Protective Effect of Polysaccharide from Gastrodia elata Blume on Non-alcoholic Fatty Liver Induced by High Fat Diet
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摘要: 目的：探讨天麻多糖对非酒精性脂肪肝的保护和延缓作用及其相关分子机制。方法：将60只ICR小鼠随机分成正常组、模型组、天麻多糖给药组(50、100和200 mg/kg)，除正常组给予普通饲料外，其余各组给予高脂饲料以诱导模型。同时，按剂量给予相应的药物，每 d 1次，持续10周。末次给药后30 min，记录小鼠体重及脏器指数，通过组织病理学方法评估肝脏组织的病理变化，分别测定小鼠血清天冬氨酸氨基转移酶（Aspartate amino transferase，AST）、丙氨酸氨基转移酶（Alanine amino transferase，ALT）活力，并同时检查与氧化应激损伤和脂质代谢相关的信号转导途径。结果：与模型组相比，天麻多糖可显著降低血清中AST和ALT活性（P<0.05），减轻脂肪肝组织病理损伤症状，同时调节多种与脂质积累相关的基因表达水平改善脂质代谢（P< 0.05）；此外，天麻多糖还通过上调Nrf2/GPx信号途径改善氧化应激损伤（P<0.05），抑制肝组织中NF-κB、TNF-α、IL-1β以及与炎症反应相关的iNOS和COX-2蛋白表达（P<0.05），并同时可抑制Bax表达，上调Bcl-2因子（P<0.05）。结论：天麻多糖可以改善小鼠的肝功能，调节脂质代谢水平减少脂肪堆积，同时缓解肝脏氧化应激损伤和抑制炎症来保护和延缓高脂饮食引起的非酒精性脂肪肝症状。Abstract: Objective: To investigate the protective and delayed effects of Gastrodia elata polysaccharide on non-alcoholic fatty liver (NAFLD) and its molecular mechanism. Methods:60 ICR mice were randomly divided into normal group, model group and Gastrodia elata polysaccharide group (50, 100 and 200 mg/kg). Except the normal group, the other groups were given high-fat diet to induce NAFLD model. At the same time, the corresponding drugs were given once a day for 10 weeks. At 30 min after the last administration, the body weight and organ index of mice were recorded, the pathological changes of liver tissue were evaluated by histopathology. At the same time, the activity of serum aspartate amino transferase (AST) and alanine amino transferase (ALT) were measured, and the related signal transduction pathways were examined including oxidative stress injury and lipid metabolism. Results:Compared with the model group, the activity of AST and ALT in serum were significantly decreased (P<0.05), and the pathological symptoms of fatty liver tissue was alleviated, and the level of genes expression related to lipid accumulation were regulated to improve lipid metabolism (P<0.05); In addition, Gastrodia elata polysaccharide also improved oxidative stress injury by upregulating Nrf2/GPX signaling pathway (P<0.05), inhibited the expression of NF-κB, TNF-α, IL-1β, iNOS and COX-2 proteins related to inflammatory response (P<0.05), and inhibited the expression of Bax and upregulated Bcl-2 proteins (P<0.05). Conclusion: Gastrodia elata Blume polysaccharide (GBP) can improve the liver function of NAFLD model mice, regulate the level of lipid metabolism and reduce the accumulation of fat, alleviate the oxidative stress injury of liver and inhibit inflammation to protect and delay NAFLD symptoms caused by high fat diet.
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近年来大量的研究表明，过量的脂肪摄入会导致机体增加罹患非酒精性脂肪肝和糖尿病的风险，严重威胁了公众健康[1-2]。非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是由脂质代谢异常和脂肪过度堆积而引起的肝脏代谢紊乱性综合征[3-4]，是一种临床常见的慢性疾病[5]，并且患病率在全球范围内逐年上升，已经成为威胁人民健康的最常见的三大肝病之一[6-7]。目前，NAFLD的发病机制并不是完全清楚，有学者提出的“二次打击”学说已经得到普遍认同[8]，即不健康的生活方式和饮食习惯会引起肝部脂肪积聚，导致肝细胞脂肪变性及细胞持续损伤（一次打击），进而诱发炎性细胞因子、线粒体功能障碍和氧化应激的相互作用，最终导致肝细胞损伤和脂肪性肝炎（二次打击），并且已经证明了氧化应激、脂质在肝部过度贮积及炎症反应等方面与NAFLD的发病密切相关[9-10]。研究表明，NAFLD若不及时干预，严重时会进一步发展为肝硬化和肝癌，然而目前尚缺乏明确的药物治疗手段。因此，寻找高效治疗NAFLD病症的药物是全人类健康事业的共同挑战。
天麻（Gastrodia elata Blume）又名赤箭、独摇芝、离母等[11]，为兰科（Orchiidaceae）植物天麻的干燥块茎，被《神农本草经》列于上品，是我国传统名贵中药，主要分布于四川、陕西、河南等地。我国传统中医认为天麻具有平肝熄风、镇静安眠的功效[12]，并且现代药理学研究证明，天麻具有强效的镇静、抗惊厥、改善血管微循环及增强机体免疫力等作用[13-17]，因而天麻具有广泛的药用价值。此外，天麻还是重要的药食两用资源，已被我国食品药品监督管理局（CFDA）列入可用于保健食品的名录[18]。值得一提的是，我国民间自古以来就有食用天麻的习惯，传统食用方式主要是作为煲汤或蒸煮直接食用。随着生活水平的提高和人们健康意识的增强，以天麻为主要原料的高档补益和保健产品已被广泛研究和开发。目前，市场上销售的天麻保健品多种多样，被CFDA批准的保健食品达30余个品种，主要有复方的保健品和营养液，其他剂型主要有胶囊剂、颗粒剂、片剂和散剂等[19]。此外，天麻加工食品主要有蜜饯片、咀嚼片和天麻果脯等，许多已获得国家发明专利，市场前景非常广阔。
天麻的主要成分为天麻素、酚类、有机酸类、多糖类及甾体类等[20]，但目前大多数对天麻的研究主要集中在天麻素及其苷类和酚类成分[21]，对天麻多糖及其组分研究报道甚少。天麻中多糖含量丰富，占天麻中总成分的25%[22]。近年来，大量的研究已经证明，天麻多糖具有多种药理活性，如抗炎、抗氧化、抗衰老、调节免疫功能、保肝及降血脂等重要的药理作用[23-27]。然而，到目前为止并未见天麻多糖对高脂饮食诱导的NAFLD的改善研究。同时，由于NAFLD发病常会伴随机体炎症反应、氧化应激损伤和细胞凋亡加剧[28]，因此本项研究建立在天麻多糖多种药理作用的基础上，以高脂饮食诱导的NAFLD模型为研究对象，研究天麻多糖对NAFLD小鼠炎症反应、氧化应激损伤及细胞凋亡的调节作用，探索天麻多糖改善NAFLD症状的可能机制，同时评价天麻多糖的保肝效果，以期为开发治疗NAFLD的新药和保健产品提供理论依据。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
