纳米SiO<sub>2</sub>富集水样重金属镉-hicELISA检测方法的建立

周叶; 杨树宇; 高祎琳; 陈俊杰; 刘长忠; 王自良; 姜金庆

doi:10.13386/j.issn1002-0306.2020100133

纳米SiO₂富集水样重金属镉-hicELISA检测方法的建立

河南科技学院动物科技学院，河南新乡 453003

基金项目: 中原千人计划-中原科技创新领军人才项目（204200510010）；河南省高校科技创新团队（20IRTSTHN025）；河南省重点科技攻关项目（202102110090）

详细信息

作者简介:
周叶（1995−）, 女, 硕士研究生, 研究方向: 动物源食品安全免疫学快速检测技术, E-mail: yezhou9502@163.com

通讯作者:
姜金庆（1972−）, 男, 博士, 教授, 研究方向: 动物疫病防控与残留物免疫检测, E-mail: jjq5678@126.com

中图分类号: TS252.1
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出版历程
- 收稿日期: 2020-10-19
- 网络出版日期: 2021-05-18
- 刊出日期: 2021-07-14

Determination of Cadmium in Water Samples by Nano-SiO₂ Preconcentration with hicELISA

College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang 453003, China

摘要

摘要: 目的：探究纳米SiO₂富集分离水样中Cd²⁺的条件，制备抗Cd²⁺单克隆抗体，建立水样中痕量Cd²⁺异源性间接竞争ELISA（heterologous indirect competitive ELISA，hicELISA）快速检测方法。方法：以纳米SiO₂富集、EDTA-2Na竞争洗脱Cd²⁺，ICP法测定处理过程中的Cd²⁺含量。人工合成Cd-ITCBE-BSA免疫Balb/C小鼠，制备Cd²⁺单克隆抗体。人工合成异源性包被抗原，建立镉离子hicELISA检测方法。结果：纳米SiO₂对Cd²⁺的吸附容量为13.3 mg/g，富集倍数可达20倍，EDTA-2Na可有效洗脱被富集的Cd²⁺。以Cd-ITCBE-BSA为免疫原，小鼠血清效价达到1:1.28×10⁴；腹水效价为1:2.0×10⁵，亲和力Ka为8.1×10⁸L/moL。以Hg-ITCBE-OVA包板建立的hicELISA检测限为2.9 μg/L，与Hg²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺、Pb²⁺、Cr³⁺、Mo⁶⁺、Fe³⁺、Co²⁺无明显交叉反应。在湖水、自来水、超纯水样品中镉的加标回收率为92.47%~102.86%。结论：建立的纳米SiO₂富集重金属镉-hicELISA检测方法灵敏、特异、准确，能用于水样中镉离子的检测。
- 纳米SiO₂ /
- 重金属 /
- 镉离子 /
- hicELISA /
- 异源性检测
Abstract: Objective: Explore the conditions of preconcentration and separation of Cd²⁺ in water samples by nano-SiO₂, prepare monoclonal antibody against Cd²⁺ and establish a rapid detection method of trace Cd²⁺ in water samples by heterologous indirect competitive ELISA (hicELISA). Methods: Cd²⁺ was preconcentrated by nano-SiO₂ and eluted by EDTA-2Na. The content of Cd²⁺ was determined by ICP. Balb/C mice were immunized with Cd-ITCBE-BSA to prepare Cd²⁺ monoclonal antibody. The heterologous coating antigen was synthesized to establish the detection method of cadmium ion hicELISA. Results: The adsorption capacity of Nano-SiO₂for Cd²⁺ was 13.3 mg/g, and the enrichment multiple was 20 times. EDTA could be used as the effective eluent for the pretreatment. Using Cd-ITCBE-BSA as immunogen, the titer of serum was 1:1.28×10⁴, The titer of mAb in ascites was 1:2.0×10⁵ and the affinity constantwas 8.1×10⁸ L/mol. The detection limit of hicELISA was 2.9 μg/L. There was no significant cross reaction with Hg²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Pb²⁺, Cr³⁺, Mo⁶⁺, Fe³⁺, Co²⁺. The recoveries of cadmium in lake water, tap water and ultrapure water were 92.47%~102.86%. Conclusion: The hicELISA method was sensitive, specific and accurate, and could be used for the detection of cadmium in water samples.
- nano-SiO₂ /
- heavy metal /
- cadmium ion /
- hicELISA /
- heterologous detection

