Effect Evaluation of Liupao Tea on Improving Phlegm-dampness Constitution and Mechanism of Clearing Damp on Intestinal Microbiota
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摘要: 为研究六堡茶调理亚健康状态痰湿体质的有效性，并探究其作用机制，本研究以六堡茶新茶和五年陈化茶（10 g，200 mL沸水浸泡2 min口服，每日2次）作为干预手段，纳入亚健康状态痰湿质人群进行随机、对照的临床试验，进行90 d的标准化干预，记录干预前后与痰湿质有关的中医诊断指标、血液生化指标，并重点分析肠道菌群的变化。结果显示，六堡茶新茶干预组和陈茶干预组在干预后痰湿质转化分均有下降趋势，其中六堡茶新茶干预组在干预后的25、45和90 d三个时间点痰湿质转化分差异有显著性（P<0.05）。六堡茶新茶及五年陈茶干预均有助于痰湿质体质改善，其中新茶起效较快。生化结果显示，六堡茶陈茶和新茶均具有降低胆红素的作用，陈茶作用较为明显，差异具有统计学意义（P<0.05）。肠道菌群分析显示，六堡茶干预后，六堡茶新茶干预组拟杆菌门（Bacterioidetes）水平下降为0.49±0.17、厚壁菌门（Firmicutes）水平上升至0.42±0.23，六堡茶陈茶干预组拟杆菌门（Bacterioidetes）水平下降为0.48±0.35、厚壁菌门（Firmicutes）水平上升至0.45±0.08；嗜胆菌（Bilophila）的相对丰度提高至六堡茶新茶干预组的0.0024±0.0013和六堡茶陈茶干预组的0.0022±0.0034，改变了肠道菌群中的厚壁菌门和拟杆菌门的相对比例, 促进嗜胆菌增殖。与代谢疾病、能量代谢有关的萨特氏菌属（Sutterella）、Izimaplasmatales菌和瘤胃球菌属（Ruminococcus）的相对丰度水平发生改变，因此六堡茶可能通过调节肠道微生态，改善痰湿质等亚健康人群的代谢状态。Abstract: To investigate the efficacy of Liupao tea on regulating phlegm-dampness constitution in sub-health state and the mechanism, a randomized, controlled clinical trial of 90-day was taken using Liupao fresh and aged tea with the intervention dose of 10 g soaked in boiling water of 200 ml for 2 min, twice a day as the intervention means. Traditional Chinese medicine diagnostic indexes and blood biochemical indexes related to phlegm-dampness were recorded before and after intervention, and the change of intestinal flora was analyzed. The results indicated that the phlegm-dampness quality translation score showed a decreasing trend in the middle and end of the intervention among the fresh tea intervention group and aged tea intervention group. The ANOVA results showed the phlegm-dampness quality translation score of fresh tea intervention group had significant differences at three time points of 25, 45 and 90 d after intervention (P<0.05). The intervention of Liupao tea could improve the phlegm-dampness constitution slowly and the effect of fresh tea was slightly faster. Biochemical results showed that Liupao tea had the effect of reducing bilirubin (total bilirubin and direct bilirubin). The effect of aged tea was obvious and the difference was statistically significant (P<0.05). Intestinal flora results showed that the level of Bacterioidetes decreased to 0.49±0.17 in fresh tea intervention group and 0.48±0.35 in aged tea intervention group, while the level of Firmicutes increased to 0.42±0.23 in fresh tea intervention group and 0.45±0.08 in aged tea intervention group after intervention. The relative abundance of Bilophila increased to 0.0024±0.0013 in fresh tea intervention group and 0.0022±0.0034 in aged tea intervention group. Liupao tea changed the relative proportion of Firmicutes and Bacteroidetes in the intestinal flora, promoted the increase of Bilophila, thus Liupao tea may improve the metabolism of blood bilirubin by regulating the bile acid pathway. The relative abundance of Sutterella, Izimaplasmatales and Ruminococcus, which are related to metabolic diseases and energy metabolism, were changed during the experiment. Therefore, Liupao tea may improve the metabolic state of sub-health people by regulating intestinal microbiota.