天麻药材 河北安国药材市场，经辽宁中医药大学药学院马国华副教授鉴定为兰科植物天麻的干燥块茎；60只ICR雄性小鼠（6~8周龄），体重在18~22 g 由辽宁中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号：SYXK（辽）2020-0001；谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、还原性谷胱甘肽（GSH）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、过氧化氢酶（CAT）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、无毒环保苏木素-伊红染液（H&E）测定试剂盒 南京建成生物公司研究所提供；兔源单克隆抗体一氧化氮合成酶（iNOS）、环氧合酶-2（COX-2）、B-相关X（Bax）、B-淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒 北京索莱宝科技有限公司；白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核转录因子（NF-κB）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）、胆固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）、脂肪酸合成酶（FAS）、核因子E2相关因子2 （Nrf2）、谷胱甘肽过氧化物酶1/2（GPx1/2）、谷胱甘肽还原酶（GR）、腺苷酸活化蛋白激酶α2（AMPKα2）、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGCR）引物 TaKaRa公司设计；UNIQ-10柱式Ttizol总RNA提取试剂盒 生工公司；Tap PCR Master Mix（2ˣ, blue dye）、Prime Script TM RT reagent Kit with gDNA Eraser、SYBR® Premix Ex Taq TM II TaKaRa公司；其他试剂 均为分析纯，北京化工厂。
SpectraMax M2型酶标仪 美国Molecular Devices；Mx3000P型荧光定量PCR仪 美国Aligent公司；Fresco 21型微量离心机、NanoDrop 2000型核酸/蛋白定量仪 美国Thermo公司；BUCHI R300型旋转蒸发仪、AOD-756PC型紫外分析仪、B-585型真空冷冻干燥机 瑞士步琪（Buchi）有限公司；Olympus BX-60型光学显微镜 日本Tokyo公司。
1.2 实验方法
1.2.1 供试药液的制备
称取天麻样品粉末药材100.10 g，加入5倍体积的70%乙醇溶液，常温条件下搅拌提取3 h，8000 r/min离心15 min。去除上清液，取沉淀，加入8倍体积的水，90 ℃水浴2 h，间歇搅拌，待冷却后，于8000 r/min离心45 min。取上清液进行浓缩，浓缩液加入3倍体积的无水乙醇进行醇沉，静置过夜，8000 r/min离心30 min，取沉淀并冻干，得到天麻多糖样品，备用。采用刘涛等[29]方法，以葡萄糖为标准品通过苯酚-浓硫酸法于490 nm处测定吸光度值建立多糖标准曲线，利用回归方程y=0.0037x+0.0471 （R2=0.9954）计算得天麻多糖的含量为86.4%。
1.2.2 分组及处理
所有实验程序经辽宁中医药大学附属第二医院实验动物伦理委员会批准执行。所有动物饲养在具备动物饲养标准许可的专业动物房内，在特定的无病原体条件下（控制温度18~28 ℃，湿度30％~80％），每笼饲养4~5只，并饲喂标准实验室食品且保证自由饮水喂食。
所有实验小鼠适应性饲养7 d，随机分为正常组（Normal）、脂肪肝模型组（Model）、天麻多糖低剂量组（50 mg/kg，GBP-L）、天麻多糖中剂量组（100 mg/kg，GBP-M）、天麻多糖高剂量组（200 mg/kg，GBP-H），每组12只[30-31]。除正常组小鼠给予标准饲料（玉米粉27%、麸皮19%、大米16%、豆饼16%、鱼粉13%、钙粉3%、骨粉3%、酵母粉2.3%、食盐0.5%、复合维生素0.1%、微量元素0.1%）外，其余各组小鼠给予高脂饲料（10.0%猪油、20.0%蔗糖、10.0%蛋黄粉、0.5%胆酸钠和59.5%常规饲料）饲养。同时，各给药组小鼠以灌胃给药的方式给予相应剂量的药物（灌胃体积为0.1 mL/10 g），正常组及模型组小鼠均以相同的给药方式给予0.9%生理盐水，每 d给药1次，连续10周。
末次给药30 min后，称取小鼠体质量，之后将所有小鼠脱颈椎处死，收集血液，4 ℃、4000 r/min离心10 min，分取血清，按照试剂盒说明书方法测定生化指标。同时，迅速将收集的肝脏，脾脏及肾脏用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称重，用于计算各脏器指数。并从每只小鼠肝左叶的相同部分切除一小块肝组织，然后固定于10%的福尔马林溶液中用于病理学染色分析。剩下的肝脏样本彻底洗净后保存于−80 ℃，用于匀浆制备和蛋白质印迹分析[32]。
1.2.3 组织病理学检查
将肝脏样品用10%甲醛缓冲液固定24 h以上。用石蜡包埋后切片成5 μm厚的切片，常规H&E染料对肝组织进行染色并使用光学显微镜进行形态学观察。通过Ridit分析法来分析肝细胞坏死程度[33]。
1.2.4 生化指标的检测
依据生化试剂盒说明书测定血清中两个重要的肝功能指标：ALT和AST；同时测定血清中脂质代谢水平，包括TC、TG、HDL-C和LDL-C 四个生物活性指标。
使用商业试剂盒测定肝组织中氧化应激指标SOD、CAT和GSH，从−80 ℃取出肝脏样本，并用冰冷的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）进行匀浆，然后在4 ℃下离心10 min，利用上清测定SOD、CAT和GSH水平[34]。此外，匀浆液用于测定MDA含量。
1.2.5 实时荧光定量PCR测定肝脏中NF-κB, TNF-α和IL-1β
称取小鼠肝组织50 mg，置于经过高压灭菌的研钵中，加入液氮进行充分研磨；将研磨好的粉末分取放入1.5 mL离心管中，静置5 min，加入1 mL的裂解液裂解1 min，再按照提取总RNA试剂盒提取组织中RNA；分取1 μL总RNA加入逆转录反应体系，合成cDNA模版，并以此为模版利用SYBR® Premix Ex Taq TM II试剂盒进行扩增。RT-PCR反应所使用的引物序列如表1，反应条件在95 ℃预变性30 s，95 ℃变性5 s，退火温度为55 ℃、30 s，并进行40个循环。相对mRNA表达=2−△△Ct。
表 1 引物序列Table 1. Sequence of the primes for RT-PCR amplification基因 引物序列 NF-κB 上游引物 5'-TCTGACCTTGCCTATCTAC-3' 下游引物 5'-GTTCTGTCCATTCTTACGATC-3' Nrf2 上游引物 5'-AGCACATCCAGACAGACACCAGT-3' 下游引物 5'-TTC AGC GTG GCT GGG GAT AT-3' GPx-1 上游引物 5'-ATCATTTGGTCTCCGGTGTG-3' 下游引物 5'-TTCGATGTCGATGGTACGAA-3' GPx-2 上游引物 5'-TGCAACCAGTTCGGACATCA-3' 下游引物 5'-TGCAACCAGTTCGGACATCA-3' GR 上游引物 5'-CGGCGATCTCCACAGCAATG-3' 下游引物 5'-ACCGCTCCACACATCCTGATTG-3' AMPKα2 上游引物 5'-GAGAGAGGACTCGGCATCAATAA-3' 下游引物 5'-AAGGAAACAGGCAGATACCAACA-3' PPARγ 上游引物 5'-GAAAGACAACGGACAAATCAC-3' 下游引物 5'-GAAACTGGCACCCTTGAA-3' SREBP 1c 上游引物 5'-CTTCTGGAGACATCGCAAAC-3' 下游引物 5'-GGTAGACAACAGCCGCATC-3' FAS 上游引物 5'-CTTGGGTGCTGACTACAACC-3' 下游引物 5'-GCCCTCCCGTACACTCACTC-3' HMGCR 上游引物 5'-TTCTGCTCTTGATTGACCTTTC-3' 下游引物 5'-TTTCCCTTACTTCATCCTGTGA-3' IL-1β 上游引物 5'-TCCAGGATGAGGACATGAGCAC-3' 下游引物 5'-GAACGTCACACACCAGCAGGTTA-3' TNF-α 上游引物 5'-TGGCAAATGTGAGAAACGAG-3' 下游引物 5'-AAACCAGAACAGACCCAACG-3' β-actin 上游引物 5'-GTGCTATGTTGCTCTAGACTTCG-3' 下游引物 5'-ATGCCACAGGATTCCATACC-3' 1.2.6 免疫印迹分析
