喹诺酮类药物是一类广泛用于水产养殖的人工合成抗菌药物，用来预防和治疗动物疾病，具有广谱、高效、价廉等特点^[1-2]，但误用、滥用等不合理使用喹诺酮类药物不仅会使其在环境中残留，还会对人体健康造成危害^[3-5]。许多国家和地区、国际组织都对喹诺酮在水生动物和水产品中的残留作出了规定。中国原农业部公告第2292号宣布停止生产用于食品动物的洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种原料药的各种盐、酯及其各种制剂。其他国家的要求也越来越高，如输往韩国的养殖水产品中诺氟沙星、培氟沙星和氧氟沙星的限量要求不得检出^[6]。鲆鲽类鱼一般指身体扁平，眼在头部一侧的鲽形目鱼类，包括鲽科、鳎科和鲆科等，是我国重要的养殖海水鱼类^[7-8]，根据中国渔业统计年鉴2018年鲆鱼和鲽鱼养殖年产量分别为10.8万吨和1.4万吨^[9]。水产品中的喹诺酮类药物残留量小，样品基质复杂，需要高效的前处理和检测技术，目前水产品中应用较多的前处理技术有液液萃取法^[10-12]、固相萃取法^[13-14]和QuEChERS法^[15-16]等，而高效液相色谱-串联质谱法的分析时间短、检出限低、准确性和灵敏度高，是喹诺酮类药物残留检测中应用较广的仪器检测方法^[17-19]。

测量不确定度用来表征被测量值的分散性^[20-21]，可以体现检测结果的准确性和可靠性，测量不确定度的评定是食品检测中质量控制的重要内容^[22-23]。本文参考SN/T 1751.2-2007 《进出口动物源食品中喹诺酮类药物残留量检测方法 第2部分：液相色谱-质谱/质谱法》建立了鲆鲽类水产品中我国已停用的4种喹诺酮类药物残留的检测方法^[24]，参照已经报道的动物源性食品中兽药残留检测中的不确定度的评定方法^[25-28]，对不确定度的来源分析和量化，为鲆鲽类水产品中喹诺酮类残留检测过程质量评价提供参考。

1.   材料与方法

1.1   材料与仪器

诺氟沙星（norfloxacin, 纯度≥99.6%）、培氟沙星（pefloxacin, 纯度≥92.1%）、氧氟沙星（ofloxacin, 纯度≥99.3%）、洛美沙星（lomefloxacin, 纯度≥99.4%）　德国Dr. Ehrenstorfer公司；甲醇、乙腈（色谱纯）　德国Merck公司；其他试剂　为国产优级纯；实验用水　为自制超纯水；石鲽、星斑川鲽、半滑舌鳎等鲆鲽类样品　采购自本地市场。

QTRAP 4500型液相色谱-串联质谱仪，配备有电喷雾离子源（ESI）　美国AB SCIEX仪器公司；XS 205型分析天平　瑞士Metller Toledo公司；Milli-Q纯水仪　美国Millipore公司；N-EVAP 112氮吹仪　美国Organomation公司。

1.2   实验方法

参考SN/T 1751.2-2007《进出口动物源食品中喹诺酮类药物残留量检测方法 第2部分：液相色谱-质谱/质谱法》中的前处理方法并改进。

1.2.1   标准溶液配制

200 mg/L标准储备液：准确称取经纯度折算后为10 mg的标准物质，用甲醇溶解定容。

10 mg/L混合标准溶液：分别取适量单标储备液用甲醇稀释，使用前稀释至所需浓度。

1.2.2   样品前处理

称取5.00 g制备均匀的样品于50 mL塑料离心管中，加入10 mL含1%（V/V）乙酸的乙腈旋涡混匀后超声提取10 min，3500 r/min离心5 min，取上清液到另一离心管中。重复提取一次，合并上清液。加入5 mL正己烷旋涡混合1 min，3500 r/min离心5 min后取乙腈层于氮气流下吹干，用1 mL甲醇−0.1%（V/V）甲酸水溶液（1:9）溶解定容，过0.22 μm有机滤膜，仪器测定。

1.2.3   仪器条件

1.2.3.1   液相色谱条件

色谱柱：ACE UltraCore 2.5 Super C₁₈柱（100 mm×2.1 mm，2.5 μm）；柱温40 ℃；进样量5 μL；流动相0.1%（V/V）甲酸水溶液和甲醇；流速0.3 mL/min；流动相梯度洗脱程序见表1。