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痰湿质是一种病理体质，由于水液内停而痰湿凝聚所致，主要特征为黏滞重浊[1]。流行病学调查显示，我国一般人群中痰湿体质所占比例为7.32%[2]。痰湿质是代谢综合征形成的风险因素，与其发展预后有着密切关系[3-6]。“痰湿体质土壤论”认为，通过调节痰湿质状态，可以实现高血脂、高血糖、高血压等代谢类疾病的“异病同防”[7-9]。痰湿质还与特定人群肝内胆汁淤积症相关[10]，因此，应用清热利湿方剂有助于改善痰湿质人群的胆汁淤积症[11]。油腻饮食与痰湿质的形成相关，多食过量导致脾胃运化不及易形成痰湿[12]；反之，痰湿质之人体内痰湿之邪盛，易困阻脾阳，脾再生湿，相互影响，导致脾系亚健康状态的出现[13-18]。现代研究认为，肠道菌群紊乱影响消化功能，是脾虚湿困的重要病理因素[19]。与平和质相比，痰湿质中老年人肠道菌群的丰度及多样性均显著降低，拟杆菌门相对丰度较低，而厚壁菌门相对丰度较高，双歧杆菌等厌氧菌减少[20]。
中医体质学说认为“体质可调”，其调节方式包括心理、运动、饮食调整及适当的中药、针灸等方法[21-22]。薏苡仁、莲子、山药、陈皮、冬瓜、山楂等食药同源食物具有健脾祛湿的作用，在药理学上表现为抗菌、降脂、利尿、改善血管功能、调节肠道菌群、调节免疫力等作用[23-25]。六堡茶是黑茶的一种，产自广西壮族自治区梧州市苍梧县六堡镇，其品质成分的形成与渥堆、窖藏等环节的微生物转化紧密相关。随着陈化时间延长，六堡陈茶中茶褐素和茶多糖增加，茶黄酮和酚酸进一步发生转化，形成新结构的化合物[26]。六堡茶具有抗氧化、调节糖脂代谢、保护肝脏、增强免疫功能、促消化、抗凝血、促进胃排空和小肠推进作用[27-30]，与健脾祛湿类食药同源物品有相似的药理作用特点，特别是对于高脂饮食大鼠体现为抑制乙酸分泌、促进丙酸和丁酸分泌的作用[31]；促进双歧杆菌、乳酸杆菌、拟杆菌和肠球菌等厌氧菌的生长，并抑制需氧菌生长[29]。因此，民间所说六堡茶具有“祛湿”作用，可能与调节肠道菌群、促进代谢相关。但是，六堡茶的祛湿作用尚未得到论证，其可能的机制也尚未进行阐述。
本研究纳入亚健康状态痰湿质人群进行随机、对照的临床试验，考察六堡茶改善痰湿质的作用，以及重点围绕肠道菌群对其可能的机制进行探讨，为其合理应用和推广提供科学依据。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
六堡茶供试样本 梧州中茶茶业有限公司提供；空腹血糖（FBG）、总胆红素与直接胆红素（TBIL、DBIL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）试剂盒 中生北控生物科技股份有限公司；DNA分离提取（MOBIO PowerSoil DNA Isolation）试剂盒 深圳市安必胜科技有限公司。
ALLEGRAX-25R多功能高速冷冻离心机 美国贝克曼库尔特有限公司；ThermoForma5995超低温冰箱 赛默飞世尔科技（中国）有限公司；Milli-Q Reference纯水仪 德国默克集团有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 研究对象的选择标准及分组
依据《中医体质分类与判定表》和人群亚健康调查问卷，选择18~30周岁健康平和体质及痰湿质体质人群作为研究对象，其中平和质以体态适中、面色红润、精力充沛、脏腑功能状态强健壮实为主要特征，痰湿质以体型肥胖、腹部肥满、口黏苔腻等痰湿表现为主要特征[32]。
采用人群随机对照研究，共纳入健康平和质42人，痰湿质70人。在干预期间，将所有人群分为4组，健康平和质人群为平和质对照组（PH），痰湿质人群分为痰湿质对照组（TS Control，27人）、六堡茶新茶干预组（Tea，24人）、六堡茶陈茶干预组（Aged Tea，19人），进行两疗程（45 d/疗程，共90 d）的标准化干预及评价，干预方式见1.2.2。本研究经中国注册临床试验伦理审查委员会伦理审查，文号：ChiECRCT20190168，中国临床试验注册中心临床研究注册号码：ChiCTR1900026342。
1.2.2 六堡茶干预物制作及干预方法