称取部分肝组织，加入RIPA裂解液（1:10，m/v）对肝组织进行匀浆，离心，提取总蛋白。再利用BCA蛋白质测定试剂盒测量蛋白质浓度并统一至5 mg/mL。上样量为20 μL，转膜后用含有5%的脱脂奶粉封闭至少1 h。将膜于4 ℃下用一抗iNOS（1:3000），COX-2（1:2000），Bax（1:2000），Bcl-2（1:2000）和β-action（1:2000）孵育过夜[32]。然后，于二抗中在室温下孵育1 h。使用ECL发光液检测信号，条带的强度通过光密度进行分析。
1.3 数据处理
使用SPSS 24.0软件进行统计，采用t检验对各组数据的差异性进行比较，P<0.05表示差异显著，所得数据以平均值±标准误（Mean±SEM）表示。结果数据图表用（GraphPad Prism 6.0（ISI®, USAISI®, USA）制作。
2. 结果与分析
2.1 天麻多糖对小鼠体重及脏器指数的影响
如表2所示，与正常组相比，模型组小鼠体重显著升高（P<0.01）。但是，经天麻多糖（GBP）治疗后，各给药组小鼠体重明显减轻并趋于正常组，其中GBP-高剂量组极显著（P<0.01）。同时，与正常组相比，模型组小鼠的肝脏和脾脏指数均显著升高（P<0.05）。然而，在经三个给药治疗组（50、100和200 mg/kg）改善治疗后，虽然小鼠的肝脏和脾脏指数与模型组相比有一定程度地降低，但结果并不显著。这些结果表明，天麻多糖对非酒精性脂肪肝小鼠的肝脏和脾脏具有保护作用。
表 2 天麻多糖对小鼠体重及脏器指数的影响Table 2. Effect of GBP on body weights and organ indices in mice组别 剂量（mg/kg） 体重（g） 脏器指数 初始 最终 肝脏指数（mg/g） 脾脏指数（mg/g） 正常组 − 21.16±2.14 38.76±4.33 4.16±1.36 0.46±0.69 模型组 − 22.20±1.08 48.12±4.06＃ 5.72±0.77＃ 0.85±0.38＃ GBP-低剂量 50 20.47±1.53 43.56±3.46 5.44±0.69 0.79±0.39 GBP-中剂量 100 21.50±1.74 42.95±3.76 5.25±0.95 0.65±0.35 GBP-高剂量 200 22.31±0.96 41.22±2.93** 4.77±1.21* 0.54±0.71 注：与正常组相比##P < 0.01, # P < 0.05；与模型组相比**P < 0.01, *P < 0.05；表3同。 2.2 天麻多糖对小鼠肝组织病理学的影响
通过H&E染色对NAFLD模型肝脏组织切片进行分析检查。如图1和表3所示，正常组小鼠肝脏组织结构清晰、完整。肝细胞规则排列，细胞核形态无异常且位于细胞中央，胞浆完整均匀。然而模型组小鼠肝细胞有轻度水肿，轻度脂肪变性和少量炎性浸润，细胞质内有大量的脂滴空泡现象，还有少数的细胞核消失，这些典型的病理特征证实了长期高脂诱导非酒精性脂肪肝模型的成功建立。经天麻多糖高、中、低三个剂量组治疗的肝脏结构清晰，排列较为整齐，水肿和脂滴空泡现象均有不同程度的改善。同时，结合表3的组织损伤等级评分和Ridit分析，结果均表明天麻多糖治疗后显著改善了肝脏病理学损伤，进一步证实了天麻多糖对NAFLD模型肝脏损伤的改善作用。
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图 1 各组肝组织苏木精-伊红染色（H&E）切片注：图中箭头表示小鼠肝细胞炎性浸润, 放大倍数：200×，比例尺=40 μm。Figure 1. Liver sections of each group after hematoxylin-eosin（H&E）staining表 3 肝脏的病理学改变及Ridit分析Table 3. Pathological changes in the liver and Ridit analysis组别 剂量（mg/kg） 损伤等级（n=12） 0 1 2 3 评分 Ridit 正常组 − 12 0 0 0 0 0.22 模型组 − 0 1 4 7 30 0.94## GBP-低剂量 50 8 3 6 3 24 0.55** GBP-中剂量 100 6 4 6 2 22 0.51** GBP-高剂量 200 3 7 3 2 19 0.48** 注：分级标准：0级表示没有坏死细胞，肝细胞中正常；1级表示含有不超过1/4的坏死肝细胞；2级表示含有不超过1/2的坏死肝细胞；3级表示几乎全部是坏死性细胞。等级0级计算0分；1级计算1分；2级计算2分；3级计算3分。 2.3 天麻多糖对血清生化指标的影响
为评估天麻多糖（GBP）对NAFLD小鼠肝功能的影响，本研究检测了血清中两种重要肝损伤标志物酶（ALT和AST）的水平。如图2A和B所示，与正常组相比，持续高脂饲料诱导后ALT和AST活力极显著上升（P<0.01），这说明NAFLD模型小鼠肝部受损严重；与脂肪肝模型组相比，用天麻多糖（GBP）处理能显著缓解这两个指标的增加（P<0.05、P<0.01），表明天麻多糖（GBP）能有效改善高脂诱导的NAFLD模型肝功能损伤。同时，为考察NAFLD模型小鼠脂质代谢水平，本研究还测定了TG、TC、HDL-C和LDL-C的含量。由图2C~F可知，与正常组相比，模型组小鼠血清中TG、TC和LDL-C的含量均极显著升高（P<0.01），而HDL-C含量则极显著降低（P<0.01）。然而，与脂肪肝模型组相比，天麻多糖各剂量组（50、100和200 mg/kg）可显著降低TG、TC和LDL-C的含量（P<0.05），同时显著升高HDL-C含量（P<0.05），并且天麻多糖高剂量组（200 mg/kg）具有更好的效果。
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2.4 天麻多糖对氧化应激指标的影响
NAFLD模型肝组织中会发生氧化应激损伤，如图3 A~D研究结果表明，高脂诱导的NAFLD模型会导致小鼠肝脏组织中GSH的消耗，降低SOD和CAT活性，并使MDA水平极显著升高（P<0.01），而用天麻多糖（GBP）处理后，肝脏中SOD、CAT活性和GSH含量显著升高（P<0.05），MDA水平则显著降低（P<0.05）。
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图 3 天麻多糖对小鼠肝脏中MDA水平和SOD、GSH、CAT活性的影响Figure 3. Effects of GBP on level of MDA and the activities of SOD, GSH, CAT in liver tissues of mice另外，已经证明持续性高脂饮食诱导的NAFLD模型引发的肝毒性疾病中，线粒体功能和过氧化物酶体氧化不饱和脂肪过程中会引起活性氧（ROS）的过度激活，同时还会产生大量自由基，并与氧化磷酸化特定位点结合，加剧肝细胞中氧化应激损伤[9]。因此，本研究评估了天麻多糖（GBP）对几种氧化应激和线粒体功能障碍标志物mRNA表达的影响，如图4 A~D所示，与模型组相比，天麻多糖（GBP）预处理会显著增加Nrf2、GPx1、GPx2和GR mRNA表达量（P<0.05）。这些数据表明，天麻多糖具有明显的抗氧化应激损伤的作用。
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图 4 天麻多糖对小鼠肝脏中Nrf2、GPx1、GPx2、GR mRNA表达量的影响Figure 4. Effects of GBP on the mRNA expression of Nrf2, GPx1, GPx2 and GR in liver tissues of mice2.5 天麻多糖对脂质代谢水平的影响
为进一步证明天麻多糖（GBP）对脂肪沉积清除和改善能力的分子机制，对NAFLD模型小鼠脂肪肝相关信号分子的mRNA表达进行检测。如图5 A~E所示，与正常组相比，模型组中PPARγ、SREBP 1c、FAS、HMGCR mRNA表达水平极显著升高（P<0.01），AMPKα2
则极显著降低（P<0.01）。相比之下，经天麻多糖（GBP）灌胃后，PPARγ、SREBP 1c、FAS、HMGCR mRNA表达量则极显著下调（P<0.01），并且AMPKα2 基因表达显著上调（P<0.05）。这表明，天麻多糖（GBP）通过调节多种与脂质积累相关的基因表达水平改善了脂质代谢水平，从而缓解了脂肪肝疾病。 ![]()
图 5 天麻多糖对小鼠肝脏中AMPKα2、PPARγ、FAS、SREBP 1c和HMGCR mRNA表达量的影响Figure 5. Effects of GBP on the mRNA expression of AMPKα2, PPARγ, FAS, SREBP 1c and HMGCR in liver tissues of mice2.6 天麻多糖对小鼠肝部炎症因子的影响