HTML全文

重金属镉通常以分散的Cd²⁺状态存在于水体等自然环境，在含水氧化物、有机物存在时较活泼，较其他重金属迁移性强。镉可通过人们直接饮水、生物食物链富集、职业镉暴露等途径进入机体蓄积，最终都会诱导产生活性氧，引起人体氧化损伤，诱发脑神经、肺脏、肾脏、骨骼病变，痕量吸入也被认为是有害的^[1-4]。因此，监测水体、食品镉残留具有重要意义。世界卫生组织（WHO）、国际食品法典委员会（CAC）等国际组织以及多数国家均发布了镉在食品以及水中的限量标准，检测要求达到μg/kg甚至ng/kg级。这就对重金属离子的快速、准确、可靠的检测技术提出了更高的要求。

重金属离子的检测通常采用原子吸收与电感耦合等离子体发射光谱法，样品需经干法灰化、湿法硝化、微波消解等方法去除有机物等杂质，这些方法准确、灵敏、适合样品的痕量定量检测，但样品前处理要求严格，成本较高^[5-8]。电化学检测技术更经济方便操作性强，但电极材料的稳定性差且有毒性，新界面材料的研究不成熟，该方法的灵敏度和检测限都需要进一步提高^[9-10]。重金属镉离子免疫学检测法灵敏度高、检测限低，但依赖于稳定可靠的特异性单克隆抗体^[11]，且采用icELISA检测时，样品镉含量高于IC₈₀或低于IC₂₀均会出现数据不稳定现象，而目前痕量重金属离子免疫学检测的样品富集研究较少；Cd²⁺-EDTA与Hg²⁺-EDTA三维结构具有高度相似性^[12]，离子检测特异性差的问题亟待解决。本试验在实验室研究基础上，成功制备抗Cd²⁺单克隆抗体。通过筛选异源性包被原优化检测体系，建立了实际水样中镉离子残留hicELISA检测方法，提高了检测的特异性；同时利用巯基改性纳米SiO₂做吸附材料，实现水样中Cd²⁺的定量富集，然后以EDTA竞争洗脱Cd²⁺，建立了痕量镉离子富集-hicELISA检测体系，有效提高了ELISA检测的灵敏度。目前关于纳米SiO₂富集重金属离子并用于免疫学检测的研究尚未见报道，本研究旨在优化纳米SiO₂富集与解吸Cd²⁺的条件，同时制备稳定的抗Cd²⁺单抗，进一步建立水样重金属镉hicELISA检测方法，为实际生产中镉离子的快速检测，提供技术支撑。

1. 材料与方法

1.1 材料与仪器

镉标准溶液1000 μg/mL　国家有色金属及电子材料分析测试中心；CdCl₂、HgNO₃　Alfa Aesar 产品；异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸（ITCBE）、二乙烯三胺五乙酸（DTPA）　Dojindo公司；乙二胺四乙酸（EDTA）　Biosail产品；牛血清白蛋白（BSA）、弗氏完全佐剂（freund’s complete adjuvant, FCA）、弗氏不完全佐剂（freund’s incomplete adjuvant, FIA）、聚乙二醇1500（polyethylene glycol, PEG-1500）、细胞培养基HT、HAT　Sigma公司；鸡卵清蛋白（OVA）　Solarbio公司；胎牛血清　BI公司；细胞培养基RTMI-1640　Gibco公司；兔抗鼠酶标二抗（RaMIgG-HRP）　博尔西公司；SPF级8周龄雌性Balb/C小鼠5只　河南农科院实验动物中心供；骨髓瘤细胞NS0 　本实验室−197 ℃液氮中冻存；巯基改性纳米SiO₂河南大学纳米材料工程研究中心惠赠。

蛋白质核酸分析仪（BD1109）　英国Biodrop公司；紫外分光光度计（DU800）　美国Beckman公司；Optima 2100DV型电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP）　美国 PerkinElmer 公司；多功能全自动酶标仪　Thermo公司。

