Analysis of Monosaccharide Compositions of Ganoderma lucidum Polysaccharide by Ultrasonic Assisted Acid Hydrolysis-Ultra Performance Liquid Chromatography-Charged Aerosol Detection Method
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摘要: 目的:建立超声辅助酸解-超高效液相色谱-电雾式检测器(UAH-UPLC-CAD)法测定灵芝多糖的单糖组成的方法,为药食两用真菌多糖的单糖组成研究提供快速分析方法支持。方法:以赤芝为研究对象,对灵芝多糖超声辅助酸解条件进行系统优化,采用Waters ACQUITY UPLC Amide柱(3.0 mm×100 mm,1.7 μm),梯度洗脱(A为0.8%甲酸水溶液,B为乙腈),流速:0.4 mL·min-1,柱温:25 ℃,采用CAD检测器,其中:雾化器温度35 ℃,N2压力61.2 Psi。结果:获得了最佳的超声辅助酸解工艺条件:超声功率270 W、水解温度70 ℃、水解时间1 h;在优化的UPLC-CAD条件下,各化合物分离较好、灵敏度较高,方法具有较好的精密度、重现性和稳定性;应用该方法测定了灵芝多糖酸解产物中的7种单糖(摩尔比为:鼠李糖∶岩藻糖∶木糖∶阿拉伯糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖=5.90∶5.34∶72.64∶31.96∶1.00∶1.89∶5.24),其中,木糖和阿拉伯糖的含量较高,其值分别为27.25±0.67和11.99±0.29 mg/g;而甘露糖和葡萄糖的含量则较低,其值分别为0.45±0.01和0.85±0.04 mg/g。结论:该方法简单、快速、灵敏度高,为药食两用真菌多糖的单糖组成研究提供了方法支持。Abstract: Objective:To establish a method for rapid determination of the monosaccharide composition of Ganoderma lucidum polysaccharides by Ultrasonic Assisted Acid Hydrolysis-Ultra Performance Liquid Chromatography-Charged Aerosol Detection(UAH-UPLC-CAD),so as to provide a rapid analytical method for the study of the monosaccharide composition of edible medicinal fungi polysaccharides. Methods:Using Waters ACQUITY UPLC Amide column(3.0 mm×100 mm,1.7 μm),gradient elution(A was 0.8% formic acid solution,B was acetonitrile),flow rate:0.4 mL·min-1,column temperature:25 ℃,CAD detector:atomizer temperature:35 ℃,N2 pressure:61.2 Psi. Results:The optimum conditions of ultrasound-assisted acid hydrolysis were obtained:ultrasonic power 270 W,hydrolysis temperature 70 ℃,hydrolysis time 1 h. Under the optimized UPLC-CAD condition,the compounds were separated well and the sensitivity was high,and the method had better precision,reproducibility and stability. Seven monosaccharides(molar ratio∶rhamnose∶fucose∶xylose∶arabinose∶mannose∶glucose∶galactose=5.90∶5.34∶72.64∶31.96∶1.00∶1.89∶5.24)in the acidolysis products of ganoderma lucidum were determined by this method. The contents of mannose and glucose were lower,with values of 0.45±0.01 and 0.85±0.04 mg/g,respectively. Conclusion:This method is simple,rapid and sensitive,which provides method support for the study of monosaccharide composition of medical fungi polysaccharides.
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