研究表明，NAFLD模型引起肝细胞脂肪变性及损伤，进而诱发炎症因子表达。在目前的研究中，通过RT-PCR分析肝组织中促炎因子NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA的表达，结果发现高脂诱导的NAFLD模型会导致NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA表达极显著升高（P<0.01），而通过GBP灌胃后则显著（P<0.05）抑制NF-κB、TNF-α和IL-1β的过渡表达（图6A、B和C）。重要的是，为进一步检测天麻多糖对NAFLD模型的抗炎作用，本实验采用Western-blotting来检测肝组织中促炎因子iNOS和COX-2蛋白表达水平。如图6 D~F所示，脂肪肝模型组小鼠肝脏中iNOS和COX-2蛋白表达极显著升高（P<0.01）。然而，给予50 、 100和200 mg/kg剂量的天麻多糖可使肝组织中iNOS和COX-2的表达显著降低（P<0.05）。这些研究结果说明，天麻多糖（GBP）的保肝作用也可能在一定程度上与其抗炎作用有关。
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图 6 天麻多糖对小鼠肝脏中NF-κB、TNF-α、IL-1β（A、B和C）mRNA表达和iNOS、COX-2（D、E和F）蛋白表达的影响Figure 6. Effects of GBP on NF-κB, TNF-α, IL-1β（A, B and C）mRNA expressions and iNOS, COX-2（D, E and F ）protein expressions in liver2.7 天麻多糖对小鼠肝细胞凋亡的影响
为进一步分析脂肪肝细胞变性和凋亡程度的影响，采用Western-blotting分析方法测定凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2表达。如图7A~C所示，脂肪肝模型组肝脏中的Bax蛋白表达极显著升高（P<0.01），天麻多糖给药组中的Bax表达则显著低于模型组（P<0.05），而抗凋亡因子Bcl-2的表达则与Bax相反。这些数据表明，天麻多糖对NAFLD模型引起肝细胞凋亡具有明显的改善作用。
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图 7 天麻多糖对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响Figure 7. Effects of GBP on the protein expression of Bax and Bcl-23. 讨论与结论
非酒精性脂肪肝病（NAFLD）是一种代谢紊乱性疾病，在世界范围内都具有极高的发病率，但又因其发病机制较复杂且尚未完全阐明，目前尚缺乏明确的药物治疗策略[35]。近年来，大量的研究者通过高脂饮食诱导建立的非酒精性脂肪肝动物模型，具有成模率高、稳定性好和死亡率低等优点[36-36]。在本研究中，长期饲喂高脂饲料导致小鼠肥胖，肝脂肪变性和脂代谢异常，氧化应激损伤和线粒体功能障碍，并伴随着炎症因子分泌增加，炎症因子通过刺激肝脏发生炎症，引起肝细胞坏死和凋亡，在NAFLD的发生发展中起到重要作用[37-38]，这些组织病理学特征类似于NAFLD患者的临床表现。而天麻多糖作为天麻中重要的活性成分，药理学研究表明其具有抗炎、抗氧化、降血脂及保肝作用，但相关机制尚未阐明，因此，本文评估了天麻多糖对高脂诱导的NAFLD小鼠的保肝作用及其机制。在研究中，高脂饮食持续造模10周，结果表明高剂量天麻多糖能极显著降低NAFLD小鼠的体重（P<0.01）。组织病理学显示模型组小鼠肝细胞明显变性和炎症细胞明显增多；肝小叶边界不清楚，肝索结构紊乱，肝组织呈弥漫性并空泡和气球状，肝组织损伤明显和肝细胞的凋亡数量加剧。经天麻多糖治疗后能够显著降低凋亡细胞的数量和炎症水平（P<0.05）。
NAFLD是一种与血脂异常密切相关的代谢紊乱性肝损伤病，而高脂血症是脂肪肝危害健康的重要因素，90%左右的高脂血症患者患有脂肪肝[39]。因此血清TG、TC、HDL-C、LDL-C水平与脂肪肝密切相关。研究结果表明，模型组小鼠的血清中AST、ALT活性及LDL-C、TG、TC含量与正常组相比极显著增加（P<0.01），HDL-C含量极显著降低（P<0.01），而天麻多糖则显著改善了这种改变，表明天麻多糖对脂肪肝损伤具有显著的保护作用，并有积极的降血脂作用，改善脂质代谢，保护肝细胞质膜。
此外，NAFLD的严重程度和氧化应激相关标志物在肝脏中的异常表达密切相关[40]，这也是NAFLD的发病机制之一[41]。GPx是抗氧化系统的重要组成部分，其在肝组织中的活性最高，可以清除ROS和防止氧化应激性肝损伤。Nrf2可调节SOD、CAT、GPX、GR等多种抗氧化酶的表达，CAT、GPx与SOD是机体内重要的细胞保护酶，在细胞内协调工作，共同构建了细胞抗氧化防御系统，可防止细胞内活性氧升高。本文的结果显示，天麻多糖预处理可有效地减缓肝组织中SOD、GSH和CAT活性的降低，并降低MDA的含量，同时调节Nrf2及其下游靶基因GPx、GR mRNA的表达，表明天麻多糖可能是通过上调Nrf2/GPx信号途径改善氧化应激损伤、提高机体的抗氧化酶活性和抑制氧化应激损伤对NAFLD的发生形成保护作用。
在以往的研究中发现，参与脂肪肝形成的大多数基因与PPAR信号通路相关，并参与到脂肪细胞分化[42]。脂联素已被证明激活了几乎所有主要类型的靶组织，包括骨骼肌、肝脏、和大脑中的AMPK基因家族等[43]。有研究表明，AMPKα2
活化直接磷酸化SREBP-1c，从而抑制SREBP-1c前体的裂解和核移位，进而抑制SREBP-1c介导的脂肪生成[44-45]。SREBP-1c主要参与脂肪酸代谢和葡萄糖代谢。葡萄糖经糖酵解转化为乙酰辅酶a，再转化为丙二酰辅酶a。最后，在FAS的作用下，乙酰辅酶a和丙二酰辅酶a催化生成脂肪酸，脂肪酸经酯化合成甘油三酯，进而加速脂肪生成。胆固醇主要是由一系列以乙酰辅酶a为底物的酶反应在肝脏中合成的。HMGCR是合成反应中的限速酶[46]。本研究结果显示，天麻多糖下调SREBP-1c，以及其下游靶基因FAS和HMGCR的RNA表达，通过抑制HMGCR达到降胆固醇的作用，表明天麻多糖可通过调节脂代谢水平改善NAFLD。 炎症反应在NAFLD中起着重要的作用。核转录因子-κB（NF-κB）作为一种广泛存在于机体各种细胞的诱导性核转录因子，当受到外界刺激时可被激活，进入细胞核参与炎性反应[47]。当NF-κB被激活后，可加强TNF-α和IL-1β等基因转录，致使其产生、释放增加，最终使炎症反应加剧[48]。目前，NF-κB被认为是应激反应尤其是炎症过程中关键性调控因子[49]。研究发现，作为重要的前炎症基因的转录调控因子NF-κB，氧化应激、炎性反应、细胞凋亡与再生在肝组织中起着重要作用[50]。近年来，国内外研究发现，抑制NF-κB信号通路以改善肝细胞脂肪性炎性可能。反之，活化NF-κB亦可进一步加重脂肪性肝炎的形成。而TNF-α、IL-1β作为重要的促炎因子，在加剧慢性炎症恶性循环的同时，对维持和延续炎症反应起到重要作用[51-53]。在本研究中，通过RT-PCR分析显示，天麻多糖能显著抑制NAFLD引起的炎症细胞因子NF-κB、TNF-α和IL-1β的过度表达，这表明天麻多糖在高脂饮食诱导的脂肪肝毒性中具有潜在的抗炎作用。此外，免疫印迹（Western-blotting）分析结果还表明，天麻多糖预处理可有效抑制iNOS和COX-2的过度表达，这与上述研究结论相一致。
通常，细胞凋亡是平衡人体生理功能的最基本特征之一[54-55]。因此，Western-blotting分析用于证实天麻多糖的抗凋亡作用。结果显示，天麻多糖治疗后脂肪肝组织中Bax蛋白水平明显下降，而Bcl-2蛋白表达相对升高，以上数据表明，天麻多糖能明显抑制高脂饮食引起NAFLD肝细胞凋亡。
综上所述，本研究结果清晰地表明，天麻多糖通过调节NF-κB介导的炎症小体通路及降低TNF-α和IL-1β促炎因子的表达水平来减轻炎症损伤，并通过上调抗凋亡因子Bcl-2及抑制Bax蛋白表达水平来抑制肝细胞凋亡，同时上调Nrf2/GPx信号途径缓解氧化应激损伤来保护和延缓高脂饮食引起的NAFLD症状，具有明显的肝脏保护作用。更重要的是，这些数据也为天麻多糖用于临床上脂肪肝疾病的治疗以及开发护肝保健药物提供理论依据。
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图 1 各组肝组织苏木精-伊红染色（H&E）切片
注：图中箭头表示小鼠肝细胞炎性浸润, 放大倍数：200×，比例尺=40 μm。
Figure 1. Liver sections of each group after hematoxylin-eosin（H&E）staining
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图 3 天麻多糖对小鼠肝脏中MDA水平和SOD、GSH、CAT活性的影响
Figure 3. Effects of GBP on level of MDA and the activities of SOD, GSH, CAT in liver tissues of mice