1.2 实验方法

1.2.1 纳米SiO₂、Cd²⁺的吸附与解吸试验

参考刘斌等^[13]，在聚丙乙烯离心管中加入20 mL一定浓度的Cd标准溶液，以30 mg 纳米SiO₂固体吸附，调节pH至9.0反应，达到吸附平衡后，离心分离上清液（A液），沉淀采用去离子水充分洗涤后以0.1 mol/L的EDTA-2Na重悬反应，离心分离上清液（B液），ICP法测定上清液中Cd含量，设置3组平行对照求平均值，参考梁达豪等^[14]计算平衡吸附容量Q_e=（C₀−C_e）V/m。

1.2.2 人工免疫原的合成与鉴定

参考张海棠等^[15]制备Cd-ITCBE-BSA等人工抗原，称取4 mg CdCl₂，溶于HEPES制成Cd²⁺溶液，称取BSA溶于HEPES制成蛋白溶液，称取5 mg ITCBE溶于DMSO然后分别于与重金属离子和蛋白偶联，调节pH至9.0，常温反应24 h后于PBS中透析3~5 d，去除杂分子和有机溶剂，收集免疫原，同理合成包被原。采用Bradford测定合成抗原中的BSA、OVA含量^[16]，ICP法测定其中Cd²⁺、Hg²⁺含量。将样品稀释至1 mg/mL，UV检测样品吸收光谱，鉴定抗原的偶联情况。

1.2.3 抗Cd²⁺单抗的制备

1.2.3.1 细胞融合小鼠的选择

将Cd-ITCBE-BSA配合佐剂充分乳化，注射到Balb/C小鼠背部皮下3~4点，（30 μg/0.2 mL每只），免疫间隔时间为4周。第五次免疫后10 d断尾采血，以Cd-ITCBE-OVA包板，5% 猪阴性血清封闭，ELISA法检测抗血清，P/N≥2.1的最大稀释倍数记为效价；通过比较半数抑制浓度（50% inhibitory concentration，IC₅₀）分析抗血清对半抗原的敏感性，挑选效价高且敏感性强的小鼠，尾静脉注射100 μg/0.3 mL（PBS稀释）Cd-ITCBE-BSA进行加强免疫，用于细胞融合。

1.2.3.2 细胞融合与杂交瘤细胞的筛选

参考王亚楠等^[17]取上述小鼠脾细胞与NS0细胞在PEG-1500作用下诱导融合，以HAT培养基筛选培养杂交瘤细胞。待细胞生长达到10%~20%，采用ELISA法检测细胞上清效价与敏感性，确定阳性孔；通过亚克隆培养技术，筛选出阳性抗Cd-EDTA单克隆细胞株。

1.2.3.3 单克隆抗体的生产与鉴定

采用体内诱生腹水法制备腹水，以2×10⁵个细胞量，注射到FCA致敏的小鼠腹腔，1周后收集腹水。将单抗腹水置于4 ℃分层，去上层油脂和下层细胞杂质，以抗体稀释液作10倍稀释，ELISA法测定单抗的效价、敏感性，Beaty非竞争性EIA法^[18]测定抗体的亲和力，计算公式Ka=（n−1）/2（n*Ab₁−Ab₂），n=Ag₁/Ag₂。

1.2.4 hicELISA检测方法的建立

1.2.4.1 检测条件的优化

包被液选用碳酸盐缓冲液（CBS），以3% BSA、3% OVA以及5%的猪阴性血清封闭液包被，鼠阴性血清作一抗，对比不同封闭液的封闭效果。抗体稀释液参考王亚楠等^[19]选用pH7.4的PBS。采用棋盘滴定法，确定Hg-ITCBE-OVA、Cd-DTPA-OVA、Cd-EDTA-OVA的最佳包被浓度和抗Cd²⁺ mAb的最佳稀释度。

1.2.4.2 hicELISA标准曲线的绘制与灵敏度分析

参照上述半抗原合成方法，制备Cd-EDTA标准阻断液。将阻断液与工作抗体等体积混合后加入不同酶标板中进行ELISA测定，绘制吸光值百分比（B/B₀）与阻断液浓度的常用对数值（lgс_{（Cd-EDTA）}）的标准曲线，根据回归方程计算检测限IC₂₀~IC₈₀，分析不同包被条件下检测方法的灵敏度。