毛茶经筛选、拼配、渥堆、蒸、压制成型、陈化（相对湿度在75%~90%、温度在23~28 ℃）等工艺制成新茶成品。新茶成品转至清洁、阴凉、干爽、无异杂味的仓库中继续陈化五年后，制得六堡茶五年陈茶样品。
平和质对照组（PH）、痰湿质对照组（TS Control）给予生活方式指导，包括膳食营养指导、体力活动指导、睡眠指导[22]。六堡茶新茶干预组（Tea）、六堡茶陈茶干预组（Aged Tea）除生活方式指导外，分别给予六堡茶新茶、六堡茶五年陈茶干预，每次1袋（10 g），200 mL沸水浸泡2 min口服，每日2次，服用两个疗程（45 d/疗程）。
1.2.3 体质转化分计算
体质得分（转化分）采用中医体质调查表对体质的转化进行评价，按照《中医体质分类与判定表》评分，每一问题按5级评分，每个条目原始最低分是1分，最高分是5分，计算原始分及转化分，依标准判定体质类型。原始分=各条目的分数相加。痰湿质转化分数=[（原始分−条目数）/（条目数×4）] ×100，按照公式计算干预0、25、45和90 d体质转化分数。平和质转化分大于等于60分且其他八种体质转化分均小于30分，记为平和体质。痰湿质转化分大于等于40分且平和质转化分小于60分、其他七种体质转化分不高于40分，记为痰湿质。
1.2.4 生化指标测定
试验第0、25和45 d上午10点抽取静脉血5 mL于EP管中，血浆样品静置2 h后，3500 r/min、4 ℃条件下离心10 min取上清液，严格按照试剂盒要求进行血清FBG、TBIL、DBIL、ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C的测定。
1.2.5 肠道微生物16S基因靶向测序分析
试验第0、25和45 d留取粪便样品3~5 g于取样管中（内含裂解液和稳定液），由深圳谱元科技有限公司完成肠道微生物16S基因靶向测序分析[33]。
1.3 数据处理
试验结果通过SPSS 20.0统计软件进行统计分析，采用平均数±标准差表示，各组比较应用ANOVA分析，P<0.05为差异具有统计学意义。
2. 结果与分析
2.1 六堡茶干预后痰湿质改善情况
六堡茶干预后痰湿质改善结果如图1所示，与平和质对照组相比，痰湿质对照组的痰湿质转化评分会出现明显的升高趋势。六堡茶陈茶干预组和新茶干预组在干预25、45和90 d三个时间点的痰湿质转化分均有下降趋势，六堡茶陈茶干预组痰湿质转化分从0 d的38.97±7.10下降到25 d的36.57±5.68、45 d的33.72±3.12和90 d的27.80±3.49，六堡茶新茶干预组由0 d的40.76±7.95下降到25 d的30.86±4.87、45 d的29.76±5.42和90 d的24.29±2.94。六堡茶新茶干预组在干预25、45和90 d的痰湿质转化分均与痰湿质对照组有显著差异（P<0.05），六堡茶陈茶干预组痰湿质转化分在干预45 d之后与痰湿质对照组相比有所下降，且在干预90 d时，与痰湿质对照组有显著差异（P<0.05）。
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图 1 试验各组痰湿质转化评分注：与PH组比较，#表示P<0.05，##表示P<0.01；与TS Control组比较，*表示P<0.05，**表示P<0.01。Figure 1. The phlegm-dampness quality translation score of each group2.2 六堡茶干预对血液生化指标的影响
本试验分别对干预前（0 d）、第一疗程中期（25 d）和第一疗程干预末期（45 d）三个时间节点的空腹血糖（FBG）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）进行检测，结果如图2、图3、图4和图5所示。
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图 3 试验各组总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平Figure 3. The total cholesterol, triglycerides, high-density lipoprotein cholesterol and low-density lipoprotein cholesterol of each group2.2.1 六堡茶干预对空腹血糖的影响