表  1  梯度洗脱程序

Table  1.  Gradient elution program

时间（min）	0.1%甲酸（%）	甲醇（%）	流速（mL/min）
0	90	10	0.3
3.5	65	35	0.3
6	10	90	0.3
7	10	90	0.3
7.1	90	10	0.3
10	90	10	0.3

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1.2.3.2   质谱条件

电喷雾离子源；正离子扫描、多反应监测模式；去溶剂温度500 ℃；电喷雾电压5.5 kV；入口电压和碰撞室出口电压分别为10、6 V；气体均为高纯氮气；碰撞气、气帘气、雾化气、辅助气压力分别为41.4、207、345、345 kPa。4种喹诺酮类药物质谱参数见表2。

表  2  4种喹诺酮类药物的质谱参数

Table  2.  Mass spectrometry parameters of 4 quinolones

化合物	保留时间（min）	母离子（m/z）	子离子（m/z）	碰撞能量（eV）	去簇电压（V）
氧氟沙星	3.58	362.2	318.1*,261.1	26,38	80
培氟沙星	3.61	334.1	316.1*,290.2	27,25	80
诺氟沙星	3.73	320.1	276.1*,233.1	26,35	80
洛美沙星	4.10	352.0	265.0*,308.1	33,28	80
注：*为定量离子。

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1.2.4   数学模型

根据鲆鲽类水产品中喹诺酮类残留的测定方法，待测物在样品中的残留量计算公式如下：

式中：X—样品中喹诺酮的残留量，μg/kg；c—喹诺酮的校准浓度，μg/L；V—定容体积，mL；f_R—回收率校正因子，等于回收率的倒数；m—试样溶液代表的样品质量，g。

1.3   数据处理

喹诺酮类药物的标准工作曲线和样品含量采用MultiQuant软件处理，文中数据平均值和标准偏差等采用Excel软件处理，公式采用Microsoft公式编辑器软件编辑。

2.   结果与分析

2.1   不确定度的主要来源

根据数学模型，不确定度主要有以下几方面：a.校准浓度的不确定度，包括标准物质纯度、标准溶液配制、标准曲线拟合和高效液相色谱-串联质谱仪等的不确定度；b.样品质量的不确定度，主要是天平的校准的不确定度；c.定容体积的不确定度；d.回收率的不确定度，方法前处理过程复杂，步骤较多，采用对样品添加回收对样品处理过程的不确定度进行评定；e.随机效应的不确定度，包括称量的重复性、体积的重复性、液相色谱-串联质谱仪的重复性等引入的不确定度等。详见图1。

图  1  鲆鲽类水产品中4种喹诺酮类药物残留不确定度来源

Figure  1.  Uncertainty sources for determination of 4 quinolones residues in flatfish

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2.2   校准浓度的不确定度u_rel（c）

2.2.1   标准物质纯度的不确定度u_rel（p）

喹诺酮标准物质纯度（p）及扩展不确定度（U_p）见表3，标准物质标准不确定度计算公式为：${\rm{u}}({\rm{p}}) = \dfrac{{{{\rm{U}}_{\rm{p}}}}}{{\rm{k}}}$，相对不确定度计算公式为：${{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}({\rm{p}}) = \dfrac{{{\rm{u}}({\rm{p}})}}{{\rm{p}}}$。4种喹诺酮纯度的相对不确定度计算结果见表3。

表  3  标准物质的纯度及不确定度

Table  3.  Purity and uncertainty of standard materials

标准物质	纯度（%）	扩展不 确定度Up（%）	包含 因子k	标准不 确定度（%）	相对不 确定度urel（p）
氧氟沙星	99.3	0.69	2	0.345	0.00347
培氟沙星	92.1	2.0	2	1.0	0.0109
诺氟沙星	99.6	1.58	2	0.79	0.00793
洛美沙星	99.4	0.84	2	0.42	0.00422

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2.2.2   标准储备液配制的不确定度u_rel（s）

标准储备液的配制过程参照标准，分别称取按照纯度折算相当于10 mg的喹诺酮标准物质，用甲醇溶解定容于50 mL容量瓶中，包括标准物质称量的不确定度和50 mL容量瓶的不确定度。

a.标准物质称量的不确定度u_rel（m₁）

查询天平的校准证书，其扩展不确定度为0.05 mg（k=2），则2次称量过程（去皮和称样）产生的标准不确定度为：${\rm{u}}({{\rm{m}}_1}) = \sqrt {2 \times {{\left(\dfrac{{0.05}}{2}\right)}^2}} = 0.0354$ mg，u_rel（m₁）详见表4。

