值。用第1 d和第6 d的测定结果计算综合评分,作为保鲜效果评判的依据。
1.2.6 指标测定
1.2.6.1 叶绿素含量、VC含量和失重率的测定
叶绿素含量参照NY/T3082-2017《水果、蔬菜及其制品中叶绿素含量的测定 分光光度法》[21]进行测定;VC含量参照GB5009.86-2016《食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定》[22]中2,6-二氯靛酚滴定法进行测定;失重率(%)的计算公式为失重率(%)=(第1 d质量−第6 d质量)/第1 d质量×100。
1.2.6.2 感官评价
挑选经过培训的10名预防医学专业学生组成感官评价小组,对树仔菜感官品质进行评价,评价标准见表2。
表 2 树仔菜感官评分标准Table 2. Sensory evaluation standards for Sauropus androgynus(L.) Merr.项目 评分标准 分值 总体色泽 颜色鲜绿,有光泽 21~25 颜色偏暗,光泽较差 16~20 部分枝叶发黄或呈深绿,颜色暗淡 11~15 枝叶为浓暗绿色,呈不可食用状态 5~10 枝干质地 枝干直挺,脆嫩,易折断 21~25 枝干直挺,较脆,较易折断 16~20 枝干稍软,易弯曲,不易折断 11~15 枝干软榻,不易折断 5~10
菜叶形态菜叶挺立,呈自然生长形态 21~25 菜叶较为挺立,部分菜叶软塌、掉落 16~20 菜叶大部分萎蔫、低垂、掉落 11~15 菜叶全部萎蔫、低垂、掉落、腐烂 5~10
气味清淡的自身气味 21~25 蔬菜自身气味稍变浓郁 16~20 气味较为浓郁,稍有异味 11~15 有浓郁的发酵或腐烂异味 5~10 注:此表为累计加分制,对各项评分后相加得最终结果;90分以上:非常新鲜;80~89分:新鲜;70~79分:较为新鲜;60~69分:不新鲜;低于60分:完全不新鲜或出现腐烂。 1.2.6.3 综合评价
利用上述指标第1 d和第6 d的测定结果计算变化率,设叶绿素含量变化率、VC含量变化率、感官评分变化率、失重率占比分别为0.1、0.3、0.3、0.3(各处理组的树仔菜在贮存6 d后,树仔菜色泽均保持较好,呈翠绿色,叶绿素变化对贮存期间树仔菜的色泽的影响不大。因此,在综合评价时,叶绿素变化占比设置较低),计算综合评分,公式如下:
式中:叶1 d、叶6 d表示第1 d和第6 d的叶绿素含量,mg/100 g;VC1 d、VC6 d表示第1 d和第6 d的VC含量,mg/100 g;感1 d、感6 d表示第1 d和第6 d的感官评分,分;M1 d、M6 d表示第1 d和第6 d的质量,g。
1.3 数据处理
采用Excel 2010、正交设计助手软件对试验数据进行处理、分析,Graphpad Prism 8软件进行绘图。
2. 结果与分析
2.1 单因素实验
2.1.1 不同浓度茶皂素处理对树仔菜保鲜效果的影响
不同浓度茶皂素处理对树仔菜叶绿素含量、VC含量、感官评分、失重率及综合评分的影响见下图1。
图1a显示,茶皂素处理浓度为1~8 mg/mL时,叶绿素含量随处理浓度的增加而升高,处理浓度为4 mg/mL时达最高点,之后叶绿素含量趋于平稳。有研究发现[23],适宜的茶皂素浓度处理可增加植物中叶绿素的合成。王晓等[24]也发现,小香葱在低温储存期间,光合作用合成的叶绿素总量高于储存过程中分解的量,使得叶绿素含量上升。
由图1b、c可知,不同浓度茶皂素处理对树仔菜VC含量和感官评分的影响,均随处理浓度的增加呈现先上升后下降的趋势,处理浓度为2~4 mg/mL时,VC含量和感官评分均较高;当处理浓度达到8 mg/mL时,VC含量下降明显,感官评分也下降。可能是由于茶皂素具有较强的抗氧化能力,在适宜浓度范围内,随浓度的增加,VC氧化损失减少[13,18];李迅[13]将茶皂素用于草莓保鲜,亦发现随处理浓度的增加,草莓VC损失减少。但本研究中当茶皂素浓度增加到8 mg/mL时,树仔菜VC损失增加,可能是由于随着茶皂素浓度增加,其表面张力减小,成膜性下降,不利于隔绝氧气,使VC氧化损失增加[25]。不同浓度茶皂素处理下,树仔菜的感官评分随处理浓度的增加,呈现先上升后下降的趋势。可能是由于茶皂素具有抑菌作用[18],浓度偏低时,抑菌效果不佳,树仔菜贮存6 d后少量叶片有轻度腐烂现象。处理浓度为2~4 mg/mL时,感官评分均较好,当处理浓度达到8 mg/mL时,感官评分又下降。可能是茶皂素浓度增加,导致其表面张力减小,成膜性下降[25],树仔菜水分丢失较多,叶片出现萎蔫现象,故感官评分下降。