实验干预45 d后，平和质对照组空腹血糖水平为（4.74±0.37）mmol/L，痰湿质对照组为（4.67±0.29）mmol/L，六堡茶新茶干预组和六堡茶陈茶干预组空腹血糖分别为（4.78±0.32）、（4.74±0.26）mmol/L，与平和质对照组和痰湿质对照组相比，六堡茶新茶干预和陈茶干预对空腹血糖无显著影响(P>0.05)。
2.2.2 六堡茶干预对血脂水平的影响
六堡茶陈茶和新茶干预后，总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇均有一定程度的下降趋势，六堡茶陈茶干预组总胆固醇由0 d的（4.58±0.97）mmol/L下降为45 d的（4.44±0.83）mmol/L，高密度脂蛋白胆固醇由（1.53±0.38）mmol/L（0 d）下降至（1.44±0.34）mmol/L（45 d），低密度脂蛋白胆固醇由（2.62±0.94）mmol/L（0 d）下降至（2.51±0.82）mmol/L（45 d）；六堡茶新茶干预组总胆固醇由（4.64±0.81）mmol/L（0 d）下降至（4.41±0.70）mmol/L（45 d），高密度脂蛋白胆固醇由（1.54±0.29）mmol/L（0 d）下降至（1.47±0.34）mmol/L（45 d），低密度脂蛋白胆固醇由（2.68±0.72）mmol/L（0 d）下降至（2.51±0.66）mmol/L（45 d），但与平和质对照组、痰湿质对照组相比，变化没有显著性差异(P>0.05)，且下降后的值在正常范围内。本试验所纳入人群的甘油三酯水平整体较低，干预第25 d和45 d，六堡茶新茶干预组和六堡茶陈茶干预组的甘油三酯较0 d略有升高（其原因可能与受试人群的饮食结构和习惯有关），但均在正常值范围内，说明本试验中六堡茶的干预对正常范围内的血脂水平没有显著影响。
2.2.3 六堡茶干预对胆红素的影响
六堡茶陈茶和新茶干预后，六堡茶陈茶干预组的总胆红素由（14.31±8.42）μmol/L（0 d）下降至（8.24 ±3.72）μmol/L（45 d），六堡茶新茶干预组的总胆红素由0 d的（11.25±5.30）μmol/L下降至45 d的（8.34±3.70）μmol/L。六堡茶陈茶干预组直接胆红素由（5.79±3.44）μmol/L（0 d）下降为（3.52±1.58）μmol/L（45 d），六堡茶新茶干预组直接胆红素由0 d的（4.34±2.00）μmol/L变化为45 d的（3.43±1.41）μmol/L。即六堡茶陈茶和新茶均具有降低胆红素（总胆红素和直接胆红素）的作用，其中六堡茶陈茶干预组在45 d干预期内下降值更为明显，说明其对于总胆红素和直接胆红素的调节作用较为明显。
2.2.4 六堡茶干预对肝功的影响
丙氨酸氨基转移酶（ALT）及天冬氨酸氨基转移酶（AST）是反映肝功的重要指标，常用于肝脏或消化系统性疾病的诊断以及评估[34]，各组检测结果见图5。结果显示，在整个干预期内，ALT及AST均保持在正常水平，即40 U/L以下。各组ALT及AST均出现一定的下降趋势，六堡茶陈茶干预后，ALT由（33.53±27.85）U/L（0 d）下降为（29.10±25.43）U/L（45 d），AST由0 d的（21.26±11.88）U/L下降为45 d的（17.00±6.76）U/L；六堡茶新茶干预组，ALT由（18.67±9.54）U/L（0 d）下降至（16.09±11.22）U/L（45 d），AST由（16.30±5.76）U/L（0 d）下降为（14.17±5.52）U/L（45 d），但无显著差异（P>0.05)，说明六堡茶饮茶干预对于ALT和AST影响作用不显著。
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图 5 试验各组丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶水平Figure 5. The alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase of each group2.2.5 体质与血生化指标相关性分析