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图 4 天麻多糖对小鼠肝脏中Nrf2、GPx1、GPx2、GR mRNA表达量的影响
Figure 4. Effects of GBP on the mRNA expression of Nrf2, GPx1, GPx2 and GR in liver tissues of mice
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图 5 天麻多糖对小鼠肝脏中AMPKα2、PPARγ、FAS、SREBP 1c和HMGCR mRNA表达量的影响
Figure 5. Effects of GBP on the mRNA expression of AMPKα2, PPARγ, FAS, SREBP 1c and HMGCR in liver tissues of mice
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图 6 天麻多糖对小鼠肝脏中NF-κB、TNF-α、IL-1β（A、B和C）mRNA表达和iNOS、COX-2（D、E和F）蛋白表达的影响
Figure 6. Effects of GBP on NF-κB, TNF-α, IL-1β（A, B and C）mRNA expressions and iNOS, COX-2（D, E and F ）protein expressions in liver
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图 7 天麻多糖对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响
Figure 7. Effects of GBP on the protein expression of Bax and Bcl-2
表 1 引物序列
Table 1 Sequence of the primes for RT-PCR amplification
基因 引物序列 NF-κB 上游引物 5'-TCTGACCTTGCCTATCTAC-3' 下游引物 5'-GTTCTGTCCATTCTTACGATC-3' Nrf2 上游引物 5'-AGCACATCCAGACAGACACCAGT-3' 下游引物 5'-TTC AGC GTG GCT GGG GAT AT-3' GPx-1 上游引物 5'-ATCATTTGGTCTCCGGTGTG-3' 下游引物 5'-TTCGATGTCGATGGTACGAA-3' GPx-2 上游引物 5'-TGCAACCAGTTCGGACATCA-3' 下游引物 5'-TGCAACCAGTTCGGACATCA-3' GR 上游引物 5'-CGGCGATCTCCACAGCAATG-3' 下游引物 5'-ACCGCTCCACACATCCTGATTG-3' AMPKα2 上游引物 5'-GAGAGAGGACTCGGCATCAATAA-3' 下游引物 5'-AAGGAAACAGGCAGATACCAACA-3' PPARγ 上游引物 5'-GAAAGACAACGGACAAATCAC-3' 下游引物 5'-GAAACTGGCACCCTTGAA-3' SREBP 1c 上游引物 5'-CTTCTGGAGACATCGCAAAC-3' 下游引物 5'-GGTAGACAACAGCCGCATC-3' FAS 上游引物 5'-CTTGGGTGCTGACTACAACC-3' 下游引物 5'-GCCCTCCCGTACACTCACTC-3' HMGCR 上游引物 5'-TTCTGCTCTTGATTGACCTTTC-3' 下游引物 5'-TTTCCCTTACTTCATCCTGTGA-3' IL-1β 上游引物 5'-TCCAGGATGAGGACATGAGCAC-3' 下游引物 5'-GAACGTCACACACCAGCAGGTTA-3' TNF-α 上游引物 5'-TGGCAAATGTGAGAAACGAG-3' 下游引物 5'-AAACCAGAACAGACCCAACG-3' β-actin 上游引物 5'-GTGCTATGTTGCTCTAGACTTCG-3' 下游引物 5'-ATGCCACAGGATTCCATACC-3' 
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表 2 天麻多糖对小鼠体重及脏器指数的影响
Table 2 Effect of GBP on body weights and organ indices in mice
组别 剂量（mg/kg） 体重（g） 脏器指数 初始 最终 肝脏指数（mg/g） 脾脏指数（mg/g） 正常组 − 21.16±2.14 38.76±4.33 4.16±1.36 0.46±0.69 模型组 − 22.20±1.08 48.12±4.06＃ 5.72±0.77＃ 0.85±0.38＃ GBP-低剂量 50 20.47±1.53 43.56±3.46 5.44±0.69 0.79±0.39 GBP-中剂量 100 21.50±1.74 42.95±3.76 5.25±0.95 0.65±0.35 GBP-高剂量 200 22.31±0.96 41.22±2.93** 4.77±1.21* 0.54±0.71 注：与正常组相比##P < 0.01, # P < 0.05；与模型组相比**P < 0.01, *P < 0.05；表3同。
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表 3 肝脏的病理学改变及Ridit分析
Table 3 Pathological changes in the liver and Ridit analysis
组别 剂量（mg/kg） 损伤等级（n=12） 0 1 2 3 评分 Ridit 正常组 − 12 0 0 0 0 0.22 模型组 − 0 1 4 7 30 0.94## GBP-低剂量 50 8 3 6 3 24 0.55** GBP-中剂量 100 6 4 6 2 22 0.51** GBP-高剂量 200 3 7 3 2 19 0.48** 注：分级标准：0级表示没有坏死细胞，肝细胞中正常；1级表示含有不超过1/4的坏死肝细胞；2级表示含有不超过1/2的坏死肝细胞；3级表示几乎全部是坏死性细胞。等级0级计算0分；1级计算1分；2级计算2分；3级计算3分。
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[1] RECTOR R S, THYFAULT J P, WEI Y, et al. Non-alcoholic fatty liver disease and the metabolic syndrome: An update[J]. World J Gastroenterol,2008,14(2):185−192. doi: 10.3748/wjg.14.185
[2] BROWNING J D, HORTON J D. Molecular mediators of hepatic steatosis and liver injury[J]. The Journal of Clinical Investigation,2004,114(2):147−152. doi: 10.1172/JCI200422422
[3] 宫海艳, 姜莉. 慢性阻塞性肺疾病合并肺间质纤维化的研究进展[J]. 国际呼吸杂志,2012,32(14):1098−1104. [ GONG H Y, JIANG L. Research progress of chronic obstructive pulmonary disease with pulmonary fibrosis[J]. International Respiratory Journal,2012,32(14):1098−1104. doi: 10.3760/cma.j.issn.1673-436X.2012.014.015 [4] 张声生, 李乾构, 李军祥. 非酒精性脂肪性肝病中医诊疗共识意见[J]. 北京中医药,2011,30(2):83−86. [ZHANG S S, LI Q G, LI J X. Consensus opinions on diagnosis and treatment of non-alcoholic fatty liver disease in traditional Chinese medicine[J]. Beijing Traditional Chinese Medicine,2011,30(2):83−86. [5] 范建高. 非酒精性脂肪肝的临床流行病学研究[J]. 中华消化杂志,2002,22(2):106−107. [FAN J G. Clinical epidemiological study of non-alcoholic fatty liver[J]. Chinese Journal of Digestion,2002,22(2):106−107. doi: 10.3760/j.issn:0254-1432.2002.02.012 [6] ANDRONESCU C, PURCAREA M R, BABES P A. Nonalcoholic fatty liver disease: Epidemiology, pathogenesis and the rapeutic implications[J]. Journal of Medicine and Life,2018,11(1):20−23.