表  4  标准储备液配制的不确定度

Table  4.  Uncertainty of standard stock solutions

化合物	纯度（%）	标准物质称取量（mg）	天平扩展不确定度（mg）	包含因子k	标准不确定度u（m1）（mg）	相对不确定度urel（m1）
氧氟沙星	99.3	10.07	0.05	2	0.0354	0.00352
培氟沙星	92.1	10.86	0.05	2	0.0354	0.00326
诺氟沙星	99.6	10.04	0.05	2	0.0354	0.00353
洛美沙星	99.4	10.06	0.05	2	0.0354	0.00352

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b. 50 mL容量瓶的不确定度u_rel（V_{50 mL}）

根据JJG 196-2006《常用玻璃量器检定规程》^[29]，A级50 mL容量瓶的容量允差为±0.05 mL，按三角分布，k=$\sqrt{6}$，则标准不确定度为：${\rm{u}}({{\rm{V}}_1}) = \dfrac{{0.05}}{{\sqrt 6 }} = 0.0204$ mL。在20±5 ℃下操作，甲醇的体积膨胀系数为1.18×10⁻³，按均匀分布，k=$\sqrt{3}$，则由温度效应引入的体积标准不确定度为：${\rm{u}}({{\rm{V}}_2}) = \dfrac{{{\rm{1}}{\rm{.18}} \times {\rm{1}}{{\rm{0}}^{{\rm{ - 3}}}} \times 5 \times 50}}{{\sqrt 3 }} = 0.170$ mL，则50 mL容量瓶的标准不确定度为：${\rm{u}}({{\rm{V}}_{50\; {\rm{ mL}}}}) = \sqrt {{\rm{u}}({{\rm{V}}_1}) + {\rm{u}}({{\rm{V}}_2})} =$$0.171$ mL，相对确定度为：u_rel（V_{50 mL}）=0.00342。

则标准储备液配制的相对不确定度为：${{\rm{u}}_{\rm{rel}}}({\rm{s}}) =$$\sqrt {{{\rm{u}}_{\rm{rel}}}{{({{\rm{m}}_1})}^2} + {{\rm{u}}_{\rm{rel}}}{{({V_{50\;{\rm{mL}}}})}^2}}$，氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星和洛美沙星标准储备液配制的相对不确定度u_rel（s）分别为0.00491、0.00472、0.00492、0.00491。

2.2.3   配制混合标准溶液的不确定度u_rel（ms）

a.10 mg/L混合标准溶液的配制引入的不确定度u_rel（10 mg/L）

移取5 mL 4种喹诺酮类标准储备溶液至100 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容。A级单标线5 mL吸量管的容量允差为±0.015 mL，按三角分布，则${\rm{u}}({{\rm{V}}_3}) =$$\dfrac{{0.015}}{{\sqrt 6 }} = 0.00612$ mL，u_rel（V₃）=0.00122。

A级100 mL容量瓶的容量允差为±1 mL，按三角分布，则${\rm{u}}({{\rm{V}}_4}) = \dfrac{{0.1}}{{\sqrt 6 }} = 0.0408$ mL。在20±5 ℃下操作，甲醇的体积膨胀系数为1.18×10⁻³，按照均匀分布，k=$\sqrt{3}$，则由温度效应引入的体积标准不确定度为：${\rm{u}}({{\rm{V}}_5}) = \dfrac{{{\rm{1}}{\rm{.18}} \times {\rm{1}}{{\rm{0}}^{{\rm{ - 3}}}} \times 5 \times 100}}{{\sqrt 3 }} = 0.341$ mL。100 mL容量瓶的标准不确定度为：${\rm{u}}({{\rm{V}}_6}) = \sqrt {{\rm{u}}({{\rm{V}}_4}) + {\rm{u}}({{\rm{V}}_5})} = 0.343$ mL，相对不确定度为：u_rel（V₆）=0.00343。

配制10 mg/L混合标准溶液的相对不确定度由以上分量合成计算为：${{\rm{u}}_{\rm{rel}}}(10\;{\rm{mg}}/{\rm{L}}) = \sqrt {{{\rm{u}}_{\rm{rel}}}{{({{\rm{V}}_3})}^2} + {{\rm{u}}_{\rm{rel}}}{{({{\rm{V}}_6})}^2}} =$${\rm{0}}{\rm{.00364}}$。

b.0.5 mg/L混合标准溶液的配制引入的不确定度u_rel（0.5 mg/L）

使用1000 μL移液器吸取500 μL移液器10 mg/L标准溶液，移至10 mL容量瓶（A级）中，用甲醇定容。根据JJG 646-2006《移液器检定规程》，1000 μL移液器在500 μL时的容量允差为±1%，即±5 μL，按三角分布，k=$\sqrt{6}$，标准不确定度为：${\rm{u}}({{\rm{V}}_7}) = \dfrac{5}{{\sqrt 6 }} = 2.04$ μL，相对不确定度为u_rel（V₇）=0.00408。