通过血生化检测指标与平和质转化分、痰湿质转化分相关性分析发现（图6），痰湿质转化分与丙氨酸氨基转移酶呈正相关（P<0.05，相关系数为0.131），与总胆红素呈极显著负相关（P<0.01，相关系数为−0.139），与直接胆红素呈显著负相关（P<0.05，相关系数为−0.141），与其他生化指标相关性不显著（P>0.05）。庄耀东等[35]指出代谢综合征与中医的“痰浊”或“痰湿”关系密切，研究结果为痰湿质转化分与直接胆红素呈负相关，与本实验结果一致。同时痰湿质转化分与胆固醇和甘油三酯呈正相关，而本实验结果显示痰湿质转化分与胆固醇和甘油三酯相关性不显著（P>0.05），其原因可能是本实验所招募人群年龄普遍较轻，存在高血脂的人群占比较小，有待后续进一步证实。
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图 6 痰湿质转化分与血生化指标相关性热图注：*表示在 0.05水平（双侧）上显著相关，**表示在 0.01水平（双侧）上极显著相关。Figure 6. Correlation heat-map between phlegm-dampness quality translation score and blood biochemical indicators2.3 六堡茶干预对肠道菌群的影响
采用干预后（45 d）的肠道菌群丰度数据分析肠道菌群α-多样性及门属水平变化情况，多样性分析包含丰富度（Obeserved_OTUs，反映样品中含有的物种数目，数值越高表明样品物种丰富度越高）和均匀度（Shannon指数，评估样本中物种组成的丰富度和均匀度，值越大表示该环境的物种越丰富，各物种分配越均匀）[36]。
从图7A可以看出，平和对照组、痰湿对照组与六堡茶新茶干预组的Obeserved _OTUs值相差不大，而六堡茶陈茶干预组的Obeserved_OTUs值低于其他三组，说明六堡茶新茶对肠道菌群物种丰富度影响较小，而六堡茶陈茶对肠道菌群物种丰富度影响大于新茶，其物种丰富度稍小于其他各组。从图7B可以看出，平和质组、痰湿对照组、新茶干预组的Shannon指数相差不大，各组均匀度基本一致，六堡茶陈茶干预组略有下降，但组内差异较大。六堡茶新茶经陈放数年后，小分子物质氧化、聚合以及被微生物分解、利用，形成六堡茶陈茶，水浸出物增加，且大分子物质增加，更容易到达肠道，从而影响肠道微生态，这可能是六堡茶陈茶干预组肠道微生物物种丰富度和均匀度稍小的原因之一，有待后续进一步进行论证。
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图 7 六堡茶干预对肠道菌群α-多样性的影响注：#表示与其他组差异显著P<0.05。Figure 7. Effect of Liupao tea on α-diversity从肠道菌群门水平变化来看（如图8所示），痰湿质对照组中拟杆菌门（Bacterioidetes）水平下降，相对丰度由平和质对照组的0.52±0.28变化为0.51±0.06，厚壁菌门（Firmicutes）水平有所上升，由平和质对照组的0.39±0.14变化为0.41±0.13；饮茶后这一变化更为显著，六堡茶新茶干预组拟杆菌门（Bacterioidetes）相对丰度下降为0.49±0.17、厚壁菌门（Firmicutes）相对丰度上升至0.42±0.23，六堡茶陈茶干预组拟杆菌门（Bacterioidetes）相对丰度下降为0.48±0.35、厚壁菌门（Firmicutes）相对丰度上升至0.45±0.08，以六堡茶陈茶干预变化更为明显。
从肠道菌群属水平变化来看（如图9所示），痰湿质对照组的需氧菌大肠杆菌/志贺菌（Escherichia-Shigella，需氧菌）的相对丰度为0.013±0.026，略高于平和质对照组（丰度为0.010±0.016），饮茶后下降，六堡茶新茶干预组相对丰度为0.009±0.012，六堡茶陈茶干预组相对丰度为0.005±0.034，以六堡茶陈茶干预后下降更为明显，提示肠道健康情况得到改善。痰湿质对照组的拟杆菌属（Bacteroides）和考拉杆菌属（Phascolarctobacterium）的相对丰度（分别为0.29±0.16、0.034±0.021）比平和质对照组高（分别为0.26±0.18、0.030±0.028），六堡茶新茶干预使得拟杆菌属（Bacteroides）和考拉杆菌属（Phascolarctobacterium）的相对丰度降低，分别为0.24±0.17、0.027±0.013。