[7] BEDOGNI G, BELLENTANI S. Fatty liver: How frequent is it and why[J]. Annals of Hepatology,2004,3(2):63−65. doi: 10.1016/S1665-2681(19)32110-6
[8] DAY C P, JAMES O. Steatohepatitis: A tale of two “hits”[J]. Gastroenterology,1998,114(4):842−845. doi: 10.1016/S0016-5085(98)70599-2
[9] KOHEI O, HIROFUMI U, SEIICHI M, et al. Clinical features of hepatocellular carcinoma associated with nonalcoholic fatty liver disease: A review of human studies[J]. Clinical Journal of Gastroenterology,2015,8(1):1−9. doi: 10.1007/s12328-014-0548-5
[10] REENAM K, FERNANDO B, KEN C, et al. Modulation of insulin resistance in NAFLD[J]. Hepatology,2018,70(2):711−724.
[11] 中国科学院植物研究所. 中国高等植物图鉴: 第五册[M]. 北京: 科学出版社, 2002. Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences. An illustrated book of Chinese higher plants: Volume 5 [M]. Beijing: Science Press, 2002.
[12] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2020. National Pharmacopoeia Committee. Pharmacopoeia of the People's Republic of China (Volume I)[M]. Beijing: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2020.
[13] 张金芝, 黄光清, 郑卫红, 等. 天麻素对长春新碱诱导大鼠神经病理性疼痛的抑制作用[J]. 中药药理与临床,2012(6):44−46. [ZHANG J Z, HUANG G Q, ZHENG W H, et al. Inhibitory effect of gastrodin on vincristine induced neuropathic pain in rats[J]. Pharmacology and Clinic of Traditional Chinese Medicine,2012(6):44−46. [14] 陈小银, 田礼义. 天麻素对戊四氮致痫大鼠海马氨基酸递质的影响[J]. 天津中医药,2009,26(6):476−478. [CHEN X Y, TIAN L Y. Influence of gastrodin on amino acid transmitter in hippocampus of pentylenetetrazole-induced epileptic rats[J]. Tianjin Traditional Chinese Medicine,2009,26(6):476−478. [15] 许廷生, 陆龙存, 黄子冬. 天麻有效成分的药理作用分析与临床应用研究进展[J]. 中医临床研究,2020,12(21):133−135. [XU T S, LU L C, HUANG Z D. Progress in pharmacological action analysis and clinical application of active components of gastrodia elata[J]. Clinical research of Traditional Chinese Medicine,2020,12(21):133−135. [16] 王耀, 李光布, 朱启云. 天麻素治疗椎-基底动脉供血不足疗效观察[J]. 中华全科医学,2014,12(2):326−327. [WANG Y, LI G B, ZHU Q Y. Effect of gastrodin on vertebrobasilar insufficiency[J]. Chinese General Medicine,2014,12(2):326−327. [17] 何珊珊, 李锐, 吴迪, 等. 天麻素对脑缺血再灌注小鼠海马新生神经元的保护作用[J]. 现代生物医学进展,2015,15(32):6241−6244. [HE S S, LI R, WU D, et al. Protective effects of gastrodin on hippocampal newborn neurons in cerebral ischemia-reperfusion[J]. Progress of Modern Biomedicine,2015,15(32):6241−6244. [18] 赵晓慧, 许燕, 林佶, 徐丹先. 小草坝新鲜天麻中多种金属元素评价分析[J]. 食品安全质量检测学报,2018,9(22):5987−5992. [ZHAO X H, XU Y, LIN J, et al. Evaluation and analysis of many kings of metal elements in Xiaocaoba fresh gastrodia elata in Xiaocaoba[J]. Journal of Food Safety and Quality Inspection,2018,9(22):5987−5992. doi: 10.3969/j.issn.2095-0381.2018.22.032 [19] 吴静澜. 天麻作为保健食品原料药的应用思考[J]. 世界最新医学信息文摘,2017,17(39):103−104. [WU J L. Thoughts on the application of Gastrodia elata as a health food API[J]. World Latest Medical Information Digest,2017,17(39):103−104. [20] 陈维红, 罗栋. 天麻素、天麻多糖药理作用研究进展[J]. 中国药物评价,2013,30(3):132−141. [CHEN W H, LUO D. Research progress in the pharmacological effects of gastrodin and Gastrodia elata polysaccharides[J]. China Drug Evaluation,2013,30(3):132−141. doi: 10.3969/j.issn.2095-3593.2013.03.002 [21] 李云, 王志伟, 刘大会, 等. 天麻化学成分研究进展[J]. 山东科学,2016,29(4):24−29. [LI Y, WANG Z W, LIU D H, et al. Research progress on the chemical constituents of Gastrodia[J]. Shandong Science,2016,29(4):24−29. doi: 10.3976/j.issn.1002-4026.2016.04.006 [22] 李晶, 苏薇薇, 李沛波, 等. 膜分离技术应用于麦冬多糖纯化工艺的研究[J]. 中医药导报,2017,23(4):51−57. [Li J, Su W W, Li P B, et al. Study on the application of membrane separation technology in the purification process of Ophiopogon japonicus polysaccharide[J]. Guide of Chinese Medicine,2017,23(4):51−57. [23] LIU J, MORIA A. Antioxidant and free radical scavenging activi-ties of Gastrodia elata and Uncaria rhynchophylla (Miq) Jacks[J]. Neuropharmacology,1992,31(12):87−98.