图1d显示,随着茶皂素处理浓度的增加,树仔菜失重率逐渐增加,可能是因为随茶皂素浓度增加,表面张力减小,成膜性下降,水分丢失增加[25]。
图1e显示,综合评价,2 mg/mL和4 mg/mL的茶皂素处理对树仔菜保鲜效果较好。
2.1.2 不同浓度茶树油纳米乳液处理对树仔菜保鲜效果的影响
茶树油纳米化处理后,能更有效地抑制多种细菌和霉菌,对食品具有良好的防腐保鲜作用[11,26-28],用茶树油纳米乳液喷洒处理树仔菜后,储存第6 d各项指标结果如图2。
图2a显示,不同浓度茶树油纳米乳液处理树仔菜,储存第6 d其叶绿素含量随浓度的增加,呈先上升后下降的趋势,2 mg/mL茶树油纳米乳液处理组叶绿素含量最高。可能是不同浓度的茶树油纳米乳液处理影响了储存期间树仔菜的光合作用强度[24],其机制有待进一步探索。
图2b~d所示,储存第6 d,树仔菜VC含量随处理浓度的增加而上升,处理浓度为3~5 mg/mL时,VC含量较高,可能是由于茶树油纳米乳液具有较高的抗氧化活性[29],适宜浓度的茶树油纳米乳液处理减少了VC的氧化损失。蒋金勇等[30]发现,与对照组相比,用含茶树油的树脂薄膜包装西兰花,可有效抑制VC的损失。感官评分随处理浓度的增加,呈先上升后下降的趋势,4 mg/mL处理组感官评分较高,可能是较高浓度茶树油的抗氧化性较强,可降低活性氧积累,延缓树仔菜的老化进程,加上树仔菜失重率较低,较好地保持了树仔菜的感官品质。浓度为3 mg/mL的处理组失重率高于其他处理组,原因不明。
图2e显示,综合评价,3~5 mg/mL茶树油纳米乳液处理对树仔菜的保鲜效果较好。
2.1.3 不同浓度壳聚糖处理对树仔菜保鲜效果的影响
不同浓度壳聚糖处理对树仔菜储存第6 d各指标的影响见下图3。
由图3a可知,储存第6 d树仔菜叶绿素含量随壳聚糖处理浓度的增加而升高,处理浓度达到20 mg/mL时不再增加,可能是因为壳聚糖浓度较高时,形成的膜较厚,在树仔菜表面形成一个微真空环境,延缓了叶绿素的降解速率[31];也可能是较高浓度的壳聚糖抗氧化性较强[32],较好地保持了内源抗氧化酶的活性,使其能有效清除活性氧,减缓了因活性氧的积累造成的叶绿素下降[31,33]。
图3b、c显示,VC含量和感官评分均呈先上升后下降的趋势,处理浓度为10~15 mg/mL时,VC含量较高。可能是:一方面,壳聚糖具有抗氧化活性[31],适宜浓度的壳聚糖可延缓树仔菜VC的下降[34-36],另一方面,壳聚糖有成膜性,在树仔菜表面形成了一层薄膜,减少了氧气交换,从而减少了VC的氧化损失[34]。但进一步提高浓度,会增加蔬菜呼吸代谢强度,使VC损失加速[34,37]。张慧君等[34-35]、路志芳等[36]的研究均发现,随壳聚糖处理浓度的增加,蔬菜感官评分呈先上升后下降的趋势;本研究中处理浓度为15、20 mg/mL时,感官评分较高;浓度过低或过高,感官评分均较低,可能是由于浓度过低,抗氧化作用较弱,在表面形成的膜太薄,起不到良好的保护作用;浓度过高,在蔬菜表面形成的膜较厚,呼吸代谢强度增加,加速了蔬菜的腐败;张慧君等[34]研究发现,用20 mg/mL的壳聚糖处理马齿苋,颜色翠绿,感观良好,当处理浓度增加到30 mg/mL时,颜色黄绿,稍有枯萎腐烂现象;可见壳聚糖浓度不是越高越好。
由图3d可见,随壳聚糖处理浓度增加,失重率呈先下降后上升趋势,处理浓度为20 mg/mL时,失重率最低。浓度过低或过高失重率均增加,可能是因为浓度较低,在树仔菜表面形成的薄膜太薄,不能有效防止水分蒸腾;而浓度过高,形成的膜太厚,树仔菜呼吸强度增加,加速失重[34]。
图3e显示,综合评价,15 mg/mL壳聚糖溶液处理树仔菜的保鲜效果最好。
2.2 正交试验结果与分析
由表3可知,各因素对树仔菜保鲜效果影响大小为茶皂素(A)>壳聚糖(C)>茶树油纳米乳液(B)。根据正交试验优化的最优的复配保鲜剂方案为A2B2C2,即茶皂素2 mg/mL,茶树油纳米乳液4 mg/mL,壳聚糖溶液15 mg/mL,进行三次重复验证实验,综合评分为86.05,结果与A2B2C3处理综合评分相近,但壳聚糖的使用量低于A2B2C3组合,故最优配方确定为A2B2C2。