痰湿质对照组的粪杆菌属（Faecalibacterium）相对丰度（0.091±0.059）比平和质对照组略低（0.094±0.057），新茶和陈茶干预均使得粪杆菌属（Faecalibacterium）的相对丰度略有升高（0.092±0.025、0.094±0.041），粪杆菌属与丁酸代谢等密切相关，丁酸与肠道屏障改善、炎症改善等密切相关[37]。与平和质对照组相比，痰湿质对照组的嗜胆菌（Bilophila）相对丰度升高，由0.0019±0.0020上升为0.0021±0.0022，与摄入油腻饮食的菌群变化现象一致[12]。嗜胆菌的作用可能是降低动物性饮食带来的心血管风险[38]，饮用六堡茶后，嗜胆菌（Bilophila）的相对丰度提高至六堡茶新茶干预组的0.0024±0.0013和六堡茶陈茶干预组的0.0022±0.0034，以六堡茶新茶干预组升高更为明显。嗜胆菌可在胆汁酸丰富的肠道中增殖，其相对丰度的升高，表明饮用六堡茶后胆汁酸分泌进一步增加，可能是解腻、去痰湿的机制之一。
2.4 体质与菌群相关性分析
通过《中医体质分类及判定表》所定的人群体质类型，对试验所纳入人群的肠道菌群进行检测，通过平和质转化分、痰湿质转化分与目水平菌群的相关性进行分析，如图10所示。结果显示痰湿质转化分与Bifidobacteriales菌、Sphingomonadales菌、Izimaplasmatales菌呈显著正相关（P<0.05，相关系数分别为0.130、0.120、0.131），与Synergistales菌呈显著负相关（P<0.01，相关系数为−0.152），且在六堡茶干预后，Bifidobacteriales菌、Sphingomonadales菌、Izimaplasmatales菌的丰度呈下降趋势、Synergistales菌丰度呈上升趋势，即肠道微生物中含有更高丰度的Bifidobacteriales菌、Sphingomonadales菌、Izimaplasmatales菌和更低丰度的Synergistales菌的人群在体质上更偏向痰湿质体质，更易被六堡茶干预，达到改善痰湿质体质的效果。
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图 10 体质转化分与目水平菌群相对丰度水平相关性Figure 10. The correlation between traditional Chinese medicine constitution translation score and gut microbiota in the level of order3. 讨论与结论
人群随机对照研究显示，经六堡茶陈茶和新茶干预后，六堡茶陈茶干预组痰湿质转化分由0 d的38.97±7.10下降到25 d的36.57±5.68、45 d的33.72±3.12和90 d的27.80±3.49，六堡茶新茶干预组痰湿质转化分由0 d 的40.76±7.95下降到25 d 的30.86±4.87、45 d的29.76±5.42和90 d 的24.29±2.94。六堡茶陈茶干预组的总胆红素由14.31±8.42 μmol/L（0 d）、下降至8.24 ±3.72 μmol/L（45 d），直接胆红素由0 d 的5.79±3.44 μmol/L下降为45 d的 3.52±1.58 μmol/L。六堡茶新茶干预组的总胆红素由0 d的11.25±5.30 μmol/L下降至45 d的8.34±3.70 μmol/L，直接胆红素由0 d的4.34±2.00 μmol/L变化为45 d的3.43±1.41 μmol/L。说明六堡茶新茶和5年陈茶能够降低痰湿质转化分、降低直接胆红素和总胆红素水平，均具备改善痰湿质状态的作用，在饮茶25 d即可看到改善作用，每日饮茶量为10 g，200 mL沸水浸泡2 min口服，每日2次，其中六堡茶新茶的改善作用优于六堡茶陈茶。