A级10 mL容量瓶的容量允差为±0.02 mL，按三角分布，k=$\sqrt{6}$，标准不确定度为：${\rm{u}}({{\rm{V}}_8}) = \dfrac{{0.02}}{{\sqrt 6 }} =$$0.00816$ mL。在20±5 ℃下操作，甲醇的体积膨胀系数为1.18×10⁻³，按照均匀分布，k=$\sqrt{3}$，则由温度效应引入的体积标准不确定度为：${\rm{u}}({{\rm{V}}_9}) = \dfrac{{{\rm{1}}{\rm{.18}} \times {\rm{1}}{{\rm{0}}^{{\rm{ - 3}}}} \times 5 \times 10}}{{\sqrt 3 }} =$$0.0341$ mL，则10 mL容量瓶的标准不确定度合成计算为0.0351 mL，相对不确定度为u_rel（V₁₀）=0.00351。

0.5 mg/L标准溶液的配制过程的相对不确定度为：${{\rm{u}}_{\rm{rel}}}(0.5\;{\rm{mg}}/{\rm{L}}) = \sqrt {{{\rm{u}}_{\rm{rel}}}{{({{\rm{V}}_7})}^2} + {{\rm{u}}_{\rm{rel}}}{{({{\rm{V}}_{10}})}^2}} = {\rm{0}}{\rm{.00538}}$。

配制混合标准溶液的不确定度${{\rm{u}}_{\rm{rel}}}({\rm{ms}}) =$$\sqrt {{{\rm{u}}_{\rm{rel}}}{{(10\;{\rm{mg}}/{\rm{L}})}^2} + {{\rm{u}}_{\rm{rel}}}{{(0.5\;{\rm{mg}}/{\rm{L}})}^2}} = {\rm{0}}{\rm{.00650}}$。

2.2.4   配制标准系列溶液的不确定度u_rel（curve）

配制标准系列使用了20~200 μL和100~1000 μL量程的可调式移液器，根据JJG 646-2006 《移液器检定规程》^[30]，各浓度点移取体积的容量允差见表5，按三角分布，k=$\sqrt{6}$。

表  5  标准溶液配制的不确定度

Table  5.  Uncertainty of standard solution preparation

标准溶液浓度（μg/L）	移液器				10 mL容量瓶的相对不确定度urel（V13）	相对不确定度
	规格（μL）	移取体积（μL）	容量允差（±μL）	相对不确定度
1	200	20	0.8	0.0163	0.00101	0.0163
5	200	100	2	0.0082	0.00101	0.0083
10	200	200	3	0.0061	0.00101	0.0062
50	1000	1000	10	0.0041	0.00101	0.0042
100	1000	2×1000	10	0.0058	0.00101	0.0059

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由2.2.3知，10 mL容量瓶校准的标准不确定度${\rm{u}}({{\rm{V}}_{11}}) = 0.00816$ mL。在20±5 ℃下操作，定容溶剂为甲醇−0.1%（V/V）甲酸水溶液（1:9），按水的膨胀系数2.08×10⁻⁴计算，按均匀分布，则${\rm{u}}({{\rm{V}}_{12}}) = \dfrac{{{\rm{2}}.08 \times {\rm{1}}{{\rm{0}}^{{\rm{ - 4}}}} \times 5 \times 10}}{{\sqrt 3 }}$$=0.00600$ mL。则10 mL容量瓶的不确定度为：${\rm{u}}({{\rm{V}}_{13}}) =$$\sqrt {{\rm{u}}({{\rm{V}}_{11}}) + {\rm{u}}({{\rm{V}}_{12}})} = 0.0101$ mL，u_rel（V₁₃）=0.00101。各浓度点的不确定度计算详见表5。

则合成计算后配制标准系列溶液的不确定度u_rel（curve）=0.0206。

2.2.5   最小二乘法拟合标准曲线校准的不确定度u_rel（cal）

5个浓度标准系列溶液分别上机测定3次，以标准系列溶液的浓度（μg/L）为横坐标，3次进样定量离子对平均峰面积为纵坐标，采用最小二乘法拟合，得到线性回归方程A=ac+b（a为斜率，b为截距）和线性相关系数r，结果见表6。