1.2.4.3 特异性分析检测

该抗体与Hg²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺、Pb²⁺、Cr³⁺等离子EDTA螯合液的识别特性，参考周静清^[20]计算交叉反应率，分析hicELISA检测方法的特异性。

1.2.4.4 准确度与精密度分析

选用超纯水、自来水和湖水作为样品液进行加标回收实验。向水样中添加一定浓度的Cd标液，以纳米SiO₂富集后通过0.45 μm通用滤膜过滤除杂，EDTA-2Na洗脱，获得的Cd-EDTA用于hicELISA检测，计算该方法的回收率。

1.3 数据处理

所有实验均重复3 次，采用Excel 2019软件处理数据，实验结果用平均值±标准差表示，用Origin 2019b软件作图。

2. 结果与分析

2.1 纳米SiO₂对Cd²⁺的吸附容量

上清液Cd²⁺含量均值见表1。纳米SiO₂对Cd²⁺的吸附容量Q_e可达到13.28 mg/g，采用0.1 mol/L的EDTA-2Na洗脱率较高，试样体积小于20 mL时可实现高浓度Cd²⁺的定量回收，低浓度Cd²⁺的完全富集。

表 1 纳米SiO₂对Cd²⁺的富集

Table 1. Enrichment of Cd²⁺ and by nano-SiO₂

镉标准溶液（mg/L）	SiO₂用量（mg）	A液Cd²⁺浓度（mg/L）	B液Cd²⁺浓度（mg/L）	吸附容量Q_e（mg/g）
5	30	0.08±0.03	98.30±0.05	3.28
10	30	0.19±0.02	197.20±0.06	6.54
20	30	0.07±0.02	406.14±0.08	13.28

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2.2 免疫原鉴定

UV扫描结果如图1。BSA在230、280 nm处出现吸收峰，当Cd²⁺与ITCBE-BSA偶联后，吸收峰位置相对BSA发生了偏移（在230、270 nm处），说明人工抗原合成成功。经检测，Cd-ITCBE-BSA中BSA的质量浓度为6.67 g/L，Cd²⁺的质量浓度为176.7 mg/L。

图 1 人工抗原紫外扫描图

Figure 1. UV spectra of artificial antigen

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2.3 抗Cd²⁺单抗制备与鉴定

2.3.1 小鼠多抗血清检测

抗血清效价检测如图2，五免小鼠多抗效价均达到了1:1.28×10⁴，其中4号鼠效价稳定达到1:5.12×10⁴。小鼠多抗icELISA曲线如图3，4号小鼠回归方程为y= −24.073x+85.119（R²=0.9932），经计算IC₅₀=28.8 μg/L，选择4号作为细胞融合小鼠供体。

图 2 小鼠多抗血清效价测定

Figure 2. Titer determination of mouse polyclonal antibody

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图 3 小鼠多抗血清对Cd-EDTA的抑制曲线

Figure 3. Inhibition curve of Cd-EDTA by mouse polyclonal antibody serum

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2.3.2 单克隆抗体的生产与鉴定

经检测分析，原96孔板细胞融合率>90%，挑选其中三株效价与敏感性较好的阳性杂交瘤细胞进行三次亚克隆，获得的单克隆细胞株命名为3G2E9、3G2E10、2E12D9。传代细胞上清效价检测如图4，其中3G2E10表现出良好的分泌抗体的稳定性。

图 4 细胞传代培养上清中抗体效价变化

Figure 4. Detection of antibody titer in the supernatant of cell subculture

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收集3G2E10细胞注射经产母鼠腹腔，获得的了IgG含量22.12 mg/mL、亚型IgG_2a的单抗腹水。经检测，单抗效价为1:2.0×10⁵，敏感性曲线y= −26.897x+90.045（R²=0.993）经计算IC₅₀=13.8 μg/L。与Cd-ITCBE-OVA的亲和力测定曲线如图5，根据亲和力测定公式计算K_a=8.1×10⁸L/moL。该抗体效价、敏感性、亲和力均可满足Cd-EDTA的检测要求。