将中医体质评分与肠道菌群的丰度进行分析，结果发现痰湿质人群的大肠杆菌/志贺菌（Escherichia-Shigella）、拟杆菌（Bacteroides）和考拉杆菌（Phascolarctobacterium）、嗜胆菌（Bilophila）等菌丰度高于平和质人群，而粪杆菌（Faecalibacterium）Cloacibacillus菌、溶杆菌（Lysobacter）、嗜冷杆菌（Psychrobacter）等菌的丰度低于平和质人群，证明肠道菌群紊乱与痰湿质的形成相关。
将受试人群体质与本研究的重要生理指标进行统计学分析，发现痰湿质转化分与总胆红素、直接胆红素水平呈现负相关。本研究发现，饮用六堡茶陈茶和新茶均具有降低胆红素（总胆红素和直接胆红素）的作用，以陈茶更为显著，提示六堡茶特别是陈茶的祛湿机制之一是改善胆红素代谢。肠道菌群分析证实，饮茶促使表达胆盐水解酶的拟杆菌属丰度下降，提示结合型胆汁酸的分解代谢受到抑制，可能通过进一步作用于FXR受体通路，将促使胆固醇转化为胆汁酸。而肠道嗜胆菌的增殖则在饮用新茶组更为明显，嗜胆菌有助于降低动物性饮食带来的心血管风险，是人体保护机体的一个反馈机制。因此，尽管新茶和陈茶均可能通过肠道菌群-胆汁酸代谢通路发挥祛湿作用，但是其机制存在差别，是否与其内含的茶多酚、茶多糖、酚酸等含量和结构的差异有关，有待进一步研究予以论证。
本研究所纳入的人群按体质进行遴选和分组，由于招募人群的年龄普遍较轻，在血液诊断指标上处于糖脂代谢不同阶段的兼而有之，存在高血脂、高血糖、高血压等多种代谢综合征的人群占比较小，因此六堡茶对于空腹血糖、脂代谢的调节作用在统计学上不显著。而饮茶后与代谢疾病、能量代谢有关的萨特氏菌属（Sutterella）、Izimaplasmatales菌和瘤胃球菌属（Ruminococcus）的相对丰度水平均发生改变。本研究提示，通过饮用六堡茶带来祛湿作用，可能有助于在亚健康阶段，实现代谢病的“异病同治”，其机制与调节肠道微生态相关。
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图 1 试验各组痰湿质转化评分
注：与PH组比较，#表示P<0.05，##表示P<0.01；与TS Control组比较，*表示P<0.05，**表示P<0.01。
Figure 1. The phlegm-dampness quality translation score of each group
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图 3 试验各组总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平
Figure 3. The total cholesterol, triglycerides, high-density lipoprotein cholesterol and low-density lipoprotein cholesterol of each group
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图 5 试验各组丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶水平
Figure 5. The alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase of each group
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图 6 痰湿质转化分与血生化指标相关性热图
注：*表示在 0.05水平（双侧）上显著相关，**表示在 0.01水平（双侧）上极显著相关。
Figure 6. Correlation heat-map between phlegm-dampness quality translation score and blood biochemical indicators
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图 7 六堡茶干预对肠道菌群α-多样性的影响
注：#表示与其他组差异显著P<0.05。
Figure 7. Effect of Liupao tea on α-diversity
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