表  6  标准工作曲线拟合的不确定度

Table  6.  Uncertainty of standard curve

化合物	方程	相关系数r	样品平均含量（μg/L）	S（A）	urel（cal）
氧氟沙星	A=57883c+21012	0.9999	22.62	64672	0.0318
培氟沙星	A=32728c+3421.2	0.9997	24.82	48053	0.0379
诺氟沙星	A=9545.1c+5184.5	0.9995	22.28	17988	0.0546
洛美沙星	A=43755c+4543.9	0.9997	23.59	53141	0.0331

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标准曲线的拟合标准偏差按照下列公式计算：

式中：c_i为标准系列浓度，A_i为对应的峰面积，a为标准曲线斜率，b为标准曲线截距，n为标准系列溶液测定总次数（本实验为5×3=15）。

样品平行测定3次，根据标准曲线方程求得平均浓度。则拟合标准曲线的标准不确定度按下式计算：

式中：S（A）如前所述；a为斜率；p为测定次数，这里为3；n=15；c为样品平均浓度；$\overline {{{\rm{c_s}}}}$为标准系列的平均浓度，这里为33.2 μg/ L；

由最小二乘法拟合标准工作曲线引入的相对不确定度计算结果见表6。

2.2.6   高效液相色谱-串联质谱仪的不确定度u_rel（LCMS）

查询高效液相色谱-串联质谱仪的校准证书，仪器的相对扩展不确定度为5.2%（k=2），则由高效液相色谱-串联质谱仪引入的相对不确定度u_rel（MS）为0.026。

2.2.7   校准浓度的不确定度的合成

综合以上各分量，得出校准浓度引入的不确定度计算公式：${{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}({\rm{c}}) =$$\sqrt {{{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}{{({\rm{p}})}^2} + {{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}{{({\rm{s}})}^2} + {{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}{{({\rm{ms}})}^2} + {{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}{{({\rm{curve}})}^2} + {{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}{{({\rm{cal}})}^2} + {{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}{{({\rm{LCMS}})}^2}}$。4种喹诺酮类药物校准浓度的不确定度计算结果为：u_rel（c）_氧氟沙星=0.0468；u_rel（c）_培氟沙星=0.0522；u_rel（c）_诺氟沙星=0.0649；u_rel（c）_洛美沙星=0.0478。

2.3   样品质量的不确定度u_rel（m）

称样量为5.00 g，电子天平的校准证书给出扩展不确定度为0.05 g（k=2），称量2次（一次去皮，一次称样），标准不确定度和相对不确定度分别为：

2.4   定容体积的不确定度u_rel（V）

样品用刻度试管定容至1 mL，1 mL刻度试管容量允差为±0.008 mL，按三角分布，则${\rm{u}}({{\rm{V}}_{13}}) = \dfrac{{0.008}}{{\sqrt 6 }} =$$0.00327$ mL，在20±5 ℃下操作下，按水的膨胀系数2.08×10⁻⁴计算，均匀分布，则 ${\rm{u}}({{\rm{V}}_{14}}) = \dfrac{{2.08 \times {{10}^{ - 4}} \times 5 \times 1}}{{\sqrt 3 }} =$$0.00060$ mL。则定容体积的不确定度为：${\rm{u}}({\rm{V}}) =$$\sqrt {{\rm{u}}{{({{\rm{V}}_{13}})}^2} + {\rm{u}}{{({{\rm{V}}_{14}})}^2}} = 0.00332$ mL，${{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}({\rm{V}}) = \dfrac{{0.00332}}{1} = 0.00332$。

2.5   回收率的不确定度u_rel（R）

向样品中添加10 μg/kg各喹诺酮标准物质，平行测定6次，计算平均回收率和标准偏差，相对不确定度为${{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}({\rm{R}}) = \dfrac{{{\rm{S}}({\rm{R}})}}{{\sqrt 6 \times {\rm{\bar R}}}}$，计算结果见表7。

表  7  回收率的不确定度

Table  7.  Uncertainty of recoveries

化合物	回收率（%）						平均值${\rm{\bar R}}$（%）	标准偏差S（R）（%）	相对不确定度urel（R）
	1	2	3	4	5	6
氧氟沙星	96.0	87.6	95.6	87.3	91.7	96.0	91.6	4.18	0.0186
培氟沙星	87.2	88.4	88.1	91.6	90.2	87.2	89.1	1.77	0.0081
诺氟沙星	99.1	101.0	95.7	96.3	104.1	99.1	99.2	3.46	0.0142
洛美沙星	96.4	95.1	96.9	99.6	100.5	96.4	97.7	2.27	0.0095