图 5 Cd-EDTA mAb的K_a 测定曲线

Figure 5. Association constant curve of Cd-EDTA mAb

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2.4 hicELISA检测方法的建立

2.4.1 最佳检测条件

试验结果表明：中性CBS作包被液，PBS作抗体、半抗原稀释液，可有效降低吸光度检测的基质干扰。3% OVA封闭时，阴性孔吸光值<0.5，空白孔吸光值<0.1，封闭效果最佳。棋盘滴定试验结果如表2。

表 2 包被原与抗体的最佳浓度测定

Table 2. Determination of optimum concentration of coating antigen and antibody

包被原	阳性吸收值	阴性吸收值	包被浓度（μg/mL）	抗体稀释倍数
Cd-ITCBE-OVA	1.45	0.18	1	51200
Hg-ITCBE-OVA	1.35	0.15	2	51200
Cd-DTPA-OVA	0.57	0.12	4	2000
Cd-EDTA-OVA	0.65	0.16	8	4000

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2.4.2 hicELISA检测方法的灵敏度

icELISA与hicELISA标准曲线如图6，采用Cd-ITCBE-OVA包被的icELISA标准曲线为y= −25.579x+99.554（R²=0.9942），半数抑制浓度IC₅₀=86.5 μg/L，检测限为5.8 μg/L。hicELISA标准曲线为y= −25.479x+92.079（R²=0.9934），IC₅₀=44.8 μg/L，检测范围在2.9~672.6 μg/L，相对icELISA检测限明显降低，灵敏度高。

图 6 hicELISA抑制曲线图

Figure 6. Inhibition curve of hicELISA

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2.4.3 hicELISA检测方法的特异性

将Hg²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺、Pb²⁺、Cr³⁺、Mo⁶⁺、Fe³⁺、Co²⁺离子与EDTA偶联，作为标准液，检测其对Cd²⁺mAb的阻断效果，计算交叉反应率，结果见表3。由表3可知，抗Cd²⁺mAb与其他检测的重金属离子交叉反应率低，特异性强。

表 3 hicELISA检测方法的特异性

Table 3. Specificity of hicELISA

化合物	IC₅₀（μg/L）	交叉反应率
Cd²⁺-EDTA	44.8	100
Hg²⁺-EDTA	574.8	7.8
Cu²⁺-EDTA	792.6	5.6
Zn²⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5
Pb²⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5
Cr³⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5
Mo⁶⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5
Fe³⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5
Co²⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5

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2.4.4 hicELISA检测方法的准确度与精密度

对湖水、自来水、纯水样进行加标回收试验，加标浓度分别为10 、30 和50 μg/L，采用纳米SiO₂富集-hicELISA法检测镉浓度。如表4可知，不同样品加标回收率为92.47%~102.86%，相对标准偏差为0.91%~3.41%。本试验建立的方法具有较高的准确度和精密度，适合处理后水样中Cd²⁺的定量分析。

表 4 不同样品中Cd²⁺的添加回收试验

Table 4. Recovery test of Cd²⁺ in different samples

样品	加标浓度（μg/L）	回收浓度（μg/L）	回收率（%）	相对标准差RSD （%）
湖水	10.00	9.67±0.32	96.70±3.20	2.93
	30.00	29.89±2.03	99.63±6.80	2.91
	50.00	51.43±5.15	102.86±10.30	3.41
自来水	10.00	9.64±0.36	96.40±3.60	2.51
	30.00	27.74±1.58	92.47±5.30	3.25
	50.00	47.67±3.90	95.34±7.80	2.08
纯水	10.00	9.98±0.51	99.80±5.10	0.94
	30.00	29.54±1.52	98.47±5.10	0.91
	50.00	50.03±3.28	100.06±6.50	1.21

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3. 讨论与结论

纳米材料以其高比表面积、强活性、稳定性等独特的性质深得材料化学领域研究者的青睐，不同种类的纳米材料常作为吸附剂用于污染物处理，如黏土纳米复合材料、金属氧化物基纳米材料、碳纳米管等应用于重金属污染水体的修复^[21]。但痕量重金属离子的定量吸附与解吸研究、以及纳米材料在重金属离子免疫学检测中样品处理阶段的应用研究较少。本试验以纳米SiO₂作为痕量Cd²⁺的吸附材料用于水样前处理，吸附条件简便，可定量富集洗脱，有效降低hicELISA的检测限，将样品浓度调至最佳检测范围，提高检测的灵敏度。