[24] 鞠桂春. 天麻及其制剂的药理作用和临床应用研究进展[J]. 中国药业,2008,17(1):64−66. [JU G C. Research progress in the pharmacological effects and clinical application of Gastrodia and its preparations[J]. China Pharmaceuticals,2008,17(1):64−66. doi: 10.3969/j.issn.1006-4931.2008.01.045 [25] KOMATSU T, KIDO N, SUGIYAMA T, et al. Antiviralactivity of acidic polysaccharides from Coccomyxa gloeobotrydiformi, a green alga, against an in vitro human influenza A virus infection[J]. Immunopharmacology and Immunotoxicology,2013,35(1):1−7. doi: 10.3109/08923973.2012.710636
[26] HUANG G B, ZHAO T, MUNA S S, et al. Therapeutic potential of Gastrodia elata Bl. for the treatment of Alzheimer’s disease[J]. Neural Regeneration Research,2013,8(12):1061−1070.
[27] DOO A R, KIM S N, HAHM D H, et al. Gastrodia elata Bl. alleviates L-DOPA-induced dyskinesia by normalizing FosB and ERK activation in a 6-OHDA-lesioned Parkinson’s disease mouse model[J]. BMC Complementary and Alternative Medicine,2014,14(1):107−114. doi: 10.1186/1472-6882-14-107
[28] KÜHNEL F, ZENDER L, PAUL Y, et al. NF-κB mediates apoptosis through transcriptional activation of Fas (CD95) in adenoviral hepatitis[J]. The Journal of Biological Chemistry,2000,275(5):6421−6427.
[29] 刘涛, 尼玛卓玛, 尼珍. 苯酚-浓硫酸法测定西藏天麻中多糖含量的条件优化[J]. 广东农业科学,2011,38(8):132−134. [LIU T, NIMA Z M, NI Z, et al. Determination of the polysaccharide content of Tibetan Rhizoma Gastrodiae by Phenol-colorimetric concentrated sulfuric acid[J]. Guangdong Agricultural Science,2011,38(8):132−134. doi: 10.3969/j.issn.1004-874X.2011.08.052 [30] 李晓冰, 展俊平, 张月腾, 等. 天麻多糖对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠体液免疫功能的影响[J]. 中国老年学杂志,2016,36(5):1027−1028. [LI X B, ZHAN J P, ZHANG Y T, et al. Effect of polysaccharide from Gastrodia elata B1 on humoral immune function in immunosuppressed mice induced by cyclophosphamide[J]. Chinese Journal of Gerontology,2016,36(5):1027−1028. doi: 10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.002 [31] HUANG R, ZHAO J, WU F, et al. Effect of electroacupuncture plus polysaccharide of Gastrodia elata Blume on expression of nestin and brain derived neurotrophic factor in the basolateral amygdala of focal cerebral ischemia rats[J]. Acupuncture Research,2016,41(3):230−234.
[32] JUN N H, XING Y X, WEI L, et al. Ginsenoside Rk1 ameliorates paracetamol-induced hepatotoxicity in mice through inhibition of inflammation, oxidative stress, nitrative stress and apoptosis[J]. Journal of Ginseng Research,2017,43(1):10−19.
[33] LI W, LIU Y, WANG Z, et al. Platycodin D isolated from the aerial parts of Platycodon grandiflorum protects alcohol-induced liver injury in mice[J]. Food Function,2015,6(5):1418−1427. doi: 10.1039/C5FO00094G
[34] HAN Y, XU Q, HU J N, et al. Maltol, a food flavoring agent, attenuates acute alcohol-induced oxidative damage in mice[J]. Nutrients,2015,7(1):682−696. doi: 10.3390/nu7010682
[35] SINGH S, OSNA N A, KHARBANDA K K. Treatment options for alcoholic and non-alcoholic fatty liver disease: A review[J]. World Journal of Gastroenterol,2017,23(36):6549−6570. doi: 10.3748/wjg.v23.i36.6549
[36] TAKAHASHI Y, SOEJIMA Y, FUKUSATO T. Animal models of nonalcoholic fatty liver disease/nonalcoholic steatohepatitis[J]. World Journal of Gastroenterology,2012,18(19):2300−2308. doi: 10.3748/wjg.v18.i19.2300
[37] OFOSU A, RAMAI D, REDDY M. Non-alcoholic fatty liver disease: Con-trolling an emerging epidemic, challenges, and future directions[J]. Ann Gastroenterol,2018,31(3):288−295.
[38] DUMITRASCU D L, NEUMAN M G. Non-alcoholic fatty liver disease: An update on diagnosis[J]. Clujul Medical,2018,91(2):147−150.
[39] BELLENTANI S, SCAGLIONI F, MARINO M, et al. Epidemiology of non-alcoholic fatty liver disease[J]. Journal of Digestive Diseases,2010,28(1):155−161. doi: 10.1159/000282080
[40] BRAUD L, BATTAULT S, MEYER G, et al. Antioxidant properties of tea blunt ROS-dependent lipogenesis: Benefificial effffect on hepatic steatosis in a high fat-high sucrose diet NAFLD obese rat model[J]. The Journal of Nutritional Biochemistry,2017,40:95−104. doi: 10.1016/j.jnutbio.2016.10.012
[41] SHI J, ZHAO Y, WANG K, et al. Cleavage of GSDMD by inflflammatory caspases determines pyroptotic cell death[J]. Nature,2015,526(7575):660−665. doi: 10.1038/nature15514
[42] SIRAJ F M, SATHISHKUMAR N, KIM Y J, et al. Ginsenoside F2 possesses anti-obesity activity via binding with PPARγ and inhibiting adipocyte difffferentiation in the 3T3-L1 cell line[J]. Journal of Medicinal Chemistry,2015,30(1):9−14.
[43] SøNDERGAARD E, JOHANSEN R F, JENSEN M D, et al. Postprandial VLDL-TG metabolism in type 2 diabetes[J]. Metabolism,2017,75:25−35. doi: 10.1016/j.metabol.2017.07.002
[44] YAN W, ZHANG H, LIU P, et al. Impaired mitochondrial biogenesis due to dysfunctional adiponectin-AMPK-PGC-1α signaling contributing to increased vulnerability in diabetic heart[J]. Basic Research in Cardiology,2013,108(3):329−343. doi: 10.1007/s00395-013-0329-1
[45] LI Y, XU S, MIHAYLOVA M M, et al. AMPK phosphorylates and inhibits SREBP activity to attenuate hepatic steatosis and atherosclerosis in diet-induced insulin-resistant mice[J]. Cell Metabolism,2011,13(4):376−388. doi: 10.1016/j.cmet.2011.03.009
[46] BERLANGA A, GUIU-JURADO E, PORRAS J A, et al. Molecular pathways in non-alcoholic fatty liver disease[J]. Clin Exp Gastroenterol,2014,7:221−239.
[47] 朱贺, 陈思娇, 宋金丹. 核因子κB及其SUMO化调控与糖尿病肺改变[J]. 医学综述,2012,18(8):1143−1146. [ZHU H, CHEN S J, SONG J D. Nuclear factor κB and its SUMOylation regulation and diabetic lung changes[J]. Medicine Review,2012,18(8):1143−1146. doi: 10.3969/j.issn.1006-2084.2012.08.008 [48] KULMS D, SCHWARZ T. NF-kappa B and cytokines[J]. Vitam Horm,2006,74:283−300.