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用t检验对回收率进行显著性检验，计算公式为${{t}} = \dfrac{{\left| {100\text{%} - {\rm{\bar R}}} \right|}}{{{\rm{S}}({\rm{R}})}}$，取P=0.95，查阅t检验表，t_{（0.05，5）}=2.57，即当t值大于2.57时，则${\rm{\overline R}}$与100%有显著性差异，f_rec必须在计算公式中采用以修正结果，否则${\rm{\bar R}}$与100%无显著性差异，不需要f_rec修正结果。计算结果氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星和洛美沙星的t值分别为：2.00、6.15、0.22和1.01，因此培氟沙星回收率因子f_rec必须在计算公式中采用，其他3种不需要。

2.6   随机效应的不确定度u_rel（A）

随机效应的不确定度包括由称量、定容等过程中随机效应不确定度的加和，为不确定度的A类评定，采用对同一样品平行测定6次，计算其标准偏差，结果见表8。

表  8  随机效应的不确定度

Table  8.  Uncertainty of repeatability

化合物	测定值（μg/kg）						平均值	标准偏差	相对不确定度urel（A）
	1	2	3	4	5	6
氧氟沙星	9.73	9.95	9.40	8.68	9.02	8.77	9.26	0.520	0.0229
培氟沙星	9.08	8.76	9.15	8.69	9.17	9.01	8.98	0.204	0.0093
诺氟沙星	9.28	9.50	10.36	9.96	9.59	9.68	9.73	0.381	0.0160
洛美沙星	9.77	10.00	9.71	8.97	9.60	9.37	9.57	0.359	0.0153

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2.7   合成不确定度

不确定度分量详见表9。测定结果的相对合成不确定度为：${{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}} = \sqrt {{{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}{{({\rm{c}})}^2} + {{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}{{({\rm{m}})}^2} + {{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}{{({\rm{V}})}^2} + {{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}{{({\rm{R}})}^2} + {{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}}{{({\rm{A}})}^2}}$。

表  9  不确定度分量汇总表

Table  9.  Summary of each uncertainty component

不确定度分量	不确定度来源	氧氟沙星	培氟沙星	诺氟沙星	洛美沙星
urel（c）	校准浓度	0.0468	0.0522	0.0649	0.0478
urel（m）	样品质量	0.0071	0.0071	0.0071	0.0071
urel（V）	定容体积	0.00332	0.00332	0.00332	0.00332
urel（R）	回收率	0.0186	0.0081	0.0142	0.0095
urel（A）	测试过程随机效应	0.0229	0.0093	0.016	0.0153
urel	合成相对不确定度	0.0559	0.0542	0.0688	0.0517

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2.8   扩展不确定度及结果报告

取包含因子k=2，则扩展不确定度：${\rm{U}} = {{\rm{u}}_{{\rm{rel}}}} \times {\rm{\bar X}} \times {\rm{k}}$，测定结果可以表述为：${\rm{\bar X}}$±U，k=2。计算结果见表10。

表  10  鲆鲽类水产品中4种喹诺酮类残留测定不确定度评定结果

Table  10.  Uncertainty evaluation result for determination of 4 quinolones residues in flatfish

项目	氧氟沙星	培氟沙星	诺氟沙星	洛美沙星
合成相对不确定度	0.0559	0.0542	0.0688	0.0517
实测值（μg/kg）	9.26	8.98	9.73	9.57
回收率修正值（μg/kg）	/	10.08	/	/
扩展不确定度U（k=2，μg/kg）	1.04	1.09	1.34	0.99
测定结果（k=2，μg/kg）	9.26±1.04	10.08±1.09	9.73±1.34	9.57±0.99

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3.   结论

本研究建立了测定鲆鲽类水产品中氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星和洛美沙星残留量过程中的不确定度评定方法，分析不确定度的来源并计算，得出扩展不确定度并报告了检测结果。从评定结果看，不确定度的主要贡献来自于标准曲线的拟合、高效液相色谱-串联质谱仪和标准溶液配制，应当注意标准曲线的配制和保持仪器的良好状况。不确定度的评定和分析对进出口鲆鲽类水产品中喹诺酮类药物残留检测中的质量控制有参考意义。