异源抗原即通过不同方法改造同一分析物所制备的半抗原-蛋白载体复合物，将其包被到酶标板，可有效去除桥抗、载体抗体与包被抗原的干扰性抗原抗体反应，允许分析物在低浓度下与包被抗原竞争，从而提高了ELISA分析的灵敏度^[22]。异源性ELISA检测主要应用于带有羧基、羟基、氨基等活性基团的小分子化合物，如农药、抗生素、激素、毒素等^[23-27]，而重金属离子本身不具有可改造的活性基团，其异源检测要通过选用不同离子、不同螯合剂制备异源抗原，建立间接竞争或直接竞争ELISA检测方法。

秦宝亮^[28]采用开环类双功能螯合剂ITCBE，成功制备完全抗原Hg-ITCBE-BSA/OVA；张云显、刘丹等^[29-30]制备了Cd/Zn-DTPA-OVA与Cd/Zn-EDTA-KLH人工抗原；郭建军等^[31]采用闭环类双功能螯合剂NOTA成功制备了Pb-NOTA-BSA，为重金属离子异源性检测提供了抗原技术支持。Zhao等^[32]通过Co（Ⅱ）-EDTA-BSA与Co（Ⅱ）-EDTA-BSA-HRP，建立了Cu（Ⅱ）的hicELISA与hdcELISA检测方法，证明了Co²⁺异源性检测的可靠性。本研究通过对比4种异源性包被原检测体系，发现Hg-ITCBE-OVA作包被原建立的hicELISA检测方法检测效果最佳，相对于Cd-ITCBE-OVA包被的icELISA灵敏度可提高一倍，且经检测hicELISA与Hg²⁺、Cu²⁺螯合物的交叉反应率低，表明抗体被游离Cd-EDTA的竞争结合力更强，降低了icELISA检测体系包被原造成的强亲和力干扰，使检测特异性更强。

本研究采用纳米SiO₂预富集浓缩痕量镉，制备了Cd²⁺单克隆抗体，建立了水样中痕量Cd²⁺异源性间接竞争ELISA（hicELISA）快速检测方法，通过实际样品验证，该方法灵敏、特异、准确，为水样中Cd²⁺的快速检测提供了新的技术支撑。

图 1 人工抗原紫外扫描图

Figure 1. UV spectra of artificial antigen

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图 2 小鼠多抗血清效价测定

Figure 2. Titer determination of mouse polyclonal antibody

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图 3 小鼠多抗血清对Cd-EDTA的抑制曲线

Figure 3. Inhibition curve of Cd-EDTA by mouse polyclonal antibody serum

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图 4 细胞传代培养上清中抗体效价变化

Figure 4. Detection of antibody titer in the supernatant of cell subculture

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图 5 Cd-EDTA mAb的K_a 测定曲线

Figure 5. Association constant curve of Cd-EDTA mAb

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图 6 hicELISA抑制曲线图

Figure 6. Inhibition curve of hicELISA

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表 1 纳米SiO₂对Cd²⁺的富集

Table 1 Enrichment of Cd²⁺ and by nano-SiO₂

镉标准溶液（mg/L）	SiO₂用量（mg）	A液Cd²⁺浓度（mg/L）	B液Cd²⁺浓度（mg/L）	吸附容量Q_e（mg/g）
5	30	0.08±0.03	98.30±0.05	3.28
10	30	0.19±0.02	197.20±0.06	6.54
20	30	0.07±0.02	406.14±0.08	13.28

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表 2 包被原与抗体的最佳浓度测定

Table 2 Determination of optimum concentration of coating antigen and antibody

包被原	阳性吸收值	阴性吸收值	包被浓度（μg/mL）	抗体稀释倍数
Cd-ITCBE-OVA	1.45	0.18	1	51200
Hg-ITCBE-OVA	1.35	0.15	2	51200
Cd-DTPA-OVA	0.57	0.12	4	2000
Cd-EDTA-OVA	0.65	0.16	8	4000