表 3 树仔菜保鲜效果正交试验结果Table 3. Results of orthogonal experiment on the preservation effect of Sauropus androgynus(L.) Merr.试验号 A B C 误差 综合评分(分) 1 1 1 1 1 75.33 2 1 2 2 2 78.92 3 1 3 3 3 78.13 4 2 1 2 3 83.69 5 2 2 3 1 86.02 6 2 3 1 2 83.10 7 3 1 3 2 82.20 8 3 2 1 3 81.57 9 3 3 2 1 84.03 K1 77.46 80.41 80.00 81.79 K2 84.27 82.17 82.21 81.41 K3 82.60 81.75 82.12 81.13 R 6.81 1.76 2.21 0.66 优化水平 A2 B2 C2 2.3 复合天然保鲜剂与传统化学保鲜剂对树仔菜的保鲜效果比较
复合天然保鲜剂、传统化学保鲜剂、空白对照对树仔菜保鲜效果的比较,结果见下图4。
由图4a~d可见,复合天然保鲜剂处理组的叶绿素含量和感官评分均明显高于空白对照组,也略高于化学保鲜剂处理组;复合天然保鲜剂处理组失重率低于化学保鲜剂和空白组;两种保鲜剂处理组的VC含量均明显高于空白对照组;表明经复合天然保鲜剂处理的树仔菜叶绿素和VC含量较为稳定,感官品质较好。
图4e显示,从综合评分来看,复合天然保鲜剂处理组的综合评分(86.05分)略高于化学保鲜剂处理组(85.92分),但均明显优于空白对照组(80.33分)。可见,本实验筛选的复合天然保鲜剂配方对树仔菜能起到优良的保鲜效果。
3. 结论
本研究筛选出了适用于树仔菜的三种天然保鲜剂的最佳组合,即茶皂素2 mg/mL,茶树油纳米乳液4 mg/mL,壳聚糖15 mg/mL,用该复合天然保鲜剂喷洒树仔菜后,低温(4 ℃)储存至第6 d,能较好地保持叶绿素含量、VC含量及感官品质,并能减少失重。以蒸馏水处理组做对照,比较了最佳配方的复合天然保鲜剂和传统化学保鲜剂(二氧化氯)对树仔菜的保鲜效果差异,结果显示,二者保鲜效果均优于对照组,且复合天然保鲜剂的保鲜效果略优于传统化学保鲜剂,尤其在保持叶绿素含量及减少失重方面效果更明显。
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表 1 正交试验因素水平表
Table 1 Factors and levels of orthogonal test
水平 因素 A茶皂素
(mg/mL)B茶树油纳米乳液
(mg/mL)C壳聚糖
(mg/mL)1 1 3 10 2 2 4 15 3 4 5 20 表 2 树仔菜感官评分标准
Table 2 Sensory evaluation standards for Sauropus androgynus(L.) Merr.
项目 评分标准 分值 总体色泽 颜色鲜绿,有光泽 21~25 颜色偏暗,光泽较差 16~20 部分枝叶发黄或呈深绿,颜色暗淡 11~15 枝叶为浓暗绿色,呈不可食用状态 5~10 枝干质地 枝干直挺,脆嫩,易折断 21~25 枝干直挺,较脆,较易折断 16~20 枝干稍软,易弯曲,不易折断 11~15 枝干软榻,不易折断 5~10
菜叶形态菜叶挺立,呈自然生长形态 21~25 菜叶较为挺立,部分菜叶软塌、掉落 16~20 菜叶大部分萎蔫、低垂、掉落 11~15 菜叶全部萎蔫、低垂、掉落、腐烂 5~10
气味清淡的自身气味 21~25 蔬菜自身气味稍变浓郁 16~20 气味较为浓郁,稍有异味 11~15 有浓郁的发酵或腐烂异味 5~10 注:此表为累计加分制,对各项评分后相加得最终结果;90分以上:非常新鲜;80~89分:新鲜;70~79分:较为新鲜;60~69分:不新鲜;低于60分:完全不新鲜或出现腐烂。 表 3 树仔菜保鲜效果正交试验结果
Table 3 Results of orthogonal experiment on the preservation effect of Sauropus androgynus(L.) Merr.
试验号 A B C 误差 综合评分(分) 1 1 1 1 1 75.33 2 1 2 2 2 78.92 3 1 3 3 3 78.13 4 2 1 2 3 83.69 5 2 2 3 1 86.02 6 2 3 1 2 83.10 7 3 1 3 2 82.20 8 3 2 1 3 81.57 9 3 3 2 1 84.03 K1 77.46 80.41 80.00 81.79 K2 84.27 82.17 82.21 81.41 K3 82.60 81.75 82.12 81.13 R 6.81 1.76 2.21 0.66 优化水平 A2 B2 C2 -
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