[49] 马晓燕, 司英奎, 韩雪霖. 脂肪性肝病中NF-κB活性变化及其意义[J]. 中国病理生理杂志,2007,23(11):2276−2277. [MA X Y, SI Y K, HAN X L. Changes of NF-κB activity in fatty liver disease and its significance[J]. Chinese J Pathophysiology,2007,23(11):2276−2277. doi: 10.3321/j.issn:1000-4718.2007.11.046 [50] 赵彩彦. 实验性脂肪肝病发病机制的研究[D]. 石家庄: 河北医科大学, 2004. ZHAO C Y. Study on the pathogenesis of experimental fatty liver disease[D]. Shijiazhuang: Hebei Medical University, 2004.
[51] 宋艳芳, 林青, 祝先进, 等. 趋化因子CX3CL1对β-淀粉样蛋白激活的小胶质细胞IL-1β、TNF-α和NO表达的影响[J]. 免疫学杂志,2016,32(12):1101−1104. [SONG Y F, LIN Q, ZHU X J, et al. Effect of chemokine CX3CL1 on the expression of IL-1β, TNF-α and NO in microglia activated by β-amyloid[J]. J Immunology,2016,32(12):1101−1104. [52] MATTHAY M A, ZIMMERMAN G A. Acute lung injury and the acute respiratorydistress syndrome: Four decades of inquiry into pathogenesis and rational management[J]. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology,2005,33(4):319−27. doi: 10.1165/rcmb.F305
[53] 王红嫚, 王阳, 薛关生, 等. PDTC对大鼠急性肺损伤 TNF-α、IL-1β及核因子-KB蛋白表达的影响[J]. 中国老年学杂志,2013,33(10):3116−3118. [WANG H M, WANG Y, XUE G S, et al. Effect of PDTC on the expression of TNF-α, IL-1β and nuclear factor-KB protein in rats with acute lung injury[J]. Chinese Journal Gerontology,2013,33(10):3116−3118. [54] BAI J, WANG S. Panaxatriol saponin ameliorated liver injury by acetaminophen via restoring thioredoxin-1 and pro-caspase-12[J]. Liver International,2014,34(6):963. doi: 10.1111/liv.12463
[55] OZ H S, CHEN T S. Green-tea polyphenols downregulate cyclooxygenase and Bcl-2 activity in acetaminophen-induced hepatotoxicity[J]. Digestive Diseases and Sciences,2008,53(11):2980−2988. doi: 10.1007/s10620-008-0239-5
-
期刊类型引用(23)
1. 王玥颖，邱蕊，方琼，帅永康，赵鑫. 不同栽培条件对天麻活性成分的影响. 智慧农业导刊. 2025(02): 30-33+45 . 
百度学术
2. 刘靓，姜晶，陈贝妮，吴丹. 春砂仁多糖对高脂饮食小鼠脂代谢和抗氧化作用的影响. 中国食品添加剂. 2024(03): 163-170 . 百度学术
3. 王乃经，陈云云，陈莎，唐扩，王惠群. 贵州苗族红酸汤对高脂饮食诱导型大鼠非酒精性脂肪肝的预防作用. 贵州医科大学学报. 2024(02): 228-234 . 百度学术
4. 陈朦朦，吕冠华. 非酒精性脂肪肝发病的影响因素及预防调摄. 实用中医内科杂志. 2024(06): 96-100 . 百度学术
5. 郭晴君，杨惠蘩，杨蕴妍，李淑欢，杨宜浩，谢佳玉，苏立杰. 槲皮素对高脂饮食诱导肥胖小鼠肝脏脂肪变性的改善作用及对色氨酸代谢物的影响. 现代食品科技. 2024(06): 96-103 . 百度学术
6. 尚玉杰，张强，韩彦斌，梁宗锁. 天麻化学成分、药理作用及其产品开发分析. 中医药学报. 2024(08): 115-121 . 百度学术
7. 田晓玲，蒋佳佳，张彧，杜珊，陈斌. 中药多糖防治非酒精性脂肪性肝病作用机制研究进展. 中草药. 2024(17): 6016-6025 . 百度学术
8. 王林，杨小莉. 非酒精性脂肪肝合并脂质代谢异常的预防策略. 公共卫生与预防医学. 2024(06): 127-132 . 百度学术
9. 赵梦琦，王洪东，施高程，张正，于兵兵，俞浩. 滁菊总黄酮对高胆固醇血症的改善作用及机制. 食品工业科技. 2024(23): 111-120 . 本站查看
10. 刘从富，王瑞芳，齐景伟，安晓萍，王园，杨艳平，宋敏. 发酵麸皮多糖对胆固醇诱导的高脂斑马鱼脂肪代谢和抗氧化相关指标的影响. 饲料研究. 2024(20): 51-55 . 百度学术
11. 陈刚，高晴，和劲松，罗艳霞，杨春蕾，卢文丽，钱瑞，付晓萍. 响应面法优化天麻发酵液发酵工艺. 食品研究与开发. 2023(04): 162-167 . 百度学术
12. 刘学贵，刘娟，许佳宁，赵子薇，李丹琦，高品一. 紫花苜蓿根部多糖的结构表征及其体外活性研究. 当代化工. 2023(03): 527-532 . 百度学术
13. 段昊，周亚西，周士琦，闫文杰. 天麻在我国保健食品中的应用. 食品工业科技. 2023(09): 403-412 . 本站查看
14. 金璨，邓颖，曹楠，张晓丽，肖长义，何建刚，何功威，李世刚. 茶多酚对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病预防作用的研究进展. 食品科学. 2023(07): 295-302 . 百度学术
15. 张含，龚敏，李妍昕，石汝杰. 外源基质对乌红天麻根际土壤微生物多样性及酶活性的影响. 西南农业学报. 2023(05): 992-1001 . 百度学术
16. 田单单，王灿，苗明三. 基于中西医临床病证特点的脂肪肝动物模型评价. 世界中医药. 2023(12): 1784-1788 . 百度学术
17. 刘英语，吴酉芝，张冠亚. 食源性多糖缓解脂质代谢异常的研究进展. 食品研究与开发. 2023(17): 210-217 . 百度学术
18. 刘芳芳，张晶. 紫苏籽抗氧化肽对高脂饮食小鼠脂代谢及氧化应激的影响. 食品科技. 2023(10): 210-218 . 百度学术
19. 杨哲，董帅，范春艳，王宏艳. 桑椹多糖对高脂饮食诱导的脂肪肝小鼠的保护作用研究. 中兽医医药杂志. 2023(06): 7-11 . 百度学术
20. 周美伶，范春艳，王宏艳. 中药多糖在非酒精性脂肪性肝病中的研究进展. 现代畜牧兽医. 2023(12): 89-93 . 百度学术
21. 刘霖，黄闻霞，胡杨，胡艳，陈东坡. 蒸烤组合条件对猪肉饼脱脂速率的影响因素研究. 现代食品. 2022(17): 104-107 . 百度学术
22. 于温温，张金华，刘云娜，刘飞，邵华荣，韩冠英. 贻贝多糖对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除小鼠非酒精性脂肪肝的改善作用. 食品工业科技. 2022(24): 369-376 . 本站查看
23. 刘伟，吴江平，袁平川，邵太丽，柳春燕，王国栋. 中药多糖对非酒精性脂肪性肝病改善作用及机制研究进展. 中草药. 2022(23): 7566-7574 . 百度学术
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