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表 3 hicELISA检测方法的特异性

Table 3 Specificity of hicELISA

化合物	IC₅₀（μg/L）	交叉反应率
Cd²⁺-EDTA	44.8	100
Hg²⁺-EDTA	574.8	7.8
Cu²⁺-EDTA	792.6	5.6
Zn²⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5
Pb²⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5
Cr³⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5
Mo⁶⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5
Fe³⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5
Co²⁺-EDTA	>6.4×10³	＜0.5

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表 4 不同样品中Cd²⁺的添加回收试验

Table 4 Recovery test of Cd²⁺ in different samples

样品	加标浓度（μg/L）	回收浓度（μg/L）	回收率（%）	相对标准差RSD （%）
湖水	10.00	9.67±0.32	96.70±3.20	2.93
	30.00	29.89±2.03	99.63±6.80	2.91
	50.00	51.43±5.15	102.86±10.30	3.41
自来水	10.00	9.64±0.36	96.40±3.60	2.51
	30.00	27.74±1.58	92.47±5.30	3.25
	50.00	47.67±3.90	95.34±7.80	2.08
纯水	10.00	9.98±0.51	99.80±5.10	0.94
	30.00	29.54±1.52	98.47±5.10	0.91
	50.00	50.03±3.28	100.06±6.50	1.21

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1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 实验方法
1.2.1 纳米SiO2、Cd2+的吸附与解吸试验
1.2.2 人工免疫原的合成与鉴定
1.2.3 抗Cd2+单抗的制备
1.2.3.1 细胞融合小鼠的选择
1.2.3.2 细胞融合与杂交瘤细胞的筛选
1.2.3.3 单克隆抗体的生产与鉴定
1.2.4 hicELISA检测方法的建立
1.2.4.1 检测条件的优化
1.2.4.2 hicELISA标准曲线的绘制与灵敏度分析
1.2.4.3 特异性分析检测
1.2.4.4 准确度与精密度分析
1.3 数据处理
2. 结果与分析
2.1 纳米SiO2对Cd2+的吸附容量
2.2 免疫原鉴定
2.3 抗Cd2+单抗制备与鉴定
2.3.1 小鼠多抗血清检测
2.3.2 单克隆抗体的生产与鉴定
2.4 hicELISA检测方法的建立
2.4.1 最佳检测条件
2.4.2 hicELISA检测方法的灵敏度
2.4.3 hicELISA检测方法的特异性
2.4.4 hicELISA检测方法的准确度与精密度
3. 讨论与结论

1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 实验方法
1.2.1 纳米SiO₂、Cd²⁺的吸附与解吸试验
1.2.2 人工免疫原的合成与鉴定
1.2.3 抗Cd²⁺单抗的制备
1.2.3.1 细胞融合小鼠的选择
1.2.3.2 细胞融合与杂交瘤细胞的筛选
1.2.3.3 单克隆抗体的生产与鉴定
1.2.4 hicELISA检测方法的建立
1.2.4.1 检测条件的优化
1.2.4.2 hicELISA标准曲线的绘制与灵敏度分析
1.2.4.3 特异性分析检测
1.2.4.4 准确度与精密度分析
1.3 数据处理
2. 结果与分析
2.1 纳米SiO₂对Cd²⁺的吸附容量
2.2 免疫原鉴定
2.3 抗Cd²⁺单抗制备与鉴定
2.3.1 小鼠多抗血清检测
2.3.2 单克隆抗体的生产与鉴定
2.4 hicELISA检测方法的建立
2.4.1 最佳检测条件
2.4.2 hicELISA检测方法的灵敏度
2.4.3 hicELISA检测方法的特异性
2.4.4 hicELISA检测方法的准确度与精密度
3. 讨论与结论

参考文献(32)

施引文献

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纳米SiO2富集水样重金属镉-hicELISA检测方法的建立

作者简介: 周叶（1995−）, 女, 硕士研究生, 研究方向: 动物源食品安全免疫学快速检测技术, E-mail: yezhou9502@163.com

通讯作者: 姜金庆（1972−）, 男, 博士, 教授, 研究方向: 动物疫病防控与残留物免疫检测, E-mail: jjq5678@126.com

计量

出版历程